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GUA DE SOLUCIN

DE PROBLEMAS EN
CROMATOGRAFA
LQUIDA
COMUNQUESE CON PHENOMENEX SI NECESITA:
n Columnas para HPLC (desde capilares hasta preparativas)
n Columnas de exclusin por tamao (SEC): acuosa (GFC) o no
acuosa (GPC)
n Anlisis de aminocidos
n Columnas especializadas para el anlisis de:

n Drogas farmacuticas bsicas, cidas o anfotricas

n Separaciones de pH alto/bajo (pH 1-12)

n Protenas/Pptidos por fase reversa

n Biopolmeros-protenas y cidos nuclicos por mtodos

de GFC/SEC
n Polmeros sintticos

n Alimentos y bebidas

n Muestras ambientales

n Drogas en fluidos biolgicos


n Fase estacionaria de HPLC a granel
n Accesorios para HPLC tales como:

n Filtros para muestras y solventes

n Proteccin de columnas SecurityGuard

n Filtros para jeringa

n Jeringas y viales

n Calentador de columnas/Enfriador-Calentador de columnas

n Vlvulas de inyeccin para HPLC

n Tubos y conectores

n Desgasificadores de solventes

n Selectores de columnas

n Procesadores de fluidos
n Columnas para gases
n Tubos de SPE (extraccin por fase slida), Platos de 96 pocillos
n Soporte para aplicaciones, desarrollo y validacin
n Servicio Tcnico fuera de serie
NDICE

I. Introduccin...................................................................................... 1

II. Presin anormal................................................................................ 2

III. Fugas................................................................................................ 4

IV. Problemas con el cromatograma..................................................... 6

V. Problemas con el inyector.............................................................. 14

VI. Problemas detectados por medio del olfato, vista u odo.............. 15

VII. Areas de problemas clave y mantenimiento preventivo................. 17


SecurityGuard Sistema de Cartuchos de Proteccin Universal

para HPLC.......................................................................................19

Filtros para jeringa Phenex........................................................... 20

2012 Phenomenex, Inc. Todos los derechos reservados.

Este manual no puede ser copiado ni reproducido total o parcialmente sin la autorizacin por escrito de
Phenomenex, Inc. USA.

An cuando se hecho todo lo posible para asegurar la confiabilidad de la informacin contenida en


esta gua, Phenomenex no asume responsabilidad por el uso que se d a la misma. Es bienvenida
cualquier adicin o correccin para ser incorporadas en futuras ediciones.
I. INTRODUCCIN
LOCALIZANDO Y CORRIGIENDO EL PROBLEMA
La correcta identificacin del problema es la mejor forma de acercarse a la solucin
del mismo. Esta gua se divide en cinco categoras principales de sntomas para
ayudarle en una forma efectiva a identificar el origen del problema que usted esta
confrontando:
presin anormal
fugas
problemas con el cromatograma
problemas con el inyector
otros problemas detectados por los sentidos del olfato, vista u odo
Cuando haya corregido el problema, regstrelo en un libro de incidentes que ser
muy valioso en el futuro para la identificacin de los problemas.

PREVENCIN
Muchos problemas en cromatografa lquida pueden evitarse con el mantenimiento
preventivo rutinario, por ejemplo el reemplazo de los sellos (juntas) de la bomba a
intervalos regulares, puede eliminar las fallas asociadas a esas juntas (sellos). La
seccin VII lista las reas de problemas ms comunes para cada mdulo y las prc-
ticas de mantenimiento preventivo que reducen su frecuencia. Estas sugerencias
pueden ser modificadas para ajustarse al modelo de su cromatgrafo y para ser
implementadas como una rutina en su laboratorio.

DONDE CONSEGUIR AYUDA ADICIONAL


Deben consultarse los manuales del operador as como de servicio. Estos
manuales contienen diagramas, y procedimientos a seguir para resolver pro-
blemas en algn modelo especfico, as como nmeros de parte para ordenar
repuestos.
El conocimiento de otras personas en el laboratorio que hayan experimentado un
problema similar y lo hayan resuelto, es un valioso recurso.
El fabricante del instrumento puede ayudarle tambin. La mayora de ellos ofre-
cen soporte tcnico sin costo a sus clientes.
Phenomenex, tiene un equipo de consultores tcnicos experimentados que
pueden asistirle en casi cualquier problema de cromatografa. Llmenos, enve-
nos un fax o email.
Phenomenex ofrece seminarios para HPLC.
Hay un numero de fuentes de referencia que pueden guiarle en la solucin del
problema:
J.W. Dolan and L.R. Snyder, Troubleshooting LC Systems, Humana Press, NJ
(1989).
L.R. Snyder and J.J. Kirkland, Introduction to Modern Liquid Chromatography,
2nd ed., Wiley, NY (1979).
D.J. Runser, Maintaining and Troubleshooting HPLC Systems - A Users Guide,
Wiley, NY (1981).
J.W. Dolan, Troubleshooting, LC/GC Magazine. Publicacin mensual.

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II. PRESIN ANORMAL
Un cambio en la presin de operacin es un signo de que puede haber un pro-
blema. Seleccione abajo cual categora se parece ms a los sntomas que presenta
su instrumento de HPLC. Entonces siga las sugerencias para corregir el problema.
A. No hay flujo ni lectura de presin
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
1. Est apagado 1. Encindalo
2. Fusible quemado 2. Reemplace el fusible
3. Fallas o ajuste del controlador 3. a. Verifique que la programacin es
la correcta
b. Repare o cambie el controlador
4. Pistn roto 4. Cambie el pistn
5. Aire atrapado en el cabezal de 5. Desgasifique los solventes, elimine el
la bomba aire de la bomba principal
6. Fase mvil insuficiente 6. a. Rellene el recipiente de la fase
mvil
b. Limpie el frit de entrada si
est tapado
7. Vlvula check fallando 7. Cambie la vlvula check
8. Fuga mayor 8. Apriete o cambie los conectores
B. No hay lectura de presin y el flujo es normal
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
1. Medidor fallando 1. Cambie el medidor
2. Transductor de presin fallando 2. Cambie el transductor
C. La presin se mantiene alta
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
1. El ajuste del flujo es demasiado alto 1. Ajstelo adecuadamente
2. Frit de la columna tapado 2. a. Monte la columna al revs y pase flujo
b. Reemplace frit*
c. Reemplace la columna
3. Fase mvil incorrecta, precipitacin 3. a. Use la fase mvil correcta
de la solucin reguladora (bfer) b. Lave la columna
4. Columna incorrecta 4. Use la columna adecuada
5. Inyector tapado 5. Limpie o cambie el inyector
6. Temperatura de la columna 6. Aumente la temperatura
demasiado baja
7. Mal funcionamiento del controlador 7. Repare o cambie el controlador
8. Guarda columna (pre-columna) tapada 8. Cambie el guarda columna
9. Filtro en lnea bloqueado 9. Remueva o cambie el filtro en lnea
* Remover los conectores podria anular la garanta de la columna, verifique con el fabricante antes de hacerlo.

2
II. PRESIN ANORMAL (contina)

D. La presin se mantiene baja


CAUSA PROBABLE SOLUCIN
1. El ajuste del flujo es demasiado bajo 1. Ajuste el flujo correctamente
2. Fuga en el sistema 2. Localcela y corrjala
3. Columna incorrecta 3. Use la columna apropiada
4. Temperatura de la columna 4. Disminuya la temperatura
demasiado alta
5. Mal funcionamiento del controlador 5. Repare o cambie el controlador

E. Presin en aumento
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
1. Vea la seccin C 1. Vea la seccin C

F. Presin llegando a cero


CAUSA PROBABLE SOLUCIN
1. Vea las secciones A y B 1. Vea las secciones A y B

G. Presin disminuyendo pero no en cero


CAUSA PROBABLE SOLUCIN
1. Vea la seccin D 1. Vea la seccin D

H. La presin sube y baja


CAUSA PROBABLE SOLUCIN
1. Aire atrapado en la bomba 1. a. Desgasifique el solvente
b. Saque el aire la bomba
2. Vlvula check fallando 2. Cambie la vlvula
3. Sello (junta) de la bomba fallando 3. Cambie el sello de la bomba
4. Desgasificado insuficiente 4 a. Desgasifique el solvente
b. Cambie el mtodo de desgasificar,
use Degassex (desgasificador en
lnea)
5. Fuga en el sistema 5. Localcela y reprela
6. Uso de elucin con gradiente 6. Las variaciones de presin son
normales cuando se usa gradiente
debido a cambios en la viscosidad

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III. FUGAS
Las fugas se resuelven casi siempre apretando o cambiando un conector. De
cualquier forma debe tomar en cuenta que apretando de ms los conectores de
metal pueden daarse y causar fuga. As mismo los conectores de plstico pueden
desgastarse apretndolos demasiado. Cuando un conector sigue con fuga despus
de apretarlo un poco ms, es mejor quitarlo y examinario para comprobar que no
esta daado debido a un ferrul deformado o a partculas de los sellos (juntas). Los
conectores que presenten algn dao deben desecharse.

A. Conectores con fugas


CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Conector flojo 1. Apritelo


2. Conector trasroscado 2. Cmbielo
3. Conectores demasiado apretados* 3. a. Afljelo y vuelva a apretarlo
b. Cmbielo
4. Conector sucio 4. a. Desmonte y lmpie el conector
b. Cmbielo
5. Partes que no ajustan 5. Use partes de una misma marca

B. Fugas en la bomba
CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Vlvula check mal apretada 1. a. Apriete la vlvula check (no se


exceda)
b. Cmbiela
2. Conectores flojos 2. Apriete los conectores, sin
excederse
3. Falla en los sellos del mezclador 3. a. Cambie las sellos
b. Cambie el mezclador
4. Fallas en los sellos de la bomba 4. Repare o cambie los sellos
5. Falla en la presin del transductor 5. Reprelo o cmbielo
6. Falla en el apagador del regulador 6. Cmbielo
7. Falla en la vlvula proporcionadora 7. a. Observe los diafragmas,
cmbielos si fugan
b. Verifique si hay dao en los
conectores, cmbielos
8. Vlvula de purga 8. a. Apriete la vlvula
b. Cambie la vlvula

* Use conectores de apretar con los dedos (fingertight) para evitar problemas de sellado y/o el uso de herramientas

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III. FUGAS (contina)

C. Fugas en el inyector
CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Falla en el sello del rotor 1. Reconstruya o cambie el inyector


2. Serpentn (loop) bloqueado 2. Cambie el serpertn (loop)
3. Sello del puerto de inyeccin flojo 3. Ajstelo
4. Dimetro de la aguja de la 4. Use la jeringa correcta
jeringa incorrecto
5. Lnea de drenaje succionando 5. Mantenga la lnea de drenaje arriba de
la superficie de drenaje
6. Lnea de drenaje bloqueada 6. Cambie la lnea de drenaje

D. Fuga en la columna
CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Conector flojo 1. Apriete el conector


2. Material de empaque de la columna 2. Desmonte, enjuague el ferrul y
en el ferrul mntelo de nuevo
3. Frit con espesor incorrecto 3. Use el frit apropiado (vea la
tabla de abajo)

E. Fugas en el detector
CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Falla en el sello de la celda 1. a. Evite una presin excesiva


b. Cambie el sello
2. Ventanas de la celda rotas 2. Cambie las ventanas
3. Conectores goteando 3. Apritelos o cmbielos
4. Lnea de drenaje bloqueada 4. Cambie la lnea de drenaje
5. Flujo de la celda bloqueado 5. Reconstruya o cmbiela

GUA PARA LA SELECCIN DE LOS FRITS


Cuando el tamao de partcula es: El tamao de poro del frit debe ser:

2 - 4 m 0.5 m

5 - 20 m 2 m

5
IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA
Muchos de los problemas en el sistema de LC producen cambios en el cromato-
grama. Algunos de esos problemas pueden solucionarse haciendo ajustes en el
equipo, mientras otros pueden requerir modificacin en los procedimientos de
ensayo. La seleccin correcta del tipo de columna y de fase mvil son la clave para
una buena cromatografa.
A. Pico con coleo (Tailing)
CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Frit tapado 1. a. Montar al revs la columna (de ser


posible) y lavar para limpiar el frit*
b. Reemplace la columna
2. Columna con vaco 2. llene el vaco*
3. Pico interfiriendo 3. a. Use una columna ms larga
b. Cambie la fase mvil y/o la
selectividad de la columna
4. pH de la fase mvil, incorrecto 4. Ajuste el pH. Para compuestos
bsicos, pH ms bajo da
picos ms simtricos.
5. Muestras reaccionando con los 5. a. Agregue un reactivo de pareo
sitios activos inico o un modificador
bsico voltil
b. Cambie la columna
Normal Problema

PICO CON COLEO

B. Pico con fronteo (fronting)


CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Temperatura baja 1. Aumente la temperatura de la


columna
2. Solvente de la muestra incorrecto 2. Use fase mvil como solvente de
inyeccin
3. Muestra saturada 3. Disminuya la concentracin de la
muestra
4. Columna daada 4. Vea A.1 y A.2

*Vea la garanta de la columna con el fabricante. Remover los conectores


puede anular la garanta de la columna, verifique con el fabricante antes de hacerlo.

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IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (contina)

C. Picos divididos
CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Contaminacin del guarda 1. Remueva el guarda columna y


columna o de la columna analtica haga una corrida, cmbielo de ser
necesario. Si la columna analtica se
obstruye, mntela al revs y prguela.
Si el problema persiste la columna
Normal Problema podra tener contaminantes
fuertemente retenidos. Use el
procedimiento correcto de
restauracin. Si el problema persiste
podra ser que la entrada est tapada.
PICOS DIVIDIDOS Cambie la columna.

2. Solvente de la muestra 2. Cambie el solvente. Cada vez
incompatible con la fase mvil que sea posible inyecte las
muestras con fase mvil.

D. Distorsin ms grande de los picos


CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Saturacin con la muestra 1. Disminuya el tamao de la muestra

E. Distorsin de los primeros picos


CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Inyeccin con solvente equivocado 1. a. Reduzca el volumen


de inyeccin
b. Use un solvente ms
dbil para la inyeccin

F. Ms coleo (tailing) en los primeros picos que en los ltimos


CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Efecto extra columna 1. a. Cambie el tubo del sistema


por uno ms corto y de menor
dimetro interno
b. Use una celda del detector
de menor volumen

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IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (contina)

G. Aumento de coleo (tailing) al aumentar k


CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Efectos secundarios de 1. a. Agregue trietilamina


retencin en fase reversa (muestras bsicas)
b. Agregue acetato
(muestras cidas)
c. Agregue sal o bfer
(muestras inicas)
d. Pruebe con una
columna diferente
2. Efectos secundarios de 2. a. Agregue trietilamina
retencin en fase normal (compuestos cidos)
b. Agregue cido actico
(compuestos cidos)
c. Agregue agua
(polifuncionales). Solamente
en mtodos de fase normal
que usan solventes miscibles
con agua.
d. Pruebe un mtodo de
HPLC distinto
3. Efectos de retencin 3. Agregue trietilamina
secundaria, par inico (muestras bsicas)

H. Picos cidos o bsicos con coleo (tailing)
CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Solucin reguladora 1. a. Use bfer con concentracin


(bfer) incorrecta 50-100 mM
b. Use bfer con pKa igual a
la fase mvil

I. Picos extra
CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Otros componentes en la muestra 1. Normal


2. Pico de una inyeccin previa 2. a. Aumente el tiempo de anlisis
eluyendo tardamente o la curva del gradiente
b. Aumente el flujo
3. Picos fantasma o vacantes 3. a. Verifique la pureza de
la fase mvil
b. Use fase mvil como
solvente de inyeccin
c. Reduzca el tamao de la inyeccin
4. Contaminacin 4. Filtre la muestra

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IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (contina)

J. Movimiento en los tiempos de retencin


CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Pobre control de la temperatura 1. Use termostato con la columna


2. Fase mvil cambiante 2. Evite el cambio
(evaporacin, reaccin, etc.)
3. Acondicionamiento de 3. De ms tiempo de acondicionamiento
la columna insuficiente a la columna entre un anlisis y otro
K. Cambio abrupto en los tiempos de retencin
CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Cambio en el flujo 1. Restablezca el flujo


2. Aire atrapado en la bomba 2. Purgue la bomba para eliminar
el aire
3. Fase mvil incorrecta 3. a. Cambie la fase mvil
por la correcta
b. Ajuste la mezcla apropiada de
fase mvil en el controlador
L. Elevacin de la lnea base
CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Fluctuacin en la temperatura. 1. Controle la temperatura de la fase


(An los cambios mnimos causan mvil y de la columna, use
que la lnea base se mueva arriba intercambiador de calor antes
o hacia abajo. Afecta ms a detectores del detector
de ndice de refraccin, de
conductividad y de UV, a alta
Normal Problema
sensibilidad o en modo fotomtrico
directo.) ELEVACIN DE LA LNEA BASE

2. Fase mvil no homognea. (Se eleva 2. Use solventes grado HPLC, sales y
generalmente a absorbancias altas, aditivos de alta pureza. Desgasifique
ms que con fluctuaciones la fase mvil antes de usarla, haga
cclicas de temperatura.) burbujear helio durante su uso.
3. Contaminacin o burbuja de 3. Lave la celda con metanol, u otro
aire en la celda del detector solvente fuerte. De ser necesario
limpie la celda con HNO3 1N
(jams use HCl).
4. Salida de lnea tapada despus del 4. Desconecte o cambie la lnea. Vea el
detector. (La alta presin fractura manual del detector para
la ventana de la celda produciendo cambiar la ventana.
una lnea base con ruido.)
5. Problema en el mezclado de la fase 5. Corregir la composicin y/o el flujo.
mvil o cambio en la velocidad flujo Para evitar esto, observe
rutinariamente la composicin
y el flujo.
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IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (contina)

L. Elevacin de la lnea base (contina)


CAUSA PROBABLE SOLUCIN

6. Acondicionamiento lento de la 6. Purgue con un solvente


columna especialmente cuando se medianamente fuerte, corra con 10 a
cambia la fase mvil 20 volmenes de columna con fase
mvil nueva, antes de
iniciar el anlisis
7. Fase mvil contaminada, deteriorada, 7. Verifique como se prepara la fase
o preparada con materiales de mvil. Use solventes de la ms alta
baja calidad pureza grado HPLC.
8. Materiales fuertemente retenidos en 8. Use guarda-columna. De ser
la muestra (k alta) pueden eluir dando necesario purgue la columna con un
picos muy gruesos y aparecer una solvente fuerte entre inyecciones o
lnea base elevada. (Los anlisis con peridicamente entre anlisis.
gradiente pueden agravar este problema.)
9. Fase mvil reciclada, aunque 9. Ajuste la lnea base. Use fase mvil
el detector no ha sido ajustado nueva cuando los lmites dinmicos
del detector son excedidos.
10. Detector (UV) no ajustado al mximo 10. Cambie la longitud de onda de UV
de absorbancia sino a la al mximo de absorbancia
pendiente de la curva
M. Ruido en la lnea base (regular)
CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Aire en la fase mvil, celda del 1. Desgasifique la fase mvil. Purgue


detector o en la bomba el sistema para eliminar el aire del
detector, la celda o la bomba.
2. Fugas 2. Vea la seccin III. Verifique que el
Normal sistema no tenga conectores flojos.
Vea que la bomba no tenga fugas,
Problema
incrustaciones de sales o haga ruidos
RUIDO DE LA LNEA BASE poco comunes. De ser necesario
cambie los sellos de la bomba.
3. Mezclado incompleto de la fase mvil 3. Mezcle la fase mvil manualmente
o use un solvente menos viscoso
4. Efecto de temperatura (columna a 4. Reduzca la diferencia de
alta temperatura, detector sin calentar) temperaturas o use un
intercambiador de calor
5. Otro equipo electrnico en 5. Ponga aparte del cromatgrafo de
la misma lnea lquidos, para determinar si el
problema es externo. Corrjalo
de ser necesario.
6. Pulsaciones en la bomba 6. Incorpore un regulador de
pulsaciones en el sistema
10
IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (contina)

N. Ruido en la lnea base (irregular)


CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Fugas 1. Vea la seccin III. Verifique si hay


Normal conectores flojos. Vea si la bomba
gotea, tiene incrustaciones de sales,
cambie los sellos de ser necesario.
Problema Vea si la celda del detector no
RUIDO DE LA LNEA BASE tiene fugas.
2. Fase mvil contaminada, deteriorada 2. Verifique como se prepara
o preparada con materiales la fase mvil
de baja calidad
3. Fase mvil con solventes 3. Seleccione y use solo
no miscibles solventes miscibles
4. Detector y registrador electrnicos 4. Asle electrnicamente ambos.
Vea las instrucciones para
corregir el problema.
5. Aire atrapado en el sistema 5. Purgue el sistema con
un solvente fuerte
6. Burbujas de aire en el detector 6. Purgue el detector. Instale un
componente para presin
despus del detector.
7. Celda del detector contaminada 7. Limpie la celda con HNO3 1N
(An las ms pequeas cantidades (nunca use HCl)
de contaminantes producen ruido.)
8. Lmpara del detector muy dbil 8. Cambie la lmpara
9. Columna fugando slica o 9. Cambie la columna
material de empaque
10. Mezclador de fase mvil daado 10. Repare o cambie el mezclador
o funcionando mal o mezcle fuera de lnea si
es isocrtico

O. Picos muy anchos


CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Cambio en la composicin 1. Prepare fase mvil nueva


de la fase mvil
2. Flujo de la fase mvil demasiado bajo 2. Ajuste el flujo
3. Fugas (especialmente entre 3. Vea la seccin III. Verifique que no
la columna y el detector) hayan conectores flojos. Vea que
la bomba no tenga fugas,
incrustaciones de sales, o ruido.

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IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (contina)

O. Picos muy anchos (contine)


CAUSA PROBABLE SOLUCIN

4. Ajuste incorrecto del detector 4. Ajste bien


5. Efectos extra columna 5. a. Inyecte un volumen menor
a. Columna saturada (10 l vs. 100 l) o diluya
la muestra a 1:10 y 1:100

b. Tiempo de respuesta del detector b. Reduzca el tiempo de respuesta


largo o volumen de la celda o use una celda ms pequea
demasiado grande

c. La tubera entre la columna y el c. Use una pieza ms corta de
detector es demasiado larga tubo con un dimetro interno
de entre 0.005 y 0.007

d. El tiempo de respuesta del d. Reduzca el tiempo de respuesta
registrador es demasiado largo
6. Concentracin de la solucin 6. Aumente la concentracin
reguladora demasiado baja
7. Guarda columna contaminada 7. Cambie el guarda columna
o desgastada
8. Columna contaminada/desgastada. 8. Cambie la columna por una
Conteo de platos muy bajo. nueva del mismo tipo
9. Vaco a la entrada de la columna 9. Cambie la columna por otra nueva
10. Un pico representando dos o ms 10. Cambie el tipo de columna para
compuestos pobremente resuelto mejorar la separacin
11. Temperatura de la columna muy baja 11. Aumente la temperatura. No exceda
los 60 C a menos que el fabricante
de la columna indique lo contrario.
12. Constante del tiempo del detector 12. Use una constante ms pequea
demasiado larga

Normal Problema

PICOS MUY ANCHOS

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IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (contina)

P. Prdida de resolucin
CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Fase mvil contaminada /deteriorada, 1. Prepare fase mvil fresca


causando cambios en los
tiempos de retencin
2. Guarda columna o 2. Quite el guarda columna y haga un
columna tapadas anlisis. Cambie el guarda de ser
necesario. Si la columna analtica
esta tapada, pngala al revs y
prguela. Si el problema persiste la
columna pudiera estar fallando
Normal debido a que tiene retenidos
contaminantes muy fuertes. Use el
procedimiento de regeneracin
Problema apropiado. Si el problema persiste,
probablemente este tapada la entrada.
PRDIDA DE RESOLUCIN
Limpie el frit o cambie la columna.

Q. Todos los picos demasiado pequeos


CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. La atenuacin del detector 1. Reduzca la atenuacin


es demasiado alta
2. La constante de tiempo del 2. Use una constante menor
detector es demasiado grande
3. La inyeccin es demasiado pequea 3. a. Aumente la concentracin
de la muestra
b. Aumente el volumen de inyeccin
4. Conexin del registrador incorrecta 4. Corrija la conexin

R. Todos los picos demasiado grandes


CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. La atenuacin del detector 1. Aumente la atenuacin


es muy baja
2. Inyeccin demasiado grande 2. a. Reduzca la concentracin de la
muestra
b. Disminuya el volumen de
inyeccin. Use un serpentn ms
corto o use un serpentn
parcialmente rellenado.
3. Mala conexin del registrador 3. Corrija la conexin

13
V. PROBLEMAS CON EL INYECTOR
Estos problemas se detectan generalmente cuando se usan vlvulas de inyec-
cin. Las fugas en las vlvulas de inyeccin se discuten en la Seccin III (Fugas).

A. Inyector manual difcil de operar


CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Sello del rotor, daado 1. Reconstruya o cambie la vlvula


2. Rotor demasiado apretado 2. Ajuste la tensin del rotor

B. Inyector manual difcil de cargar


CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Vlvula mal alineada 1. Ajuste la alineacin


2. Serpentn (loop) bloqueado 2. Cambie el serpentn (loop)
3. Jeringa sucia 3. Limpie o cmbiela
4. Lneas bloqueadas (tapadas) 4. Lmpielas o cmbielas

C. El autoinyector no funciona
CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. No hay presin de aire (o corriente) 1. Ajuste la presin al punto correcto


2. El rotor esta muy apretado 2. Ajuste
3. Vlvula mal alineada 3. Ajuste la alineacin

D. Otros problemas con el autoinyector


CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Obstruccin 1. Destpelo o cambie la porcin


obstruida
2. Mecanismo atorado 2. Vea el manual de servicio
3. Controlador fallando 3. Cambie o repare el controlador

14
VI. PROBLEMAS DETECTADOS POR MEDIO DEL
OLFATO, EL ODO O LA VISTA
Para identificar los problemas de LC se necesita hacer uso de todos los senti-
dos. Seria una buena idea dedicar unos minutos cada da para usar todos los
sentidos (a excepcin del gusto), para determinar las condiciones del equipo
de LC y asegurarse que esta funcionado correctamente. Esta prctica le puede
ayudar muchas veces a localizar rpidamente algn problema ya que en mu-
chas ocasiones se puede percibir el olor de una fuga antes de encontrar donde
se encuentra. La mayora de los problemas se identifican con la vista, y muchos
de ellos se incluyen en la seccin anterior.

A. Olor a solvente
CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Fugas 1. Vea la seccin III


2. Derrame 2. a. Verifique que el recipiente
de drenado no est rebosando
b. Localice el derrame y lmpielo

B. Olor a sobrecalentamiento
CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Sobrecalentamiento del mdulo 1. a. Verifique que hay ventilacin


adecuada, ajstela
b. Vea que la temperatura sea la
correcta, ajuste de ser necesario
c. Apague el mdulo y vea el
manual de servicio

C. Lecturas del medidor fuera de lo normal


CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Anomala en la presin 1. Vea la seccin II


2. Problema con el horno 2. a. Vea los ajustes y corrija
de la columna b. Consulte el manual de servicio
3. Lmpara del detector fallando 3. Cambie la lmpara

D. Luz de aviso de anomala


CAUSA PROBABLE SOLUCIN
1. Lmite de presin excedido 1. a. Vea si hay algn bloqueo
b. Verifique los limites de
operacin, ajstelos
2. Otras lmparas de aviso 2. Consulte el manual de servicio

15
VI. PROBLEMAS DETECTADOS POR MEDIO DEL
OLFATO, EL ODO O LA VISTA (contina)

E. Timbre de aviso de anomala


CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Fuga o derrame de solvente 1. Localice y corrija


2. Otros timbres de aviso sonando 2. Consulte el manual de servicio

F. Chillidos y chirridos
CAUSA PROBABLE SOLUCIN

1. Falla en los cojinetes (baleros) 1. Consulte el manual de servicio


2. Mala lubricacin 2. Lubrique tanto como sea necesario
3. Desgaste mecnico 3. Consulte el manual de servicio

16
VII. PROBLEMAS CLAVE Y MANTENIMIENTO
PREVENTIVO
La tabla de abajo presenta los problemas ms comunes que ocurren en cualquier
equipo de HPLC. En la columna de la derecha estn las prcticas de manteni-
miento preventivo que pueden evitar a la incidencia de fallas. Entre parntesis se
presenta la frecuencia sugerida para el mantenimiento. Los manuales de servicio
y del operador de su equipo pueden tener sugerencias adicionales para el mejor
mantenimiento preventivo de su modelo de LC.

Deposito (tanque)
PROBLEMA MANTENIMIENTO PREVENTIVO
1. Frit de entrada tapado 1. a. Lave la columna montndola al
revs
b. Filtre la fase mvil con filtro
de 0.5 m
2. Burbujas de gas 2. Desgasifique la fase mvil

Bomba
PROBLEMA MANTENIMIENTO PREVENTIVO
1. Burbujas de aire 1. Desgasifique la fase mvil
2. Falla en el sello de la bomba 2. Cmbielo cada 3 meses
3. Falla en la vlvula check 3. Filtre la fase mvil, use un frit en la
entrada de la lnea. Tenga una
vlvula de repuesto.

Inyector
PROBLEMA MANTENIMIENTO PREVENTIVO
1. Sello del rotor desgastado 1. a. No apriete de ms
b. Filtre las muestras

Columna
PROBLEMA MANTENIMIENTO PREVENTIVO
1. Frit tapado 1. a. Filtre la fase mvil
b. Filtre las muestras
c. Use un filtro en lnea y/o
guarda columnas
2. Vaco en la cabeza de la columna 2. a. Evite fase mvil con pH > 8
(para la mayora de columnas a
base de slica)
b. Use guarda columna
c. Use pre-columna (columna
de saturacin)

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VII. PROBLEMAS CLAVE Y MANTENIMIENTO
PREVENTIVO (contina)

Detector
PROBLEMA MANTENIMIENTO PREVENTIVO
1. Fallas en la lmpara, respuesta del 1. Cambie cada 6 meses.
dectector disminuida, aumento Tenga uno de repuesto.
en el ruido del detector
2. Burbujas en la celda 2. a. Mantenga limpia la celda
b. Use restrictor despus
de la celda
c. Desgasifique la fase mvil

General
PROBLEMA MANTENIMIENTO PREVENTIVO
1. Dao corrosivo/abrasivo 1. Elimine los residuos de sales en el
sistema y lmpielo cuando no lo use

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AVISO: LOS CONTAMINANTES PUEDEN CAUSAR
ALTA PRESIN
PICOS DIVIDIDOS
PICOS DEMASIADO ANCHOS
RUIDO EN LA LNEA BASE
ELEVACIN DE LA LNEA BASE
PERDIDA DE RESOLUCIN
DAO IRREVERSIBLE EN LA COLUMNA
Dao al sistema
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forma efectiva tanto a sus valiosas columnas analticas como sus resultados del
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Del inyector

contaminantes
compuestos de inters
Guarda Cartucho Columna de HPLC
(Holder)
AJUSTE UNIVERSAL*:
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19
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Para filtracin de muestras y solventes antes de la cromatografa


Menos tiempo de paro

Resultados ms consistentes y reproducibles

Mayor tiempo de vida de la columna

Rpida filtracin de muestras para HPLC y GC antes


del anlisis

Particulado, PVC, y filtros libres de extrables

Menos paros en el sistema

Phenex ofrece:
Baja absorcin de protenas Bajo volumen
Mxima compatibilidad Calidad certificada
qumica
Integridad probada al 100%
Mnimo de extrables
Uso bidireccional
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Tipos de membrana

RC NY
Regenerated Cellulose (Nylon)

PTFE Teflon CA
(Polytetrafluoroethylene) (Cellulose Acetate)

PES GF
(Polyethersulfone) (Glass Fiber)

Los filtros para jeringa anteriores no son estriles. La cubierta


est hecha de polipropileno (PP) grado mdico.
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Si Phenex no fuciona igual o mejor que
los filtros para jeringa que est usando
actualmente con membrana, dimetro
Tip: Pruebe una muestra
y tamao de poro similares, regrese
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Marcas comerciales
SecurityGuard y Phenex son marcas comerciales de Phenomenex. PTFE y Teflon son marcas
comerciales registradas de E.I. du Pont de Nemours and Co.

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