Universidad Industrial de Santander

Facultad de ciencias - Escuela de Química

Bioquímica

Enzimología y Cinética Enzimática

Grande J; Duarte A.

𝑉𝑀á𝑥𝑖𝑚𝑎
1. Utilizando la ecuación de Michaelis-Menten demuestre que 𝑉= cuando [𝑆] = 𝐾𝑚 .
2

Partiendo de la ecuacion de Michaelis-Menten de manera general y con la premisa de [𝑆] = 𝐾𝑚 se tiene que:

𝑉𝑀á𝑥 [𝑆] 𝑉𝑀á𝑥 [𝐾𝑚 ] 𝑉𝑀á𝑥 𝑥 [𝐾𝑚 ] 𝑽𝑴á𝒙

𝑉0 = 𝐾𝑚 +[𝑆]
→ 𝑉0 = 𝐾𝑚 +[𝐾𝑚 ]
→ 𝑉0 = 2[𝐾𝑚 ]
→ 𝑽𝟎 =
𝟐

2. Estudiando el efecto del pH sobre la actividad de una enzima se trabajó de acuerdo con dos protocolos
diferentes. En uno de ellos (A) se pre- incubó la enzima a distintos pH y luego se midió la actividad
de esta a pH 7. En el otro caso (B) se determinó la actividad de la enzima a distintos pH. Los resultados
obtenidos se muestran a continuación. Explique el comportamiento enzimático en cada caso.

Actividad
pH Protocolo A Protocolo B
Efecto del pH sobre la actividad de una enzima
bajo protocolo A y B
4,0 7,9 1,0
10
4,5 8,1 1,9
Actividad de la enmzima %

5,0 8,0 3,2 8

5,5 8,2 4,9 6

6,0 7,8 7,3
4
6,5 8,0 9,0
2
7,0 8,0 8,0
0
7,5 8,1 6,3
0 2 4 6 8 10 12
8.0 4,0 2,5 pH
8,5 2,0 1,0
Protocolo A Protocolo B
9,0 0,2 0,0

La actividad catalítica de las enzimas está altamente relacionada con su estructura en general; en un caso en
particular si se cambia el medio (ácido – básico) de su cadena polipeptídica esta verá afectada su actividad
enzimática. Cada enzima es y se comporta diferente, por cual, cada una en especial tendrá un pH particular
denominado pH optimo, en el que se tendrá la mejor conformación y por tanto, una mayor actividad.

En el análisis protocolar, se denota que en A, al someter la enzima a una variación de pH, esta posee una mejor
actividad enzimática que el B dado que los cambios del coeficiente hecho en ambos casos muestran que algunos
residuos aminoacídicos del segundo protocolo se ven altamente afectados. Por otra parte, en ambos se nota una
actividad alta a coeficientes neutros, se ve favorecida en un rango definido (5-7) pero a coeficientes superiores
a 8 la actividad enzimática de ambos protocolos se ve afectada llegando a ser prácticamente nula, dañándose
irremediablemente.
3. Una enzima posee la curva de actividad versus pH que aparece en la figura:

a. Explique este comportamiento

b. ¿Cómo probaría su hipótesis?
c. Suponga que se informó que un residuo de Asp es el
responsable de una parte de esta curva de pH ¿Cómo
explicaría este comportamiento?

(a) El comportamiento de la gráfica se da a partir de un grupo

carboxilo no protonado pKa = 3 y un grupo amino de carácter terminal
protonado con pKa = 6 indispensables en la actividad enzimática,
razón de las partes de ascenso y descenso.
b) Esto se puede comprobar mediante cristalografía de rayos X dado
que esta técnica permite un acercamiento a la estructura molecular, así como una descripción a nivel
atómico de la proteína en cuestión.
c) Dado que un medio no polar suprime la ionización de los grupos que tengan carga tal efecto llegaría
a bajar el pKa del grupo carboxilo del Asp de un 4 a un 3.

4. En la figura se muestra el comportamiento de la actividad de una enzima en función del pH. ¿Qué
aminoácidos del sitio activo serían los responsables del comportamiento observado? No tenga en
cuenta el efecto de la falta de ionización causada por el medio hidrofóbico.

Debido a que se presenta un cambio en la actividad de la

enzima cercana a pH 7.0, se relaciona el comportamiento
observado con el aminoácido Histidina (𝑝𝐼 = 7,56), mediante
un residuo de la histidina no protonada (𝑝𝐾𝑎 = 6.0).

5. Los datos de velocidad y concentración que se muestran en la tabla se obtuvieron para una enzima
que cataliza una reacción S → P. (a) Calcular Km y Vmáxima. (b) Comprobar que la enzima sigue una
cinética de saturación hiperbólica.

(S) (V) 1/(S) 1/(V)

0,25 24 4,00 0,042
0,33 30 3,03 0,033
0,4 34 2,50 0,029
0,5 40 2,00 0,025
1,0 60 1,00 0,017
2,0 80 0,50 0,013
4,0 96 0,25 0,010
10 109 0,10 0,009
200 119 0,01 0,008
1000 120 0,00 0,008
 Gráfico de dobles reciprocos
0,05
0,04
y = 0,0832x + 0,0083
0,04
R² = 0,9999
1/(v) M/min 10-9
0,03
0,03
0,02
0,02
0,01
0,01
0,00
0,00 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30 0,35 0,40 0,45
1/(S) M-1 10-6

1 𝒏𝒎
𝑹𝒆𝒔𝒑𝒖𝒆𝒔𝒕𝒂 𝒆𝒏𝒛𝒊𝒎𝒂𝒕𝒊𝒄𝒂 𝑦 = 0,0832𝑥 + 0,0083 → 𝑽𝒎á𝒙 = = 𝟏𝟐𝟎, 𝟒𝟖 ≅ 𝟏𝟐𝟎, 𝟓𝟎 [ ];
0,0083 𝒎𝒊𝒏 ∗ 𝑳
1 𝐾𝑚 1
𝑃𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑀𝑖𝑐ℎ𝑎𝑒𝑙𝑖𝑠 − 𝑀𝑒𝑛𝑡𝑒𝑛 𝑠𝑒 𝑡𝑖𝑒𝑛𝑒 𝑞𝑢𝑒 = + 𝑝𝑜𝑟 𝑡𝑎𝑛𝑡𝑜
𝑉0 𝑉𝑚á𝑥 [𝑆] 𝑉𝑚á𝑥
𝐾𝑚
𝐿𝑎 𝑝𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑠𝑒𝑟á 𝑑𝑎𝑛𝑑𝑜 = 𝑲𝒎 = (0,0832)(120,50) = 𝟏𝟎, 𝟎𝟐 = 𝟏, 𝟎𝒙𝟏𝟎−𝟓 [𝑴]
𝑉𝑚á𝑥

Reaccion S → P
140,0

120,0
Velocidad (molxMin) x10^-9

100,0

80,0

60,0

40,0

20,0

0,0
-2000 0 2000 4000 6000 8000 10000 12000
Concentracion del sustrato (S) en M x 10^-6

𝑀𝑒𝑑𝑖𝑎𝑛𝑡𝑒 𝑙𝑎 𝑔𝑟á𝑓𝑖𝑐𝑎 (𝑆)𝑣𝑠(𝑉)𝑠𝑒 𝑐𝑜𝑛𝑓𝑖𝑟𝑚𝑎 𝑞𝑢𝑒 𝑙𝑎 𝑒𝑛𝑧𝑖𝑚𝑎 𝑠𝑖𝑔𝑢𝑒 𝑢𝑛𝑎 𝑐𝑖𝑛𝑒𝑡𝑖𝑐𝑎 𝑑𝑒 𝑠𝑎𝑡𝑢𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 ℎ𝑖𝑝𝑒𝑟𝑏𝑜𝑙𝑖𝑐𝑎

6. Dos estudiantes A y B aislaron independientemente la enzima lactato deshidrogenasa de músculo de

caballo que cataliza la reducción de piruvato siguiendo los mismos pasos de purificación. Una vez
obtenida una solución concentrada de enzima midieron actividad en función de la concentración de
sustrato obteniendo los siguientes datos:
 Sustrato (M) 2.0x10-6 5.0x10-6 1.0x10-5 5.0x10-5 1.0x10-4 2.0x10-4 1.0x10-3
VA µmol.min.mg-1 16 33 50 83 90 95 100
VB µmol.min.mg-1 25 50 75 125 136 143 150

a. Sin graficar haga una estimación aproximada de Km y Vmáxima observando los datos de A y B. Justifique.
b. Intente una explicación para la discrepancia observada entre los parámetros cinéticos de A y B.
c. Qué variables graficaría para obtener Km y Vmáxima. Justifique.

Debido a que la velocidad máxima se puede estimar como la máxima velocidad presente en cada experimento,
entonces:

µ𝑚𝑜𝑙 µ𝑚𝑜𝑙
𝑉𝑚á𝑥𝐴 = 100 [ ] 𝑦 𝑉𝑚á𝑥𝐵 = 150 [ ]
𝑚𝑖𝑛 ∗ 𝑚𝑔 𝑚𝑖𝑛 ∗ 𝑚𝑔

𝑉𝑚á𝑥
Como se sabe, [ ] se presenta cuando [𝑆] = 𝐾𝑚 , por ende se puede hallar el valor de 𝐾𝑚 al encontrar la
2
concentración de sustrato que se presenta cuando la velocidad máxima vale la mitad

𝑉𝑚á𝑥𝐴 100 µ𝑚𝑜𝑙

= = 50 [ ] ; 𝑝𝑎𝑟𝑎 𝑒𝑠𝑡𝑎 𝑣𝑒𝑙𝑜𝑐𝑖𝑑𝑎𝑑 [𝑆] = 1,0𝑥10−5 [𝑀] → 𝑲𝑴𝑨 = 𝟏, 𝟎𝒙𝟏𝟎−𝟓 [𝑴]
2 2 𝑚𝑖𝑛 ∗ 𝑚𝑔
Así mismo para el estudiante B,

𝑉𝑚á𝑥𝐴 150 µ𝑚𝑜𝑙

= = 75 [ ] ; 𝑝𝑎𝑟𝑎 𝑒𝑠𝑡𝑎 𝑣𝑒𝑙𝑜𝑐𝑖𝑑𝑎𝑑 [𝑆] = 1,0𝑥10−5 [𝑀] → 𝑲𝑴𝑨 = 𝟏, 𝟎𝒙𝟏𝟎−𝟓 [𝑴]
2 2 𝑚𝑖𝑛 ∗ 𝑚𝑔

b. Intente una explicación para la discrepancia observada entre los parámetros cinéticos de A y B.

Debido a que los estudiantes A y B aislaron independientemente la enzima lactato deshidrogenasa siguiendo
los mismos pasos de purificación, se esperaría obtener resultados similares entorno a la cinética enzimática,
sin embargo, estos resultados presentan ciertas discrepancias, que pueden estar relacionados con un diferente
intervalo de pH y temperatura a los cuales están sometidos estos dos procesos.

c. Qué variables graficaría para obtener Km y Vmáx. Justifique.

Para obtener los valores de Km y Vmáx se utiliza el método de Lineweaver-Burk (dobles recíprocos) ya que
permite conocer los parámetros cinéticos de una enzima al graficar el inverso de la concentración de sustrato
versus el inverso de la velocidad.

7. Sobre una enzima que cataliza la reacción S → P se prueba el efecto de dos inhibidores X e Y
obteniéndose los datos de velocidad que se muestran en la tabla. Determinar qué tipo de inhibidor es
cada uno de ellos. Calcule Km y Vmáx.

(S) (mM) Sin agregado [x] = 12 µM [l] = 60 µM 1/(S) 1/ Sin agregado 1/[x] 1/[l]
2,00 66,67 40,00 22,22 0,500 0,015 0,025 0,045
2,50 71,40 45,45 23,81 0,400 0,014 0,022 0,042
3,33 76,93 52,63 25,64 0,300 0,013 0,019 0,039
4,00 80,00 57,14 26,67 0,250 0,013 0,018 0,037
5,00 83,33 62,50 27,77 0,200 0,012 0,016 0,036

De la gráfica de dobles recíprocos se extraen las ecuaciones de las velocidades de la reacción sin inhibidor y este.
 Gráfico de dobles reciprocos (Sin inhibidor e inhibidores (x) y (l))
0,050
y = 0,03x + 0,03
0,040

0,030
y = 0,03x + 0,01
1/v [mL/U]

0,020

0,010
y = 0,01x + 0,01
0,000
-1,000 -0,800 -0,600 -0,400 -0,200 0,000 0,200 0,400 0,600
-0,010

-0,020
1/s [M-1] x10-3

[mL/U] Sin inhibidor [mL/U] (x)=12 µM [mL/U] (l)=60 µM

1 𝑼
𝑺𝒊𝒏 𝒊𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒅𝒐𝒓 𝑦 = 0,01𝑥 + 0,01 → 𝑽𝒎á𝒙 = = 𝟏𝟎𝟎 [ ] ;
0,01 𝒎𝑳
1 𝐾𝑚 1
𝑃𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑀𝑖𝑐ℎ𝑎𝑒𝑙𝑖𝑠 − 𝑀𝑒𝑛𝑡𝑒𝑛 𝑠𝑒 𝑡𝑖𝑒𝑛𝑒 𝑞𝑢𝑒 = + 𝑝𝑜𝑟 𝑡𝑎𝑛𝑡𝑜
𝑉0 𝑉𝑚á𝑥 [𝑆] 𝑉𝑚á𝑥
𝐾𝑚
𝐿𝑎 𝑝𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑠𝑒𝑟á 𝑑𝑎𝑛𝑑𝑜 = 𝑲𝒎 = (0,01)(100) = 𝟏 [𝒎𝑴]
𝑉𝑚á𝑥

1 𝑼
𝑰𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒅𝒐𝒓 (𝒙) 𝑦 = 0,03𝑥 + 0,01 → 𝑽𝒎á𝒙 = = 𝟏𝟎𝟎 [ ];
0,01 𝒎𝑳
1 𝐾𝑚 1
𝑃𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑀𝑖𝑐ℎ𝑎𝑒𝑙𝑖𝑠 − 𝑀𝑒𝑛𝑡𝑒𝑛 𝑠𝑒 𝑡𝑖𝑒𝑛𝑒 𝑞𝑢𝑒 = + 𝑝𝑜𝑟 𝑡𝑎𝑛𝑡𝑜
𝑉0 𝑉𝑚á𝑥 [𝑆] 𝑉𝑚á𝑥
𝐾𝑚
𝐿𝑎 𝑝𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑠𝑒𝑟á 𝑑𝑎𝑛𝑑𝑜 = 𝑲𝒎 = (0,03)(100) = 𝟑 [𝒎𝑴]
𝑉𝑚á𝑥

1 𝑼
𝑰𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒅𝒐𝒓 (𝒍) 𝑦 = 0,03𝑥 + 0,03 → 𝑽𝒎á𝒙 = = 𝟑𝟑, 𝟑𝟑 [ ];
0,03 𝒎𝑳
1 𝐾𝑚 1
𝑃𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑀𝑖𝑐ℎ𝑎𝑒𝑙𝑖𝑠 − 𝑀𝑒𝑛𝑡𝑒𝑛 𝑠𝑒 𝑡𝑖𝑒𝑛𝑒 𝑞𝑢𝑒 = + 𝑝𝑜𝑟 𝑡𝑎𝑛𝑡𝑜
𝑉0 𝑉𝑚á𝑥 [𝑆] 𝑉𝑚á𝑥
𝐾𝑚
𝐿𝑎 𝑝𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑠𝑒𝑟á 𝑑𝑎𝑛𝑑𝑜 = 𝑲𝒎 = (0,03)(33,33) = 0.99 ≅ 𝟏 [𝒎𝑴]
𝑉𝑚á𝑥

Debido a que el inhibidor [x]=12µM corta en el mismo punto en el eje Y (Mismo valor de la velocidad
máxima) que el experimento sin inhibidor, se establece que es un inhibidor competitivo. En el caso del
inhibidor [I]=60µM se encuentra que corta en el mismo punto del eje X (Mismo valor de K M) que el
experimento sin inhibidor, por ende, es un inhibidor no competitivo.

[𝑋] = 12 µ𝑀 → 𝐶𝑜𝑚𝑝𝑒𝑡𝑖𝑡𝑖𝑣𝑜
𝑰𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒅𝒐𝒓𝒆𝒔 {
[𝑙] = 60 µ𝑀 → 𝑁𝑜 𝐶𝑜𝑚𝑝𝑒𝑡𝑖𝑡𝑖𝑣𝑜
 8. El silicato inhibe la acción catalítica de la enzima glutamato deshidrogenasa.
a. Determine el tipo de inhibición mediante el análisis grafico de los datos de la tabla.
b. Calcule la Kmáx para el sustrato. Suponga que la concentración de silicato se manifiesta
constante y es de 40.0 mM.

[Sustrato] V (mg de producto/mín.) 1/ [s] 1/[v] (mg de producto/mín.)

(mM) Sin silicato Con Silicato (mM) Sin silicato Con Silicato
1,5 0,21 0,08 0,67 4,76 12,50
2,0 0,25 0,10 0,50 4,00 10,00
3,0 0,28 0,12 0,33 3,57 8,33
4,0 0,33 0,13 0,25 3,03 7,69
8,0 0,44 0,16 0,13 2,27 6,25
16,0 0,45 0,18 0,06 2,22 5,56

Gráfico de dobles reciprocos (incidencia de silicato en la enzima)

14,00

12,00

10,00
y = 11,109x + 4,8012
8,00 R² = 0,992
1/[v]

6,00

4,00
y = 4,3254x + 1,913
2,00 R² = 0,9821

0,00
-0,60 -0,40 -0,20 0,00 0,20 0,40 0,60 0,80
-2,00
1/[S]

Sin silicato Con silicato

1 𝑼
𝑺𝒊𝒏 𝒊𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒅𝒐𝒓 𝑦 = 4,3254𝑥 + 1,913 → 𝑽𝒎á𝒙 = = 𝟎, 𝟓𝟐𝟐 [ ] ;
1,913 𝒎𝑳
1 𝐾𝑚 1
𝑃𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑀𝑖𝑐ℎ𝑎𝑒𝑙𝑖𝑠 − 𝑀𝑒𝑛𝑡𝑒𝑛 𝑠𝑒 𝑡𝑖𝑒𝑛𝑒 𝑞𝑢𝑒 = + 𝑝𝑜𝑟 𝑡𝑎𝑛𝑡𝑜
𝑉0 𝑉𝑚á𝑥 [𝑆] 𝑉𝑚á𝑥
𝐾𝑚
𝐿𝑎 𝑝𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑠𝑒𝑟á 𝑑𝑎𝑛𝑑𝑜 = 𝑲𝒎 = (4,3254)(0,523) = 𝟐, 𝟐𝟔 [𝒎𝑴]
𝑉𝑚á𝑥

1 𝑼
𝑰𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒅𝒐𝒓 (𝑺𝒊𝒍𝒊𝒄𝒂𝒕𝒐) 𝑦 = 11,109𝑥 + 4,8012 → 𝑽𝒎á𝒙 = = 𝟎, 𝟐𝟎𝟖 [ ] ;
4,8012 𝒎𝑳
1 𝐾𝑚 1
𝑃𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑀𝑖𝑐ℎ𝑎𝑒𝑙𝑖𝑠 − 𝑀𝑒𝑛𝑡𝑒𝑛 𝑠𝑒 𝑡𝑖𝑒𝑛𝑒 𝑞𝑢𝑒 = + 𝑝𝑜𝑟 𝑡𝑎𝑛𝑡𝑜
𝑉0 𝑉𝑚á𝑥 [𝑆] 𝑉𝑚á𝑥
𝐾𝑚
𝐿𝑎 𝑝𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑠𝑒𝑟á 𝑑𝑎𝑛𝑑𝑜 = 𝑲𝒎 = (11,109)(0,208) = 𝟐, 𝟑𝟏𝟒 [𝒎𝑴]
𝑉𝑚á𝑥

𝑁𝑜 ℎ𝑎𝑦 𝑐𝑎𝑚𝑏𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑲𝒎 (𝐸𝑙 𝑐𝑎𝑚𝑏𝑖𝑜 𝑛𝑜 𝑒𝑠 𝑠𝑖𝑔𝑛𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑡𝑖𝑣𝑜)

𝑵𝒐 𝒄𝒐𝒎𝒑𝒆𝒕𝒊𝒕𝒊𝒗𝒐 {
𝐷𝑖𝑠𝑚𝑖𝑛𝑢𝑦𝑒 𝑽𝒎á𝒙 (𝐸𝑙 𝑐𝑎𝑚𝑏𝑖𝑜 𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑚𝑎𝑛𝑒𝑟𝑎 𝑠𝑖𝑔𝑛𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑣𝑜)
 9. A partir de los siguientes datos obtenidos al estudiar el efecto de un inhibidor sobre una reacción
enzimática, determine el tipo de inhibición, Vmáx y la Km para el sustrato.

[Sustrato] V (µg de producto/mín.) 1/[S] 1/[V] (µg de producto/mín.)

(mM) Inhibidor = 0 [mM] Inhibidor = 6 [mM] (mM) Inhibidor = 0 [mM] Inhibidor = 6 [mM]
2,0 139 88 0,500 0,007 0,011
3,0 179 121 0,333 0,006 0,008
4,0 213 149 0,250 0,005 0,007
10,0 313 257 0,100 0,003 0,004
15,0 370 313 0,067 0,003 0,003

Gráfico de dobles reciprocos (Incidencia de inhibidores)

0,0140
0,0120
0,0100 y = 0,0188x + 0,002
R² = 0,9999
0,0080
0,0060
1/[V]

0,0040 y = 0,0103x + 0,0021

R² = 0,9987
0,0020
0,0000
-0,40 -0,30 -0,20 -0,10 0,00 0,10 0,20 0,30 0,40 0,50 0,60
-0,0020
-0,0040
-0,0060
1/[S]

Inhibidor = 0 [mM] inhibidor = 6 [mM]

1 𝑼
*𝑰𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒅𝒐𝒓 = 𝟎 [𝒎𝑴] 𝑦 = 0,0103𝑥 + 0,0021 → 𝑽𝒎á𝒙 = = 𝟒𝟕𝟔, 𝟏𝟗∗ ≅ 𝟓𝟎𝟎 [ ];
0,0021 𝒎𝑳
1 𝐾𝑚 1
𝑃𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑀𝑖𝑐ℎ𝑎𝑒𝑙𝑖𝑠 − 𝑀𝑒𝑛𝑡𝑒𝑛 𝑠𝑒 𝑡𝑖𝑒𝑛𝑒 𝑞𝑢𝑒 = + 𝑝𝑜𝑟 𝑡𝑎𝑛𝑡𝑜
𝑉0 𝑉𝑚á𝑥 [𝑆] 𝑉𝑚á𝑥
𝐾𝑚
𝐿𝑎 𝑝𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑠𝑒𝑟á 𝑑𝑎𝑛𝑑𝑜 = 𝑲𝒎 = (0,0103)(500) = 𝟓, 𝟏𝟓 [𝒎𝑴]
𝑉𝑚á𝑥

1 𝑼
𝑰𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒅𝒐𝒓 = 𝟔 [𝒎𝑴] 𝑦 = 0,0188𝑥 + 0,002 → 𝑽𝒎á𝒙 = = 𝟓𝟎𝟎 [ ];
0,002 𝒎𝑳
1 𝐾𝑚 1
𝑃𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑀𝑖𝑐ℎ𝑎𝑒𝑙𝑖𝑠 − 𝑀𝑒𝑛𝑡𝑒𝑛 𝑠𝑒 𝑡𝑖𝑒𝑛𝑒 𝑞𝑢𝑒 = + 𝑝𝑜𝑟 𝑡𝑎𝑛𝑡𝑜
𝑉0 𝑉𝑚á𝑥 [𝑆] 𝑉𝑚á𝑥
𝐾𝑚
𝐿𝑎 𝑝𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑠𝑒𝑟á 𝑑𝑎𝑛𝑑𝑜 = 𝑲𝒎 = (0,0188)(500) = 𝟗, 𝟒𝟎 [𝒎𝑴]
𝑉𝑚á𝑥

∗ 𝑆𝑒 𝑟𝑒𝑎𝑙𝑖𝑧𝑎 𝑢𝑛𝑎 𝑎𝑝𝑟𝑜𝑥𝑖𝑚𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑎𝑑𝑎 𝑙𝑎 𝑐𝑖𝑓𝑟𝑎𝑠 𝑠𝑖𝑔𝑛𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑡𝑖𝑣𝑎𝑠 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑉𝑚á𝑥 𝑑𝑒 𝑙𝑜𝑠 𝑖𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑑𝑜𝑟𝑒𝑠

𝐻𝑎𝑦 𝑐𝑎𝑚𝑏𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑲𝒎 (𝐸𝑙 𝑐𝑎𝑚𝑏𝑖𝑜 𝑒𝑠 𝑎𝑙𝑡𝑎𝑚𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑠𝑖𝑔𝑛𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑡𝑖𝑣𝑜)
𝑪𝒐𝒎𝒑𝒆𝒕𝒊𝒕𝒊𝒗𝒂 {
𝑁𝑜 ℎ𝑎𝑦 𝑐𝑎𝑚𝑏𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑽𝒎á𝒙
 10. Al estudiar el efecto de una serie de compuestos sobre la enzima hexoquinasa
𝑮𝒍𝒄 + 𝑨𝑻𝑷 → 𝑮𝒍𝒄 − 𝟔 − 𝑷 + 𝑨𝑫𝑷
se observó que es inhibida por piruvato. La tabla muestra los valores de actividad en μmol/min
obtenidos cuando se varía la concentración de sustrato o de piruvato. En base a esto diga ¿Qué tipo de
inhibidor es piruvato?, Valor de Km y Vmáx.

(I) (mM) [S] = 1,00 mM [S] = 1,82 mM [S] = 2,50 mM [S] = 10,0 mM
0,0 1,25 2,00 2,50 5,00
0,2 0,83 1,33 1,67 3,33
0,4 0,63 1,00 1,25 2,50
0,6 0,50 0,80 1,00 2,00
0,8 0,42 0,67 0,83 1,67
1,0 0,36 0,57 0,71 1,43

𝑹𝒆𝒆𝒔𝒕𝒓𝒖𝒄𝒕𝒖𝒓𝒂𝒏𝒅𝒐 𝒍𝒂 𝒕𝒂𝒃𝒍𝒂, 𝒑𝒂𝒓𝒂 𝒎𝒂𝒚𝒐𝒓𝒐𝒓 𝒄𝒐𝒎𝒑𝒓𝒆𝒏𝒔𝒊𝒐𝒏 𝒅𝒆 𝒍𝒂 𝒎𝒊𝒔𝒎𝒂, 𝒔𝒆 𝒕𝒊𝒆𝒏𝒆:

(S) (l) 0 mM (l) 0,2 mM (l) 0,4 mM (l) 0,6 mM (l) 0,8 mM (l) 1,0 mM
1 1,25 0,83 0,63 0,5 0,42 0,36
1,82 2 1,33 1 0,8 0,67 0,57
2,5 2,5 1,67 1,25 1 0,83 0,71
10 5 3,33 2,5 2 1,67 1,43

1/(S) 1/(l) 0 mM 1/(l) 0,2 mM 1/(l) 0,4 mM 1/(l) 0,6 mM 1/(l) 0,8 mM 1/(l) 1,0 mM
1,00 0,80 1,20 1,59 2,00 2,38 2,78
0,55 0,50 0,75 1,00 1,25 1,49 1,75
0,40 0,40 0,60 0,80 1,00 1,20 1,41
0,10 0,20 0,30 0,40 0,50 0,60 0,70

Gráfico de dobles reciprocos (incidencia del Piruvato en la reacción)

3,00

y = 2,3066x + 0,4782
2,50
y = 1,9773x + 0,4062
2,00
y = 1,6667x + 0,3335

1,50
y = 1,3187x + 0,2712
1/[l]

1,00 y = 1,0058x + 0,1986

0,50 y = 0,6667x + 0,1334

0,00
-0,40 -0,20 0,00 0,20 0,40 0,60 0,80 1,00 1,20
-0,50
1/[S]

0 mM 0,2 mM 0,4 mM 0,6 mM 0,8 mM 1,0 mM

 1 𝑼
𝑺𝒊𝒏 𝒊𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒅𝒐𝒓 𝑦 = 0,6667𝑥 + 0,1334 → 𝑽𝒎á𝒙 = = 𝟕, 𝟓𝟎 [ ] ;
0,1334 𝒎𝑳
1 𝐾𝑚 1
𝑃𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑀𝑖𝑐ℎ𝑎𝑒𝑙𝑖𝑠 − 𝑀𝑒𝑛𝑡𝑒𝑛 𝑠𝑒 𝑡𝑖𝑒𝑛𝑒 𝑞𝑢𝑒 = + 𝑝𝑜𝑟 𝑡𝑎𝑛𝑡𝑜
𝑉0 𝑉𝑚á𝑥 [𝑆] 𝑉𝑚á𝑥
𝐾𝑚
𝐿𝑎 𝑝𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑠𝑒𝑟á 𝑑𝑎𝑛𝑑𝑜 = 𝐊 𝐦 = (0,6667)(7,50) = 𝟓, 𝟎 [𝒎𝑴]
𝑉𝑚á𝑥

1 𝑼
𝑰𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒅𝒐𝒓 (𝟎, 𝟐𝟎 𝒎𝑴) 𝑦 = 1,0058𝑥 + 0,1986 → 𝑽𝒎á𝒙 = = 𝟓, 𝟎𝟑 ≅ 𝟓, 𝟎𝟎 [ ] ;
0,1986 𝒎𝑳
1 𝐾𝑚 1
𝑃𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑀𝑖𝑐ℎ𝑎𝑒𝑙𝑖𝑠 − 𝑀𝑒𝑛𝑡𝑒𝑛 𝑠𝑒 𝑡𝑖𝑒𝑛𝑒 𝑞𝑢𝑒 = + 𝑝𝑜𝑟 𝑡𝑎𝑛𝑡𝑜
𝑉0 𝑉𝑚á𝑥 [𝑆] 𝑉𝑚á𝑥
𝐾𝑚
𝐿𝑎 𝑝𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑠𝑒𝑟á 𝑑𝑎𝑛𝑑𝑜 = 𝑲𝒎 = (1,0058)(5,00) = 𝟓, 𝟎𝟐𝟗 ≅ 𝟓, 𝟎𝟎 [𝒎𝑴]
𝑉𝑚á𝑥

1 𝑼
𝑰𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒅𝒐𝒓 (𝟎, 𝟒𝟎 𝒎𝑴) 𝑦 = 1,3187𝑥 + 0,2712 → 𝑽𝒎á𝒙 = = 𝟑, 𝟔𝟗 ≅ 𝟑, 𝟕𝟎 [ ] ;
0,2712 𝒎𝑳
1 𝐾𝑚 1
𝑃𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑀𝑖𝑐ℎ𝑎𝑒𝑙𝑖𝑠 − 𝑀𝑒𝑛𝑡𝑒𝑛 𝑠𝑒 𝑡𝑖𝑒𝑛𝑒 𝑞𝑢𝑒 = + 𝑝𝑜𝑟 𝑡𝑎𝑛𝑡𝑜
𝑉0 𝑉𝑚á𝑥 [𝑆] 𝑉𝑚á𝑥
𝐾𝑚
𝐿𝑎 𝑝𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑠𝑒𝑟á 𝑑𝑎𝑛𝑑𝑜 = 𝑲𝒎 = (1,3187)(3,70) = 𝟒, 𝟗𝟎 ≅ 𝟓, 𝟎𝟎 [𝒎𝑴]
𝑉𝑚á𝑥

𝑁𝑜 ℎ𝑎𝑦 𝑐𝑎𝑚𝑏𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑲𝒎 (𝐸𝑙 𝑐𝑎𝑚𝑏𝑖𝑜 𝑛𝑜 𝑒𝑠 𝑠𝑖𝑔𝑛𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑡𝑖𝑣𝑜)

𝑵𝒐 𝒄𝒐𝒎𝒑𝒆𝒕𝒊𝒕𝒊𝒗𝒐 {
𝐷𝑖𝑠𝑚𝑖𝑛𝑢𝑦𝑒 𝑽𝒎á𝒙 (𝐸𝑙 𝑐𝑎𝑚𝑏𝑖𝑜 𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑚𝑎𝑛𝑒𝑟𝑎 𝑠𝑖𝑔𝑛𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑡𝑖𝑣𝑜)

11. Se estudio el efecto de un medicamento sobre la actividad de una enzima oligomérica. Para este
estudio se midió actividad de la enzima frente a este reactivo, obteniéndose los siguientes resultados:
a. Grafique los resultados en función de [S] en ausencia y presencia del reactivo
b. Calcule Km y Vmáx
c. Explique cómo actúa este medicamento y que efecto produce sobre la actividad de la enzima.
d. ¿Se podría utilizar en terapias, suponiendo que los productos de la actividad enzimática son
cancerígenos? (Se sabe que la concentración intracelular de sustrato es aproximadamente 9,0 mM)

[S] Vel. (Control) [U/mL] Vel. (Reac 1mM) [U/mL] 1/[S] 1/V (Control) [U/mL] 1/V (Reac. 1mM) [U/mL]
0,20 2,00 0,02 5,00 0,50 50,00
0,30 2,90 0,08 3,33 0,34 12,50
0,40 3,80 0,30 2,50 0,26 3,33
0,80 7,40 3,90 1,25 0,14 0,26
1,00 9,10 9,10 1,00 0,11 0,11
5,00 33,00 98,00 0,20 0,03 0,01
10,00 50,00 99,00 0,10 0,02 0,01

1 𝑼
𝑪𝒐𝒏𝒕𝒓𝒐𝒍 𝑦 = 0,0986𝑥 + 0,012 → 𝑽𝒎á𝒙 = = 𝟖𝟑, 𝟑𝟑 [ ];
0,012 𝒎𝑳
1 𝐾𝑚 1
𝑃𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑀𝑖𝑐ℎ𝑎𝑒𝑙𝑖𝑠 − 𝑀𝑒𝑛𝑡𝑒𝑛 𝑠𝑒 𝑡𝑖𝑒𝑛𝑒 𝑞𝑢𝑒 = + 𝑝𝑜𝑟 𝑡𝑎𝑛𝑡𝑜
𝑉0 𝑉𝑚á𝑥 [𝑆] 𝑉𝑚á𝑥

𝐾𝑚
𝐿𝑎 𝑝𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑠𝑒𝑟á 𝑑𝑎𝑛𝑑𝑜 = 𝐊 𝐦 = (0,0986)(83,33) = 𝟖, 𝟐𝟐 [𝒎𝑴]
𝑉𝑚á𝑥

El medicamento en cuestión produce un cambio en la cinética de la enzima convirtiéndola en una hiperbólica

en sigmoidea que crece rápidamente, no obstante, a una concentración de
1
9 𝑚𝑀 [𝑆] → [𝑆] = 0,11 ≅ 0,10 el no uso del reactivo es más optimo en esta etapa, después de esto aumenta la
hipótesis de utilizarla para terapias enzimáticas ya a la concentración intracelular del sustrato y la velocidad de
precursores necesarios es mayor en el principio activo que sin este.
 Actividad de enzima frente a reactivo.
Control [U/mL]
0,60
0,50 y = 0,0986x + 0,012
R² = 0,9996
0,40
0,30
1/[V] 0,20
0,10
0,00
-1,00 0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00
-0,10

1/[S]
Control [U/mL]

Actividad de enzima frente a reactivo.

Reactivo 1,0 mM [U/mL]
60,000
50,000
40,000
Título del eje

y = 3,4043x2 - 7,6525x + 2,219

30,000 R² = 0,9908
20,000
10,000
0,000
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00
-10,000
Título del eje

Reactivo 1,0 mM [U/mL]

Actividad de enzima frente a reactivo.

Control [U/mL] vs Reactivo 1,0 mM [U/mL]
60,00

50,00

40,00 y = 3,4043x2 - 7,6525x + 2,219

R² = 0,9908
30,00
1/[V]

20,00
y = 0,0986x + 0,012
10,00 R² = 0,9996

0,00
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00
-10,00
1/[S]

Control [U/mL] Reactivo 1,0 [U/mL]

Bibliografía

(1) NELSON, D. L.; Cox, M. M.; Lehninger, A. L. LEHNINGER: PRINCIPIOS DE BIOQUIMICA / David L.
Nelson, Michael M. Cox.5ed.

(2) PRATT, C. W.; Cornely, K. BIOQUIMICA / Charlotte W. Pratt, Kathleen Cornely.