GUIA DE VALIDACIN DE METODOS ANALITICOS

Definiciones:
ESPECIFICIDAD: Habilidad de evaluar inequvocamente el analito en presencia de
componentes que se puede esperar que estn presentes. Tpicamente stos pueden incluir
impurezas, productos de degradacin, la matriz, etc.
EXACTITUD: (VERACIDAD): Expresa la cercana entre el valor que es aceptado, sea como un
valor convencional verdadero (material de referencia interno de la firma), sea como un valor de
referencia aceptado (material de referencia certificado o estndar de una farmacopea) y el valor
encontrado (valor promedio) obtenido al aplicar el procedimiento de anlisis un cierto nmero de
veces.
INTERVALO DE LINEALIDAD: mbito entre la menor y la mayor concentracin de analito en la
muestra (incluyendo stas concentraciones) para las cuales se ha demostrado que el
procedimiento analtico tiene el nivel adecuado de precisin, exactitud y linealidad.
LIMITE DE CUANTIFICACION: Cantidad ms pequea del analito en una muestra que puede
ser cuantitativamente determinada con exactitud aceptable. Es un parmetro del anlisis
cuantitativo para niveles bajos de compuestos en matrices de muestra y se usa particularmente
para impurezas y productos de degradacin. Se expresa como concentracin del analito.
LIMITE DE DETECCION: Cantidad ms pequea de analito en una muestra que puede ser
detectada por una nica medicin, con un nivel de confianza determinado, pero no
necesariamente cuantificada con un valor exacto.
Es comnmente expresado como concentracin del analito.
LINEALIDAD: Habilidad (dentro de un mbito dado) del procedimiento analtico de obtener
resultados de prueba que sean directamente proporcionales a la concentracin de analito en la
muestra.
MATERIAL DE REFERENCIA (PATRN TERCIARIO): Material o sustancia, en el cual una o
ms de sus propiedades estn suficientemente bien establecidas para que sea usado en la
calibracin de un aparato, la estimacin de un mtodo de medicin o para asignar valores a los
materiales.
MATERIAL DE REFERENCIA CERTIFICADO (PATRN SECUNDARIO): Material en el que
los valores de una o ms de sus propiedades estn certificados por un procedimiento
tcnicamente validado, bien sea que este acompaado de, o pueda obtenerse, un certificado u
otra documentacin emitida por un ente certificador.
MATERIAL ESTANDAR DE REFERENCIA (PATRN PRIMARIO): Material emitido por la
Oficina Nacional de Normas de Estados Unidos (U.S National Bureau of Standars) cuyo nombre
fue cambiado recientemente a Instituto Nacional para Normas y Tecnologa (National Institute
for Standards and Technology, NIST.)

METODO ANALITICO: Adaptacin especfica de una tcnica analtica para un propsito de

medicin seleccionado.
PARAMETROS DE DESEMPEO ANALITICO: Caractersticas de validacin que necesitan ser
evaluadas y que tpicamente corresponden a la siguiente lista: exactitud, precisin,
especificidad, lmite de deteccin, lmite de Cuantificacin, linealidad, intervalo de linealidad y
robustez.
LIBROS OFIACIALES: Los aprobados mediante el decreto 28466-S y sus modificaciones.
PRECISION: expresa la cercana de coincidencia (grado de dispersin) entre una serie de
mediciones obtenidas de mltiples muestreos de una misma muestra homognea bajo
condiciones establecidas. Puede considerarse a tres niveles: repetibilidad, precisin intermedia
y reproducibilidad.
Debe determinarse utilizando muestras originales y homogneas. Sin embargo, si no es posible
obtener una muestra homognea puede ser determinada usando muestras preparadas o una
disolucin de la muestra.
PRECISION INTERMEDIA: Precisin obtenida dentro del laboratorio por diferentes analistas,
diferentes equipos, das distintos con la misma muestra homognea.
PROCEDIMIENTO ANALITICO: Forma en que se realiza el anlisis. Debe describir en detalle
los pasos necesarios para realizar cada prueba analtica. Puede incluir, pero no necesariamente
los siguientes conocimientos: caractersticas de la muestra, preparacin de los estndares de
referencia y reactivos, uso de los aparatos o instrumentos, generacin de la curva de calibracin,
uso de frmulas para los clculos.
PROCEDIMIENTO ANALITICO OFICIAL: Procedimiento analtico estandarizado contenido en
una farmacopea oficial o libros oficiales. Se les supone validados y los laboratorios que los
utilizan no estn obligados a validar la exactitud de los mismos, solamente demostrar su aptitud
para aplicarlos, validando la linealidad y precisin del sistema.
REPETIBILIDAD (REPETITIVIDAD): Precisin obtenida bajo las mismas condiciones de
operacin en un intervalo corto de tiempo (mismo da), por un mismo analista, en la misma
muestra homognea y en el mismo equipo.
REPRODUCIBILIDAD: Expresa la precisin entre laboratorios como resultado de estudios
interlaboratoriales diseados para estandarizar la metodologa.
ROBUSTEZ: Medida de la capacidad de un procedimiento analtico de permanecer inafectado
por pequeas pero deliberadas variaciones en los parmetros del mtodo y provee una
indicacin de su fiabilidad en condiciones de uso normales.
SELECTIVIDAD: Describe la habilidad de un procedimiento analtico para diferenciar entre
varias sustancias en la muestra y es aplicable a mtodos en los que dos o ms componentes
son separados y cuantificados en una matriz compleja.

SESGO: Se usa en el sentido de exactitud de un promedio a largo plazo (valor esperado) de una
serie de promedios. Es la diferencia en el valor esperado (tericamente igual al promedio de un
nmero infinito de valores individuales independientes) del valor verdadero, correcto o asumido.
SISTEMA ANALITICO: Est compuesto por: equipos, reactivos, materiales, documentos,
patrones, materiales de referencia, analistas y variables operativas, que se utilizan en un
mtodo de anlisis.
TECNICA ANALITICA: Principio cientfico que se ha encontrado til para proveer informacin
sobre la composicin de un determinado producto o material
VALIDACIN: Confirmacin que se da por la recopilacin y anlisis de la evidencia objetiva de
que se cumplen los requisitos particulares para el uso especfico propuesto.
VALIDACIN DE UN PROCEDIMIENTO ANALITICO: Procedimiento para establecer por medio
de estudios laboratoriales una base de datos que demuestren cientficamente que un mtodo
analtico tiene las caractersticas de desempeo que son adecuadas para cumplir los
requerimientos de las aplicaciones analticas pretendidas.
Implica la demostracin de la determinacin de las fuentes de variabilidad y del error sistemtico
y al azar de un procedimiento, no solo dentro de la calibracin sino en el anlisis de muestras
reales.
1

Exactitud:

Existen diferentes maneras de determinar la exactitud, los siguientes son los ms

frecuentes en la literatura, y pueden ser utilizados en todos los tipos de anlisis.
1.1

Comparacin con un mtodo oficial, validado o

estandarizado:

Verificacin
La muestra debe ser analizada, utilizando el mtodo a validar y un segundo mtodo bien
caracterizado, el cual debe tener una exactitud bien definida y establecida. Se analizan 6
muestras por replicado a la concentracin normal de trabajo por ambos mtodos.
Criterio de aceptacin:
Se lleva a cabo un anlisis de varianza (ANOVA), del porcentaje de recuperacin o del error
relativo en porcentaje, para determinar si hay o no diferencia significativa entre la exactitud de
los mtodos comparados.
1.2

Adicin estndar:

Verificacin
Se puede llevar a cabo de dos maneras diferentes:
3

1.2.1 Con placebo:

Se utiliza una mezcla preparada en el laboratorio de todos los componentes de la matriz de la
muestra sin el principio activo a determinar, luego el placebo se enriquece con estndar.
1.2.2 Con muestra:
Cuando no es posible contar con un placebo, se determina por replicado el contenido
promedio del analito en la muestra con el mtodo a validar; una vez conocido el
contenido promedio se procede a enriquecer las muestras con estndar. Para preparar
las soluciones, en este caso se mantiene constante la cantidad de muestra tomada y se
agregan cantidades variables del estndar.
En ambos casos se preparan soluciones de placebo o de muestras enriquecidas a tres
niveles de concentracin diferentes, valores sugeridos en la literatura son 80, 100 y
120 % de la concentracin normal de trabajo del mtodo. ICH (International Conference
Harmonization), recomienda preparar muestras independientes por triplicado a cada
nivel de concentracin. En el caso en que se trabaje con muestra enriquecida, para
llevar a cabo el clculo del porcentaje de recuperacin, se requiere contar con los datos
de contenido del principio activo en la muestra antes de la adicin estndar.
Criterios de aceptacin
Tabla 1
Concentracin del analito
Ensayo

Criterio de aceptacin

1. Placebo enriquecido
Porcentaje de recuperacin
esperado debe encontrarse
entre el 98%-102%. Lo cual es
equivalente a 2 % de error
relativo.
Al graficar la cantidad
recuperada contra la cantidad
adicionada, debe obtenerse un
coeficiente de correlacin de
1.00, una pendiente de 1.00 y
el intercepto debe ser 0.00. Lo
cual puede ser corroborado
estadsticamente.
2. Muestra enriquecida

Los
porcentajes
de
recuperacin obtenidos, deben
encontrarse dentro del 100%
4S, donde S es la mayor
desviacin estndar obtenida
en la determinacin de la
precisin del mtodo o del
4

sistema
Al graficar la respuesta del
ensayo (cantidad
total
encontrada), contra la cantidad
de analito adicionada, la
pendiente debe ser mayor o
igual a 0.95 y el intercepto
debe
ser
igual
a
la
concentracin inicial.

Trazas
Sobre 100 ppb (ng/ L)
Menos de 100 ppb (ng/ L )
Menos 1 ppb

1.3

80%-100% de recuperacin
60%-110 % de recuperacin
70%-120% de recuperacin

Comparacin de las curvas de regresin lineal de estndares

con curvas de regresin lineal de placebos enriquecidos
(mtodos de curvas de respuesta relativa):

Verificacin
Este mtodo es una modificacin del mtodo de adicin estndar a placebo. Se
preparan soluciones a diferentes niveles de concentracin de placebo enriquecido ( 80,
100, 120%) y soluciones de estndares a los mismos niveles de concentracin.
Separadamente se evala la regresin lineal de ambos grupos y se lleva a cabo la
comparacin de las pendientes y los interceptos.
Criterio de aceptacin:
Los efectos de la interaccin entre la matriz y el analito, se encuentran ausentes si los
interceptos del placebo enriquecido y los estndares son estadsticamente iguales a cero,
(informacin que a la vez permite establecer la especificidad del mtodo respecto a la matriz). El
error sistemtico proporcional se encuentra ausente si la razn de las pendientes de las curvas
de respuesta para el placebo y los estndares es estadsticamente equivalente a 1.
1.4

Comparacin de los resultados obtenidos de un estndar o

material de referencia certificado:

Verificacin
El material de referencia puede ser obtenido en el mercado por algn suplidor o
puede ser preparado internamente en el laboratorio. Se analiza por replicado el
material, por el mtodo a validar y se compara el resultado obtenido con el valor
verdadero declarado, este mtodo se encuentra limitado por la disponibilidad y la
5

estabilidad del material de referencia, as como por el grado de certidumbre que se tenga
del valor verdadero de la concentracin del material de referencia.

Criterio de aceptacin
98%-102% de recuperacin o 2% de error relativo
2

Precisin

Verificacin
Existen diferentes formas de evaluar la precisin: repetibilidad, precisin intermedia,
reproducibilidad
En trminos generales la precisin, debe determinarse, analizando un nmero suficiente
de alcuotas, que permitan calcular estadsticamente la desviacin estndar y la
desviacin estndar relativa. La ICH, recomienda llevar a cabo un total de nueve
determinaciones, que cubran el intervalo especificado en el procedimiento. Para ello se
pueden trabajar tres niveles diferentes de concentracin ( 80, 100, 120 %), con tres
muestras independientes de cada nivel. Datos con los que se cuenta si al evaluar la
exactitud, se llev a cabo por el mtodo de Adicin estndar. Otra forma de evaluarlo
es, analizando por lo menos seis muestras independientes a la concentracin normal de
trabajo.
Criterios de aceptacin:
Existen diferentes criterios de aceptacin, sin embargo se puede generalizar que en el
caso de la repetibilidad y la precisin intermedia la desviacin estndar relativa, para
evaluar la precisin del sistema o del mtodo debe ser menor o igual al 2 %, y en
algunos casos puede ser igual o menor del 3%, la reproducibilidad, puede ser 2 o 3
veces la repetibilidad.
3

Linealidad e intervalo

Verificacin
El comportamiento lineal de un mtodo, debe ser demostrado dentro del intervalo en el
cual es probable que se trabaje. Este intervalo vara dependiendo del tipo de
determinacin a realizar. Por esta razn se establece los intervalos dentro de los cuales
deben llevarse a cabo las pruebas para cada anlisis:
Tabla 2
Anlisis
Intervalo de trabajo
Ensayo del principio activo
80-120 % de la concentracin de trabajo
Determinacin de impurezas
50-120% de la especificacin
Ensayo de Uniformidad de contenido
70-130% de la concentracin de trabajo, o
alguna
modificacin
del
mismo,
dependiendo de la naturaleza de la forma
dosificada
6

Prueba de disolucin

20 % sobre la especificacin, en el caso

de la liberacin controlada, en que existe
una especificacin mnima al inicio de la
prueba y una mxima al finalizar, el
intervalo debe ser menos un 20% de la
especificacin mnima y ms 20% de la
especificacin mxima.

Para llevar a cabo la determinacin de la linealidad y el intervalo, se deben seguir los siguientes
pasos:
3.1

Linealidad e intervalo del sistema:

Verificacin
1. Preparar en forma independiente soluciones de estndar al menos 5 niveles de
concentracin, las cuales deben encontrarse dentro de los intervalos establecidos para
cada tipo de anlisis.
2. Este procedimiento debe repetirse en forma independiente por lo menos 3 veces,
para evaluar estadsticamente la regresin lineal del sistema.
3. Con estos datos se grafica la respuesta de la medicin, contra la concentracin
del analito. Se verifican datos con comportamiento atpico mediante mediciones
adicionales.
4. Realizar un anlisis de varianza de la regresin lineal
5. Calcular el coeficiente de regresin (calcular por lo menos tres curvas
independientes)
6. Calcular y graficar los residuos (valor real de la concentracin el calculo por la
ecuacin de regresin para cada valor de X)
3.2

Linealidad e intervalo del mtodo

Verificacin
1. Preparar soluciones de muestra o placebo enriquecidos a cinco niveles de
concentracin, los cuales deben encontrarse dentro de los intervalos establecidos por la
USP para cada tipo de anlisis, y que fueron verificados previamente al llevar a cabo la
determinacin de la linealidad del sistema.
2. Este procedimiento debe repetirse en forma independiente por lo menos 3 veces, para
evaluar estadsticamente la regresin lineal del mtodo
3. Con estos datos se grafica la respuesta de la medicin, contra la concentracin
del analito. Se verifican datos con comportamiento atpico mediante mediciones
adicionales.
4. Realizar un anlisis de varianza de la regresin lineal
5. Calcular el coeficiente de regresin con la totalidad de los datos (por los menos
tres curvas independientes)
6. Calcular y graficar los residuos (valor real de la concentracin el calculado por
la ecuacin de regresin para cada valor de X)

Criterios de aceptacin
Se confirma linealidad si se cumplen los siguientes criterios:
1. Homocedasticidad (la varianza es constante para todas las concentraciones)
2. El Anlisis de varianza de la regresin lineal debe demostrar:
a- paso del intercepto por cero, mediante un test de t o mediante el intervalo de
confianza con un de 0.05.
b- desviacin no significativa con respecto a la regresin
3. Distribucin aleatoria de los residuos (Tendencias sistemticas son indicativas de no
linealidad
4. El coeficiente de correlacin de la regresin lineal debe encontrarse entre 0.98 y
1.00, el
coeficiente de correlacin al cuadrado debe ser mayor de 0.995
4

Lmite de deteccin

El lmite de deteccin puede ser establecido de diferentes maneras dependiendo del tipo
de mtodo:
4.1

Mtodos no instrumentales

4.1.1 Por comparacin de blanco y blanco enriquecido a una sola

concentracin.
Verificacin
El lmite de deteccin se determina por medio del anlisis comparativo de un
blanco y de muestras independientes de blanco enriquecido con diferentes niveles de
concentraciones conocidas del analito. Se compara el comportamiento de las muestras
con el blanco y se establece el nivel mnimo al cual el analito puede ser realmente
detectado. En el caso del lmite de deteccin del sistema, el blanco est constituido por
los solventes utilizados en el anlisis. En el caso del mtodo, el blanco est constituido
por los solventes y por la matriz de la muestra.
4.2

Mtodos instrumentales

En el caso de mtodos establecidos como oficiales casi nunca es necesario

determinar el lmite actual de deteccin. Preferiblemente el lmite de deteccin de
trabajo debe ser ms bajo del nivel de deteccin requerido por la especificacin. Por
ejemplo, si se requiere detectar una impureza al nivel del 0.1%, se debe demostrar que
el procedimiento realmente detecta la impureza a este nivel.
Existen diferentes formas de determinar el lmite de deteccin, cualquiera que
sea el mtodo utilizado, se requiere del anlisis de un nmero adecuado de muestras
conocidas que deben estar cercanas o preparadas a la concentracin del lmite de
deteccin requerido para el tipo de ensayo a realizar.

4.2.1 Por comparacin de blanco y blanco enriquecido a una sola

concentracin.

Determinacin
Se utiliza cuando la desviacin estndar del blanco es diferente de 0. Se
preparan no menos de 10 blancos independientes y 10 blancos enriquecidos a la
concentracin ms baja aceptada. Una vez preparadas las soluciones, se llevan a cabo
las mediciones de cada una y posteriormente se calcula la desviacin estndar de cada
grupo de datos.
Con estos datos se puede calcular el lmite de deteccin
LD= Valor promedio del blanco + 3S
Donde S es la desviacin estndar de la muestra enriquecida
4.2.2 Blanco enriquecido a una sola concentracin
Determinacin
En este caso se analizan y cuantifican no menos de 10 soluciones de blanco
enriquecidas o muestras enriquecidas preparadas a la concentracin menor para la que
se puede obtener un grado aceptable de incertidumbre. Se lleva a cabo la cuantificacin
para cada una de las soluciones, se calcula el valor promedio de las concentraciones
obtenidas y la desviacin estndar.
LD= Concentracin promedio obtenida para el blanco o la muestra enriquecida + 4.65 S

4.2.3 Comparacin del comportamiento de blanco con blanco

enriquecido a diferentes concentraciones
Determinacin
9

Se preparan soluciones independientes de blanco y de blanco enriquecido a diferentes

niveles de concentracin bajos, cercanos al lmite de deteccin esperado. Se determina
aquella concentracin a la cual la seal del analito es igual a la seal del blanco (Ca).
Se calcula el lmite de deteccin. Puede calcularse de dos maneras.

1. LD = Ca + 2 S

Donde:
Ca es la concentracin del analito determinada
S la desviacin estndar del blanco
2. Se debe construir la regresin lineal de los blancos enriquecidos para determinar el
valor de la pendiente (m), tambin debe calcularse el valor promedio de la seal del
blanco y su desviacin estndar. Con estos datos se calcula el lmite de deteccin de la
siguiente manera
L.D. = Sm-Sbl
m

Sm

=Sbl + K Sbl

Sm se puede determinar realizando 20-30 medidas del blanco preferiblemente a lo largo de un

perodo de tiempo extenso.
_
Sbl = seal media del blanco
Sm = seal analtica mnima distinguible
Sbl= Desviacin estndar del blanco
m = pendiente de la regresin lineal
K = mltiplo de la desviacin estndar del blanco, valores recomendados en la literatura son 2 o
3
4.2.4 Determinacin del corredor de error
Determinacin
Se preparan de 7 a 10 soluciones independientes, a tres niveles de concentracin (baja,
intermedia y alta).
Se construye el corredor de error a un nivel de confianza adecuado 95%, graficando la
concentracin versus la seal obtenida. Utilizando para ello un programa estadstico
apropiado.

10

4.2.5 Mtodo de comparacin Seal / Ruido

Determinacin
En el caso de procedimientos analticos instrumentales que estn sujetos a ruido
de fondo, los documentos de la International Conference Harmonization describen una
aproximacin comn que consiste en comparar las seales de muestras con
concentraciones bajas (conocidas) del analito, contra las seales del blanco.
Se preparan muestras de concentracin baja conocida a diferentes niveles de
concentracin, de acuerdo con el mtodo en estudio. Se prepara un blanco, y se miden las
seales de las soluciones preparadas.
El Lmite de deteccin corresponde a la concentracin mnima a la cual el
analito es detectado con una relacin seal ruido de 2:1 o 3:1
5
5.1

Lmite de cuantificacin
Mtodos no instrumentales

5.1.1 Con muestras preparadas

Determinacin
Se preparan varias muestras de concentraciones conocidas del analito en anlisis.
Se analiza cada una de las muestras preparadas por el mtodo en estudio.
El lmite de cuantificacin es la mnima concentracin cuantificable con una
precisin y exactitud aceptable. (ver tabla 1)
5.2

Mtodos instrumentales

5.2.1 Con muestras preparadas

Se procede de la misma manera que en el caso de los mtodos no instrumentales.
5.2.2 Mtodo de comparacin de Seal / Ruido
Determinacin:
Se preparan muestras de concentracin conocida a bajos niveles, de acuerdo al mtodo
en estudio. Se prepara un blanco, y se mide la seal de las soluciones preparadas.
11

El lmite de cuantificacin es la concentracin de analito en la que se pueden dar

cualquiera de las siguientes situaciones:
- Relacin seal / ruido es 10:1.
-Relacin seal / ruido es al menos 10 y la precisin de menos de 10% (Desviacin
estndar relativa)
-Relacin seal / ruido es mayor de 20 y la precisin menor de 5% (Desviacin estndar
relativa)

5.2.3 Mtodo de respuesta de lnea base (cromatografa lquida o

gaseosa)
Determinacin
Se debe preparar una solucin de blanco y se corre el cromatograma por un tiempo igual
a 20 veces el ancho del pico obtenido para el analito.
Se obtiene la medida de ruido como:
-La ms grande fluctuacin pico a pico
-La desviacin ms grande (positiva o negativa) de la respuesta media
Se calcula el lmite de cuantificacin, utilizando la siguiente frmula:
LC = 10 x Desviacin mnima x la pendiente de la curva de calibracin.
Donde la pendiente de la curva de calibracin se obtiene del estudio de linealidad del
mtodo.
5.2.4 Mtodo de la inyeccin doble de la muestra de analito
Determinacin
Se preparan muestras del analito a bajas concentraciones. Se llevan a cabo dos corridas
para cada una de las soluciones.
Se calcula el Lmite de cuantificacin como la concentracin ms baja del analito a la
cual la desviacin estndar relativa de las dos mediciones es 2%
6

Especificidad

La especificidad puede verificarse de diferentes maneras, dependiendo del tipo

de anlisis a realizar. Es importante tomar en cuenta, que en aquellos casos en que la
matriz de la muestra es variable, tanto en trminos de su composicin (productos
12

biolgicos o de origen natural), as como en la fuente de las materias primas que las
componen (diferentes proveedores, diferentes orgenes), se recomienda que la
especificidad se establezca para las diferentes composiciones o fuentes en forma
independiente.
6.1

Anlisis Tipo I:
contenido.

Potencia, disolucin y uniformidad de

Se puede demostrar de diferentes maneras:

6.1.1 Comparacin del comportamiento de la matriz o impurezas

con respecto al comportamiento del estndar.
Verificacin
Se prepara una solucin estndar del analito a la concentracin esperada en el
procedimiento de ensayo, y una solucin de matriz a la misma concentracin relativa. Se lleva a
cabo una comparacin de las mediciones de ambas soluciones.

Criterio de aceptacin
La matriz no debe presentar ningn tipo de seal que interfiera con la seal que se
encuentra para el estndar.
6.1.2 Comparacin del comportamiento de muestra con respecto
al comportamiento del estndar.
Verificacin
Se prepara una solucin estndar del analito a la concentracin esperada en el
procedimiento de ensayo y una solucin de muestra a la misma concentracin. Se lleva a cabo
una comparacin de las mediciones de ambas soluciones.
Criterio de aceptacin
La muestra no debe presentar ningn tipo de seal que interfiera con la seal que se
encuentra para el estndar.

13

6.1.3 Comparacin del comportamiento de muestra enriquecida

con matriz con respecto al comportamiento de estndar
enriquecido con matriz.
Verificacin
Se prepara una solucin estndar del analito a la concentracin esperada en el
procedimiento de ensayo, y una solucin de muestra a la misma concentracin. Ambas
soluciones son enriquecidas con una cantidad equivalente de matriz. Se lleva a cabo
una comparacin de las mediciones de ambas soluciones enriquecidas.
Criterio de aceptacin
El criterio de aceptacin es que el comportamiento de las muestras enriquecidas y
del patrn enriquecido, debe ser los ms cercano posible, en aquel punto en que se lleva
a cabo la medicin del analito. Lo cual es indicativo de que la matriz, no aporta ningn
tipo de seal que interfiera con la medicin.

6.1.4 Comparacin del comportamiento de muestras enriquecidas

con analito con respecto al comportamiento de estndar
enriquecido con analito.
Verificacin
Se prepara una solucin estndar del analito a la concentracin esperada en el
procedimiento de ensayo, y una solucin de muestra a la misma concentracin. Ambas
soluciones son enriquecidas con una cantidad equivalente de analito. Se lleva a cabo
una comparacin de las mediciones de ambas soluciones enriquecidas.

Criterio de aceptacin
El criterio de aceptacin es que el comportamiento de las muestras enriquecidas
y del patrn enriquecido, debe ser los ms cercano posible, en aquel punto en que se
lleva a cabo la medicin del analito. Lo cual es indicativo de que la matriz, no aporta
ningn tipo de seal que interfiera con la medicin

Algunos autores recomiendan enriquecer tanto las muestras como el patrn con
cinco niveles de concentracin del analito, y llevar a cabo la comparacin del
comportamiento de las soluciones a los diferentes niveles. Esto permitira determinar el
grado de interferencia, dependiendo de la concentracin del analito a determinar. Estos
datos pueden obtenerse del estudio de linealidad del mtodo utilizando la adicin
estndar.

14

6.1.5 Procedimientos adicionales para verificar la especificidad,

pueden ser:
a. Ensayo de la pureza de pico, cuando se cuenta con un detector de arreglo
de diodos o con espectrometra de masas.
b. Reanlisis del pico, cuando el analito de inters es recogido y reanalizado
bajo diferentes condiciones cromatogrficas o con mtodos sensitivos a
la estructura del analito
c. Comparacin de resultados obtenidos cuando la muestra puede ser
analizada por dos o ms mtodos de separacin o de deteccin.

6.2

Anlisis Tipo II: Pruebas cuantitativas para la determinacin

del contenido de impurezas o de valores lmites para el control
de impurezas

6.2.1 Adicin estndar de impurezas a la muestra:

Verificacin
Este mtodo se utiliza, si se encuentran disponibles en el mercado los patrones
correspondientes a las impurezas. Se agrega a la muestra, diferentes concentraciones de
impurezas, a la concentracin normal de trabajo
Criterio de aceptacin
Se debe demostrar que el contenido de impurezas determinado en el ensayo
tienen una exactitud y precisin apropiadas para el mtodo al lmite de cuantificacin.
6.2.2 Comparacin de mtodos
Verificacin
En los casos en que los patrones de impurezas no estn disponibles, la
especificidad puede ser demostrada por comparacin de los resultados del ensayo con el
mtodo propuesto, con resultados obtenidos por un segundo mtodo bien caracterizado
u oficial.
La comparacin debe incluir muestras almacenadas bajo condiciones extremas
relevantes ( luz, calor, humedad, hidrlisis cida o bsica, oxidacin ). Estas
condiciones deben ser escogidas de acuerdo a la estructura qumica del analito, que
determinar la susceptibilidad del mismo a la descomposicin.
Criterio de aceptacin

15

En el caso de la determinacin cuantitativa de impurezas, se deben comparar los

resultados obtenidos por ambos mtodos.
En el caso de pruebas de impurezas cromatogrficas, se deben comparar los
perfiles de impurezas.
6.3

Anlisis tipo IV: Pruebas de identificacin

Verificacin
Deben prepararse:
1.
2.
3.
4.

Muestras que contengan el analito a identificar

Muestras que no contengan el analito (matriz)
Muestras sin analito pero contaminadas con una sustancia de estructura similar
Solucin de patrn de la sustancia a identificar, preparado a una concentracin
equivalente a las anteriores.

Las tres primeras soluciones se comparan con la cuarta solucin.

Criterio de aceptacin
Deben obtenerse los siguientes resultados para cada solucin
1. La solucin 1 Identificacin positiva
2. La solucin 2 Identificacin negativa
3. La solucin 3 Identificacin negativa.

16

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