Manual Control Calidad Interno Microbiologia V4

MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD
INTERNO
Hospital del Salvador
Subdirección de Apoyo Diagnóstico y Terapéutico
SECCIÓN MICROBIOLOGÍA
Laboratorio Clínico
Indice
1. Introducción
2. Objetivo
3. Alcance
4. Definiciones
5. Responsables
6. Descripción de actividades
7. Control de Calidad
7.1. Control de medios de cultivo
7.2. Control susceptibilidad antimicrobiana
7.2.1. Control método Kirby Bauer
7.2.2. Control antibiograma por Etest
7.2.3. Control test fenotípico confirmatorio BLEE
7.3. Mantención del cepario
7.4. Control tinciones
7.4.1. Tinción Gram
7.4.2. Tinta China
7.5. Control VDRL
7.5.1. Criterios de aceptabilidad
7.5.2. Criterios de rechazo
7.6. Control Documental
7.7. Anexos
Distribuido a: Áreas Técnicas de Laboratorio Clínico de Página 2 de 18

Microbiología
INTERNO
1- Introducción
El control de calidad interno permite evaluar el correcto aislamiento, identificación y

determinación de sensibilidad a los antimicrobianos de los microorganismos de muestras
clínicas, asegurando la calidad de la información proporcionada al clínico, mediante técnicas
estandarizadas según normas internacionales (CLSI).
2- Objetivo
Describir las actividades que permiten asegurar que los resultados generados por el Área
Técnica de Microbiología (ATM) sean precisos, reproducibles y confiables, aplicando una
metódica de trabajo enfocada a la mejoría continua de la calidad en la etapa analítica de la
muestra.
3- Alcance
Se aplica a medios de cultivos, equipos, pruebas y técnicas de sensibilidad en difusión y

dilución realizadas por el ATM.
4- Definiciones
ATM: Área Técnica de Microbiología.

Cepa: Cultivo puro obtenido a partir de una colonia.
Cepa ATCC: Conjunto de cepas de la American Type Culture Collection que se utilizan
internacionalmente en el control de pruebas de identificación, calidad de los medios de
cultivo, reactivos, tinciones y pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos.
CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute.
Medios de cultivo: son preparados líquidos y sólidos que contienen los nutrientes necesarios
para el desarrollo de los microorganismos in vitro y también permiten aislarlos, determinar
características fisiológicas y diferencias entre los géneros y especies.

Microbiología
INTERNO
Antibiograma: estudio de susceptibilidad in vitro a los antimicrobianos, el cual se puede

ejecutar mediante las técnicas de difusión utilizando sensidiscos, epsilometría (tiras
epsilométricas) o microdilución (manual o en sistema automatizado).
Método Kirby- Bauer: método para la ejecución de antibiogramas mediante la técnica de

difusión en agar utilizando sensidiscos impregnados con antibióticos.
CIM: concentración mínima de antimicrobiano capaz de inhibir el crecimiento visible de un
microorganismo medida en ug/ml.
Halo: zona de inhibición de desarrollo bacteriano visible a ojo desnudo.
Tiras epsilométricas: Cintas de material inerte con gradiente de concentración exponencial
0contínua de antimicrobiano.
B
LEE: Betalactamasa de espectro extendido, enzima que hidroliza las cefalosporinas de 3ª y
4ª generación.
5- Responsables
● El profesional Tecnólogo Médico (TM) es el responsable de ejecutar y de llevar

registro de los procesos relacionados al control de calidad interno.
● El personal técnico del laboratorio (TP) cumplirá funciones de apoyo en los procesos
pre-analíticos, analíticos y post-analíticos según las indicaciones del TM.
● El profesional Tecnólogo Médico coordinador será responsable de revisar el lote,

fecha de caducidad y las condiciones físicas de todos los insumos y reactivos
recibidos en el laboratorio. En caso que alguna de estas condiciones no cumplan con
lo requerido, deberá hacer su respectiva notificación y devolución a la unidad de
logística del hospital.
● El profesional designado como Encargado de Calidad del Área Técnica de

Microbiología (ATM) es el responsable de supervisar la correcta ejecución, análisis
y registro de los resultados de control de calidad.

Microbiología
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● El Encargo de Calidad, en conjunto con el profesional Microbiólogo serán los

responsables de revisar los registros y aplicar las acciones correctivas para garantizar
que los procedimientos microbiológicos cumplen con los requisitos de calidad
definidos por el ATM; adicionalmente, es responsabilidad de ambos profesionales
aplicar las acciones correctivas y/o de mejoramiento cuando se generen
incumplimientos de dichos requisitos.
6- Descripción de actividades
El ATM cuenta con una amplia gama de medios de cultivo, tinciones, sensidiscos, tiras
epsilométricas, insumos, reactivos, kits, matrices y tarjetas de susceptibilidad, todos los
cuales son indispensables para los análisis microbiológicos. Para asegurar la adecuada
ejecución y registro del control de calidad de estos insumos y reactivos, el personal técnico
del laboratorio (TP) debe cumplir funciones de apoyo en los procesos pre-analíticos,
analíticos y post-analíticos. Dichos procesos son conducidos por el profesional TM del ATM,
quien es el responsable de ejecutar y llevar el registro del control de calidad. El análisis e
implementación de medidas correctivas en caso de incumplimiento de los requisitos
establecidos, serán llevados a cabo por el profesional Encargado de Calidad en conjunto con
el profesional Microbiólogo(a). El Tecnólogo Médico responsable del control Interno de
Calidad proporcionará las cepas ATCC y otras cepas de referencia necesarias a la sección de
acuerdo con los medios y reactivos que corresponde controlar.
El procedimiento, condiciones, frecuencia, registros y responsables de realizar el control

de calidad en el ATM se describe a continuación:
7- Control de calidad
7.1- Control de Medios de Cultivo.

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Todos los medios de cultivo utilizados en el ATM son medios comerciales, por lo que el
proveedor debe asegurar la adecuada composición, condiciones de funcionamiento y el
control de esterilidad para cada lote de medio. Será responsabilidad del profesional TM
coordinador asegurar los requisitos del lote, fecha de caducidad y las condiciones físicas de
todos los medios de cultivo recibidos en el laboratorio. Las TP al utilizar los medios de
cultivo verificarán que la fecha de vencimiento y condiciones físicas sean las adecuadas.
El Encargado de Calidad será responsable de archivar, en la carpeta de “Certificados de
calidad de medios de cultivos comerciales” del ATM, los certificados de conformidad de
todos los lotes de los medios de cultivo recibidos en el laboratorio.
7.2- Control de susceptibilidad antimicrobiana
7.2.1- Control de método Kirby- Bauer
El objetivo del control de calidad de antibiogramas es: monitorizar precisión y exactitud,

calidad de los reactivos utilizados en el antibiograma y desempeño del operador.
Este procedimiento se realizará cada 15 días, incorporándose a la rutina del TP que
realice los antibiogramas en difusión. Se colocarán los sensidiscos correspondientes a cada
cepa de referencia de acuerdo con las hojas de registro de halos ubicada en el Libro de registro
de Control de Calidad Interno y al Manual de Antibiograma.
El TM medirá los diámetros de inhibición con un pie de metro y anotará los resultados
en los registros creados para ello.
El Encargado de Calidad analizará los resultados y junto al médico Microbiólogo tomará
las medidas necesarias para mejorar los resultados en caso que éstos no se encuentren dentro
de los rangos establecidos.
Las cepas de referencia a utilizar, los antibióticos a probar y los halos de inhibición
esperados serán los establecidos por la guía CLSI vigente.
Los halos de inhibición se registrarán en hoja de registro de halos antibiograma manual
(Anexo N°1)
Cepa E. coli ATCC 35218

Medio de cultivo: Agar Mueller Hinton (MH)

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Incubación 35°C aerobiosis
Antimicrobiano Sigla Límite inferior Límite superior

(mm) (mm)
Ampicilina/sulbactam 10/10 ug SAM 13 19
Amoxicilina/Ác. Clavulánico (20/10 ug) AMC 17 22
Ampicilina 10 ug AMP 6


(mm) (mm)
Ampicilina 10 ug AMP 15 22
Cefalotina 30 ug KF 15 21
Cefuroxima 30 ug CXM 20 26
Ceftriaxona 30 ug CRO 29 35
Amikacina 30 ug AK 19 26
Ceftazidima 30 ug CAZ 25 32
Imipenem 10 ug IPM 26 32
Ertapenem 10 ug ETP 29 36
Gentamicina 10 ug CN 19 26
Nitrofurantoína 300 ug F 20 25
Ciprofloxacino 5 ug CIP 29 37
Cloranfenicol 30 ug C 21 27
Trimetropin/sulfametoxazol (1,2/23,7 ug) SXT 23 29
Tetraciclina 30 ug TE 18 25
Cepa P. aeruginosa ATCC 27853


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(mm) (mm)
Amikacina 30 ug AK 18 26
Gentamicina 10 ug CN 17 23
Ceftriaxona 30 ug CRO 17 23
Cefepime 30 ug FEP 25 31
Imipenem 10 ug IPM 20 28
Meropenem 10 ug MEM 27 33
Ciprofloxacino 5 ug CIP 25 33
Piperacilina/tazobactam 100/10 ug TZP 25 33
Aztreonam 30 ug AZT 23 29
Cepa S. aureus ATCC 25923


(mm) (mm)
Penicilina 10 ug P 26 37
Cefoxitina 30 ug FOX 23 29
Eritromicina 15 ug E 22 30
Clindamicina 2 ug DA 24 30
Tetraciclina 30 ug T 24 30
Rifampicina 5 ug RA 26 34
Trimetropin/sulfametoxazol 1,2/23,7 ug SXT 24 32
Vancomicina 30 ug VA 17 21
Teicoplanina 30 ug TEC 15 21
Linezolid 30 ug LNZ 25 32
Tigeciclina 15 ug TGC 20 25
Cepa E. faecalis ATCC 29212


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(mm) (mm)
Trimetropin/sulfametoxazol 1,2/23,7 ug SXT Un halo de inhibición ≥ 20
mm es satisfactorio
Un halo de inhibición < 20 mm es
insatisfactorio
Gentamicina 120 ug CN 120 4 16
7.2.2- Control antibiograma por Etest
Este procedimiento se realizará cada nuevo lote, incorporándose a la rutina del TP que
realice los antibiogramas en difusión. Se registrarán los valores en su respectiva hoja (Anexo
N°2).


(ug/ml) (ug/ml)
Cefotaxima Etest 0.03 0.12
Ertapenem Etest 0.004 0.016
Levofloxacino Etest 0.008 0.06
Ceftazidima Etest 0.06 0.5
Cepa E. faecalis ATCC 29212


(ug/ml) (ug/ml)

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Vancomicina Etest 1 4
Penicilina Etest 1 4
7.2.3- Control test fenotípico confirmatorio BLEE

Este procedimiento se realizará cada dos semanas incorporándose a la rutina del TP que
realice los antibiogramas en difusión. Se registrarán los valores en el Libro de registro de
Control de Calidad Interno.
Cepa K. pneumoniae ATCC 700603


(mm) (mm)
Ceftazidima/Ác. Clavulánico 30/10 ug CAL Un aumento ≥ 5 mm del
diámetro del antibiótico
en combinación en
relación al antibiótico
solo
Cefotaxima 30 ug CTX 17 25
Cefotaxima/Ác. Clavulánico 30/10 ug CTX/CLA Un aumento ≥ 5 mm del
diámetro del antibiótico
en combinación en
relación al antibiótico
solo
7.2.4- Acciones correctivas con error identificado

En caso de obtener valores fuera de los rangos establecidos, se deben considerar y
verificar como posibles causas::
✔ Cepa incorrecta
✔ Cepa no viable
✔ Cepa o placa contaminada

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✔ Variaciones propias de la cepa (pérdida de plasmidos o mutaciones)

✔ Mal almacenamiento o mal manejo de la cepa
✔ Medio de cultivo inadecuado
✔ Reactivos vencidos
✔ Reactivos mal almacenados
✔ Error en el inóculo
✔ Error en la temperatura o en la atmósfera de incubación
✔ Error en el tiempo de incubación
✔ Error en la lectura
✔ Error en la calibración del equipo para medir turbidez
● Acciones correctivas con error identificado

En caso de que uno o más sensidiscos testeados con una cepa tenga al menos un resultado
fuera de rango y la causa del error sea identificable, se repetirá el antibiograma con la cepa
el mismo día en que se detecte el error. Si el resultado siguiente está dentro de rango no se
requieren más acciones correctivas. Si el resultado persiste fuera de rango pase al siguiente
punto
● Acciones correctivas sin error identificado

En el caso de que una cepa de resultados no esperados y no hay un error identificado, o bien
si se repitió el control de calidad pero la cepa persiste fuera de rangos se debe:
✔ Cambiar la cepa (nuevo subcultivo) de trabajo
✔ Repetir el antibiograma para la cepa/antimicrobiano fuera de rango
✔ Realizar control diario por 5 días consecutivos
Si las 5 repeticiones se encuentran dentro de los rangos esperados no se requieren más
acciones correctivas. En caso de que una de las mediciones se encuentre fuera de los rangos
pase al punto siguiente.
● Acciones correctivas adicionales.

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Si una medición fuera de los rangos esperados no se corrige con lo mencionado en los puntos
anteriores quiere decir que no se debe a un error al azar sino a un error sistemático. En este
caso se debe:
✔ Conseguir nueva cepa desde un congelado nuevo
✔ Cambiar lote del sensidisco involucrado
✔ Verificar calibración del turbidímetro o conseguir uno nuevo
Si luego de esto el control se corrige en 5 días consecutivos luego de realizado los

cambios, se volverá al control semanal. En caso de que no se identifique la causa, pero el
control vuelve a los rangos mantenga el control de calidad de manera diaria por 30 días y
luego documentar que no hay más de 3 discordancias se volverá al control semanal.
En caso de que no se corrija el problema se mantendrán las verificaciones y se buscará
método alternativo.
Cada vez que haya una no conformidad en los controles de calidad el TMl a cargo
debe dejar registrado en el libro u hoja de registro, sección registro de acciones preventivas
y/o correctivas, su firma y fecha. Además en la misma hoja o libro se dejará registro de
situaciones o problemas asociados al control de calidad (ej: falta de stock del sensidisco a
controlar) y, en caso de situaciones que lo ameriten, si hubo suspensión de informe de
antibiótico asociado.
7.3- Mantención del cepario.
Las cepas bacterianas ATCC e ISP mencionadas previamente en este documento,

deben ser mantenidas y trabajadas de manera que conserven en el tiempo sus características
bioquímicas y de susceptibilidad antibiótica. Para esto se debe considerar lo siguiente:
Las cepas de referencia deben permanecer congeladas a -20°C o menos, en tubos
estériles con un estabilizante adecuado como caldo soya tripticasa con glicerol al 15-20% o
bien leche descremada al 20%.
Desde esta copia congelada, mensualmente se debe realizar un subcultivo primario
en el medio apropiado (Agar Sangre u otro medio sólido), que debe mantenerse refrigerado
a 2 -8 °C.

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Desde este subcultivo primario, cada semana se debe obtener un segundo subcultivo
desde el cual se harán los repiques necesarios para el trabajo semanal, que se mantendrán
refrigerados.
Desde el cultivo semanal se deben sacar cada 24 horas subcultivos de trabajo para
tener cepa fresca para los controles de calidad. Este procedimiento puede ser repetido por 7
días seguidos.
Al octavo día se debe obtener un nuevo subcultivo semanal desde el subcultivo
primario.
En el caso de cepas que se utilicen con menos frecuencia que la semanal o que solo
se utilicen con los cambios de lotes de reactivos, se deben mantener congeladas según lo
mencionado anteriormente y se deben subcultivar según necesidad cada vez que se vayan a
utilizar. En este caso realice 2 subcultivos desde el congelado para obtener la cepa de trabajo.
7.4- Control de Tinciones
El control de tinciones permite evaluar la calidad de los reactivos, al operador y la calidad

del microscopio a través del uso de cepas controles de afinidad tintorial, morfología y
disposición.
7.4.1- Tinción de Gram
El control se realizará con las cepas ATCC Staphylococcus aureus 25923 y Escherichia
coli 25922 de 24 hrs de incubación repicadas en agar sangre.
7.4.2- Tinta China
Los controles a utilizar para la tinta china son: cepa ISP Cryptococcus spp. (Control
positivo) y Candida albicans ATCC® 14053 (control negativo).
Se controlará mensualmente y cada vez que se abra un nuevo kit y se registrará en

Registro control de tinciones (Anexo N°3) y Libro registro de Control de Calidad Interno.
TINCIÓN CEPA CONTROL RESULTADO ESPERADO

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GRAM S. aureus 25923 Cocácea Gram positiva: color azul-

morado
E. coli 25922 Bacilo Gram negativo: color
rosado
CHINA Cepa ISP Cryptococcus spp. Reacción (+): zona de
aclaramiento o halo alrededor de la
célula
C. albicans 14053 Reacción (-): sin halo
● Medidas correctivas
En caso de valores discordantes con lo esperado:
✔ Verificar que el material de control sea el adecuado
✔ Realizar una nueva tinción, si se corrige el problema, seguir con la rutina
✔ Si no se corrige realizar cambio de reactivo preparado y recontrolar.
7.5- Control de Carbapenemasas
El control de calidad de las pruebas de detección de carbapenemasas en enterobacterias

se realizará mediante la confirmación de las cepas con resultado positivo enviadas al ISP.
El envío de cepas con resultado positivo para carbapenemasas es responsabilidad del TM,
de acuerdo al protocolo de ISP para el envío de muestras. Una vez recibida la confirmación,
será responsabilidad del médico Microbiólogo el análisis de resultados y de archivar los
resultados de la identificación en la carpeta “Informe Cepas ISP” de cada año.
7.6- Control de calidad de VDRL
Cada vez que se procesen muestras de VDRL y cada nuevo lote de antígeno se
controlará el antígeno preparado contra un suero control comercial para control de
reactividad R (reactivo), Rd (reactivo débil) y NR (no reactivo). De no contar con este control
comercial, se utilizarán controles preparados en el laboratorio (“in house”) con sueros de
pacientes caracterizados por el profesional de mayor experiencia. Estos sueros se alicuotan y

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se mantienen congelados a -20°C. Los controles “in house” deben ser calentados a 56°C antes
de utilizarlos. Se realizará registro en Hoja de registro de VDRL (Anexo N°4)
7.5.1- Criterios de aceptabilidad
Con el antígeno preparado para la técnica de VDRL, los controles R, Rd y NR

presentan una reacción como se observa en la figura a continuación:
Interpretación de lecturas de floculación microscópica.
El control reactivo (R) es titulado en cada preparación, y éste debe dar un título
esperado y reproducible en cada procedimiento.
7.5.2- Criterios de Rechazo.
Si los controles NR, Rd y R no se comportan de la manera esperada se interrumpe el

proceso y se siguen los siguientes pasos:
● Repetir la lectura de los controles utilizando el mismo antígeno. Si la discordancia
persiste, preparar nuevamente el antígeno, idealmente por otro profesional
competente.
● Verificar que la fecha de vencimiento del kit esté vigente. Si el problema continúa,
utilizar un kit nuevo y repetir los controles. Cambiar de N° de Lote si persiste la no
conformidad.

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INTERNO
● Verificar la temperatura ambiental, esta influye en la reactividad del antígeno.

Verificar que esté entre 23 y 29 °C. Bajo 23°C pueden obtenerse falsos negativos y
sobre 29°C falsos positivos.
7.6- Control Documental
Actualización Elaborado por Páginas Descripción de la Fecha de

actualización elaboración
2 Dra. María Victoria Moreno, 12 Actualización de Febrero 2017
TM. Álvaro Arriagada, técnicas vigentes
BQ. Fernando Corvalán
3 Dra. María Victoria Moreno, 24 Actualización de Abril 2019
TM. Álvaro Arriagada técnicas vigentes

Microbiología
INTERNO
Anexo N°1:
Anexo N°2:

Microbiología
INTERNO
Anexo N°3:
Anexo N°4:

Microbiología

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El control de calidad interno permite evaluar el correcto aislamiento, identificación y

Se aplica a medios de cultivos, equipos, pruebas y técnicas de sensibilidad en difusión y

ATM: Área Técnica de Microbiología.

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Antibiograma: estudio de susceptibilidad in vitro a los antimicrobianos, el cual se puede

Método Kirby- Bauer: método para la ejecución de antibiogramas mediante la técnica de

● El profesional Tecnólogo Médico (TM) es el responsable de ejecutar y de llevar

● El profesional Tecnólogo Médico coordinador será responsable de revisar el lote,

● El profesional designado como Encargado de Calidad del Área Técnica de

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● El Encargo de Calidad, en conjunto con el profesional Microbiólogo serán los

El procedimiento, condiciones, frecuencia, registros y responsables de realizar el control

7.1- Control de Medios de Cultivo.

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7.2- Control de susceptibilidad antimicrobiana

7.2.1- Control de método Kirby- Bauer

El objetivo del control de calidad de antibiogramas es: monitorizar precisión y exactitud,

Cepa E. coli ATCC 35218

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Incubación 35°C aerobiosis

Antimicrobiano Sigla Límite inferior Límite superior

Cepa E. coli ATCC 25922

Antimicrobiano Sigla Límite inferior Límite superior

Cepa P. aeruginosa ATCC 27853

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Antimicrobiano Sigla Límite inferior Límite superior

Cepa S. aureus ATCC 25923

Antimicrobiano Sigla Límite inferior Límite superior

Cepa E. faecalis ATCC 29212

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Antimicrobiano Sigla Límite inferior Límite superior

7.2.2- Control antibiograma por Etest

Cepa E. coli ATCC 25922

Antimicrobiano Sigla Límite inferior Límite superior

Cepa E. faecalis ATCC 29212

Antimicrobiano Sigla Límite inferior Límite superior

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7.2.3- Control test fenotípico confirmatorio BLEE

Cepa K. pneumoniae ATCC 700603

Antimicrobiano Sigla Límite inferior Límite superior

7.2.4- Acciones correctivas con error identificado

Distribuido a: Áreas Técnicas de Laboratorio Clínico de Página 10 de 18

✔ Variaciones propias de la cepa (pérdida de plasmidos o mutaciones)

● Acciones correctivas con error identificado

● Acciones correctivas sin error identificado

● Acciones correctivas adicionales.

Distribuido a: Áreas Técnicas de Laboratorio Clínico de Página 11 de 18

Si luego de esto el control se corrige en 5 días consecutivos luego de realizado los

7.3- Mantención del cepario.

Las cepas bacterianas ATCC e ISP mencionadas previamente en este documento,

Distribuido a: Áreas Técnicas de Laboratorio Clínico de Página 12 de 18

7.4- Control de Tinciones

El control de tinciones permite evaluar la calidad de los reactivos, al operador y la calidad

7.4.1- Tinción de Gram

7.4.2- Tinta China

Se controlará mensualmente y cada vez que se abra un nuevo kit y se registrará en

Distribuido a: Áreas Técnicas de Laboratorio Clínico de Página 13 de 18

GRAM S. aureus 25923 Cocácea Gram positiva: color azul-

7.5- Control de Carbapenemasas

El control de calidad de las pruebas de detección de carbapenemasas en enterobacterias

7.6- Control de calidad de VDRL

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