Bioquímica Medica II - Prácticas

Metabolismo de
Lípidos: Hígado Graso
Experimental
 Hígado
participa

Metabolismo
lipídico

mediante
Diversos
procesos
Oxidación de los
Síntesis de
ácidos grasos
cuerpos cetónicos
Síntesis de
Síntesis de ácidos lipoproteínas
plasmáticas Síntesis de
grasos y colesterol
ácidos biliares
VLDL HDL
 Cirrosis
Hepatica
Esteatosis
Frecuentemente
Hepatica o
es la antesala Carcinoma
Hígado Graso hepatocelular

Se produce por

En el Alteraciones en el
Hígado
metabolismo lipídico

Ocasionando

Aumento anormal
del contenido graso
 Aumento
Disminución
cantidad
de
Hígado Graso De la
Ácidos Salida
grasos Principales causas lipídica
Que llegan al
del
Hígado
Hígado
Menor Mayor
Procedentes oxidación síntesis Debido a un
Alimentación Otros de Defecto en la
de
tejidos síntesis
Ácidos Ácidos
grasos grasos
En el En el Lipoproteínas
Hígado Hígado plasmáticas
 Rol de la Metionina en el metabolismo lipídico
ATP PPi

METIONINA Metionil-AMP
Metionil-tRNA Sinteasa
ATP tRNA
ATP Metionina
Adenosil Transferasa
Ppi + Pi AMP
Estrógenos 
S-Adenosilmetionina Met-tRNA
La fosfatidilcolina (lecitina) Fosfatidil
es uno de los principales etanolamina
fosfolípidos.
Síntesis Proteica
Fosfatidil
colina
S-Adenosilhomocisteina
LIPOPROTEINAS
 Hígado Graso
Tetracloruro
de carbono Inducción Experimental

Estructuralmente
Compuesto Metionina
relacionado
Puromicina
Antagonista Síntesis Fosfatidil
competitivo colina y proteínas
Ácido Etionina Bloquea
Orótico
Síntesis de
lipoproteínas
Evita
Una dieta rica en fructosa (70%) induce esteatosis Salida de lípidos
macrovesicular e inflamación lobulillar en hígados de rata. del hígado
 Rol de la Etionina en el metabolismo lipídico
ATP PPi

ETIONINA Etionil-AMP
Metionil-tRNA Sinteasa
ATP tRNA
Metionina Adenosil
Ppi + Pi Transferasa
AMP
Estrógenos 
S-Adenosiletionina Met-tRNA
Fosfatidil
etanolamina
Síntesis Proteica
Fosfatidil
etilcolina
S-Adenosilhomocisteina
LIPOPROTEINAS
https://youtu.be/GLTaGa2Lu-k
 Experimento Hígado graso experimental

Objetivos
• Conocer el mecanismo bioquímico por el cual la Etionina
induce esteatosis hepática.

• Conocer el fundamento de la determinación de los ácidos

grasos en el hígado.

• Estudiar el efecto de la metionina sobre el hígado graso

producido por etionina.

• Indicar algunas alternativas de tratamiento en pacientes que

sufren esteatosis hepatica.
 Experimento Hígado graso experimental
Metodología
El día anterior a la practica se inyecta vía intraperitoneal a un
lote de tres ratas hembras, las siguientes soluciones:

• Rata control: Inyectar 3 mL de solución salina isotónica.

Inyectar la misma cantidad a las 2:30, 5 y 7 horas después
de la primera inyección.
https://www.youtube.com/watch?v=_8CwrSLfdpo
• Rata tratada con etionina: Inyectar 3 mL de solución de
DL-Etionina (16.7 mg/L). Inyectar la misma cantidad a las
2:30, 5 y 7 horas después de la primera inyección.
• Rata tratada con etionina + metionina: Recibe el mismo
tratamiento que la rata con etionina, pero además se
inyecta 3 mL de L-metionina (20 mg/L) una hora antes de
la primera inyección de etionina y una hora después de
cada inyección de etionina.
https://www.youtube.com/watch?v=b_Myg2qqD28
Experimento Hígado graso experimental

Determinación de los ácidos grasos

Transcurridas 24 horas de iniciado el tratamiento de los

animales se les sacrifica y se les retira rápidamente el hígado, https://www.youtube.com/watch?v=0z5_mNUEzlg
se pesa y se observan sus características.
Rata Control Rata con Etionina Rata con Etionina + Metionina

Peso: 6.8 g Peso: 7.3 g Peso: 7.2 g

Experimento Hígado graso experimental
Determinación de los ácidos grasos
Inmediatamente se toma un trozo de 2.5 g, el que se fragmenta con la ayuda de tijeras y se deposita
en un Erlenmeyer de 250 mL
Rata Control Rata con Etionina Rata con Etionina + Metionina

2.5 g 2.5 g 2.5 g

1 2 3
Experimento Hígado graso experimental
Determinación de los ácidos grasos
Se le añade 10 mL de hidróxido de potasio al 33% y 40 mL de etanol al
96% con alcohol isoamílico al 0.4%

40 mL 40 mL 40 mL
Etanol 96% Etanol 96%
Etanol 96%
Alcohol Alcohol
Alcohol
isoamílico isoamílico
isoamílico
0.4%
0.4%
10 mL
0.4%
10 mL 10 mL
1 2 3

KOH KOH
KOH 33%
33% 33%
Experimento Hígado graso experimental
Determinación de los ácidos grasos
Se calienta la preparación en baño maría Añadir 17 mL de HCl al 25 %, mezclar y
hirviente durante 20 minutos, teniendo dejar en reposo algunos minutos.
cuidado que no se proyecte el contenido.

HCl
25% 17 mL
17 mL 17 mL

1 2 3
Experimento Hígado graso experimental
Determinación de los ácidos grasos Colocar el contenido en una pera de
Añadir con una pipeta volumétrica 25 mL decantación y agitar fuertemente durante 1
de éter de petróleo minuto. Dejar en reposo por 10 minutos para
conseguir una adecuada separación de las
fases éter de petróleo y etanol-ácido.

1 2 3

https://www.youtube.com/watch?v=EFiFPoOzqtk
Experimento Hígado graso experimental
Determinación de los ácidos grasos
Separar ambas fases y retirar 5 mL de la capa etérea (superior), y colocar en un Erlenmeyer y añadir
1 mL de solución de etanol – alcohol isoamílico y dos gotas de azul de timol.

Etanol 96% Etanol 96% Etanol 96%

Alcohol Alcohol Alcohol
isoamílico isoamílico isoamílico
0.4% 0.4% 0.4%
1 mL 1 mL 1 mL
2 gotas 2 gotas 2 gotas
5 mL 1 2 3
2 23

https://www.youtube.com/watch?v=EFiFPoOzqtk
 Experimento Hígado graso experimental

CH2O – CO – (CH2)n – CH3 CH2OH H3C – (CH2)n – COOK H

H3C – (CH2)n – COOH
KOH HCl
CHO – CO – (CH2)n – CH3 CHOH H3C – (CH2)n – COOK H
H3C – (CH2)n – COOH

CH2O – CO – (CH2)n – CH3 CH2OH H3C – (CH2)n – COOK H3C – (CH2)n – COOH
H
Triglicérido Glicerol Sales de ácidos grasos Ácidos grasos
(jabones)

Éter de Petróleo
 Experimento Hígado graso experimental
Determinación de los ácidos grasos
Finalmente, titular con NaOH 0.1 N hasta obtener un color azul
verdoso que debe permanecer estable por lo menos 3 minutos.

NaOH 0.1 N NaOH 0.1 N

https://www.youtube.com/watch?v=OnHMp9Rn2gI
Experimento Hígado graso experimental

Resultados

Características del hígado

Peso total Color Consistencia

Rata control

Rata con etionina

Rata con etionina + metionina

Experimento Hígado graso experimental

Resultados
Para efecto de los cálculos asuma que el PM promedio
de los ácidos grasos que se están titulando es de 284.

Contenido de ácidos grasos

NaOH 0.1 N mg de A.G. por
mEq / 5 mL mEq / 25 mL
mL gastados gramo de hígado

Rata control 1.3

Rata con etionina 3.6

Rata con etionina + metionina 2.0

 Para complementar….

https://www.researchgate.net/publication/27340007_Modelos_animales_expe
rimentales_de_enfermedad_de_higado_graso_y_sindrome_metabolico
Bibliografía
• Ayala, I., Cámara, P., & Fernández-Pardo, J. (2008). Modelos animales experimentales de
enfermedad de hígado graso y síndrome metabólico. In Anales de veterinaria de Murcia (Vol. 24).
• Gogoi-Tiwari, J., Köhn-Gaone, J., Giles, C., Schmidt-Arras, D., Gratte, F. D., Elsegood, C. L., ... &
Tirnitz-Parker, J. E. (2017). The murine choline-deficient, ethionine-supplemented (CDE) diet model
of chronic liver injury. JoVE (Journal of Visualized Experiments), (128), e56138.
• Kucera, O., & Cervinkova, Z. (2014). Experimental models of non-alcoholic fatty liver disease in
rats. World journal of gastroenterology: WJG, 20(26), 8364.
• Lau, J. K. C., Zhang, X., & Yu, J. (2017). Animal models of non‐alcoholic fatty liver disease: current
perspectives and recent advances. The Journal of pathology, 241(1), 36-44.
• Younossi, Z., Tacke, F., Arrese, M., Chander Sharma, B., Mostafa, I., Bugianesi, E., ... & Vos, M. B.
(2019). Global perspectives on nonalcoholic fatty liver disease and nonalcoholic
steatohepatitis. Hepatology, 69(6), 2672-2682.