TEMA 2: ORGANIZACIÓN DEL ADN EN LOS CROMOSOMAS

- El ADN necesita compactarse mucho para ubicarse en el espacio que lo contiene, pero tiene
que descompactarse para realizar sus funciones.
- El ADN se compacta en diferentes niveles jerárquicos utilizando como soporte las proteínas y
progresa de interfase a mitosis en metafase (estado de máxima compactación).

ESTRUCTURA DEL MATERIAL NUCLEAR DE LOS EUCARIOTAS A LO LARGO DEL

CICLO CELULAR

- El material hereditario a lo largo de la célula eucariota se compacta en dos niveles:

- Fibra de cromatina en núcleos en interfase (entendiendo la interfase entre dos mitosis):

estado de mínima compactación. El material hereditario tiene una estructura llamada
cromatina.

- Cromosomas en mitosis en metafase: estado de máxima

compactación donde los cromosomas son estructuras
individualizadas del material hereditario perfectamente
reconocibles. Cada cromosoma ocupa un territorio
específico de los núcleos, esos cromosomas estirados
están asociados con la matriz nuclear. Es decir, este es
un entramado formado por ADN y proteínas.

- Esta progresiva compactación sucede porque al obtener en mitosis unidades discretas de

material hereditario contenidos en cromosomas, se facilita la división mitótica y el material
hereditario (en las fibras sería difícil distribuir equitativamente ese material hereditario).
LA CROMATINA EN INTERFASE

LA CROMATINA DE 30nm A MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA

- La fibra de cromatina de 30nm representa la estructura organizativa del material hereditario
en interfase.
- Este entramado de las fibras genera la cromatina.
- A partir de estos núcleos en interfase se intenta extraer esa cromatina y caracterizarla.

COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA CROMATINA

- ADN
- PROTEÍNAS:
- HISTONAS: H1, H2A, H2B, H3 y H4.
• Hay veces que las histonas se cambian por protaminas (en peces, esperma,…) que
compactan altamente el material hereditario (función protectora).
• La H3 y H4 están muy conservadas. Esto no implica que los genes que codifican a
estas no muten, sino que al hacerlo los cambios son mortales y la célula no progresa.
• Son ricas en arginina y lisina que tienen grupos NH3 que a pH fisiológico, están
cargados positivamente. Por ello se unen fuertemente a los grupos fosfato del ADN
cargados negativamente.
• Se modifican frecuentemente con, por ejemplo, metilaciones o acetilaciones.
• Las histonas no juegan un papel tan meramente pasivo en la compactación del ADN, lo
compactan cerca de 5-7 veces.
- NO HISTONAS (resto de proteínas asociadas a la cromatina como las ADN
polimerasas).
- ARN
- Se encuentra ligado a su molde de ADN.

LA FIBRA DE CROMATINA DE 10nm

- Se somete a la fibra de 30nm a condiciones de

baja fuerza iónica. La subestructura que se
observa es la fibra de 10nm o estructura de rosario
de la cromatina.
- A las zonas más teñidas (bolas) de 10nm se les
denomina NUCLEOSOMAS. Estas unidas al ADN
forman la fibra de 10nm.

MODELO DEL NUCLEOSOMA

- Es la unidad básica de la fibra de 10nm con forma de cilindro aplastado.

- Es la subunidad de la cromatina.
- Compuesto por 200 pares de bases y el octámero de histonas (2 subunidades de H2A, H2B,
H3 y H4).
- La proteína H1 tiene una localización externa al nucleosoma.
- Está compuesto por:
- Partícula núcleo del nucleosoma:
• Conformado por las histonas + ADN del núcleo con longitud
constante de 146 bases.
• El ADN se encuentra enrollado al octámero exteriormente
para facilitar la unión con proteínas (mantiene las superhélices
negativas) dando 1,75 giros levógiros.
• Hay 1sh(-) para cada partícula de núcleo.

- ADN espaciador o linker:

• Conecta las partículas núcleo adyacente oscilando entre 8-
114 pb.
• Está asociado con la H1

- Las partículas del nucleosoma sufren continuos reposicionamientos para que el ADN
realice sus propias funciones.
- Modificaciones químicas de las histonas: acetilaciones, metilaciones, fosforilaciones,..
Parece que condicionan la expresión genética ya que presentan estas modificaciones
químicas: EL CÓDIGO DE LAS HISTONAS
- Sistemas de remodelado de la cromatina.

- La fórmula empírica del nucleosoma es: partícula núcleo+octámero de histonas+ADN

núcleo+ADN espaciador+H1.
- La organización nucleosomal es dinámica. Los complejos de remodelado de la cromatina
reposicionan los nucleosomas para que sean accesibles a las proteínas.

EMPAQUETAMIENTO DE LA FIBRA DE 30nm

- Para pasar de la estructura de 10nm a la de 30nm, incrementamos
gradualmente la fuerza iónica de la fibra de 10nm para ver ese grado de
compactación.
- Los estudios realizados dictaminan varios modelos posibles. El modelo
más aceptado es el "MODELO DEL SOLENOIDE": los nucleosomas en
10nm adquieren una configuración en hélice que se va aplastando hasta
llegar a la fibra de 30nm.
- En la fibra de 30 nanómetros hay seis nucleosomas por vuelta. Implica una
tasa de compactación de cerca del 30%.
- El problema es identificar el ADN espaciador y donde está la H1.
- El cromatosoma nos indica que la proteína H1 debe estar adyacente a la
partícula núcleo pero no se sabe la posición precisa.
- La fibra de 30nm usa un soporte proteico (scaffold) formando una
estructura multilobulada radial. El esqueleto gira formando hélices que
darán lugar a los cormosomas.
- Todo el camino es una estrategia para que se pueda equidistribuir el ADN
en las células hijas. OBJETIVO: Conseguir una fiel compactación.

SCAFFOLD
- Se somete a los cromosomas en metafase a la acción de fuertes polianiones (eparina o
sulfato de dextrano por ejemplo).
 - Estamos poniendo polianiones en contacto con el ADN, de modo
que compiten con el ADN por las histonas. Les ganan sacándole a
los cromosomas las histonas.
- Se obtiene la siguiente imagen: una estructura que recuerda a las
cromátidas hermanas unidas por el centrómero.
- El ADN que queda unido al scaffold, está unido en secuencias
críticas que no pueden ser digeridas por nucleasas
- Secuencias ricas en Ay T (Secuencias SAR, regiones de unión
al scaffold, secuencia similar a la unión a la matriz nuclear).
- En resumen, las proteínas forman un papel clave en el soporte y
protección como agentes mutagénicos, y en la expresión del material hereditario.

TIPOS DE CROMATINA
 EUCROMATINA: cromatina verdadera que experimenta progresivos niveles de compactación
 HETEROCROMATINA: exhibe niveles de compactación grandes.
o CONSTITUTIVA
o FACULTATIVA

CONSTITUTIVA
- Se localiza preferentemente en regiones centroméricas y
pericentroméricas de los cromosomas. No obstante, también puede
estar ocasionalmente en los brazos cromosómicos.
- Un ejemplo ilustrativo de este ejemplo, está en los cromosomas
humanos (ver cormosoma Y los brazos).
- Al estar tan fuertemente compactada, es muy pobre en genes
codificadores de proteínas. OJO, no es una zona genéticamente inerte.
- Las zonas centroméricas y pericéntromericas se asocian al ADN
satélite, es decir, un ADN que no se expresa en moléculas de ARN,
tiene una función meramente estructural.

FACULTATIVA. EL CORPÚSCULO DE BARR

- Barr descubre que en núcleos en interfase de hembras de mamífero se observaban zonas
intensamente teñidas. Estas zonas son zonas de heterocromatina facultativa.
- Se denomina así porque este tipo de heterocromatina puede funcionar como eucromatina o
como heterocromatina, es decir, compactarse ampliamente si conviene.
- Mary Lion postula la “Hipótesis de compensación de dosis”: En los varones hay una dosis de
0.5 cromosomas sexuales respecto a autosomas, mientras que en las hembras es de 1 (dos
autosomas, dos cromosomas X). Los genes dependientes de la dosis requieren la
inactivación de uno de los cromosomas X en las mujeres para su correcto funcionamiento
mediante una amplia compactación.
- El cromosoma Y es muy pobre en genes
- En resumen, la doble X de mujeres es un problema para las células. Se postula ese equilibrio
de dosis, por la cual se necesita la inactivación de uno de los cromosomas X de las mujeres
para equilibrarse con lo que hay en barones.

INACTIVACIÓN DEL CROMOSOMA X EN MAMÍFEROS

- El esperma y el óvulo se unen para dar el cigoto (el cual experimenta sucesivas mitosos). La
compensación de dosis ocurre durante la blástula tardía.
 - Pueden ocurrir dos eventos, A veces se inactiva por azar el
cromosoma X paterno o a veces el materno. La inactivación
por azar genera que todos los clones celulares mantiene el
cromosoma inactivado. NOTA: parece ser que en los tejidos
extraembrionarios se inactiva el del padre.
- Son las mujeres las que inactivan uno de sus cromosomas X
aleatoriamente.
- Volviendo al inicio, en las ovogonias uno de los cromosomas
X está inactivo. Necesitan activarse de vuelta porque los
óvulos que da esa mujer necesitan cromosomas X activos.
- Esto origina variaciones fenotípicas en el desarrollo con
importantes consecuencias en un individuo heterocigótico
(para un gen, dos alelos distintos Aa: mosaico en el fenotipo) para cada gen:
- Gatas calicó (mosaicos en la piel para hembras heterocigóticas): en cada mancha se
inactivó un cromosoma X expresándose el alelo que queda.
- Mujeres con displasia ectodérmica anhidrótica: mujeres heterocigóticas para una
mutación que genera la pérdida de glándulas sudoríparas.

- En humanos durante la inactivación interviene un locus complejo (XIC) con un gen clave
(XIST). Éste, codifica una molécula de ARN que envuelve a modo de caperuza la parte
del cromosoma X que va a ser inactivado, reclutando proteínas compactadoras: estado
heterocromático. Esta inactivación no es total (es del 80%) ya que hay genes que
requieren doble dosis y no se inactivan.

CROMOSOMAS
- Con la tinción de Feulgen (el tratamiento al que se supuso esta muestra libera aldehídos
que reacciona con reactivos de SHIF) se determinaron los 46 cromosomas que forman el
núcleo de las células. 22 autosomas y 2 cromosomas sexuales.
- CARIOTIPO: complemento o dotación cromosómica de una célula
o ser vivo.
- Una dotación cromosómica haploide se corresponde con un
individuo o célula que tiene una sola copia de cada cromosoma,
diploide que tiene dos etc…
- Se ordenan los cromosomas humanos por tamaño.
- La representación de estos cromosomas ordenados se denomina
IDIOGRAM o CARIOGRAMA.
- Estas técnicas no permiten distinguir los distintos pares de
cromosomas de un cariotipo dado. Se necesitan otras técnicas
más precisas: las técnicas de bandeo cromosómico.

TÉCNICAS DE BANDEO CROMOSÓMICO

- Constituyen procedimientos de tinción capaces de generar patrones de bandas alternantes
transversales claras y oscuras a lo largo del cromosoma.
- Estos patrones de banda son altamente reproducibles.
- Esta serie de bandas conforman un patrón característico que permite identificar cada
cromosoma y sus mutaciones.
- Los patrones de bandas se obtienen a partir de tratamientos que implican la
desnaturalización el ADN y/o la digestión enzimática de los cromosomas, junto a la
incorporación de sales que se unen específicamente al ADN.

BANDAS G
- Para obtener bandas G, se somete a los cromosomas a una digestión suave con la
enzima TRIPSINA. Esta enzima rompe parte de las enzimas del cromosoma facilitando el
acceso a la tinción con sales GIEMSA (conjunto de sales cargadas + que se unen a los
grupos fosfato del ADN).
- Las bandas oscuras se les denomina BANDAS G, y
a las claras BANDAS G-.
- Las bandas G son ricas en la secuencia A-T, pero
escasa en genes codificadores de proteínas
(contrario a Bandas R).
- Las bandas G- (o bandas R) son ricas en C+G, y
rica en genes codificadores de proteínas
- Se consiguen hasta 850 bandas en prometafase.
Puede ser mayor si descompactamos más.

BANDAS R
- Se somete al ADN a una desnaturalización en un medio salino (separar cadenas)
tratando los cromosomas con calor. Se unen posteriormente las sales GIEMSA.
- Da un patrón de bandas contrario a las BANDAS G, las bandas claras son las BANDAS
R- y las oscuras son BANDAS R.
- BANDAS G=BANDAS R- y viceversa

OTROS SISTEMAS DE BANDEO

- Sistemas de bandeo específicos para regiones centroméricas (BANDAS C) y si es
teloméricas ( BANDAS T)
- BANDAS Q: patrón similar a las bandas G, lo que las caracteriza es que s e tiñen primero
con un marcador fluorescente.

NUCLEASA: (o fosfodiesterasa) es una enzima hidrolasa que cataliza la ruptura de los

enlaces fosfodiéster.
- EXONUCLEASA: rompe los enlaces en el extremos 3´o 5´
- ENDONUCLEASA: rompe los enlaces por el medio.