4º SESIÓN DE

APRENDIZAJE CINETICA
ENZIMATICA I

Dr. Diomedes Camones M.

MODO DE ACCIÓN DE LAS ENZIMAS

 En las reacciones espontáneas, los productos

finales tienen menos energía libre de Gibbs (DG)
que los reactantes (Figura inferior izquierda). Por
tanto, en las reacciones espontáneas se libera
energía de Gibbs (DG<0). Sin embargo, el
comienzo de la reacción requiere un aporte inicial
de energía. Esta energía inicial que hay que
suministrar a los reactantes para que la reacción
transcurra se llama energía de activación (Ea).
Cuanto menor es la Ea más fácilmente transcurre la
reacción.

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MODO DE ACCIÓN DE LOS ENZIMAS

Laaccióndeloscatalizadoresconsiste,precisamente,en
disminuir la Ea (Figura superior derecha). Los enzimas son
catalizadores especialmente eficaces, ya que disminuyen la Ea aún
más que los catalizadores inorgánicos. Por ejemplo, la
descomposición del agua oxigenada (H2O2) para dar H2O y O2
puede ocurrir sin catalizador, con un catalizador inorgánico (platino),
o con un enzima específica (catalasa). Las respectivas Ea para cada
proceso son 18, 12 y 6 Kcal/mol. Así, se puede calcular que el
platino acelera la reacción 20.000 veces, mientras que la catalasa la
acelera 370.000 veces.
 Para que una reacción química tenga lugar, las moléculas de los
reactantes deben chocar con una energía y una orientación
adecuadas. La actuación de la enzima (1) permite que los
reactantes (sustratos) se unan a su centro activo con una
orientación óptima para que la reacción se produzca y (2) modifica
las propiedades químicas del sustrato unido a su centro activo,
debilitando los enlaces existentes y facilitando la formación de otros
nuevos (Figuras siguiente)
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MODO DE ACCIÓN DE LOS ENZIMAS

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 CINÉTICA ENZIMÁTICA
 La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas.
 Estos estudios proporcionan información directa acerca del mecanismo
de la reacción catalítica y de la especificidad de la enzima.
 La velocidad de una reacción catalizada por una enzima puede medirse
con relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario
purificar o aislar la enzima. La medida se realiza siempre en las
condiciones óptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores, etc,
y se utilizan concentraciones saturantes de sustrato. En estas
condiciones, la velocidad de reacción observada es la velocidad máxima
(Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la
aparición de los productos o la desaparición de los reactivos.

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CINÉTICA ENZIMÁTICA
MODELO CINÉTICO DE MICHAELIS-MENTEN

 Los estudios sistemáticos del efecto de la concentración inicial

del sustrato sobre la actividad enzimática comenzaron a
realizarse a finales del siglo XIX.
 En 1882 se introdujo el concepto del complejo enzima-sustrato
como intermediario del proceso de catálisis enzimática.
 En 1913, Leonor Michaelis Para explicar la relación observada
entre la velocidad inicial (v0) y la concentración inicial de
sustrato ([S]0) Michaelis y Menten propusieron que las
reacciones catalizadas enzimáticamente ocurren en dos etapas:
En la primera etapa se forma el complejo enzima-sustrato y
en la segunda, el complejo enzima-sustrato da lugar a la
formación del producto, liberando la enzima.

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 CINÉTICA ENZIMÁTICA

 Al seguir lavelocidaddeaparicióndeproducto(ode
desaparición del sustrato) en función del tiempo se obtiene la
llamada curva de avance de la reacción, o simplemente, la
cinética de la reacción. A medida que la reacción transcurre, la
velocidad de acumulación del producto va disminuyendo
porque se va consumiendo el sustrato de la reacción (Figura
siguiente). Para evitar esta complicación se procede a medir
la velocidad inicial de la reacción (v0). La velocidad inicial
de la reacción es igual a la pendiente de la curva de avance a
tiempo cero (Figura siguiente). De esta forma, la medida de v0
se realiza antes de que se consuma el 10% del total del
sustrato, de forma que pueda considerarse la [S] como
esencialmente constante a lo largo del experimento.
Además, en estas condiciones no es necesario considerar la
reacción inversa, ya que la cantidad de producto formada es
tan pequeña que la reacción inversa apenas ocurre. De esta
forma se simplifican enormemente las ecuaciones de
velocidad.

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CINÉTICA ENZIMÁTICA

Para estudiar la cinética enzimática se mide el

efecto de la concentración inicial de sustrato
sobre la velocidad inicial de la reacción,
manteniendo la cantidad de enzima constante. Si
representamos v0 frente a [S]0 obtenemos una
gráfica como la de la Figura siguiente. Cuando [S]0
es pequeña, la velocidad inicial es directamente
proporcional a la concentración de sustrato, y por
tanto, la reacción es de primer orden. A altas
[S]0, la enzima se encuentra saturada por el
sustrato, y la velocidad ya no depende de [S]0. En
este punto, la reacción es de orden cero y la
velocidad es máxima (Vmax).
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MODELO CINÉTICO DE MICHAELIS-MENTEN

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» Flcijo Ie e- ei› el i»et‹aholisiyo es ))),
con›plejo: »» e e
«»"
Intern›edios n›etabélicos

Trni›syortaJores de
e"
ii›teri»eJios
Liberaciéi› Ie ei›er‹yia

Aceptores de e- Transductores de energia moleculari

ENZI NAS y otras PRDT EI NAS

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Trabajo fitil

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Ejei»glo: •

Transportadores de e i
NAD+ ( FAO

Liberacién de energia

Transductores de energia:
ENZIMAS y OTRAS
PROTEINA6

Trahajo hiolé‹yico
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» Las reaccioi›es Ie oxiJaciéi›-reJficciér› suceden a la ) ) j*
vez, pero coi›viene Jescribir la transferei›cia de e- en )•
dos sen›irreaccioi›es:
Fe * + C‹i * “ Fe** + Cai”

( 1) Fe°* “
Fe'+ + e-
(Z) Cii** + e
Cu“

> Molécaila Joi›aJora e": a‹yei›te re‹I‹ictor

» Moléctila aceptorn e-: a‹yeiate oxi‹Iaiate

Par reJox c oi›jfi‹yaJo: Fe * (doi›a J or)/Fe3 {aceptor)

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Er ‹iacién Ie NernsE eee «
Potei›r i‹n I rle re‹lri‹ciéi› (E): tei›deitcia de prodaicir ) «"
esgoi›tñnean›ei›te In transferei›cin JesJe el JoianJor
de e- nl nc'egtor Ie e-.
PDte itc i‹n I ‹Ie r erltir C i Dt1 R5tE f1(I‹1r (E°)
Potenr i‹n I ‹Ie re‹Itir ‹ ién estñri‹I‹nr ° i› H 7 (E‘ O )
Unidades: voltios (V)

RT [aceptor e-]
E’ = E’° + In
nF [donadar e ]
n: n^ de e- transferidos/n olecula

RRlaciéi› ‹Ie AE'° y AG °

r r
n: n^ de e' tr ansferidos en Ia reaction
AG = - ›F 1E °

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Estn‹los rle ox irI‹ac iéi› ‹let C

E lectronegatividad crecientei
H < £ < S•. N •. O

OIJ1 \J 9 St 0 S IU 8 S 6 X Id a d o s

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Tiyos Ie trai1sferei›‹ia eler troi›ir a ei› las réI‹iIas ..¿ j

1. Directai»ei›te coi»o e".

Eje‹z›plo: e»tre citocroi»os

2. En forn›a de âto‹»os de H” (H” y

e"). Eje‹a1plo: FADHt

3. En forn›a de io‹› hidrriro (:H-) (2

e"). Eje‹t1plo: NAD(P)”

4. Con1hinacio‹› directa con oxige‹›o.

Ejei»plo: oxigei1asas
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Ejeinylo: AcRtBlflRl1irlo reJ‹iciJogor el tra nsgortaJor rlR ooo
e- biologico NADH j"
acetaldeliido + NADH + H” —> etanol + NAD”
Las se ia irreac c iOPI eSI

(1) )
etanol
AcetaldRhida + 2H+ +
E’°z - 0,197 V
2e-
NADH + H+
(2) NAD” + 2H” + 2e-

AE’° = E’• (aceptor e-) — E’° (donadar de e-)

Acetaldehido acepta e- del NADH

AE'• = -0,197 v - (-0,320 V) = D,1 23 V
i\ = 2
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 1fi?’° z - n F 1E z - Z ( 96. 5 kJ /v•i»oI ) (D, 12 3 V ) = -2 3,7 kJ / i»oI
Co n diciones: pH ?t [1 f•1]

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 1. INHIBIDORES

Desde el principio de la Enzimología se sabia de sustancias que disminuían

la velocidad de la reacción catalizada por los catalizadores,
“envenenando” o dificultando la actuación de éstos.

Las sustancias que disminuyen la velocidad de reacción, química o

Los inhibidores se pueden
enzimática, dividir eninhibidores.
se denominan tres grandes grupos:

 Inhibidores reversibles,
 Inhibidores pseudorreversibles
 Inhibidores irreversibles
Inhibidor:
Efector que hace disminuir la actividad enzimática, a través de
interacciones con el centro activo u otros centros específicos
(alostéricos).
Esta definición excluye todos aquellos agentes que inactivan a
la enzima a través de desnaturalización de la molécula enzimática

De esta forma, habrá dos tipos de inhibidores:

I. Isostéricos: ejercen su acción sobre el centro activo

II.Alostéricos:
Los inhibidores isostéricos pueden ser de dos tipos:

1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima

libre, con el complejo enzima-substrato o con ambos:

E+I EI

ES + I ESI

2. Inhibidor irreversible: modifica químicamente a la enzima:

E+I E’
 Inhibición reversible

(a) El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre,

impidiendo la fijación del substrato: Inhibición Competitiva

(b) El inhibidor se fija a la enzima independientemente de que lo haga o n

(c) El inhibidor se fija únicamente al complejo enzima-substrato

una vez formado, impidiendo la acción catalítica; este tipo
se conoce como Inhibición Anticompetitiva
 2.1. Inhibición competitiva

En la inhibición competitiva o inhibición específica, el inhibidor compite con el

sustrato por el mismo centro activo de la enzima.

La molécula del inhibidor es, generalmente, en todo o en parte, un isóstero del

sustrato, excluyendose mutuamente del centro activo de la enzima.

Isóstero --> Moléculas que tienen formas y tamaños similares

 2.2. Inhibición no-competitiva

En una inhibición no-competitiva el inhibidor se une a la enzima en un centro de

unión diferente al centro activo de la enzima.
Cuando [S]   no desaparece la inhibición.

V = Vmax[S] / ([S]+Km)
 Consecuentemente, las especies químicas en las que puede encontrarse la
enzima serán:

En el caso de la inhibición no-

competitiva pura suponemos que tanto
la enzima libre, E, como el complejo-ES
pueden unirse al inhibidor, y que la
constante de disociación, Ki, es igual en
ambos casos.

E y EI unen al sustrato sin que afecten a las

constantes de disociación (Km)

- En este caso, también, sólo el complejo-

ES evoluciona dando producto
 Km kcat
E + S <====> ES ----------> E + P

<=====
<=====
I Ki I Ki

Km EI
<=====> ESI>
* La deducción de la velocidad de reacción, en este caso, es análoga a la realizada
en el caso de la inhibición competitiva:

vinc = kcat (ES)

[Eo] = [E] + [ES] + [EI]+ [ESI]
 INHIBICION

lnhibidor se yne Vtjjjix Inhib"dor.se,une

my

' Min inhibidor

V, [S]* V, [S]

11
is (
Ftgura I Inhibicion competitiva. Flgurn 2 lnhibicion no competitiva.

Biologia - INMUNOLOGIA Profesor Jano es sector m. uitoria

uu.profesorfano.uordprass.erm

profesorjanoegmaif.con
RESUMEN
 RESUMEN

Inhibidores aquellos compuestos disminuyen la actividad de una enzima. Se agrupan en tres cla
Inhibidores reversibles cumplen las condiciones de Michaelis, la [Io] es muy superior a la
[Eo] siendo el complejo enzima-inhibidor [EI] despreciable frente a [I]

Tres tipos de inhibición reversible:

a) Inhibición competitiva el inhibidor compite por el mismo lugar que el substrato. La
velocidad máxima queda inafectada por el inhibidor que aumenta la Kmap al
multiplicarse la Km de la enzima por el factor (1+ I/Ki). El grado de inhibición
depende de las concentraciones de I y S, así como de la Km y Ki.

b) Inhibición no competitva el inhibidor se une a la enzima en un lugar diferente al

de la unión al substrato. La inhibición afecta a la velocidad máxima disminuyendo
su . valor al ser dividida por (1+ I/Ki). El grado de inhibición depende solamente
de la [I] y de la constante Ki.

c) Inhibición acompetitiva el inhibidor se une solamente al complejo Enzima-

Substrato, disminuye la velocidad máxima por el factor (1+ I/Ki) y, paradójicamente,
disminuye la Km por el mismo valor obteniéndose una Kmap menor.

Inhibición por exceso de substrato puede ocurrir. La curva de velocidad en función de

diferentes concentraciones de substrato presenta un máximo. En general se da este tipo
de inhibición cuando el substrato a grandes concentraciones puede reaccionar con la
proteína enzimática en lugar diferente al de la unión enzima substrato
REGULACION ENZIMATICA

 Inducción: Favorece la reacción enzimática

 Represión: Disminuye la reacción enzimática
 Interacción alostérica: Regulación por interacción
en un sitio diferente al centro activo.
 Modificación Covalente: Se da a través de
reacciones de glucosilación, acilación, hidroxilación.
 Proteólisis: Se da por cortes proteolíticos que
generan cambios conformacionales y crean el sitio
catalítico.
 Isoenzimas: Regulación por enzimas similares.
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 Estado de
Sustrato transición

GRACIAS….!!

Análogo de
estado de transición