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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS BIOLOGÍA MOLECULAR

BANCO DE SANGRE

ELABORADO POR: REVISADO POR APROBADO POR:

Nombre: Nombre: Nombre:
Susana Satelices Campos Susana Almendares Calderón Dra Carolina Prieto Castillo
TM Banco de Sangre. jefa Unidad de Calidad. Jefa Banco de Sangre

Pamela Marfan Soza Mónica Encina

TM Banco de Sangre. TM Unidad de Calidad

. Celia Gamonal Saldias

TM Banco de Sangre.
Fecha: Fecha: Fecha:

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01
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I. OBJETIVOS

GENERAL:
 Estandarizar la técnica de Biología Molecular

ESPECÍFICOS:
 Definir el flujo de trabajo del TaqScreen MPX V2.0
 Describir la mantención de los equipos.

II. ALCANCE:
 Aplica a todos los profesionales y técnicos que participan en los procedimientos de la
Sección Biología Molecular de Banco de Sangre.

III. RESPONSABILIDADES

Jefe de Servicio es responsable de:

 Velar por el cumplimiento de este manual
 Revisar las evaluaciones del Colegio Americano de Patólogos???? Es un centro evaluador
externo,(CAP)

Tecnólogos Médicos de Banco de Sangre de son responsables de:

 Conocer y ejecutar las técnicas de Biología Molecular.
 Interpretar y validar resultados.

Técnico en Laboratorio Clínico de la sección de donantes Banco de sangre es responsable

de:
 Obtener de la muestra de donantes de sangre.

Enfermera del servicio clínico, es responsable de:

 Obtener la muestra del paciente hospitalizado.

Técnico en Laboratorio Clínico de la Sección de receptores, es responsable de:

 Obtener la muestra del paciente hospitalizado en ausencia de la enfermera
 Recepcionar las muestras desde otros centros.

TENS de Unidad de toma de muestra, son responsables de:

 Obtener la muestra de pacientes ambulatorios.

IV. REFERENCIAS
 Pipeteador Hamilton MICROLAB STAR IVD/STARlet IVD, Manual del equipo Versión 3.0
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Para uso con el sistema cobas s 201.

 COBAS® AmpliPrep Instrument Manual del equipo Versión 3.0 Para uso con el
AMPLILINK Software, versión Series 3.4
 COBAS® TaqMan® Analyzer Manual del equipo Versión 3.0 Para uso con el AMPLILINK
Software, versión Series 3.4

V. DEFINICIONES / ABREVIATURAS
 CPU: Unidad de Procesamiento Central.
 LIS: Sistema de información para laboratorios.
 SIBS: Sistema Informático Banco de Sangre.
 NAT: Nucleic Acid Testing, técnica de Biología Molecular para determinar ácidos
nucleicos.
 PDM: El programa Pooling and Data Management integra la información obtenida durante
el pooling, la preparación de las muestras, la amplificación y detección y la revisión de los
resultados.
 Sistema cobas s 201 Se utiliza para el screening de pools de plasma humano o
donaciones individuales de plasma humano en busca de agentes infecciosos mediante la
tecnología de amplificación de PCR y la tecnología de detección en tiempo real de la 5'
nucleasa.
 Test cobas® TaqScreen MPX V2.0 corresponde a una prueba automatizada y cualitativa
basada en la detección de ácidos nucleicos para el virus de inmunodeficiencia humano del
tipo 1 (HIV-1, genotipo M y O) y del tipo 2 (HIV-2), virus de la hepatitis B (HBV) y virus de
la hepatitis C (HCV) en plasma humano.

VI. DESARROLLO
El test cobas® TaqScreen MPX V2.0 para uso en la plataforma cobas® S201 corresponde a una
prueba automatizada y cualitativa basada en la detección de ácidos nucleicos para el virus de
inmunodeficiencia humano del tipo 1 (HIV-1, genotipo M y O) y del tipo 2 (HIV-2), virus de la
hepatitis B (HBV) y virus de la hepatitis C (HCV) en plasma humano.
Esta prueba se ha diseñado para uso en el tamizaje de muestras de plasma de donantes de
sangre individuales en pooles, incluyendo donantes de sangre total, componentes sanguíneos
(glóbulos rojos, plaquetas y plasma) y otros donantes vivos. Esta prueba también se ha concebido
para el tamizaje de donantes de órganos y tejidos cuando las muestras se obtienen a corazón
latiente del donante y en muestras de sangre procedentes de donantes cadavéricos (a corazón
parado). Las muestras de plasma pueden ser analizadas de forma individual o en pooles de 6
compuestos por alícuotas de 167ul de las muestras individuales y la interpretación final de
resultados debe ser siempre de forma complementaria con los datos obtenidos por serología para
HIV, HBV y HCV.

El sistema de tamizaje mediante el TaqScreen MPX V2.0 test se basa en la tecnología de

reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y es un diseño de PCR multiplex (MPX), lo cual
permite el tamizaje y detección simultánea de HIV-1, HIV-2, HBV, HCV y del control interno (IC) en
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una sola prueba de pool o muestra individual. La prueba no diferencia entre el grupo M del HIV-1,
el grupo O del HIV-1 y el HIV-2. Para supervisar el proceso de extracción y amplificación se
incorpora en cada muestra un IC, el cual siempre debe amplificar y además se utiliza la enzima
AmpErase para reducir la posible contaminación a causa de material anteriormente amplificado
(amplicón).

Adicional al IC que se incorpora en cada pool o análisis individual, el kit proporciona 4 controles
externos de corrida que monitorean la calidad de la amplificación: (1) HIV-1 grupo M, HCV y HBV,
(2) HIV-1 grupo O, (3) HIV-2 y (4) Control negativo (NC). Por cada 20 pools o análisis de muestras
individuales el sistema pedirá un nuevo set de controles. Al final del proceso el sistema cuenta con
un algoritmo que realiza el análisis automatizado de los resultados tomando en consideración los
resultados de amplificación de todos los controles. Si algún resultado de los controles interno o
externo de PCR no cumple con los requisitos del algoritmo, el sistema invalida el resultado y
genera una orden de repetición.

El flujo de trabajo para el uso del TaqScreen MPX V2.0

Consta de 4 procesos principales:

 Pooling/Pipeteo automatizado de muestras y pipeteo de controles con el Hamilton
MICROLAB® STAR/STARlet IVD.
 Preparación automática de las muestras con el equipo COBAS® AmpliPrep,
 Amplificación automatizada de ácidos nucleicos y detección automatizada en tiempo real y
discriminación de productos de PCR mediante el analizador COBAS® TaqMan® .
 Gestión automática de los datos con el programa Pooling and Data Management (PDM).
El pipeteador Hamilton MICROLAB STAR IVD/STARlet IVD está programado para pipetear los
tipos siguientes de pools para el sistema cobas s 201.
 Primario Pool de muestras creado para analizar por primera vez las muestras mediante
una sola técnica.
 Secundario Pool de muestras creado para repetir o resolver resultados de pruebas
reactivas o inválidas

Recomendaciones generales
● Evitar contacto directo con la muestra y la formación de aerosoles utilizar EPP: pechera
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protector facial y guantes.

● Realizar siempre limpieza diaria y semanal de los equipos y desinfección con etanol 70%
según corresponda.
● Mantener la limpieza del área de trabajo y correcto manejo de desechos.

COBAS S201

1. Obtención de la muestra:
 No requiere preparación previa del donante .
 El anticoagulante de uso preferente es EDTA pero se puede utilizar tubos con CPD,CP2D
y CPDA, depositar aproximadamente 6 ml de sangre total en el tubo.

2. Rotulación de las muestras:

 Muestra de donantes (Sangre, Plaquetas, Plasma): una vez ingresado el donante al
sistema informático de Banco de Sangre (SIBS) ,se asigna un número único de donación
con código de barra, para cada donante que incluye el nombre completo con el cual será
identificadas y analizadas la muestra .Esta muestra debe ser rotulada en forma vertical con
su respectiva etiqueta NAT.
 Muestras pacientes ambulatorios y hospitalizados: ingresar el sistema computacional,
según el o los exámenes solicitados por el médico, posteriormente el SIBS emitirá una
etiqueta con código de barra que incluye el nombre, el RUT y Nª de muestra del paciente,
con el cual se identificará y analizarán las muestras en el equipo Esta muestra debe ser
rotulada en forma vertical con su respectiva etiqueta NAT.
 Todas las muestras de Biología Molecular, se procesan en su tubo original.
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3. Preparación de muestras y controles

 Obtenida la muestra, centrifugar por 8 minutos a 3500 rpm. En caso de que alguna
muestra no quedara bien centrifugada (ejemplo, con restos de fibrina), repetir la
centrifugación.
 Dejar las muestras refrigeradas a temperatura ambiente 30 min antes de ser cargadas en
el Hamilton.

Refrigeración de muestras y control

 Sangre total : 48 hrs a temperatura ambiente o 72 hrs de 2 a 8°C, no congelar .
 Plasma: 7 días de 2 a 8°C o 30 días a -18°C con 3 ciclos de descongelación.
 Dejar los 4 controles externos fabricados por Roche a temperatura ambiente durante 30
min, mantenerlos de forma vertical sobre la gradilla.

4. Inicialización del sistema.

 Existe un Monitor conectado a dos CPU (ampilink y PDN) ,las. CPU que se van
cambiando con un botón que existe en el lado izquierdo de la mesa del computador.
 Reiniciar el sistema obligatoriamente al inicio o al final de la jornada para asegurar el
funcionamiento óptimo del sistema.

o Encendido computadora Amplilink.

Acceder a Windows XP con: Usuario : aluser
Password: Dipreca 2019

Posteriormente, hacer click sobre el software amplilink 3.4 y acceder con:

User ID: DIPRECA1

Password: Dipreca2019

o Encendido computadora PDM.

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Se desplegará automáticamente el acceso al Software Cobas s201 y se debe acceder con:

Login ID: DIPRECA1

Password: 12345678

 Encender los equipos:

o Hamilton El interruptor se halla en la zona frontal inferior izquierda del pipeteador.
o Ampliprep El interruptor se halla la parte frontal derecha del equipo.
o TaqMan El interruptor se halla la parte frontal derecha del equipo.

 Comprobar en el PDM la conexión al servidor (presione la tecla Windows y se desplegara

la barra inferior del sistema. Si no está disponible reiniciar PC.

5. Mantención del equipo

 Realizar la mantención diaria y semanal según corresponda a cada equipo: Hamilton,
Ampliprep y TaqMan. Ver anexos N°1,2 y 3.

6. Preparación de los reactivos

 Sacar los cassettes de reactivos (CS1, CS2, CS3 y CS4) del refrigerador y cárguelos en
el Ampliprep para que estén a temperatura ambiente al menos 30 minutos antes de su
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uso. Si la luz UV aún está encendida, dejarlos en sus racks respectivos sobre el mesón.

7. Programación del equipo Hamilton e ingreso de la muestra en el equipo Hamilton

 En la pantalla de ir inicio del PDM presionar el botón wizard

 Seleccione Assay/Start y escoger el tipo de pool que se va a realizar (PP6 o Load
Secondary) y automáticamente se definirá el ensayo MPX V2.0.
 Seleccionar el tipo de rack que se cargará (24 o 32).

 Coloque los racks con muestras en cada una de las filas indicadas en el equipo,
cuidando que los códigos de barra estén bien orientados. Una vez finalice la
carga presione Done.

 Cargue los racks con S-tubes con sus respectivos clips en las posiciones indicadas
dentro del instrumento y la cantidad necesaria de acuerdo al número de pooles que se
hayan programado. Los s- tubes deben ir destapados, tener precaución con las tapas
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para evitar contaminación.

 Cargue el rack con controles negativos y positivos en las posiciones indicadas por el
instrumento. Cargue los controles necesarios en los racks de 24 de acuerdo a la
cantidad de muestras programadas. Invierta los controles un mínimo de 3
veces.PRIMERO EL CONTROL (-) Y después 3 controles +
La foto de la derecha no corresponde.
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 Cargue el rack de puntas en la posición indicada por Hamilton. Cargue la cantidad de

puntas necesarias de acuerdo a la cantidad de muestras programadas.

 Cuando Hamilton cuenta todos los racks con muestras y consumibles necesarios
para realizar la corrida, el software Pooling Wizard comenzara automáticamente.

 La pestaña AmpliLink Status enumera las unidades de control del Programa AMPLILINK
configuradas en la red de PDM y cualquier petición de prueba pendiente en esas
unidades de control. Las peticiones de pruebas se pueden eliminar o retransmitir desde
la pestaña AmpliLink Status.
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 La orden de trabajo se enviará automáticamente al ordenador que maneja los

instrumentos Cobas Ampliprep y Cobas Taqman.
 Verifique que la orden se encuentra en el Software Amplilink.
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● Retirar los S-tubes y colocar las tapas cuidadosamente sin dejarlas excesivamente
apretadas. Descargar la plataforma de trabajo del Hamilton, desechar los tubos de
controles de acuerdo a las regulaciones locales.

8. Estados LED de los equipos Ampliprep y TaqMan

Ampliprep:
Los LED se iluminan de diferentes colores para proporcionar información visual sobre el sistema.
La barra de indicadores contiene un LED de estado y varios LED para las bandejas.
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Bandejas Ampliprep

El color de cada uno de los LED para bandejas indica su estado.

TaqMan:
La barra de indicadores contiene un LED de estado y varios LED para las bandejas. Los LED se
iluminan de diferentes colores para proporcionar información visual sobre el sistema.
Estado TaqMan

Bandejas de TaqMan
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9. Ingreso de las muestras en el equipo Ampliprep

 Ingrese al sistema Cobas Ampliprep con su número de usuario-clave y verifique el volumen
de Buffer de lavado y el de los desechos. Si es necesario remplace los recipientes de
Buffer de lavado y descarte de manera adecuada los desechos.

 En la posición A (agitación), ingrese la gradilla de reactivos con el Cassette 1 CS1 (beads).

En otra gradilla de reactivos coloque los Cassettes CS2-4 e ingréselos en el equipo en
cualquiera de las posiciones de reactivos sin agitación (B-E).
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● En las posiciones F-H introduzca los racks de las muestras ya preparadas.

● En las posiciones J-L, introduzca las SPU. Coloque la cantidad necesaria para cada
montaje. Cada SPU es usada para el procesamiento de una muestra o control. Las
SPUs deben ser colocadas en los racks correspondientes.

● En las posiciones M, N, O y P coloque racks de K-tips y K-tubes de acuerdo al número

de muestras que se vayan a procesar. Es necesaria 1 K-tip y 1 K-tube por cada muestra
o control a procesar.
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● Las muestras preparadas pasarán de manera automática a través de la Docking station

al Cobas TaqMan.
● Una vez terminado el proceso de preparación de las muestras, retire del equipo Cobas
Ampliprep los reactivos y guárdelos nuevamente en su caja de 2-8°C. Retire la bandeja
de SPUs y descarte adecuadamente las ya usadas en conjunto con los s-tubes
utilizados con precaución.El rack con las banderillas debe reservarse hasta obtener un
resultado.
● No es necesario descargar los K-tips ni los K-tubes.

10. Resultados y envío al SIBS

 Una vez termine la corrida completa en el Taqman, cambie de pantalla al PDM,

seleccione el Data Manager Software haciendo click en el ícono superior derecho que
dice DMS.
 Seleccionar Query, luego hacer click en Today y posteriormente seleccionar Search.
 Se desplegarán los resultados, realizar click sobre la corrida de interés y podrá
visualizar todos los datos del pool realizado.
 Seleccionar Control Review y verificar que los controles estén en estado valido:
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● Seleccionar la pestaña de Donor Review

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● Se desplegarán los resultados de los pools y la información de los donantes que los
componen. En el caso que un pool tenga como resultado Completed N.R (Completo No
Reactivo), podrá seleccionar dando click sobre el pool o sobre cada donante, luego
seleccionar Accept y confirmar ok.

● Posterior a que los resultados fueron aceptados, podrá seleccionar nuevamente el pool y
estará habilitado el botón de Send to LIS (Enviar al LIS). Presionar botón Send to LIS y
confirmar con ok.
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● En caso de necesitar resoluciones, es necesario realizar todo el montaje desde el

principio. El software tendrá pendiente esas peticiones y la petición será entonces
“load secondary”.

11. Apagado del sistema.

Una vez haya finalizado toda la selección de muestras en estudio y haya enviado
resultados al LIS realizar apagado:
● Apagar Instrumentos: Hamilton, Ampliprep y TaqMan.
● En cada Software realizar shutdown (apagado) de la aplicación
● Computaodor PDM se apagará de inmediato realizando: Logoff, luego presionar
ctrl+alt+sup y en vez de colocar las claves seleccionar Shtudown.
● Computador Amplilink, en la esquina superior izquierda hacer click en File, luego
seleccionar Shutdown y confirmar con ok.

● En el computador del Amplilink una vez se cierra el software realizar

shutdown(apagado) del sistema, como si fuera cualquier computador: botón de la
esquina inferior izquierda y seleccionar shutdown.

Mantener siempre el Ampliprep ligado al SW Amplilink (sistema está programado para

realizar purgado diario), no mantener el equipo sin inicializar más de 7 días. Nunca realizar
shutdown en el Amplilink mientras Ampliprep o TaqMan estén funcionando.
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12. Interpretación de los resultados

● PDM genera los resultados finales basándose en la información recibida del

Amplilink y los criterios de validación del propio PDM.
● PDM evalúa: Ct values (target/IC), IC valid o invalid, target result (Reactivo/No Recativo).
● Se tendrá acceso a visualizar los resultados bajo diferentes pestañas: Controls Review,
Pools Review, and Donor Review (Query para filtrar fechas o datos específicos).
● Los resultados de los 4 controles de corrida (RMEC) se reportan como válido o
invalido para cada uno. Si uno o más de ellos es inválido toda la corrida se
invalida.
● Los resultados reactivos no pueden rechazarse y se reportarán siempre que no
haya invalidaciones y estén dentro del tiempo de viabilidad.

13.-
Validación de Resultados.

 Ir al SIBS Ingresar con usuario y contraseña.

 En el menú principal seleccionar / LABORATORIO
 Se desplegará la información / RESULTADOS POR DONACION
 Seccion : serología
 DONACION / MUESTRA N°. pistolear código número del donante

 Una vez verificada la información presionar VALIDACIÓN.

.
13. Almacenamiento y caducidad de insumos

Cassettes
● Almacenar de 2 a 8°C en refrigerador y temperar dentro del equipo por al menos 30 min.
antes de su uso.
● Vida útil del cassette está determinada :
o Por la fecha de caducidad de empaque.
o Después de 20 días desde el primer uso.
o Después 24 horas continuas en equipo o por 40 hrs de uso acumulado.
o Después 5 usos totales en el sistema.
Importante: No mezclar lotes de cassette, todas las muestras y controles de un mismo
grupo deben procesarse con el mismo lote de cassette.
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Wash Buffer
● Almacenar de 15 a 30°C .
● Usarlo hasta fecha de caducidad o hasta 30 días desde que se abrió.

VII. REGISTROS
● SIBS
● PDM de COBAS S201

VIII. ANEXOS
Anexo N°1: Mantenimiento Hamilton

Mantención diaria

 Seleccionar Wizard
 Seleccione la pestaña Maintenance
 Hacer Click en Daily Maintenance y presionar Start.

 El asistente de usuario le irá indicando las acciones a realizar.

 Abra la puerta y observe la superficie, si se encuentra con suciedad limpie la superficie con
papel humedecido con agua destilada desde adentro hacia afuera en único sentido, repetir
este procedimiento con etanol 70%. En caso de sospechar de derrame, luego de limpiar
con agua utilizar una solución de hipoclorito de sodio al 0,5% seguido de etanol 70%.
 Cierra la cubierta
 Realizar Click en Ok
 Aparecerá otro mensaje: Abra la cubierta y observe si es que hay suficiente espacio en la
bolsa de pipetas, si es necesario cámbiela.
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 Cierre la cubierta
 Presione ok

 El equipo realizará un proceso automático de verificación de pipetas y movimientos, al

finalizar saldrá un mensaje de que el mantenimiento fue concluido con éxito, seleccionar
ok. Observación: para finalizar se debe confirmar a dos mensajes, en caso de que no se
exhiba en la pantalla buscarlo en una pestaña adicional presionando la tecla Windows.

Mantención semanal

 Seleccionar Wizard
 Seleccione la pestaña Maintenance
 Hacer Click en Weekly Maintenance y presionar Start.

 El asistente de usuario le irá indicando las acciones a realizar.

 Abra la puerta y realice la limpieza de ésta (interna y externamente) con un papel
humedecido con agua destilada en único sentido desde adentro hacia afuera.
 Limpie la superficie del Hamilton con papel humedecido con agua destilada desde
adentro hacia afuera en único sentido, repetir este procedimiento con etanol 70%. En
caso de sospechar de derrame, luego de limpiar con agua utilizar una solución de
hipoclorito de sodio al 0,5% seguido de etanol 70%.
 Realizar Click en Ok
 Aparecerá otro mensaje indicándonos que debemos:
 Abrir la cubierta y sacar la bolsa con puntas y reemplazar por una nueva.
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 El equipo realizará un proceso automático de verificación de pipetas y movimientos, al

finalizar saldrá un mensaje de que el mantenimiento fue concluido con éxito, seleccionar
ok. Observación: para finalizar se debe confirmar a dos mensajes, en caso de que no se
exhiba en la pantalla buscarlo en una pestaña adicional presionando la tecla Windows.
 En caso de realizar el mantenimiento semanal, las acciones reemplazan el mantenimiento
diario.
 Presionar Ok

Anexo N°2: Mantenimiento del Cobas Ampliprep.

Mantención diaria

Insumos:
 Etanol 70%
 Agua desionizada
 Solución descontaminante: Cloro diluido al 0,5% en agua desionizada (preparación diaria)
 Papel que no bote mucha pelusa
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Procedimiento en SW Amplilink:
 Realizar click en overview y seleccionar la pestaña system. Seleccionar el Ampliprep.

 Seleccionar la pestaña Service Due y se desplegará el listado de mantenimientos

pendientes. Seleccionar Daily Maintenance y realizar click en perform.

Mantenimientos
pendientes
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 Se desplegará el asistente de usuario, confirmar que la cubierta superior se encuentre

cerrada y seleccionar Next. Esperar a que los brazos de transferencia se trasladen a
posición de Standbye y realizar click nuevamente en Next.

 Se desplegará asistente con mensaje describiendo las acciones a realizar

5 a 11

10

 Limpiar la parte interna de la cubierta con un paño humedecido sólo con agua destilada.
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Importante: En cada paso utilizar papel con agua destilada y luego repetir el mismo
proceso con papel con etanol 70%

 Extraiga todas bandejas de material fungible de la plataforma de salida.

 La zona se debe limpiar separando las áeras en 3 áreas en forma unidireccional desde
adentro hacia afuera. Utilizar un paño diferente en cada área.
 Al realizar la división en 3 zonas y pasar un paño por cada lugar de la superficie estará
limpiando: los postes de inicialización (Fig 1, Posición 1), la parte plástica posterior del
equipo o área en torno a los postes de inicialización (Fig 1, Posición 2), la superficie
(superior e inferior) de la plataforma para los racks de reactivos (Fig 1, Líneas B, C, D, E
de la posición 3a), el área de carga de muestras (Fig 1, Posición 3b, Lineas F, G y H), el
área de carga de las SPUs (Fig 1, Posición 4, Líneas J, K y L), el área de carga de los K-
tips y los K-tubes (Fig 1, Posición 5, Líneas M, N, O y P) y las estaciones de separación
(Fig 1, Posición 5).

Figura 1. Vista general de la plataforma de trabajo Cobas Ampliprep

 Una vez finalice cerrar la cubierta principal.

 Presionar Next
 Esperar a que los brazos de transferencia se posicionen en el centro y dar click en Next.
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11

12 a 15

15

 Abrir la cubierta y limpiar las estaciones de lavado (Fig 1, posición 6) con agua destilada
seguido con etanol al 70%.
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 Limpiar desde arriba hacia abajo las agujas de reactivos (movimiento único) con agua
destilada para remover los restos de partículas adheridas.
 Las otras acciones indicadas serán realizadas durante el mantenimiento semanal.
 Cerrar la cubierta y presionar Next.
 Presionar Finish
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 Abrir la puerta de servicio y verificar que no existan cristalizaciones en las jeringas de

reactivo y tubería.
 En la pestaña de Service All seleccionar UV Light Decontamination y hacer click en
perform. Durante 30 min el equipo estará expuesto a luz UV. No mire directamente a la
luz.

 Limpieza de los contenedores de desechos líquidos (bidones amarillos): Retirar

cuidadosamente el soporte con el sensor de llenado y traspasarlo al bidón de reserva
vacío. Descartar el contenido del bidón lleno, enjuagar con agua y luego con etanol al
70%. Secar la boquilla con papel absorbente. Importante: nunca mezclar el contenido con
hipoclorito de sodio.

Mantención semanal

Insumos:
 Etanol 70%
 Agua desionizada
 Solución descontaminante: Cloro diluido al 0,5% en agua desionizada (preparación
diaria)
 Papel que no bote mucha pelusa
 Hisopos o cotonitos

Limpieza de los racks SK24, racks de reactivos y rack SPU:

 Limpiar con agua corriente para
 Limpiar con agua desionizada
 Limpiar con etanol al 70% y dejar secar.
 Dejar los racks guardados en una zona limpia
Siempre utilizando trozos de papel humedecidos con las soluciones indicadas de forma
diaria. Esta acción se puede realizar al inicio o finalización de la jornada.

Procedimiento en software Amplilink:

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● Realizar click en overview y sel Seleccionar la pestaña Service Due y se desplegará el

listado de mantenimientos pendientes. Seleccionar Daily Maintenance y realizar click en
perform.

 Seleccionar la pestaña system. Seleccionar el Ampliprep.

Mantenimientos
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● Se desplegará el asistente de usuario, confirmar que la cubierta superior se encuentre

cerrada y seleccionar Next. Esperar a que los brazos de transferencia se trasladen a
posición de Standbye y realizar click nuevamente en Next.
● Limpiar la parte interna de la cubierta principal con un papel humedecido con agua
destilada desde adentro hacia afuera en un único sentido.

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● Se desplegará una ventana con mensajes describiendo las acciones a realizar.

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En cada paso utilizar papel con agua destilada y luego repetir el mismo proceso con papel
con etanol 70%.

 Extraiga todas bandejas de material fungible de la plataforma, para el mantenimiento la

superficie del ampliprep debe estar vacía.

Figura 1. Vista general de la plataforma de trabajo Ampliprep.

La zona se debe limpiar separando las áeras en 3 áreas en forma unidireccional desde adentro
hacia afuera. Al realizar la división en 3 zonas y pasar un paño por cada lugar de la superficie
estará limpiando: los postes de inicialización (Fig 1, Posición 1), la parte plástica posterior del
equipo o área en torno a los postes de inicialización (Fig 1, Posición 2), la superficie (superior e
inferior) de la plataforma para los racks de reactivos (Fig 1, Líneas B, C, D, E de la posición 3a),
el área de carga de muestras (Fig 1, Posición 3b, Lineas F, G y H), el área de carga de las SPUs
(Fig 1, Posición 4, Líneas J, K y L), el área de carga de los K-tips y los K-tubes (Fig 1, Posición
5, Líneas M, N, O y P) y las estaciones de separación (Fig 1, Posición 5).
 Cerrar la cubierta principal.
 Presionar Next.
 Esperar a que los brazos de transferencia se posicionen en el centro y dar click en Next.
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11 a 17
  Abrir la cubierta y limpiar las estaciones de lavado (Fig 1, posición 6) con agua destilada
seguido con etanol al 70%

Figura 2. Vista general de la plataforma de trabajo Ampliprep mostrando las estaciones de

lavado.

 Limpiar las posiciones de los K-Carriers (Fig 1, Posición 7).

Descontaminación de los K-Carriers:

 Sumergir los K-Carriers en una solución con hipoclorito de sodio al 0,5% por 5 min (no
exceder el tiempo).
 Enjuagar con agua corriente, posteriormente agua destilada y luego etanol al 70%
 Dejar secar a temperatura ambiente.
 Almacenar nuevamente.
 Limpiar desde arriba hacia abajo las agujas de reactivos (movimiento único) con agua
destilada para remover los restos de partículas adheridas.
 Limpiar la parte frontal del Tube Handler (abertura y transporte de tubos) utilizando un paño
humedecido con agua destilada (Fig 2).

Fig 2. Tube Handler

 Realizar la limpieza del Gripper utilizando un hisopo o cotonito humedecido con agua
destilada, presionar el pistón lateral para abrir los extremos. Realizar apenas un movimiento
de entrada y salida, prestar atención a que no se suelte el O-ring. Asegurese que no queden
restos del hisopo.
 Fig 3: Gripper

 Con un papel seco limpiar los sensores y la caja de luz.

 Cerrar la cubierta y presionar Finish.

 Abrir la puerta de servicio y verificar que no existan cristalizaciones en las jeringas de

reactivo y tuberías.
 Chequear en la pestaña de Service log que el procedimiento de mantenimiento fue
chequeado como passed, en caso de no encontrarse realizar proceso de nuevo y dejar
una nota.

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Limpieza de los contenedores de desechos líquidos (bidones amarillos):
 Retirar cuidadosamente el soporte con el sensor de llenado y traspasarlo al bidón de
reserva vacío. Descartar el contenido del bidón lleno, enjuagar con agua y luego con
etanol al 70%. Secar la boquilla con papel absorbente. Importante: nunca mezclar el
contenido con hipoclorito de sodio.

 En la pestaña de Service All seleccionar UV Light Decontamination y hacer click en

perform. Durante 30 min el equipo estará expuesto a luz UV. No mire directamente a la
luz.

 Limpiar con un paño humedecido con agua la parte externa del instrumento para evitar
que no se acumule polvo. Incluir limpieza de las manillas de la puerta de carga de
reactivos y cubierta principal.

Anexo N°3: Mantenimiento cobas TaqMan.

Mantención semanal

 Realizar semanalmente, en caso de aumentar flujo de muestras de manera considerable

cambiar la frecuencia a día por medio o de forma diaria (consultarlo con el especialista de
Roche).
Insumos:
 Etanol 70%.
 Agua des.ionizada.
 Solución descontaminante: Cloro diluido al 0,5% en agua des ionizada. (preparación diaria).
 Papel que no bote mucha pelusa.
 Hisopos o cotonitos.

Procedimiento en software Amplilink:

 Realizar click en overview y seleccionar la pestaña system. Seleccionar el TaqMan.
  Seleccionar la pestaña Service Due y se desplegará el listado de mantenimientos pendientes.

Mantenimientos pendientes

 Realizar Click Periodic Maintenance, en caso de que no esté disponible la acción en

Service Due ir a Service All y seleccionarla desde allí. Seleccionar Perform/Next.
 Limpiar la parte interna de la cubierta con un papel humedecido con agua destilada en
un único sentido desde atrás hacia adelante.

Importante: En cada paso utilizar papel con agua destilada y luego repetir el mismo proceso
con papel con etanol 70%.

 Limpiar el área de transferencia de los K-carriers y de descarte (Fig 4, área 1). No limpiar
dentro del área de descarte.
 Limpiar el área de los termocicladores y poste de inicialización (Fig 4, área 2).
 Limpiar el área de carga de muestras (no se utiliza en esta plataforma) y de
posicionamiento de los K-Carriers (Fig 4, área 3)
 Realice Descontaminación de los K-Carriers:
 Sumergir los K-Carriers en una solución con hipoclorito de sodio al 0,5% por 5 min (no
exceder el tiempo).
  Enjuagar con agua corriente, posteriormente agua destilada y luego etanol al 70%
 Dejar secar a temperatura ambiente y posteriormente dejarlos en su posición inicial.

 Cerrar la cubierta.
 Abrir la puerta de servicio y descartar los K-tube usados.
 Limpiar el contenedor con Hipoclorito de sodio al 0,5% seguido de agua destilada y etanol
al 70%.
 Presionar Finish.

IX. MODIFICACIONES EN EL DOCUMENTO

SÍNTESIS DE MODIFICACIONES

VERSIÓN FECHA CAUSA DE MODIFICACIÓN

01 01/06/2020 Creación