UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ESPE

CARRERA DE BIOTECNOLOGÍA
PRIMERO DE BIOTECNOLOGÍA "A"
BIOLOGÍA APLICADA
ING. EDUARDO ARGOTTI VALENCIA
OCTUBRE 2021 - MARZO 2022
INTEGRANTES: LOOR EMILY, MERINO CINDY, SUAREZ
ANGELINE, TORO JAVIER, VALLEJOS CARLA
NRC: 9101

Observación de células procariotas

LABORATORIO N°4

BACTERIAS
DE GRAM

CÉLULA EPITELIAL ESCAMOSA (EUCARIOTA

ANIMAL)
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CARRERA DE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

Periodo Octubre 2021 – Marzo 2022

OBJETIVOS. _
 Reconocer las diferentes formas bacterianas y las diferentes técnicas de
tinción empleadas en la observación de microorganismos procariotas.
MARCO TEÓRICO. _
Los organismos procariotas son organismos unicelulares cuyos principales
representantes son las bacterias y cianobacterias, caracterizadas por la falta de
un núcleo definido.
Dentro de su estructura general, constan de un citoplasma definido como todo lo
contenido dentro de la membrana celular. En el citoplasma se ubican los
ribosomas, el único organelo presente en las procariotas.
La membrana externa del procariota establece sus principales características y
su función principal es permitir el intercambio de sustancias entre la célula y el
exterior.
Nucleoide: La principal característica de estos organismos es que carecen de
núcleo definido por lo que su material genético (ADN) se encuentra disperso en
una zona conocida como nucleoide.
Flagelo: Cada organismo tiene su propia forma de movimiento como flagelos,
fimbrias o pilis.
Envoltura celular: Las células bacterianas a menudo se rodean de diferentes
capas, denominadas en un conjunto como envoltura celular.
Pared celular: Se encuentra en la parte más externa de la célula bacteriana, y
su papel más importante es proteger a la bacteria.
La protección consiste en una capa de peptidoglicano. El peptidoglicano a
menudo ayuda a diferenciar si las bacterias son GRAM + o GRAM-
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Las bacterias GRAM+ tienen una capa gruesa de peptidoglicano sobre su

membrana celular. Esto les permite retener el tinte primario en la tinción de
GRAM.
Las bacterias GRAM- tienen una capa más delgada de peptidoglicano a manera
de sándwich entre la membrana celular y la membrana externa de la bacteria.
Por esto no pueden retener el tinte primario en la tinción de GRAM.
Finalmente, también ayuda a mantener la forma de la bacteria.

Otra de las partes de la envoltura celular es la capsula.

Actúa como un escudo que protege a la bacteria de la fagocitosis. También
ayuda a la bacteria adherirse a las superficies. Es considerada como importante
factor de virulencia, ya que las cepas bacterianas que carecen de capsula son
menos virulentas.
Membrana plasmática: Debajo de la pared celular de la bacteria se encuentra
la membrana celular, la capa más importante porque contiene el citoplasma, una
sustancia similar al gel, compuesto de agua, componentes celulares, enzimas y
macromoléculas orgánicas.
Si retiramos la membrana plasmática, el contenido de celular se derramaría en
el medio, la célula bacteriana dejaría de existir. La membrana celular es la
responsable por la mayoría de las relaciones de la célula con el medio externo.
A través de las siguientes funciones adquiere nutrientes, elimina desechos,
mantiene el estado interior de la célula en equilibrio. Es selectivamente
permeable controlando la entrada y salida de sustancias.
En bacterias tiene otras funciones importantes como respiración, fotosíntesis,
síntesis de lípidos y componentes celulares.
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En el citoplasma de la célula bacteriana aparecen dispersos varios

componentes celulares como los:
Ribosomas que son encargados de la síntesis de proteínas y se ubican según el
destino de las proteínas que sintetizan, dispersos en el citoplasma (proteínas
endógenas), unidos a la membrana plasmática (proteínas exógenas o de la
cubierta de la bacteria).
Nucleoide es una forma irregular que contiene el cromosoma de la célula.
En la mayoría de las células bacterianas el cromosoma de la célula bacteriana
es uno solo, de forma circular y de doble hebra, sin embargo, en algunas cepas
los cromosomas son lineales o más de uno.
Adicional al contenido genético del nucleoide, muchas bacterias tienen
información genética extra en forma de plásmidos.
Los plásmidos son moléculas de ADN de doble cadena que se replican de
manera autónoma y se transmiten independientemente del ADN en el
cromosoma. Lineales o circulares tienen pocos genes y su función no es vital
para la batería sin embargo tiene genes de resistencia a antibióticos.
Pilis o Fimbrias: Las bacterias pueden moverse o adherirse a superficies u otras
células con la ayuda de estructuras presentes en su superficie. Pili son similares
a pelillos que le permiten a la célula adherirse a otras células, cuando son más
cortos se les denomina fimbrias y ayudan a la bacteria a unirse a superficies.
Flagelos es una estructura larga con forma de látigo que le permite a la bacteria
moverse.
DATOS Y OBSERVACIONES. _
Datos:
 La tinción de Gram es una prueba que identifica bacterias donde se
presiente una infección.
 Hay dos tipos principales de infecciones, Gram-positivas y Gram-
negativas, la tinción de Gram es violeta, cuando la mancha se combina
con las bacterias de la muestra, las bacterias pueden aparecer de color
púrpura o volverse rosadas o rojas, si todavía son morados, son Gram
positivos, por ende, si se vuelven rosadas o rojas, son gramnegativas.
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 Su proceso es muy sencillo, para obtener implica seguir pasos como:

recoger la muestra, extender, fijar, aplicar el tinte, por último, enjuagar la
muestra y lavar el portaobjetos.
 Se trata de una técnica muy sencilla basada en el uso de tintes (que dan
color), que es muy útil en medicina y permite ver mejor las bacterias que
al microscopio.

Observaciones:
-Observación del enfoque de la tinción de GRAM de las bacterias a 100X.

Se puede observar que la estructura de esta bacteria es color rosa, eso quiere
decir que es un gramnegativo tiene una capa delgada de peptidoglicano y una
membrana lipídica externa, es una forma bacteriana Escherichia coli.
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-Observación del enfoque de la tinción GRAM de dos bacterias a 100X.

Se puede observar que la estructura de esta bacteria es color morado al inicio,

luego va cambiando a un tono rosa, es decir, es un gramnegativo, es una forma
bacteriana Campylobacter helicobacter.

Se puede observar que la estructura de esta bacteria es color rosa, rojizo, esto
es un gramnegativo, es una forma bateriana Vibrio cholerae.
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-Célula epitelial escamosa (eucariota animal).

Se puede examinar la célula epitetial escamosa y las células procariotas.

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GRÁFICOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS. _

Observación de células procariotas tipos de tinción:
TINCION SIMPLE: Frotis directo (azul de metileno) y TINCION COMPUESTA:
tinción de gran.
MATERIALES:
 Muestras: Klebsiella sp, un género de bacterias inmóviles de mucha
importancia clínica.

 Mechero Bunsen  Microscopio

 Portaobjetos  Colorante azul de metileno

 ASA BACTERIOLOGICA (filamento metálico para la manipulación y

siembra de microorganismos)

 Solución salina
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CÁLCULOS
ANTES DE LA TINCION
1. Toma una gota de solución salina y colócala sobre una placa portaobjetos
limpia.

2. Esteriliza el asa al rojo vivo con ayuda del mechero, haciendo un ángulo
de cerca de 90° para esterilizar también el mango.

3. Permite al asa enfriarse a temperatura ambiente y toma una muestra de

bacterias de la placa de PETRI deslizando el asa entre colonias.

4. Mezcla y homogeniza la muestra tomada con el asa con la gota de

solución salina de la lámina portaobjeto.
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5. Fije la preparación con calor, pasándola varias veces sobre la flama del
mechero en forma rápida.

6. Ahora deja secar el frotis bacteriano a temperatura ambiente. Haremos

varios frotis para demostrar los distintos tipos de colaboración.

TINCION SIMPLE
Tiñen homogéneamente la célula y solo se utiliza un colorante para observar
estructuras.
1. Al FROTIS SECO añadir azul de metileno con una pipeta Pasteur. Espere
2 min

2. Transcurrido el tiempo lavar cuidadosamente con agua usando un frasco

lavador.
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3. Deje secar a temperatura ambiente y observe al microscopio.

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TINCION COMPUESTA
Requieren combinaciones de 2 o más colorantes y son usadas para distinguir
grupos de organismos.
MATERIALES:
 Cristal Violeta  Alcohol Acetona
(Decolorante)

 Lugol Mordiente
 Safranina (Colorante de
contraste)

TINCIÓN DE GRAM

Cristal violeta:
1. Con el FROTIS sobre un soporte de colaboración, cubrimos la placa
con cristal violeta dejando actual por 1 minuto

2. Pasado el tiempo, lavamos con el chorro del FRASCO LAVADOR y

dejamos escurrir.
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LUGOL DE GRAM
1. Nuevamente con el FROTIS sobre un soporte de coloración,
cubrimos la placa con Lugol dejando actuar durante 1 min.

2. Pasado este tiempo, lavamos con el chorro del FRASCO LAVADOR

y dejamos escurrir.

3. Ahora cubrimos la muestra durante 30 segundos con ALCOHOL

CETONA para decolorar.

4. Lavamos luego ABUNDANTEMENTE con el chorro del FRASCO

LAVADOR y dejamos escurrir.
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5. Ahora cubrimos la muestra durante un minuto con SAFRANINA para

la contratación.

6. Lavamos con agua usando el FRASCO LAVADOR y escurrimos

permitiendo que seque completamente a temperatura ambiente. Una
vez seco observamos la muestra en el microscopio usando 100x.
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RESULTADOS
TINCION SIMPLE

Los resultados que hemos obtenido con este laboratorio se pueden observar que la
estructura de esta bacteria es color Azul, eso quiere decir que es un grampositivo tiene
una capa delgada de peptidoglicano y una membrana lipídica externa, es una forma
bacteriana Escherichia coli.

TINCION COMPUESTA
Tinción de gram

Los resultados que hemos obtenido con este laboratorio se pueden observar que la
estructura de esta bacteria es color rosado, eso quiere decir que es un gramnegativo
tiene una capa delgada de peptidoglicano y una membrana lipídica externa, es una
forma bacteriana Escherichia coli.

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Cristal violeta

Según nuestros resultados obtenidos se puede observar que la estructura de esta

bacteria es como unas pequeñas capsulas color morado al inicio, luego va cambiando
a un tono rosa, y continua con un tono azul marino, es decir, es un gramnegativo, es
una forma bacteriana Campylobacter helicobacter.

Según los resultados que se han obtenido se puede observar que la estructura de esta
bacteria es como pequeños puntitos de varios colores color rosa, rojizo, esto es un
gramnegativo, es una forma bacteriana Vibrio cholerae.
Célula epitelial escamosa (eucariota animal)

Al final de este laboratorio los resultados obtenidos se pueden examinar en la imagen

donde se logra ver la célula epitetial escamosa y las células procariotas.

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CONCLUSIONES Y DISCUSIÓN. _
Discusión
Nuestro laboratorio se ha propuesto recientemente el estudio a las células procariotas,
para lo cual se propuso antes que nada un método eficaz y sencillo para determinar
mediante el microscopio las características de las células procariotas. La célula
procariota es sin duda la más primitiva, a pesar de su estructura muy sencilla han
sobrevivido gracias a su plasticidad de su fisiología, que le permite estar en ambientes
donde no sobreviven las eucariotas. El empleo de colorantes en la observación de
células representa una gran ventaja ya que permite identificar con mayor facilidad las
estructuras básicas.

Conclusiones
 Las células procariotas son células sin núcleo, aunque son más sencillas son
células que presentan un ADN libre en el citoplasma, también organismos muy
importantes para la vida de los seres vivos.
 En el laboratorio se comprobó que todos los organismos vivos están formados
por células procariotas, se reconocieron en el microscopio, las diferencias
morfológicas fundamentales de las células procariotas
 Las células procariotas son bacterias que no tienen núcleo definido, son muy
pequeñas y se tienen que ver con microscopio.
 Es importante que los estudiantes tengas conocimiento sobre la tinción de Gram

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REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA. _
Laboratorio virtual No 5: Observación de células Procariotas—YouTube. (s. f.).
Recuperado 15 de diciembre de 2021, de
https://www.youtube.com/watch?v=64M6aQ6xExM

Practica # 4 Observación de células procariontes—YouTube. (s. f.). Recuperado 15 de

diciembre de 2021, de https://www.youtube.com/watch?v=yDWTMKukEh0

Tinción de Gram: Prueba de laboratorio de MedlinePlus. (s. f.). Recuperado 15 de

diciembre de 2021, de https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-laboratorio/tincion-
de-gram/

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