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Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional De Ciencias Biolgicas


Laboratorio de Bioqumica
Practica 5 Cintica Enzimtica. I Curva Tipo De Azcares Reductores
INTRODUCCIN
Las enzimas son protenas que catalizan
reacciones biolgicas. Al igual que otros
catalizadores aumentan la velocidad a la que
se alcanza el equilibrio, pero no afectan el
equilibrio final de la reaccin. La cintica
enzimtica comprende el estudio de la
velocidad de reacciones catalizadas por
enzimas y de las condiciones que las
modifican, as como los mecanismos de
reaccin. Una de las enzimas ms conocidas y
ampliamente estudiadas es la sacarasa, fructofuranosidasa o invertasa.
Para que un azcar sea reductor, debe tener
en su estructura un grupo carbonilo de
aldehdo potencialmente libre. Los azucares en
solucin alcalina rpidamente reducen en
iones oxidantes y los azucares se oxidan
formando mezclas complejas de cidos.
El mtodo 3,5-DNS es una tcnica
colorimtrica
que
emplea
3,5dinitrofenilsalicilico para la hidrolisis de
polisacridos presentes en una muestra,
seguido
de
la
determinacin
espectrofotomtrico.
Reaccin

OBJETIVOS

Analizar algunos factores que modifican


la velocidad de la reaccin catalizada
por la invertasa y ver las caractersticas
que tiene.

RESULTADOS
Tabla 1. Curva tipo de azucares reductores
Tubo No.
Glucosa
0.005 M
Fructosa
0.005 M
(mL)
Sacarosa
0.2 M (mL)
Regulador
de acetatos
0.05 M, pH
4.7 (mL)
Agua (mL)
3,5 DNS
(mL)
Desarrollo
de color

Blanco
T

Problemas
3
4

0.1

0.2

0.4

0.8

1.0

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

1.0

0.9

0.8

0.6

0.2

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

5 minutos a 92 C (en bao mara)

Colocar en bao con hielo y diluir con


2 mL de agua destilada
Leer en un espectrofotmetro a 540 nm
Absorban 0.000 0.10 0.21 0.36 0.73 0.98
cia
A
3A
8A
7A
5A
8A
Azcar
reductor
0
1
2
4
8
10
(moles)/
2.0 mL
Dilucin

Procedimiento

Instituto Politcnico Nacional


Escuela Nacional De Ciencias Biolgicas
Laboratorio de Bioqumica
Practica 5 Cintica Enzimtica. I Curva Tipo De Azcares Reductores
Grafica 1: Curva tipo de azcares reductores

DISCUSIN DE RESULTADOS
La glucosa y fructuosa por ser azcares
reductores poseen un grupo carbonilo libre
formando un grupo hemiacetal que le confiere
la caracterstica de poder reaccionar con otros
compuestos. La determinacin de estos
azcares se realiz con el objeto de obtener
una curva de calibracin aplicando la tcnica
DNS (cido dinitrosaliclico), reactivo que se
reduce en presencia de calor a 3-amino-5
nitrosalicilico por la glucosa y fructuosa.

CONCLUSIONES
Se pudo determinar cuantitativamente la
concentracin de azcar en las sustancias

muestras con las que se trabaj y cuyos


resultados se encuentran en la tabla 1.
BIBLIOGRAFA
-

Charlotte W. Pratt. Bioqumica.


Editorial El Manual Moderno. 2 edicin.
Pp. 184-194
Nelson D.L. & Cox M.M. Principios de
Bioqumica Lehninger. Ediciones
Omega. 4 edicin 2006. Pp 200, 202 y
206
2.10 Determinacin de azucares
reductores (mtodo acido 3,5Dinitrosalicilico) [en lnea][fecha de
consulta: 7 junio de 2015]. Autor:
Magdaleno Orozco E. Carlos
articulo pdf. Pp 29-30.
Disponible en:
http://cdigital.dgb.uanl.mx/te/102012607
9/1020126079_01.pdf