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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS CÓDIGO:

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3M™ SISTEMA DE LUMINISCENCIA MICROBIANA MLS II

1. OBJETIVO.

Determinar el tiempo en la obtención de resultados para la liberación rápida de

productos lácteos ultra pasteurizados.

2. DEFINICIONES.

3M™ Sistema de Luminiscencia Microbiano (MLS II). Sistema rápido de detección

microbiana mediante bioluminiscencia para detectar la presencia de ATP
microbiano en productos lácteos y jugos esterilizados.
Reactivo. Sustancia que, por su capacidad de provocar determinadas reacciones,
sirve en los ensayos y análisis químicos para revelar la presencia o medir la
cantidad de otra sustancia.
ATP. El trifosfato de adenosina (adenosín trifosfato, del inglés adenosine
triphosphate, ATP o TFA) es un nucleótido fundamental en la obtención de energía
celular. Se produce durante la fotorrespiración y la respiración celular, y es
consumido por muchas enzimas en la catálisis de numerosos procesos químicos.
Tecnología UHT. Consiste en calentar el producto a más de 135 °C. Destruye todos
los microorganismos, lo que hace que el producto final sea apto para la
distribución a temperatura ambiente.

3. MATERIALES Y EQUIPOS.
 Mechero de alcohol.
 Puntas desechables de 5 mL y 10 mL, estériles.
 Pipeta automática de 10 a 100 µl.
 Pipeta automática de 1 a 1000 µl.
 Cabina de flujo laminar.
 Lámpara UV.
 Autoclave para material limpio.

4. REACTIVOS.
 Agua libre de ATP.
 ATPasa.
 Extractante.
 Luciferin Luciferasa.
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 Solución de alcohol etílico al 96% y 78 %.

5. PRINCIPIO DE MÉTODO.

Sistema rápido de detección microbiana mediante bioluminiscencia para detectar la

presencia de ATP microbiano en productos lácteos y jugos esterilizados. La prueba de ATP
funciona para aerobios, anaerobios y microaerofílicos.
La cantidad de luz producida es medida y expresada como URL, la cual es proporcional a la
cantidad de ATP presente y directamente proporcional al número de células vivas.

Figura 1 Principio de bioluminiscencia

6. CONSIDERACIONES
PREVIAS.

 Desinfectar la
cabina de flujo laminar realizando exposición de luz UV por 10 minutos.
 Desinfectar en la cabina de flujo laminar la tapa del frasco y sus
alrededores con solución de alcohol etílico al 78 %.
 Mantener encendido el mechero que contiene alcohol etílico al 96% cerca
de la muestra.
 Mezclar muy bien la muestra para asegurar su homogeneización antes de
preparar
 las diluciones.
 Abrir asépticamente y adecuadamente la muestra.

7. METODOLOGÍA.

7.1 PRENDER, WASH (LIMPIAR), & PRIME

1.º.Encender el 3M™ MLSII

2.º.Abrir el MLSII Software: User: Admin No requiere contraseña
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3.º.Colocar las botellas de Agua (Free ATP Water).

4.º.Colocar en el menú del software “Actual”, correr “Wash Assay: Ingrese el lote
(opcional) y pulse Aceptar, pulsar Start, colocar la placa en el equipo,
ingresar nombre de prueba (opcional) y pulsar Ok
5.º.Colocar los reactivos

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Figura 2 Ubicación reactivos 1) ATPasa

2) Extractante
3) LL1

6.º.Desde el menú “Actual” , correr “Prime Assay”: Ingrese el lote (opcional) y

pulse Ok, pulsar Start, colocar la placa en el equipo, ingresar nombre de
prueba (opcional) pulsar Ok.

7.2 CORRER EL CONTROL DE REACTIVOS.

1.º.Tomar un vial de ATP Ref 3004

2.º.Colocar 1 mL de ATP Free Water al vial de ATP
3.º.Invertir suavemente hasta disolver completamente
4.º.Tomar 6 pozos y colocarlos en el soporte, en iniciando en la posición A1-
F1
5.º.Pipetear 50 µl del ATP reconstituido en los pozos C1,D1,E1,F1
6.º.Desde el menú “Actual” , correr “Reagent Control”: Ingrese el lote
(opcional) y pulse Ok, pulsar Start, cuando pregunte si se realizaron los
“prime reagents”. seleccione “Si”, colocar la placa en el equipo, ingresar
nombre de prueba (opcional) y pulsar Ok.

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Figura 3 Llenado de pozos

Celdas A-B <35 URL

Verifica contaminación

Celdas C-D <35 URL

Verifica la actividad de ATPasa

Celdas E-F >1500 URL

Verifica la actividad de LL

7.3 ANÁLISIS DE PRODUCTOS UHT CON 3M™ MLSII

7.3.1 Preparar las muestras

1.º.Verificar los niveles de reactivos remplazar/agregar reactivos y correr prime si

es necesario.
2.º.Definir la cantidad de muestras.
3.º.Colocar los pozos en el soporte.
4.º.Colocar 50 µl de la muestra en cada pozo: Asegurarse que la muestra caiga
perpendicularmente y no de costado (Figura 3).

Ilustración 4 Técnica de pipeteo

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7.3.2 CORRER EL ENSAYO

1st.Del menu “Actual”, seleccionar “UHT Assay” o “Juice Assay” segun

corresponda
2.º.Ingrese información del lote del reactivo (opcional) y pulse Ok.
3rd. IMPORTANTE: Asegúrese que la imagen de las pozos en el software
coincidan con la ubicación de las muestras

Fígura 4

4°. Presione “Start”

5°. Asígnele un nombre al ensayo y pulse Ok
– Este es el nombre del archivo que va a importarse en la base de datos.
• Asegúrese que el nombre es único y fácil de encontrar.

8. BASE DE DATOS PARA 3M™ MLSII.

8.1 CREAR UNA PLANTILLA “TEMPLATE”

A. Abrir el programa 3M™ MLS Data Trending Software (Biotrack MLS Database)
B. La contraseña es “Pass”
C. Seleccionar “View Test”
D. Pulse “Template”
E. Pulse “Create”
F. Nombrar el template.
G. Cuando le pregunte si quiere usar un template, ingresar “No”
H. Agregar datos adicionales como producto, marca, presentación, etc.
I. Si no va a usar nuevamente el template asegurarse de pulsar “Delete After use”
J. Pulse “Exit” cuando finalice.

8.2 CARGAR DATOS.

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A. Cuando finalice el ensayo. Pulse “New Test”

B. Cuando le pregunte si quiere usar un template, ingresar “No”
C. Pulse “Browse” y seleccione el nombre del ensayo de UHT para importar: 
Unidad D Archivos del programa  3M™ MLS Exports
D. Una vez que los datos se importaron , pulse “Apply Template”
E. Seleccione el template que creó y automáticamente se completarán los datos.
F. Revise para asegurarse que los datos coincidan con el orden de las muestras:
Para cambiar los datos pulse el botón “On” que se encuentra cerca de Edit en
la parte superior derecha del programa.

9. CONTROLES.

9.1 APAGADO DIARIO

A. Recupere los reactivos que se encuentran en las líneas

Tools   Empty All

B. Retire las botellas de Reactivos y colóquelas en el refrigerador.

C. Coloque las botellas de Agua (ATP Free Water) en el 3M™ MLSII
D. Correr “Wash Assay”: Ingrese el lote (opcional) y pulse Ok, pulsar “Start”,
colocar la placa en el equipo, ingresar nombre de la prueba (opcional) e
ingresar Ok
E. Coloque las botellas de Solución de Lavado (Cleaning Solution) en el MLSII
F. Correr nuevamente “Wash Assay”: Ingrese el lote (opcional) y pulse Ok,
ingresar “Start”, colocar placa en instrumento, ingresar nombre de prueba
(opcional) y pulsar Ok

G. Desde el menú “Tools” 

H. Apagar el MLS II y su Software.

9.2 MANTENIMIENTO SEMANAL

A. Colocar las botellas de ATP Free Water en el MLSII.

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B. Correr “Wash Assay”: Ingrese el lote (opcional) y pulse Ok, ingresar Start, colocar la
placa en el equipo, ingresar nombre de prueba (opcional) y pulsar Ok.
C. Colocar las botellas con solución de mantenimiento en el MLSII
D. Correr “Wash Assay”: Ingrese el lote (opcional) y pulse Ok, ingresar Start, colocar la
placa en el equipo, ingresar nombre de prueba (opcional) y pulsar Ok.
E. Esperar 15 minutos – 2 hrs
F. Colocar las botellas de ATP Free Water en el MLSII
G. Correr “Wash Assay”: Ingrese el lote (opcional) y pulse Ok, ingresar Start, colocar la
placa en el equipo, ingresar nombre de prueba (opcional) y pulsar Ok.
H. Colocar las botellas de Reactivos o Solución de Limpieza en el MLSII: Correr “Prime
Assay” para los reactivos, correr “Wash Assay” para la solución de Limpieza.
I. Registre el procedimiento en su Planilla de Mantenimiento.

10. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS.

Figura 5 Resultados

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