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OBJETIVO:
Establecer los lineamientos generales mínimos necesarios para llevar a cabo el proceso de
validación de métodos analíticos.
JUSTIFICACIÓN:
Moral y Ética,
se justifica por los siguientes aspectos:
Aseguramiento de calidad,
Económica, y
Regulatoria.
DEFINICIONES:
Adecuabilidad del sistema.-Verificación de que el sistema opera con base a criterios que
permitan asegurar la confiabilidad de los resultados de un método analítico.
Analito.-Componente específico de una muestra a medir.
Calibración.-Conjunto de operaciones que determinan la relación entre los valores
indicados por un instrumento de medición y los valores conocidos correspondientes a
un patrón de referencia.
Documentación.-Conjunto de información que sustenta una actividad realizada.
Especificaciones.-Descripción del material que incluye la definición de sus propiedades
y características, con las tolerancias de variación de los parámetros de calidad.
Especificidad.-Capacidad de un método analítico para obtener una respuesta debida
únicamente al analito de interés.
Estudio colaborativo.-Reproducibilidad realizada en distintos laboratorios, por
diferentes químicos.
Exactitud.-Concordancia entre un valor obtenido empleando el método y el valor de
referencia.
Estabilidad analítica de la muestra.-Propiedad de una muestra preparada, de conservar
su integridad fisicoquímica y la concentración del analito, después de almacenarse por
un tiempo y condiciones determinadas.
Intervalo.-Concentraciones incluidas entre la concentración superior e inferior del
analito (incluyendo éstas), para las cuales se ha demostrado que el método es preciso,
exacto y lineal.
Límite de cuantificación.-Concentración mínima del analito que se puede determinar
con precisión y exactitud aceptables.
Límite de detección.-Concentración mínima del analito que puede ser detectada, pero no
necesariamente cuantificada.
Linealidad.-Habilidad para asegurar que los resultados obtenidos directamente o por
una transformación matemática, son proporcionales a la concentración del analito.
Metodología de prueba.-Procedimiento para determinar si un producto o materia prima
cumple con las especificaciones establecidas.
Método analítico.-descripción de la secuencia de actividades, materiales y parámetros
que se deben cumplir para llevar a cabo el análisis de un componente específico de la
muestra.
Método analítico desarrollado internamente.-Método desarrollado por el propio
laboratorio.
Método analítico indicativo de estabilidad.-Método cuantitativo capaz de detectar
variaciones en las propiedades del material evaluado, debido a las condiciones de
almacenaje.
Método analítico oficial.-Método que aparece en la literatura oficial reconocida.
Método analítico no oficial.-Método que no aparece en la literatura oficial reconocida.
Muestra.-Porción del material a evaluar.
Muestra analítica.-Porción del material a evaluar de acuerdo al método analítico.
Muestra adicionada.-Porción representativa del material a evaluar, a la que se le
adicionan cantidades conocidas del analito.
Parámetros de desempeño.-Parámetro específico a estudiar en un protocolo de
validación.
Placebo analítico.-Muestra que contiene todos los componentes de un producto a
excepción del analito.
Placebo adicionado.-Muestra e un placebo analítico al cual se le adiciona una cantidad
conocida del analito.
Precisión.-Grado de concordancia entre resultados analíticos individuales, cuando el
procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra
homogénea.
Precisión intermedia.-Precisión de un método analítico, expresada como la
concordancia relativa obtenida entre determinaciones independientes realizadas en un
mismo laboratorio, por diferentes analistas, en distintos días.
Proporcionalidad.-Relación establecida por una ecuación matemática entre los
resultados obtenidos por dos métodos analíticos.
Protocolo de validación,.Descripción de pruebas específicas para demostrar que un
proceso da resultados que cumplen con los criterios preestablecidos de manera
consistente.
Recobro.-Cantidad del analito determinada en el placebo adicionado, empleando el
método analítico.
Repetibilidad.-Precisión de un método analítico, expresada como la concordancia
obtenida entre determinaciones independientes realizadas por un solo analista, usando
los mismos instrumentos y métodos.
Reproducibilidad.-.Precisión de un método analítico, expresada como la concordancia
entre determinaciones independientes realizadas por diferentes laboratorios.
Revalidación.-comprobación de que el método analítico mantiene su desempeño cuando
existen cambios en la composición del producto, en el método analítico.
Robustez.-Capacidad del método analítico de mantener su desempeño al presentarse
variaciones pequeñas pero deliberadas, en los parámetros normales de operación del
método.
Sustancia de referencia.-Sustancia de uniformidad reconocida destinada a utilizarse en
comprobaciones analíticas físicas, químicas o microbiológicas en el transcurso de las
cuales se comparan con la sustancia en evaluación.
Sustancia de referencia primaria.-Sustancia que es designada por tener la más alta
calidad microbiológica, cuyas propiedades se aceptan sin referencia a otras sustancias.
Sustancia de referencia secundaria.-Sustancia cuyas propiedades se asignan por
comparación con una sustancia de referencia primaria, o bien, cuando es certificada
mediante un procedimiento científicamente reconocido.
Tolerancia.-Reproducibilidad de los resultados analíticos obtenidos por el análisis de la
misma muestra bajo diferentes condiciones normales de operación. La robustez y la
tolerancia son conceptos diferentes, ya que el primero se refiere a la influencia de
factores internos del método, mientras que la tolerancia se refiere a factores externos del
método.
Validación del método analítico.-Proceso por el cual se demuestra, por estudios de
laboratorio, que la capacidad del método satisface los requisitos para la aplicación
analítica deseada.
a) Métodos farmacopeicos
Metodología.- Preparar por lo menos un sextuplicado de soluciones a la
Precisión del Sistema:
Criterios de aceptación:
CV 1.5% para métodos físico-químicos
CV 3% para métodos biológicos
Valores superiores u otro criterio de aceptación deben ser justificados.
Metodología.- Inyectar por quintuplicado la solución de adecuabilidad,
Adecuabilidad del sistema (Métodos cromatográficos):
Metodología.- Preparar por lo menos por triplicado 5 niveles de concentración
Linealidad del sistema:
Criterios de aceptación:
r2 0.98
IC(1), no debe incluir el cero
Metodología.- Establecer las posibles sustancias interferentes y adicionar
Especificidad:
Criterios de aceptación:
La respuesta del método solo se deberá al analito.
Metodología:
Exactitud y Repetibilidad del método:
La adición del analito debe ser en las primeras etapas del método.
Criterios de aceptación:
Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 4.
Metodología:
Linealidad del método:
60% a 140%
UNIFORMIDAD DE DOSIS 75% - 125% Por lo tanto los niveles podrían
Ser 60%, 100% y 140%
Criterios de aceptación:
1) Cantidad adicionada vs cantidad recuperada:
r2 > 0.98
El IC(1) debe incluir la unidad
El IC(0) debe incluir el cero
El CVy/x del porcentaje de recobro:
No mayor de 2% en método es cromatográfico
No mayor de 2% en método volumétrico
No mayor de 3% en método químico o espectrofotométrico
No mayor de 5% en método microbiológico
No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación
del analito en la muestra.
2) Porcentaje de recobro:
Metodología.- Analizar por triplicado una muestra homogénea del producto
Precisión del Método (Precisión Intermedia o Tolerancia interdía / analista):
Criterios de aceptación:
CV 2% para métodos cromatográficos y volumétricos
CV 3% para métodos químicos o espectrofotométricos
CV 5% para métodos biológicos
No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación del
analito en la muestra.
Metodología.- Establecer la etapa de análisis en la cual se desea evaluar la
Estabilidad Analítica de la Muestra:
Criterios de aceptación:
di 2% métodos cromatográficos y volumétricos
di 3% para métodos químicos o espectrofotométricos
di 5% para métodos biológicos
Los resultados pueden ser analizados con otros métodos estadísticos como la
distribución t de Dunnett.
Límite de Detección:
Criterios de aceptación:
Metodología.-
2)LD con base en curva de calibración y desviación estándar de los blancos:
Se aplica tanto a métodos instrumentales como no
instrumentales.
Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito, placebos, etc.) a
valores menores o que incluya la especificación de la prueba de impurezas
limite, ya sea por dilución o pesada independiente del analito. Simultáneamente
preparar 5 blancos. Medir las respuestas analíticas. Para la curva de calibración,
sin incluir los blancos, calcular b1, r2 e IC(1).
Para los blancos, calcular Sb de los blancos.
Calcular el límite de detección:
Criterios de aceptación:
r2 0.98
IC(1), no debe incluir el cero.
El LD debe ser menor a la especificación de la prueba de impurezas limite.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.
Criterios de aceptación:
r2 0.98
IC(1), no debe incluir el cero.
El LD debe ser menor a la especificación de la prueba de impurezas limite.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.
Metodología.-
ordenada al origen:
Se aplica tanto a métodos instrumentales como no
instrumentales.
Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito, placebos, etc.) a
valores menores o que incluya la especificación de la prueba de impurezas
limite, ya sea por dilución o pesada independiente del analito. Medir las
respuestas analíticas.
Calcular b1, r2, Sbo, IC(1).
Calcular el límite de detección:
Criterios de aceptación:
de ruido.
r2 0.98
IC(1), no debe incluir el cero.
El LD debe ser menor a la especificación de la prueba de impurezas limite.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.
Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 8.
Limite de cuantificación:
Criterios de aceptación:
Metodología.-
2)LC con base en curva de calibración y desviación estándar de los blancos:
Se aplica tanto a métodos instrumentales como no
instrumentales.
Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito, placebos, etc.) a
valores menores o que incluya la especificación de contenido/ valoración de la
prueba de impurezas, ya sea por dilución o pesada independiente del analito.
Simultáneamente, preparar 5 blancos. Medir las respuestas analíticas. Calcular
b1, r2 e IC(1).
Para los blancos, calcular Sb de los blancos.
Calcular el límite de cuantificación:
Criterio de aceptación:
r2 0.98
IC(1), no debe incluir el cero.
El LC debe ser menor a la especificación del contenido/ valoración de la prueba
de impurezas.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.
Metodología.-
regresión:
Se aplica tanto a métodos instrumentales como no
instrumentales.
Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito, placebos, etc.) a
valores menores o que incluya la especificación de contenido/ valoración de la
prueba de impurezas, ya sea por dilución o pesada independiente del analito.
Medir las respuestas analíticas.
Calcular b1, r2, Sy/x, IC(1).
Calcular el límite de cuantificación:
Criterios de aceptación:
r2 0.98
IC(1), no debe incluir el cero.
El LC debe ser menor a la especificación del contenido/ valoración de la prueba
de impurezas.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.
Metodología.-
ordenada al origen:
Se aplica tanto a métodos instrumentales como no
instrumentales.
Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito, placebos, etc.) a
valores menores o que incluya la especificación de contenido/ valoración de la
prueba de impurezas, ya sea por dilución o pesada independiente del analito.
Medir las respuestas analíticas.
Calcular b1, r2, Sbo, IC(1).
Calcular el límite de cuantificación:
Criterios de aceptación:
cuantificación.
r2 0.98
IC(1), no debe incluir el cero.
El LC debe ser menor a la especificación del contenido/ valoración de la prueba
de impurezas.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.
Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 9.
Metodología.- Establecer los factores instrumentales (temperatura y presión
Robustez:
Criterios de aceptación:
di 2% métodos cromatográficos y volumétricos
di 3% para métodos químicos o espectrofotométricos
di 5% para métodos biológicos
No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación del
analito en la muestra.
Metodología.- Establecer los factores ajenos al equipo (diferentes equipos,
Tolerancia:
Criterios de aceptación:
CV 2% métodos cromatográficos y volumétricos
CV 3% para métodos químicos o espectrofotométricos
CV 5% para métodos biológicos
No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación del
analito en la muestra.
Los resultados pueden ser analizados con otros métodos estadísticos. Uno de
ellos es aplicar un análisis de varianza con un criterio de clasificación para
determinar si al menos una de las condiciones de uso es diferente, si se concluye
que si, se realiza una prueba estadística de comparaciones múltiples para
identificar aquellas condiciones que dan lugar a resultados diferentes.
SUSTANCIAS DE REFERENCIA:
Las sustancias de referencia constituyen un componente propio del método y una herramienta
en la evaluación de los parámetros de desempeño, lo que permite establecer la confiabilidad de
la metodología. Para su adquisición se debe contar con procedimientos para su manejo y
aplicación, así como registros del uso y con la documentación que avale una buena práctica de
manejo de dichas sustancias.
Tratamiento:
Cualquier tratamiento previo al que deba someterse la sustancia de referencia lo
debe contemplar la propia metodología, o en su caso, debe especificarse en su
marbete.
Procedencia:
Algunos centros especializados que proveen sustancias de referencia son:
*British Pharmacopoeia (BP), European Pharmacopoeia (EP)
*European Pharmacopoeia Chemical Refernce Substances (EPCRS),
*Comité de Sustancias Farmacéuticas de Referencia (COSUFAR)
*Organización Mundial de la Salud (OMS)
*Secretaría de Salud (SSA), y
*United States Pharmacopeia (USP)
REVALIDACIÓN:
Se deben establecer y justificar criterios apropiados para revalidación de métodos analíticos, así
como mantener un control de cambios. Cualquier cambio crítico a un método analítico da lugar
a uno nuevo y por lo tanto requiere de una validación como tal.
La siguiente tabla establece cambios en el método, su impacto y el parámetro de desempeño a
revalidar:
Los parámetros analíticos a comparar, así como los criterios para establecer la igualdad
de dichos parámetros, son los siguientes:
1) Especificidad:
Debe cumplir para cada método analítico, demostrando su especificidad o
exactitud.
Criterios de aceptación:
método.
Criterios de aceptación:
recobro de cada método.
Criterios de aceptación:
Anexo 15.
Estudio de Correlación:
Se utiliza cuando se comparan dos métodos cuyos resultados se expresan en
unidades diferentes.
Se aplica a métodos de contenido/valoración/potencia y los parámetros a evaluar
son:
1) Proporcionalidad:
No necesariamente establecen equivalencia de resultados, sino proporcionalidad,
ya que en muchas ocasiones la respuesta analítica es diferente.
componentes que están comúnmente en la muestra, de tal modo que pueda ser
analizado por ambos métodos en tres diferentes niveles del analito, que incluya
la especificación.
Del placebo analítico preparado adicionarle analito al nivel inferior. Fraccionar
en tres muestras y analizar cada muestra por ambos métodos bajo las mismas
condiciones de cada método para determinar el contenido/valoración/potencia.
Repetir este procedimiento con el nivel del 100% superior.
Reportar la relación contenido/valoración/potencia de cada método en cada
muestra del método a comparar (y), método de referencia (x). Calcular b1, b0, r2,
IC(1), CVy/x.
cumpla con la especificación, fijar una etapa de los métodos analíticos en los
cuales transfiera una mayor o menor cantidad e la muestra con el objeto de poder
variar el nivel del analito. Tener 3 muestras con nivel bajo, 3 niveles
correspondientes al 100% y 3 con un nivel alto del analito. Las 9 muestras se
analizan por ambos métodos en las mismas condiciones analíticas de cada
método. Determinar el contenido/valoración/potencia de cada muestra.
Reportar la relación contenido/valoración/potencia del método a comparar (y), el
método de referencia (x). Calcular b1, b0, r2, IC(1), CVy/x.
Criterios de aceptación:
El IC(1) no debe incluir el cero.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse.
Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo17.
2) Precisión:
El método no oficial deberá tener una precisión igual a mejor que el método
oficial, o que su precisión sea aceptable para la aplicación analítica.
dos analistas en dos días deben analizar por triplicado muestras independientes
(pesadas o alícuotas) de un lote homogéneo de producto, cuyo nivel de analito
esté incluido dentro de la especificación. Reportar el
contenido/potencia/valoración del analito de todas las muestras en % para ambos
métodos.
Criterios de aceptación:
El intervalo de confianza unilateral inferior, para la razón de varianzas del
método a comparar respecto del método de referencia, no debe exceder el valor
de 1.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse.
Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 18.
DOCUMENTACIÓN:
Las actividades de la validación de un método analítico deben ser sustentadas por los siguientes
documentos:
a) Protocolo, cuyo contenido es:
1. Titulo
2. Propósito u Objetivo,
3. Responsabilidades,
4. Plan de prueba describiendo los parámetros de desempeño que permitan
verificar la aplicación analítica deseada,
5. Criterios de aceptación para cada parámetro,
6. Formato de registro de resultados.
b) Reporte, cuyo contenido es:
1. Titulo,
2. Resultados,
3. Análisis de resultados,
4. Confrontación contra los criterios de aceptación,
5. Conclusión
Es crítico documentar los registros analíticos; dicha documentación deberá estar ordenada y
disponible, en responsabilidad del área de calidad.
BIBLIOGRAFIA:
Guideline for submitting Samples and Analytical Data for Methods Validation,
2000, FDA.
ANEXOS:
NUMERO CONTENIDO
1 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISIÓN DEL SISTEMA
2 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA ADECUABILIDAD DEL SISTEMA
3 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LINEALIDAD DEL SISTEMA
4 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA EXACTITUD Y Repetibilidad
DEL MÉTODO
5 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LINEALIDAD DEL MÉTODO
6 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISION DEL MÉTODO
(PRECISIÓN INTERMEDIA)
7 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA ESTABILIDAD ANALÍTICA
DE LA MUESTRA
8 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LIMITE DE DETECCIÓN
9 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LIMITE DE CUANTIFICACION
10 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA ROBUSTEZ
11 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA TOLERANCIA
12 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA REPETIBILIDAD Y EXACTITUD
PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS
13 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA REPETIBILIDAD EN
LINEALIDAD DEL MÉTODO PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS
14 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN EXACTITUD PARA COMPARACIÓN
DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS
15 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN LINEALIDAD DEL MÉTODO
PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS
16 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN PRECISIÓN DEL
MÉTODO PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS
17 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PROPORCIONALIDAD DE
MÉTODOS EN ESTUDIOS DE CORRELACIÓN PARA COMPARACIÓN DE
2 MÉTODOS ANALÍTICOS
18 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISIÓN DEL MÉTODO
EN ESTUDIO DE CORRELACIÓN PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS
19 TABLA ESTADÍSTICA DE LA DISTRIBUCIÓN t DE Student
20 TABLAS ESTADÍSTICAS DE LA DISTRIBUCIÓN F DE FISHER
21 COMENTARIOS RESPECTO A LOS CÁLCULOS Y REGLAS DE REDONDEO
A)FORMULAS:
Media Aritmética
y
y
n
Desviación Estándar
n y 2 y 2
S
nn 1
Coeficiente de variación
CV
S
*100
y
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Calcular ŷ y S
Calcular el CV
A)FORMULAS:
y
Media Aritmética
y
n
Desviación estándar
n y 2 y 2
S
nn 1
Coeficiente de variación
CV
S
*100
y
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Calcular ŷ y S
Calcular el CV
A)FORMULAS:
Pendiente
n xy x y
n x2 x2
b1
yb x
Ordenada al origen
b0
1
r2
n x2 x2n y2 y2
IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1
Intervalo de confianza para la pendiente
Sb1 Sy / x
x2
1
x2 n
Sy / x
y2 b xy b y
n2
1 o
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
y
Media aritmética
y
n
Desviación estándar
n y 2 y 2
S
nn 1
Coeficiente de variación
CV
S
*100
y
Intervalo de confianza para la media poblacional
IC ( μ ) y t 0.975, n 1
S
n
t0.975, n-1 Referirse al anexo 19 para determinar el valor de t de
Student
n = numero de recobros.
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Calcular ŷ y S
Calcular el CV
Determinar en el anexo 19 t0.975, n-1 y calcular IC()
n xy x y
Pendiente
n x2 x2
b1
y b1 x
Ordenada al origen
b0
n
r2
n x2 x2n y2 y2
IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb’
Intervalo de confianza para la pendiente
Sb ' Sy / x
x2
1
x2 n
Sy / x
y2 b xy b y
n2
1 o
IC(o) = bo t0.975,n-2Sbo
Intervalo de confianza para la ordenada al origen
x2
Sbo Sy / x
x2
1
x2
n
n
x
x
n
Coeficiente de variación de regresión
CVy / x 100
Sy / x
y
y
y
n
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
y
Media aritmética
y
n
Desviación estándar
n y 2 y 2
S
nn 1
Coeficiente de variación
CV
S
*100
y
Intervalo de confianza para la media poblacional
IC ( μ ) y t 0.975, n 1
S
n
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
y
Media aritmética
y
n
Desviación estándar
n y 2 y 2
S
nn 1
Coeficiente de variación
CV
S
*100
y
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Calcular ŷ y S
Calcular el CV
y0
y 0
no
no = número de muestras del análisis inicial
Media aritmética del análisis de cada condición de almacenaje
y1
y 1
n1
n1 = número de muestras del análisis de la i-ésima condición de almacenaje
di y1 y0
almacenaje respecto de la media aritmética del análisis inicial
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
n xy x y
Pendiente
n x2 x2
b1
r2
n x2 x2n y2 y2
Intervalo de confianza para la pendiente
IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1
Sb1 Sy / x
x2
1
x2 n
Sy / x
y2 b xy b y
n2
1 o
b0
yb x
1
n
Intervalo de confianza para la pendiente
t0.975, n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de
Student
3.3 Sb
LD
b1
Calcular b1, r2
Calcular el Sy/x y Sb1, bo
Determinar en el anexo 19 t0.975, n-2 y calcular IC(1)
E)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA LOS BLANCOS
Calcular Sb
Calcular el LD
n xy x y
Pendiente
n x2 x2
b1
r2
n x2 x2n y2 y2
Intervalo de confianza para la pendiente
IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1
Sb1 Sy / x
x2
1
x2 n
Sy / x
y2 b xy b y
n2
1 o
b0
yb x 1
3.3 Sy / x
Limite de detección
LD
b1
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO
Calcular b1, r2
Calcular el Sy/x y Sb’, bo
Determinar en el anexo 19 t0.975, n-2 y calcular IC(1)
Calcular el limite de detección
8.4 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADO EN LA DESVIACIÓN
ESTÁNDAR DE LA ORDENADA AL ORIGEN
A)FORMULAS
n xy x y
Pendiente
n x2 x2
b1
r2
n x2 x2n y2 y2
IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1
Intervalo de confianza para la pendiente
Sb1 Sy / x
x2
1
x2 n
Sy / x
y2 b xy b y
n2
1 o
b0
yb x 1
n
t0.975, n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student
x2
n
n
x
x
n
Limite de detección
3.3 Sbo
LD
b1
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO
Calcular b1, r2
Calcular el Sy/x y Sb’, bo
Determinar en el anexo 19 t0.975, n-2 y calcular IC(1)
Calcular x y Sbo
Calcular el LD
n xy x y
Pendiente
n x2 x2
b1
r2
n x2 x2n y2 y2
Intervalo de confianza para la pendiente
IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1
Sb1 Sy / x
x2
1
x2 n
Sy / x
y2 b xy b y
n2
1 o
b0
yb x
1
n
t0.975, n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student
n y 2 y 2
Sb
nn 1
n = número de blancos
10 Sb
LC
b1
Calcular b1, r2
Calcular el Sy/x y Sb’, bo
Determinar en el anexo 19 t0.975, n-2 y calcular IC(1)
E)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA LOS BLANCOS
Calcular Sb
Calcular el LC
9.3 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADA EN LA DESVIACIÓN
ESTÁNDAR DE REGRESIÓN
A)FORMULAS
n xy x y
Pendiente
n x2 x2
b1
r2
n x2 x2n y2 y2
Intervalo de confianza para la pendiente
IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1
Sb1 Sy / x
x2
1
x2 n
Sy / x
y2 b xy b y
n2
1 o
b0
yb x1
n
t0.975, n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student
Limite de cuantificación
10 Sy / x
LC
b1
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO
Calcular b1, r2
Calcular el Sy/x y Sb’, bo
Determinar en el anexo 19 t0.975, n-2 y calcular IC(1)
Calcular el LC
n xy x y
Pendiente
n x2 x2
b1
r2
n x2 x2n y2 y2
Intervalo de confianza para la pendiente
IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1
Sb1 Sy / x
x2
1
x2 n
Sy / x
y2 b xy b y
n2
1 o
b0
yb x 1
n
t0.975, n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student
x2
Sbo Sy / x
x2
1
x2
n
n
x
x
n
Limite de cuantificación
10 Sb
LC
b1
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO
Calcular b1, r2
Calcular el Sy/x y Sb’, bo
Determinar en el anexo 19 t0.975, n-2 y calcular IC(1)
Calcular x y Sbo
Calcular el LC
ANEXO 10. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA ROBUSTEZ.
A)FORMULAS:
y0
Media aritmética de la condición de operación.
yo
n0
no = numero e muestras de la condición normal de operación
y1
la condición normal
y1
n1
n1 = numero de muestras de la i-esima condición de operación
di y1 - y0
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
y
Media aritmética
y
n
Desviación estándar
n y 2 y 2
S
nn 1
Coeficiente de variación
CV
S
*100
y
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
n y2 y2
A)FORMULAS:
Varianza
S2
nn 1
Nota: Calcular la varianzas de cada método y para fines de cálculo del intervalo de confianza
para la razón de varianzas, se debe establecer.
S12= varianza menor
S22= varianza menor
F 0.025, n 2 1, n1 1 σ 22 S 22 F 0.975, n 2 1, n1 1
S 22
S12 σ 12 S12
F0.025,n2-1, n1-1 y F0.975, n2-1, n1-1 = Referirse al anexo 20 para determinar el valor de la F de Fisher
n2-1 son grados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los grados
de libertad del numerador; y n1-1 son los grados de libertad de la varianza
menor, que corresponden a los grados de libertad del denominador.
.n1 = numero de recobros del método de varianza menor
.n2 = numero de recobros del método de varianza mayor
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
n y2 y2
Varianza
S2
nn 1
Nota: Calcular la varianzas de cada método y para fines de cálculo del intervalo de confianza
para la razón de varianzas, se debe establecer.
S12= varianza menor
S22= varianza menor
Intervalo de confianza para la razón de varianzas.
F 0.025, n 2 1, n1 1 σ 22 S 22 F 0.975, n 2 1, n1 1
S 22
S12 σ 12 S12
F0.025,n2-1, n1-1 y F0.975, n2-1, n1-1 = Referirse al anexo 20 para determinar el valor de la F de Fisher
n2-1 son grados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los grados
de libertad del numerador; y n1-1 son los grados de libertad de la varianza
menor, que corresponden a los grados de libertad del denominador.
.n1 = numero de recobros del método de varianza menor
.n2 = numero de recobros del método de varianza mayor
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados
Calcular el porcentaje de recobro de cada muestra en cada método (y), al
obtener el cociente de la cantidad recuperada respecto de la cantidad
adicionada expresada en porcentaje.
Calcular Sy, Sy2 y determinar n para cada método analítico
Calcular la varianza de cada método
Determinar la varianza mayor (S22) y la varianza menor (S12)
Determinar en el anexo 20 F0.025 n2-1, n1-1y y F0.925, n2-1, n1-1y
Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas.
n y2 y2
Varianza
S2
nn 1
Nota: Calcular la varianzas de cada método y para fines de cálculo del intervalo de confianza
para la razón de varianzas, se debe establecer.
S12= varianza menor
S22= varianza menor
F 0.025, n 2 1, n1 1 σ 22 S 22 F 0.975, n 2 1, n1 1
S 22
S12 σ 12 S12
F0.025,n2-1, n1-1 y F0.975, n2-1, n1-1 = Referirse al anexo 20 para determinar el valor de la F de Fisher
n2-1 son grados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los grados
de libertad del numerador; y n1-1 son los grados de libertad de la varianza
menor, que corresponden a los grados de libertad del denominador.
.n1 = numero de recobros del método de varianza menor
.n2 = numero de recobros del método de varianza mayor
14.2 IGUAL REPETIBILIDA (VARIANZAS EQUIVALENTES):
A)FORMULAS:
Media aritmética del método 1.
y1
y 1
n1
y2
y 2
n2
S12
n1n1 1
n2 y22 y2 2
Varianza del método 2.
S 22
n2n 2 1
Intervalo de confianza para la diferencia de 2 medias poblacionales.
IC μ 1 μ 2 y1 - y2 t 0.975n1 n 22
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Calcular ŷ1, ŷ2
Calcular S12, S22
Determinar en el anexo 19 t0.975, n1+n2 y calcular IC(1-2)
14.3 DIFERENTE REPETIBILIDAD (VARIANZAS DIFERENTES):
A)FORMULAS:
Media aritmética del método 1.
Media aritmética del método 2.
Varianza del método 1.
Varianza del método 2.
Intervalo de confianza para la diferencia de 2 medias poblacionales.
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Calcular ŷ1, ŷ2
Calcular S12, S22
Calcular gl
Determinar en el anexo 19 t0.975, gl y calcular IC(1-2)
Calcular x1, x12, x2, x22, y1, y12, xy1, y2, y22, xy1 y
Tabular los resultados
determinar n1 y n2.
Calcular b11, b12, b01, bo2
Calcular Sx/y y Sb11 – Sb12
Determinar en el anexo 19 t0.97523, y calcular IC(1-2)
Calcular x1, x2, Sbo1-Sbo2
Calcular IC(01-02)
15.2 PORCENTAJE DE RECOBRO:
15.2.1 COMPARACIÓN DE Repetibilidad DE AMBOS MÉTODOS
A)FORMULAS:
Varianza
Intervalo de confianza para la razón de varianzas.
15.2.2 IGUAL Repetibilidad (VARIANZAS EQUIVALENTES)
A)FORMULAS:
Media aritmética del método 1.
Media aritmética del método 2.
Varianza del método 1.
Varianza del método 2.
Intervalo de confianza para la diferencia de 2 medias poblacionales.
15.3 DIFERENTE REPETIBILIDAD (VARIANZAS DIFERENTES):
A)FORMULAS:
Media aritmética del método 1.
Media aritmética del método 2.
Varianza del método 1.
Varianza del método 2.
Intervalo de confianza para la diferencia de 2 medias poblacionales.
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: