Mtra.

Nancy Franco

EQUIPO N°2

Diana Luz Delgado Martínez

Rubí Guadalupe Flores Ruiz

Jimena Galaviz Gutiérrez

Cesar Pérez Urbina

Karla Paola Pulido Godínez

Citlali Lizbeth Ulloa Valdez

Johana Paola Vaca Ramírez

Paulina Valle Barba

Práctica 3
 Identificación de aminoácidos y proteínas mediante reacciones
características

Objetivos
1. Comparará las reacciones de los aminoácidos con las que presenten las
proteínas.
2. Identificará los diferentes aminoácidos basándose en las reacciones
características de sus grupos químicos.
3. Explicará los fundamentos de las reacciones que va a efectuar.
Introducción
Las proteínas son polímeros formados por aminoácidos. Veinte α-aminoácidos
diferentes son los que forman las proteínas, específicamente los isómeros L. Otra
propiedad importante de los aminoácidos son sus propiedades ácido-base.
Palabras clave: Aminoácidos, Zwitterion, Anfolitos.

Fundamento
Reacción de Ninhidrina
La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) experimenta una reacción de reducción,
oxidando los grupos aminos libres, desdoblándolos en grupos carbonilo y amoniaco
por desaminación oxidativa. La forma reducida de la ninhidrina se une con el
amoniaco y la ninhidrina residual, lo cual origina un colorante azul violeta. La
reacción resulta positiva con los grupos aminos libres, hállense en aminoácidos,
péptidos y proteínas.
Cuando se trata de aminoácidos aislados sucede también otra reacción que
consiste en la descarboxilación del aminoácido con formación de CO2 además de
la reacción de color que sucede normalmente. La descarboxilación no sucede
cuando se trata de péptidos o proteínas.
Reacción del millón
Esta extracción consta de una posible mercuración, nitración ó nitrasación de los
aminoácidos con grupo fenol. El reactivo del millón es una mezcla de nitratos
mercúricos y mercurosos, que reaccionan con los grupos fenólicos dando una
coloración roja; esta reacción la presenta la tirosina en estado libre o combinada. La
fenilalanina da muy débilmente la reacción en las condiciones en que se efectúa.
Reacción Xantoproteíca:
Consiste en la formación de derivados de color amarillo, por reacción de
aminoácidos por grupo aromático o heterocíclico con ácido nítrico concentrado,
seguida de alcalinización. Dicha reacción la presenta la tirosina y el triptófano. La
fenilalanina no tiene capacidad reactiva suficiente para tornar positiva la prueba en
condiciones ordinarias.
Identificación de azufre:
El azufre de las proteínas que se encuentra en forma de grupos sulfhidrilo y disulfuro
(cisteína y cistina) puede detectarse por la formación de sulfuro de plomo, color
negro, en medio alcalino por reacción con acetato de plomo. El azufre de la
metionina no es lábil en medio alcalino.
Reacción de Biuret:
Dicha reacción consiste en hacer reaccionar las proteínas o péptidos con una
solución diluida de sulfato de cobre fuertemente alcalina; resultando una coloración
azul violeta; esta reacción recibe el nombre de Biuret por darla positiva un
compuesto no proteico que tiene una estructura semejante a un enlace peptídico y
que se denomina Biuret.
Aunque esta reacción no es específica para enlaces peptídicos, tiene valor porque
otras sustancias que pueden darla positiva no se encuentran en estado natural. El
único aminoácido que da positiva la reacción es la histidina.
Reacción con agua de Yodo:
El triptófano libre reacciona con el agua de Yodo produciendo una coloración
rosada, supuestamente por halogenación del triptófano. La prueba es negativa si el
triptófano esta combinado en una proteína.

Diagrama de flujo:
Procedimiento:
Reacción de ninhidrina
1. Agregar el volumen en ml. de aminoácido correspondiente según el tubo
numerado que le corresponda:

Resultados:
Aminoácido Resultado
Cisteína -
Leucina +
Fenilalanina +
Tirosina +
Valina +
Metionina +
Lisina +
Histidina +
H. de albúmina +
H. de plátano +
Sol. globulina +

Reacción Xantoproteíca:
1. Agregar el volumen de aminoácido correspondiente según el tubo numerado que
le corresponda:
Resultados:
Aminoácido Resultados
Fenilalanina +
Tirosina +
Metionina +
Lisina +
H. de albúmina +
Sol. globulina +

Identificación de Azufre:
1. Agregar el volumen de aminoácido correspondiente según el tubo numerado que
le corresponda:
Resultados:
Aminoácido Resultados
Fenilalanina -
Tirosina -
Metionina +
Sol. globulina +
H. de albúmina +
Cisteína +

Reacción de Biuret:
1. Agregar el volumen de aminoácido correspondiente según el tubo numerado que
le corresponda:

Resultados:
Aminoácido Resultados
Histidina +
H. de albúmina +
Lisina -
Sol. globulina -
Valina -
Reacción de agua de Yodo:
1. Agregar el volumen de aminoácido correspondiente según el tubo numerado que
le corresponda:

Resultados:
Aminoácido Resultado
Arginina -
H. de Albúmina -
H. de plátano +
Sol. globulina -
Lisina -

Cuestionario:
1. De acuerdo con sus grupos funcionales, ¿Cómo se clasifican los aminoácidos?
Los aminoácidos se clasifican en tres grupos:
• Aminoácidos esenciales
• Aminoácidos no esenciales
• Aminoácidos condicionales
AMINOÁCIDOS ESENCIALES: Los aminoácidos esenciales no los puede producir
el cuerpo. En consecuencia, deben provenir de los alimentos. Los 9 aminoácidos
esenciales son: histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina,
triptófano y valina.
AMINOÁCIDOS NO ESENCIALES: No esencial significa que nuestros cuerpos
pueden producir el aminoácido, aun cuando no lo obtengamos de los alimentos que
consumimos. Los aminoácidos no esenciales incluyen: alanina, arginina,
asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutámico, glutamina, glicina, prolina,
serina y tirosina.
AMINOÁCIDOS CONDICIONALES: Los aminoácidos condicionales por lo regular
no son esenciales, excepto en momentos de enfermedad y estrés. Incluyen:
arginina, cisteína, glutamina, tirosina, glicina, ornitina, prolina y serina.
2. Mencione los aminoácidos esenciales, ¿y por qué se les llama así?
Un aminoácido esencial es aquel que el organismo no es capaz de sintetizar por sí
mismo y, por esto, debe tomarlo necesariamente desde el exterior a través de la
dieta. Además, son aminoácidos necesarios para el correcto desarrollo de algunas
funciones en el organismo. Los aminoácidos esenciales son: leucina, isoleucina,
valina, metionina, lisina, fenilalanina, triptófano, treonina, histidina, arginina.

3. Mencione tres funciones intracelulares de los aminoácidos.

• Función estructural. Esta función de los aminoácidos consiste en sostener y
rellenar dentro de la estructura tisular. Además, ciertas proteínas de sostén
(elastina) dan propiedades elásticas a los tejidos. Las proteínas también
pueden servir de armazones estructurales de componentes celulares como
los microtúbulos, considerados el esqueleto que sostiene la estructura
celular.
• Función reguladora de distintos procesos biológicos. En los aminoácidos
existe una función, conocida como enzimática, que es la encargada de
acelerar el proceso de las reacciones bioquímicas que tienen lugar en
nuestro cuerpo. De esta manera, se pueden producir dos formas de
regulación. Una por homeostasis interna de nuestro organismo, en la que
ciertas proteínas regulan los distintos procesos de ósmosis que tienen lugar
en las membranas celulares. Y otra, por división celular, mediante la proteína
ciclina, un mecanismo muy importante a la hora de entender distintas
enfermedades como el cáncer.
• Función defensiva. Muchas de las toxinas que son perjudiciales para nuestro
organismo tienen una estructura proteica, como es el caso de los venenos
de distintos animales. Por otro lado, existen proteínas que forman parte de
nuestro sistema inmunitario, que tienen una función claramente defensiva
frente a organismos patógenos como virus o bacterias. Ejemplo de ello son
los anticuerpos que impiden el curso de la enfermedad infecciosa.
• Función de transporte. Otra función de los aminoácidos es que tienen la
capacidad de acoplarse a otras moléculas, facilitando su transporte a la largo
de nuestro cuerpo para su uso o degradación. Un modelo de proteína de
transporte es la hemoglobina, que es capaz de enviar oxígeno o dióxido de
 carbono por el torrente sanguíneo para ser utilizados por la célula o para su
eliminación. También destacan los citocromos cuya función es la de
transportar energía química en las células vivas, ya sean animales o en
vegetales.
• Función de contracción. Los aminoácidos también forman parte de proteínas
musculares involucradas en la contracción. Dentro de estas destacan la
miosina y la actina, que forman parte de las fibras contráctiles de los
músculos. Gracias a ellas, es posible la contracción muscular y, por tanto, el
movimiento de extremidades, así como, el movimiento de contracción y
relajación de nuestro corazón o los movimientos intestinales, esenciales para
un correcto procesado de los alimentos durante la digestión.
• Función de reserva energética. Una de las funciones más importante de los
aminoácidos es que aporta energía al organismo. Esto ocurre cuando las
reservas de grasas se agotan y es necesario degradar las proteínas para
obtener energía química con el objetivo de seguir realizando los procesos
vitales básicos, manteniendo las funciones fisiológicas básicas de nuestro
cuerpo.
4. Mencione tres reacciones características para diferenciar aminoácidos y
proteínas y enuncie el fundamento de cada una de ellas.
IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS MEDIANTE LA REACCIÓN: EL BIURET El
reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina (gracias a la
presencia de NaOH). La reacción se basa en la formación de un compuesto de color
violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu+2
y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los
enlaces peptídicos, esto si la reacción da positiva. Cuando la reacción de biuret dá
negativa, queda de color azul.
REACCIÓN DE NIHIDRINA: La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) reacciona
con aminoácidos que tengan el grupo amino libre, dando lugar a la formación de
amoniaco y anhídrido carbónico, con reducción del reactivo (ninhidrina) a
hidrindantina. La hidrindantina reacciona a su vez con el amoniaco y otra molécula
de ninhidrina para dar un compuesto de adición doble que presenta una coloración
azul-púrpura, con la excepción de la prolina que da una coloración amarillenta
(recordar que en la prolina el grupo amino está sustituido). El derivado coloreado
presenta máximo de absorción en torno a 570 nm. La reacción se lleva a cabo en
caliente y a valores de pH comprendidos entre 4 y 8. Las aminas primarias (R-CH2-
NH2) dan también positiva la prueba de la ninhidrina, aunque en este caso no se
libera CO2. La técnica es muy sensible, por lo que es ideal para detectar
concentraciones bajas de aminoácidos, utilizándose para revelar su presencia en
cromatogramas y fracciones procedentes de otras técnicas de separación.
REACCIÓN XANTOPROTEÍCA: La reacción xantoproteica es un método que se
puede utilizar para determinar la cantidad de proteína soluble en una solución,
empleando ácido nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas
proteinas con aminoácidos portadores de grupos aromaticos, especialmente en
presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali vira
a un color amarillo oscuro.
5. ¿Qué es la cistinuria?
La cistinuria es una aminoaciduria debida a un transporte defectuoso de cistina y de
aminoácidos dibásicos (arginina, ornitina, y lisina) en la membrana apical del epitelio
intestinal y túbulo proximal renal. El resultado es una ausencia de reabsorción de
cistina en el túbulo proximal renal produciendo un exceso de cistina en orina y con
la consiguiente formación de cálculos renales. Los cálculos de cistina son muy
difíciles de eliminar por litotricia a diferencia del resto de cálculos. Por lo tanto,
debería de llevarse a cabo una terapia no invasiva para prevenir la recidiva en la
formación de cálculos. Esta terapia estaría basada en una alta ingesta de líquidos,
alcalinización de la orina, y empleo de agentes quelantes. A la hora de preservar la
función renal es necesaria la combinación de estas tres medidas terapéuticas tanto
para disminuir la recurrencia como la morbilidad de la enfermedad.
6. ¿Por cuales técnicas bioquímicas pueden purificarse las proteínas?
La centrifugación del homogenado, permite separar de una forma bastante
aceptable los componentes que lo constituyen. El principio de este procedimiento
es el de aumentar la fuerza de la gravedad g, utilizando una centrífuga cuyo rotor
gira a muchas revoluciones por minuto. Bajo estas condiciones, las partículas más
pesadas se van al fondo del recipiente más rápidamente que las menos pesadas.
En un homogenado sometido a las condiciones descritas, se pueden separar, por
ejemplo, los núcleos de las mitocondrias, ya que los primeros son más pesados que
las segundas, por lo que se va a obtener en el fondo del recipiente una fracción que
consta de núcleos mientras que las mitocondrias van a permanecer en la
suspensión. Si, en un segundo paso, se centrifuga la fracción que se ha separado
de los núcleos a una velocidad mayor que la que se imprimió la primera vez, ahora
son las mitocondrias las que van a precipitarse al fondo, quedando en suspensión
sólo partículas más pequeñas que ellas, tales como ribosomas y fragmentos de
membranas.
El siguiente paso es separar todas las proteínas de otras moléculas existentes en
la mezcla, como por ejemplo metales, carbohidratos o lípidos. Un método consiste
en el procedimiento de diálisis. En la diálisis se usa una bolsa que tenga poros lo
suficientemente pequeños para impedir el paso de moléculas grandes (proteínas),
pero lo bastante grandes, como para que las moléculas pequeñas puedan pasar a
través de ellos. Dentro de la bolsa se coloca alguna fracción del homogenado y se
cierra herméticamente. El sistema así construido se pone dentro de un recipiente
con agua destilada, que se renueva continuamente. Bajo estas condiciones se tiene
una diferencia de concentraciones, entre el líquido del interior de la bolsa y el agua
destilada, va a existir una tendencia a igualar las concentraciones, por lo que las
moléculas del interior van a tratar de salir hacia el agua destilada, pero como las
moléculas de proteína no pueden pasar por los poros, solamente lo harán las
moléculas pequeñas, el transporte de materiales seguirá hasta que se igualen las
concentraciones en los dos compartimentos. Si el agua destilada se cambia
continuamente, se evitará que se llegue al equilibrio, de tal manera que seguirán
saliendo moléculas pequeñas. Si este proceso continúa, en el interior de la bolsa
quedarán únicamente moléculas de proteína. Con este procedimiento se tiene
ahora una mezcla de muchas proteínas; el siguiente paso es purificar la que se
requiere.
Otra forma de separar proteínas con tamaños diferentes, es mediante la filtración
en gel. En este método se usa un gel hidrófilo, fabricado con un polímero, como por
ejemplo el dextrán, que se coloca en un tubo. Este material tiene la propiedad de
formar una malla molecular en la que los poros son muy pequeños. En un extremo
del tubo se pipetea una solución que contenga la mezcla de proteínas. Las proteínas
más pequeñas pueden pasar por los poros del gel y las más grandes no, de tal
manera que del otro lado del tubo salen, en primer lugar, las proteínas grandes, las
pequeñas se van a retardar debido a que tienen que atravesar toda la malla
molecular. Si el líquido que está saliendo de la columna se colecta en diferentes
recipientes, éstos llevan diferentes tipos de proteínas.
7. ¿Cómo se manifiesta la cistinosis en los niños?
La cistinosis nefropática o infantil se manifiesta por signos clínicos y de laboratorio
de un síndrome de Fanconi, con retraso del crecimiento, raquitismo e insuficiencia
glomerular progresiva. Existe disfunción del túbulo contorneado proximal, con
pérdidas importantes de aminoácidos, glucosa, fosfato y bicarbonato.
8. ¿Para qué se utiliza la degradación de Edman?
La degradación de Edman. Es un método de secuenciación de aminoácidos en un
péptido, donde el residuo amino terminal se etiqueta y se separa del péptido sin
afectar a los enlaces peptídicos entre los otros residuos.
El procedimiento de la degradación de Edman o secuenciación de Edman marca y
elimina sólo el residuo N-terminal de un polipéptido, dejando el resto de enlaces
peptídicos intactos. Para ello, se hace reaccionar el péptido con PITC eliminándose
el residuo N-terminal en forma de derivado de fenilhidantoína (PTH). Después de la
eliminación e identificación del residuo N-terminal mediante HPLC, el nuevo residuo
N-terminal puede ser marcado, eliminado e identificado por repetición de la misma
serie de reacciones. Este procedimiento se repite hasta que se ha determinado toda
la secuencia.
9. ¿Qué es y cómo se caracteriza la fenilcetonuria?
La fenilcetonuria, también denominada «PKU», es un trastorno hereditario poco
frecuente que provoca la acumulación de un aminoácido denominado «fenilalanina»
en el organismo. La fenilcetonuria es causada por un defecto en el gen que ayuda
a crear la enzima necesaria para descomponer la fenilalanina.Sin la enzima
necesaria para procesar la fenilalanina, puede formarse una peligrosa acumulación
si una persona con fenilcetonuria come alimentos con alto contenido de proteínas o
ingiere aspartamo —edulcorante artificial—. Esto puede provocar, con el tiempo,
graves problemas de salud.

10. ¿Cuál es la importancia del análisis de fenilalanina en neonatos?

Los recién nacidos que tienen fenilcetonuria al principio no presentan ningún

síntoma. Sin embargo, sin tratamiento, los bebés suelen manifestar signos de
fenilcetonuria en pocos meses. Los signos y síntomas de la fenilcetonuria pueden
ser leves o graves y comprenden los siguientes: Olor similar al de la humedad en el
aliento, la piel o la orina de tu hijo, provocado por demasiada fenilalanina en el
cuerpo, problemas neurológicos que pueden incluir convulsiones, erupciones
cutáneas (eccema), piel clara y ojos azules, porque la fenilalanina no puede
transformarse en melanina (el pigmento responsable del color de la piel y del
cabello), cabeza anormalmente pequeña (microcefalia), hiperactividad,
discapacidad intelectual, retraso en el desarrollo, problemas de comportamiento,
emocionales y sociales, trastornos psiquiátricos.

11. ¿En qué patologías resulta positiva la prueba de Ehrlich?

El Test de Ehrlich es una prueba bioquímica desarrollada en base al reactivo p-

dimetilamino benzaldehído (DMAB) utilizada para analizar indoles y urobilinógenos
con el objetivo de diagnosticar enfermedades hepáticas, procesos hemolíticos,
oclusión del conducto biliar común y síndrome carcinoide. El reactivo de Ehrlich
funciona específicamente en base a la detección de un aminoácido llamado
triptófano en una muestra de proteína, razón por la cual se define también como un
test de aminoácidos específico.

El reactivo de Ehrlich es utilizado principalmente para detectar en la orina el

metabolito urobilinógeno, uno de los pigmentos biliares que se encuentran
presentes en caso de defectos hepáticos (ictericia epidémica y cirrosis) o como
resultado de una formación excesiva de bilirrubina (ictericia hemolítica). El
urobilinógeno incoloro reacciona con el reactivo de Ehrlich en un medio ácido para
formar un producto de condensación de coloración azul-violeta basada en la
sustitución electrofílica que sufre el reactivo Ehrlich, específicamente en el anillo
indol o bencilpirrol del triptófano.

Conclusión:

Mediante esta práctica pude reconocer diferentes reacciones que me permitieron

analizar e identificar a los aminoácidos y proteínas, realizamos varias reacciones
para poder lograr el objetivo y algunas precipitaron y desprendieron olores
característicos, pude relacionar que este tipo de prácticas va a ser de mucha utilidad
en la industria ya que el análisis de aminoácidos nos puede dar información
nutricional de las proteínas y su estudio sirve para el desarrollo de una industria
alimenticia de calidad por ejemplo, lo que quise hacer es una relación de la
identificación de aminoácidos y proteínas mediante reacciones con la industria

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