Recopilatorio Técnicas de Concentración en parasitología de suelos

Técnicas de concentración: Son usadas para aumentar la recuperación de parásitos de

diferentes tipos de muestras como heces, tierra entre otras.
En los procedimientos se utilizan fundamentos de sedimentación y flotación logrando
encontrar huevos y larvas de gusanos y quistes de protozoarios pero no trofozoitos, ya
que estas técnicas no preservan la integridad de estos. (Organización mundial de la salud, métodos
básicos de laboratorio en parasitologia médica, 1. Parasitología- manuales de laboratorio, OMS 1992) (Botero ….. )
En las técnicas de flotación, los preparados de la solución deben tener una densidad mayorr que los huevos y quistes parasitarios,
para permitirles flotar, para las técnicas de sedimentación, la solución permitirá que los elementos parasitarios se depositen en el
fondo del recipiente. (Pumarola, A; Microbiologia y parasitología médica)
En el uso de muestras de tierra y arena se recomienda la homogenización previa
mediante técnicas como la de Sloss y tratamiento con Tween 80 al 0.2%. ( Reinando Fonrouge,
Mónica del V. Guardis, Nilda E. Radman y Susana M. Archelli; Contaminación de suelos con huevos de Toxocara sp. en plazas y
parques públicos de la ciudad de La Plata. Bol. chil. parasitol. v.55 n.3-4 Santiago jul. 2000; Hernández, S., Contera, M., Acufia, A.,
Elhordoy, D., Vignolo J. Toxocara spp. en muestras de suelo y heces de plazas de la ciudad de monte video. Revista de Patologia
Tropical, América do Norte, 32, jul. 2008. Disponible en: http://www.revistas.ufg.br/index.php/iptsp/article/view/4355/3813.
Acesso em: 07 Fev. 2011; Alejandra córdoba, maría l. ciarmela , betina pezzani, m. inés gamboa ,m. marta de luca, marta minvielle
y juan a. basualdo. Presencia de parásitos intestinales en paseos públicos urbanos en La Plata Argentina. Parasitol Latinoam 57:
25 - 29, 2002 FLAP; SIEVERS G, CONCHA C, GÄDICKE P; Prueba de una técnica para recuperar huevos de Toxocara canis
de muestras de tierra; Parasitol Latinoam 62: 61 - 66, 2007 FLAP; Polo Teran L; Determinacion de la contaminacion de los suelos
de los parques publicos de la localidad de suba, bogota d.c con nematodos gastrointestinales de importancia zoonotica; Trabajo de
grado, Universidad Nacional de Colombia; 2006)

Las técnicas de concentración recomendadas son:

1.Técnica de Faust o de flotación con sulfato de zinc; 2. Técnica de flotación por Sheather; 3. Técnica de
Ritchie o centrifugación con formol-éter 4. Técnica de Willis-Molloy con solución saturada de cloruro de sodio.

1. Técnica de Faust o de flotación con sulfato de zinc: Este es un método en el cual la materia fecal se
diluye en un líquido de alta densidad y los parásitos, que proporcionalmente son más livianos, van a la
superficie. Para esta técnica se utiliza sulfato de zinc al 33%, con densidad 1.180.
Para prepararlo se añaden 331 g de sulfato de zinc a un litro de agua tibia. Una vez disuelto el sulfato, se
verifica con un densímetro que la densidad sea 1.180; si es preciso se añadirá agua o sulfato de zinc,
según el caso, hasta obtener este valor. La técnica utilizada es la siguiente:
- Una cantidad de materia fecal de aproximadamente 1 g, se diluye en 10 ml de agua y se filtra a través de
una gasa cuádruple.
- Se centrifuga a 2.500 rpm durante un minuto.
- Se descarta el líquido sobrenadante. Si la muestra es muy grasosa se repite el centrifugado cambiando de
agua y mezclando nuevamente.
- Se mezcla el sedimento con 34 ml de sulfato de zinc al 33% (densidad 1.180).
- Se completa con el sulfato de zinc hasta llegar a 1 cm del borde del tubo y se centrifuga a 2.500 rpm
durante un minuto, sin frenar la centrífuga.
- Se coloca el tubo cuidadosamente en una gradilla y se recoge el sobrenadante con un asa de platino o
una pipeta y se lleva al porta objetos (Figura 277). También puede elevar se el nivel del líquido hasta
formar un menisco, añadiendo sulfato de zinc por las paredes del tubo, para no alterar la película
superficial. En este caso se coloca un cubre-objetos sobre el menisco y se deja en esta posición durante 10
minutos, de modo que en su cara inferior quede adherida la gota que contiene huevos, larvas y quistes.
Las preparaciones se montan en lugol y solución salina y se llevan al microscopio para buscar parásitos.
Como los parásitos que flotan a la superficie de la solución vuelven a descender al cabo de una hora, se
deben hacer las preparaciones en porta-objetos, tan pronto como termine la concentración. El contacto
prolongado con el sulfato de zinc, puede deformar los quistes y dificultar su identificación, por lo tanto
estas preparaciones deben ser examinadas lo antes posible. Esta técnica es mejor para quistes de
protozoos que para huevos y larvas de helmintos. El éxito depende de la exactitud en la densidad del
sulfato de zinc. Cuando la materia fecal está fijada en formol al 5-10%, debe usarse el sulfato de zinc con
densidad de 1.200.

Técnica de flotación por Sheather. Se utiliza para separar, concentrar y recobrar ooquistes de Isospora,
Cryptosporidium y Cyclospora. Para recolectar las materias fecales se usa un recipiente de boca ancha con tapa,
limpio y debidamente marcado. Si son heces líquidas, se toma la muestra del fondo del frasco con una pipeta Pasteur,
después de mezclarlas bien, se requiere entre 2 ó 3 ml. Las heces liquidas se centrifugan, se descarta el sobrenadante
que se echa en el recipiente original y se sigue trabajando con el sedimiento del tubo centrifugado.
Si las materias fecales tienen muco, se toma una porción de este moco para examinar al microscopio. En algunos
casos se utiliza, como mucolítico. 10 gotas de KOH al 10% para disolver el moco y liberar los ooquistes atrapados. El
mucolítico se deja actuar a temperatura ambiente de 28ªC durante 15 minutos. Se centrifuga luego y se continúa
trabajando con el sedimento.
Solución concentrada fenolada de azúcar
Azúcar en cristales........................500.0 g
Agua destilada.............................. 320.0 mí
Fenol en cristales...............................6.5 g
Disolver el azúcar en el agua destilada, usando calor sin dejar llegar a ebullición. Filtrar por gasa. Agregar el fenol y
agitar hasta la disolución. Guardar en frasco tapado y rotulado.
- En un tubo de ensayo se coloca aproximada mente 1 mi de las heces fecales líquidas y se hace una suspensión.
- Pasar la suspensión a otro tubo de ensayo limpio, a través de un embudo con 2 dobleces de gasa, filtrando para
detener fibras y partí culas grandes. Tapar el tubo con Parafilm®.
- Equilibrar el peso de los tubos en una balanza para luego centrifugar a 1.500 rpm durante 2 minutos.
- Destapar y descartar el sedimento. Agregarle un poco de solución fenolada azucarada y agitar vigorosamente con un
aplicador. Completar con más solución hasta llegar a 2 cm bajo el borde del tubo y tapar con Parafilm*.
- Equilibrar el tubo en la balanza de 2 platos y centrifugar a 1.000 rpm durante 10 minutos.
- Quitar el tapón con cuidado de no agitar y tomar 2 ó 3 asadas de la superficie del menisco y colocarlas en un porta-
objetos. Flamear el asa en el mechero.
- Cubrir las gotas con un cubre-objeto y examinar al microscopio con objetivo 10X a diferentes profundidades, pues a
menudo los ooquistes flotan en el líquido.
- Las gotas en el porta-objeto se dejan secar, para ser coloreadas.
- Todo el material de desechos y contaminados se debe descartar en frascos con soluciones desinfectantes apropiadas.
Los ooquistes de coccidias se pueden deformar un poco. Toman un color rosa pálido a causa de la refracción de la luz
en la solución.

3. a) Técnica de Ritchie o centrifugación con formol-éter. Es el procedimiento más utilizado para

concentrar quistes de protozoos, huevos y larvas de helmintos. El método es el siguiente:
- Si la materia fecal es dura, agregue solución isotónica y mezcle hasta que quede liquida, en cantidad
aproximada de 10 ml.
- Pase por una gasa doble y húmeda, aproximadamente 10 ml de la materia fecal Líquida, a un tubo de
centrífuga de 15 ml.
- Centrifugue a 1.500-2.000 rpm por 2 minutos. Decante el sobrenadante.
- Diluya el sedimento en solución salina, centrifugue como antes y decante.
- Agregue al sedimento aproximadamente 10 ml de formol al 10%, mezcle bien y deje reposar por 5
minutos.
- Agregue 3 ml de éter, tape el tubo y mezcle fuertemente durante 30 segundos. Destape cuidadosamente.
- Centrifugue a 1.500 rpm por 2 minutos. Se forman 4 capas distribuidas así: un sedimento pequeño que
contiene los huevos, quistes, etc.; una capa de formol; un anillo con restos de materias fecales y el éter en
la superficie (Figura 276).
- Con un palillo afloje de las paredes del tubo el anillo con restos de materias fecales y cuidadosamente
decante las tres capas superiores.
- Mezcle el sedimento con la pequeña cantidad de líquido que baja por las paredes del tubo y haga
preparaciones en fresco y con lugol. Para ver al microscopio.
b) Técnica simplificada con formol-éter.
Es similar a la anterior en todos sus aspectos, pero más rápida y sencilla.
- Tome en un tubo partes iguales de solución salina isotónica y formol al 10%, aproximadamente 10 ml.
- Agregue más o menos 1 g de materia fecal y mezcle bien.
- Filtre por gasa doble.
- Agregue 3 ml de éter, tape, agite fuerte y destape cuidadosamente. (El éter puede remplazarse por
gasolina, que es de menor costo, con resultados iguales).
- Centrifugue 2 minutos a 2.000 rpm
- Decante las tres primeras capas (éter, restos de materia fecal y el formol salino). (Figura 276).
- Estudie el sedimento de la misma manera que en la técnica anterior.

5. Técnica de Willis-Molloy con solución saturada de cloruro de sodio. Esta técnica no requiere centrífuga y es
útil, principalmente, para huevos de uncinaria e Hymenolepis, que flotan fácilmente; pero también sirve para los otros
parásitos. Se utiliza con mucha frecuencia en parasitología veterinaria, por la facilidad de realizarse en el campo. El
procedimiento es como sigue:
- Se disuelve sal de cocina en agua caliente, hasta que haya saturación; la solución debe tener, como mínimo, una
densidad de 1.200.
- Se mezcla aproximadamente 1 g de materias fecales con 10-20 de la solución saturada.
- Se traslada la mezcla a un tubo, probeta o caja de Petri, que se llena con la solución hasta el borde, de modo que
forme un menisco.
- Se coloca una laminilla sobre el menisco durante 10 a 15 minutos o se toma el sobrenadante con asa o pipeta
capilar.
- La laminilla o el material recolectado, se coloca en el porta-objetos, para observarlo directamente o con lugol.

Tabla tomada de Pereira Neves D; Parasitología humana 11 Edçao Edit. Atheneo; Cap
56: 457,458 .