INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

Escuela Nacional de Ciencias de Biolgicas

Bioqumica General
3IM1
Crdova Flix Juan Manuel Espejel Rivera Sergio Arturo
Resultados.

Prctica 5.1
Curva tipo de azucares
reductores

Reaccin del 3,5 Dinitrosaliclico (DNS) con

Azcares Reductores

Introduccin
La invertasa (-D-fructofuranosidasa, -Dfructofuransido fructohidrolasa, EC 3.2.1.26), cataliza la
hidrlisis de restos
Blan
terminales no
Tubo No.
co
reductores -Dfructofuransidicos
T
1
de fructofuransidos.
Absorbancia
Entre los sustratos
0
0.096
sobre los que actua
es, sin duda, la
Azcar
sacarosa, de ah que
Reductor
0
1
la enzima se designe
(moles)/2.0
con el nombre de
mL
sacarasa. La
denominacin trivial
de invertasa, con la que tambin se conoce, hace
referencia al hecho de que los productos de la reaccin
son conocidos desde antes como azcar invertido ya
que mientras la sacarosa es dextrorrotatoria, la mezcla
equimolecular de glucosa y fructosa que resulta de su
hidrlisis es levorrotatoria.

Problemas
2
0.136
2

1.Lecturas
de
Absorbancia
obtenidas
en
el
4
8
10
espectrofotmetro a
540
nm
con
diferentes
concentraciones de azcares reductores.
0.208

0.552

0.640

Discusin de Resultados

El mtodo DNS (tcnica de Miller) es una tcnica

colorimtrica que emplea 3,5 dinitrosalicilico para la
hidrlisis de polisacridos presentes en una muestra. Se
determina las absorbancias por medio de un
espectofotometro a 540 nm. Esta tcnica sirve para
cuantificar los azucares reductores producidos durante
una fermentacin o para cuantificar los productos de una
reaccin enzimtica.

Mediante esta prctica logramos obtener una curva tipo

de azcares reductores donde relacionamos la
absorbancia medida en un espectrofotmetro a 540 nm
(dentro de la regin visible) con respecto a diferentes
concentraciones de un azcar reductor en (moles)/2.0
mL) que en este caso fue las diferentes concentraciones
de la solucin de Glucosa 0.005 M Fructosa 0.005 M.

El DNS reacciona nicamente con los azucares

reductores. La sacarosa es un disacrido no reductor,
pero tras su hidrlisis en medio acido se liberan glucosa y
fructosa que si son reductores y reaccionan con el DNS
generando un producto coloreado. La intensidad del color,
que se puede medir por mtodos espectrofotomtricos es
proporcional a la concentracin de sacarosa.

Donde por medio de la reaccin de los azcares

reductores: glucosa y fructosa (convertida a glucosa
mediante NaOH ya que por la posicin de su grupo
carbonilo que est comprometido la fructosa no puede
reducir en un inicio) de la solucin con el reactivo 3,5
DNS nos permito observar el poder reductor de estos
azucares de manera visual mediante la formacin de
cidos derivados del DNS reducidos en diferentes
posiciones (en 3 y 5) a partir de la oxidacin de estos
azcares los cuales presentaron color al formarse,
colores que se dieron desde amarillos hasta anaranjados
conforme la concentracin de los azucares era mayor por
esta misma razn tomamos las lecturas de absorbancia
del espectrofotmetro a 540 nm como se observa en la
imagen:

Objetivo
Se elaborara una Curva Tipo de Azucares Reductores a
partir de lecturas de absorbancia obtenidas en el
espectrofotmetro
conforme
a
diferentes
concentraciones de azucares reductores que al
reaccionar con el DNS entregan compuestos con colores
que varan acorde al poder reductor de los azucares
muestras que son posibles

de leer en la regin visible

(540 nm).

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Bioqumica General
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Crdova Flix Juan Manuel Espejel Rivera Sergio Arturo

Imagen 1: Imagen de coloracin obtenida en los

diferentes tubos con distintas concentraciones del azcar
reductor que reaccionaron con el 3,5-DNS (en orden
creciente de izquierda a derecha).

Comprobamos que aunque la sacarosa est

formada por glucosa y fructosa no es un azcar
reductor.
Comprobamos que la absorbencia depende de
la cantidad de glucosa y fructosa presente en la
muestra.

Grfica Absorbancia vs [Azucar Reductor]

Pregunta Extra

0.8

Cintica enzimtica

0.6

Absorbancia

0.4
0.2
0
0

10

[Azucar Reductor] (moles)/2.0

Mediante esta grfica obtuvimos un patrn de referencia

acerca del comportamiento del poder reductor de
azcares conforme al incremento de su concentracin, la
cual nos servir como referencia para discutir las
diferentes pruebas que realizaremos variando los factores
que afectan la actividad enzimtica (pH, Temperatura,
Concentracin de Sustrato y de enzima, inhibidores, etc)
en prcticas siguientes.

Conclusin

En esta prctica comprobamos que la fructosa

y la glucosa son azucares reductores al
reaccionar con el DNS.
Comprobamos que al reaccionar el DNS con
los azucares reductores estos se oxidan y se
forman cidos.

La cintica enzimtica estudia las velocidades de las

reacciones catalizadas por enzimas. Estos estudios
proporcionan informacin directa acerca del mecanismo
de reaccin cataltica y de la especificidad de la enzima.
La velocidad de reaccin catalizada por una enzima
puede medirse con relativa facilidad, ya que en muchos
casos no es necesario purificar o aislar la enzima. La
medida se realiza siempre en las condiciones optimas de
12
pH, temperatura, etc y se utilizan concentraciones de
sustrato. En estas condiciones la, velocidad de reaccin
mL
es la velocidad mxima. La velocidad puede determinarse
midiendo la aparicin de los productos o la desaparicin
de los reactivos.

Bibliografia
Nelson D.L y Cox M.M, Lehninger: Principios de
Bioqumica, 4ta Edicin, Ed: Omega, 2006, pgs:
75-78
http://www.scientificpsychic.com/fitness/aminoacido
s.html
http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz3.htm#
e