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I.Q. Liliana Islas Q.F.B. Gabriela Méndez Q.F.B. Araceli Cano

Químico Analista Gerente de Control de Calidad Responsable Sanitario

Fecha: 18-Jun-21 Fecha: 21-Jun-21 Fecha: 22-Jun-21

1.0 OBJETIVO

1.1 Establecer la metodología analítica necesaria para el análisis de Reference Standard de

Clorhidrato de Fentermina (Sustancia de Referencia de Clorhidrato de Fentermina) en el Instituto
de Investigación en Química Aplicada, S.A. de C.V. (IIQUIAP).

2.0 ALCANCE

2.1 Esta metodología aplica al análisis del Clorhidrato de Fentermina como Reference Standard
(Sustancia de referencia).

3.0 REFERENCIA

3.1 Método interno.

3.2 NOM-164-SSA1-2015. Buenas Prácticas de Fabricación de Fármacos.

3.3 PNO-DD-01. Elaboración y Emisión de Documentos.

4.0 DEFINICIONES

4.1 No aplica.

5.0 RESPONSABILIDADES

5.1 Responsable Sanitario. Verificar la correcta aplicación de la metodología analítica.

5.2 Gerente de Control de Calidad. Verificar la correcta aplicación de la metodología analítica y

registros correspondientes.

5.3 Químico Analista. Mantener actualizada esta metodología y verificar el cumplimiento de la misma.
Realizar el análisis de acuerdo a la metodología analítica, así como los registros correspondientes.

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6.0 FRECUENCIA

6.1 Cada vez que se solicite el análisis de Reference Standard Clorhidrato de Fentermina (Sustancia
de Referencia de Clorhidrato de Fentermina).

7.0 DESARROLLO

7.1 Descripción.

7.1.1 Polvo cristalino blanco, inodoro e higroscópico.

7.2 Solubilidad.

7.2.1 Soluble en agua y en alcoholes inferiores; poco soluble en cloroformo; insoluble en éter.

7.2.2 Pesar 100 mg de la muestra y disolver de acuerdo a la siguiente tabla:

mL de disolvente Solubilidad
<0.1 mL Muy soluble
0.1 – 1.0 mL Fácilmente soluble
1.0 – 3.0 mL Soluble
3.0 – 10.0 mL Moderadamente soluble
10.0 – 100 mL Poco soluble
100.0 – 1 000 mL Muy poco soluble
> 1 000 mL Prácticamente insoluble o insoluble

7.3 Identificación.

7.3.1 a) Absorción infrarroja.

7.3.1.1 El espectro deberá presentar máximos y mínimos característicos del compuesto.

7.3.1.2 Examinar la sustancia como indica el Método General de Análisis “Espectrofotometría infrarroja”
(MGA-CC-04).

7.3.2 b) Absorción ultravioleta.

7.3.2.1 El espectro presenta su máxima absorción a 256 nm,

7.3.2.2 Examinar la sustancia como indica el Método General de Análisis “Espectrofotometría visible y
ultravioleta” (MGA-CC-05).

7.3.2.3 Solución muestra 600 g/mL medio ácido clorhídrico 0.1 N. Pesar 12 mg de muestra disolver y
aforar a 20 mL con HCl 0.1 N. Leer la muestra inmediatamente después de su preparación para
evitar la evaporación de la solución.

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7.4 Punto de fusión.

7.4.1 Entre 202 °C y 205 °C.

7.4.1.1 Examinar la sustancia como indica el Método General de Análisis “Temperatura de fusión”
(MGA-CC-06).

7.5 Pérdida por secado.

7.5.1 No más de 2.0 %.

7.5.1.1 Examinar la sustancia como indica el Método General de Análisis “Pérdida por secado”
(MGA-CC-10).

7.5.1.2 Determinar en 1.0 g de muestra por secado en una estufa a 105 °C durante 3 horas.

7.6 Residuo de incineración.

7.6.1 No más de 0.1 %.

7.6.1.1 Pesar 1.0 g de muestra y adicionar 1.5 mL de acido sulfúrico para humectar la muestra por
completo. La digestión de debe realizar en forma lenta para evitar proyecciones.

7.6.1.2 Examinar la sustancia como indica el Método General de Análisis “Cenizas sulfatadas”
(MGA-CC-20).

7.7 Impurezas cromatográficas.

7.7.1 Impurezas desconocidas ≤ 0.5 %

Suma de impurezas totales ≤ 1.0 %

7.7.2 Reactivos.

 Heptansulfonato de Sodio Monohidratado RA.

 Trietilamina RA.
 Ácido Fosfórico RA.
 Acetonitrilo grado cromatográfico.
 Agua grado cromatográfico.
 Agua purificada.

7.7.3 Materiales y equipo.

 Cromatógrafo de líquidos de alta resolución.

 Controlador y bomba cuaternaria de alta presión.
 Detector de absorbancia UV/VIS.
 Inyector automatizado.
 Desgasificador de 4 canales.
 Integrador o procesador de datos.

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 Balanza analítica.
 Potenciómetro con electrodo de pH.
 Sistema de microfiltración para disolventes.
 Membrana, tipo HVLP de 0.45 μm de tamaño de poro.
 Baño ultrasónico.
 Matraces volumétricos de 100 y 1000 mL.
 Pipetas volumétricas de 3 mL.
 Filtros tipo GHP Acrodisc 13 de 0.45 μm.

7.7.4 Parámetros instrumentales.

 Solución amortiguadora. Pesar 375.24 mg de heptansulfonato de sodio y disolverlos en 200 mL

de agua, agregar 3 mL de Trietilamina y aforar a 1000 mL con agua. Ajustar el pH a 3.0 con
ácido fosfórico RA, filtrar y desgasificar.
 Fase móvil. Acetonitrilo y solución amortiguadora en una proporción de (12:88), realizar la
mezcla manualmente.
 Velocidad de flujo: 1 mL/min.
 Columna: Symmetry C18 3.5 µm 4.6 x 75 mm o columna equivalente con relleno L1.
 Temperatura de la columna: 45°C.
 Temperatura de la muestra: Ambiente.
 Detector UV: 210 nm
 Volumen de inyección: 20 µL.
 Tiempo de corrida: 20 minutos.

7.7.5 Preparación de soluciones.

7.7.5.1 Solución muestra. Pesar por sextuplicado y con exactitud 100 mg de Reference standard de
Clorhidrato de Fentermina y transferir a un matraz volumétrico de 100 mL, disolver con 40 mL de
agua y sonicar 10 minutos. Aforar a volumen con agua. Esta solución equivale a 1.0 mg/mL.

7.7.6 Desarrollo de análisis.

7.7.6.1 Acondicione el equipo de acuerdo a lo indicado en el punto 7.7.4.

7.7.6.2 Realice el patrón de inyección como se indica a continuación.

 Blanco Fase móvil, (una inyección).

 Solución de muestra (seis inyecciones).

7.7.6.3 Proceso de datos.

7.7.6.3.1 Adecuabilidad. El porcentaje del coeficiente de variación (%CV), para las áreas correspondientes a
Clorhidrato de Fentermina en las seis inyecciones de solución muestra no debe ser mayor al 2.0 %.

7.7.6.3.2 Muestras. Calcular el porcentaje de impurezas por normalización de área.

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7.8 Disolventes residuales.

7.8.1 Límites.

 Diclorometano. No más de 600 ppm.

 Acetato de etilo. No más de 5000 ppm.
 Acetona. No más de 5000 ppm.

7.8.2 Material.

 Dimetilsulfóxido (DMSO)
 Acetato de etilo (Sustancia de referencia)
 Acetona (Sustancia de referencia)
 Cloruro de metileno (Sustancia de referencia)
 Cromatógrafo de gases.
 Jeringa 1.0 mL HS.
 Gas acarreador helio.
 Balanza analítica.
 Matraces volumétricos 10 mL, 100 mL.
 Pipetas volumétricas de 1 mL, 5 mL, 10 mL.
 Micropipeta de volumen controlable y puntas de 100 μL.

7.8.3 Condiciones cromatográficas.

 Columna capilar de 30 m longitud, 0.32 mm diámetro, 0.18 m espesor, tipo DB-624 marca
Agilet o equivalente.
 Detector de ionización de flama (FID).
 Flujo 1.0 mL/min.
 Vol. Inyección 1000 μL.
 Temperatura inyector 180 °C.
 Split ratio de 1:15.
 Temperatura detector 250 °C.
 Programación del horno

TEMPERATURA (°C) RAMPA (°C/min) TIEMPO (min)

40 - 10
200 30.0 5

 Tiempo de corrida: 20 min

7.8.4 Condiciones Head Space.

 Temperatura de la jeringa 80 °C.

 Temperatura de incubación de la muestra 80 °C.
 Tiempo de incubación 25 minutos.
 Velocidad de incubación: 500 rpm
 Encendido de agitador: 2 seg.

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 Apagado de agitador: 4 seg.

 Velocidad de llenado del embolo: 100 µl
 Partes de llenado: 0
 Viscosidad: 1.0 seg.
 Espera de pre-inyección: 0.5 seg
 Velocidad de inyección del embolo: 250 µl
 Retraso posterior de la inyección: 0.5 seg.
 Tiempo de lavado de la jeringa: 30 seg.
 GC cycle 0:25:00.

7.8.5 Preparación de soluciones.

7.8.5.1 Solución stock 1 (Acetato de etilo). Transferir 1 mL de acetato de etilo a un matraz volumétrico de
20 mL diluir y llevar a volumen con dimetilsulfóxido (DMSO). Concentración 0.0451 g/mL.

7.8.5.2 Solución stock 2 (Cloruro de metileno). Transferir 3 mL de Cloruro de metileno a un matraz

volumétrico de 50 mL, diluir y llevar a volumen con dimetilsulfóxido (DMSO). Concentración
0.0798 g/mL

7.8.5.3 Solución stock 3 (Cloruro de metileno y acetona). De la solución stock 2 tomar una alícuota de
4 mL y transferir a un matraz volumétrico de 50 mL, a este matraz adicionar 3 mL de acetona,
diluir y llevar a volumen con dimetilsulfóxido (DMSO). Concentración de cloruro de metileno
0.006384 g/mL y de acetona 0.04704 g/mL.

7.8.5.4 Solución de referencia. Tomar una alícuota independiente de 1 mL de las soluciones stock 1 y 3;
transferirlos a un matraz volumétrico de 100 mL, diluir y llevar a volumen con dimetilsulfóxido
DMSO. Concentraciones para acetato de etilo 0.00451 g/mL, cloruro de metileno 0.00006384
g(mL y acetona 0.0004704 g/mL.

7.8.6 Preparación de viales

7.8.6.1 Vial blanco. Transferir 5 mL de dimetilsulfóxido (DMSO) a un vial de Head Space, colocar la septa
y sellar con la engargoladora.

7.8.6.2 Viales de referencias, Transferir por sextuplicado y de forma independiente 5 mL de la solución de

referencia a viales de Head Space, colocar la septa y sellar con la engargoladora.

7.8.6.3 Vial de muestra. Pesar por duplicado aproximadamente 500 mg de muestra, transferir a viales
independientes de Head Space y agregar 5 mL de dimetilsulfóxido (DMSO), mezclar, colocar la
septa y sellar con la engargoladora. Concentración 0.1 g/mL.

7.8.7 Desarrollo.

7.8.7.1 Una vez que el equipo alcance las condiciones cromatográficas indicadas en los puntos 7.8.3 y
7.8.4, inyectar los viales preparados siguiendo el patrón indicado a continuación:

 Blanco. Una inyección

 Adecuabilidad (6 viales de referencia). Una inyección por vial.
 Muestras (2 viales de muestra). Una inyección por vial.
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7.8.7.2 Calcular la adecuabilidad del sistema, empleando las seis inyecciones de los viales de referencia.

 % CV Menos o igual a 5 %.
 Resolución entre picos. ≥ 1.5
 Platos teóricos para el pico de acetona ≥ 10,000
 Tiempos de retención: Acetona 4.1 min, Diclorometano 4.7 min,
Acetato de etilo 8.4 min, (Ver figura 1).

Fig 1. Cromatograma de disolventes residuales en Reference Standard de Fentermina

7.8.7.3 Calcular la cantidad de cada disolvente mediante la siguiente fórmula:

Donde:

ΔU = Área promedio del pico del solvente en el cromatograma de la muestra.

ΔS = Área promedio de los picos del solvente correspondientes en los cromatogramas de
referencia.
Cstd = Concentración del estándar en g/mL.
Cmta = Concentración de la muestra g/mL.

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7.9 Pureza (Balance de masas)

7.9.1 ≥ 98.0%.

7.9.2 Al 100 % de la sustancia del analito restar el porcentaje de las pruebas de residuo de incineración,
perdida por secado, impurezas totales y suma de disolventes residuales.

Donde:

% PPS = Porcentaje de perdida por secado.

% RI = Porcentaje de residuo de incineración.
% IC = Porcentaje suma de impurezas totales.
% DR = Porcentaje suma de disolventes residuales.

8.0 FORMATOS

8.1 FOR-CC-12. Solicitud de Análisis.

8.2 FOR-CC-13. Certificado de Análisis de Producto Terminado.

9.0 HISTÓRICO DE CAMBIOS

Motivo del cambio Páginas Revisión Elaboró Autorizó

I.Q. Liliana Q.F.B. Araceli
Se genera como documento nuevo. Todas Nuevo
Islas Cano

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