Propósito de la

sesión:
Citogenética Molecular Interpretar y explicar las técnicas de
la citogenética molecular.

CITOGENÉTICA

Semana: 7
Sesión: 1

Actividades de Actividades de
inicio: desarrollo:
Se realiza pregunta: ¿Cuál es la Explicación del contenido teórico
aplicación de las técnicas de de la clase y se va planteando
citogenética molecular? más preguntas para motivar la
participación.
 Citogenética molecular Hibridación por fluorescencia in situ (FISH)
- Determinar e identificar rearreglos
cromosómicos: Crípticos,
• Localización cromosómica de secuencias Microdelecciones, Microduplicaciones
Combinación de biología molecular y - Identificar un material adicional de origen
citogenética. particulares de ADN. desconocido

Se aplica en células no Se aplica en células en

Utiliza técnicas basadas en la Hibridación
fluorescente in situ (FISH) con sondas cultivadas en interfase. metafase
específicas de cromosomas.

Sus avances en la técnicas de marcaje Detección rápidas de Detección de síndromes

fluorescente en muestras de ADN permiten
visualizar regiones especificas del genoma. aneuploidias de microdelección.

Otro avance en micromanipulación y examen Caracterización de

de cromosomas es la microdisección de reordenamientos
cromosomas.
cromosómicos poco
marcados.
Se pueden utilizar métodos indirectos para evaluar
el genoma completo utilizando cariotipos virtuales, Identificación de
generado a partir de matrices compuestas de miles marcadores
de millones de muestras “simulador informatico” cromosómicos que no
pueden determinarse con
técnicas clásicas.

Criterios utilizados en la técnica

Hibridación por fluorescencia in situ (FISH)
Hibridación por fluorescencia in situ (FISH)
• Tipo de muestra:
Frotis de médula ósea, frotis de sangre, Metodología Etapas
preparaciones de tejido incluidas en parafina,
muestras de tejido disociadas enzimáticamente,
médula ósea sin cultivar, amniocitos sin cultivar, Complementariedad de
las dos cadenas de ADN Desnaturalización
preparaciones de células centrifugadas. de doble hélice
• Preparación de muestras:
Estándar con sal, citrato de sodio. Luego se
Sonda de interés marcada con un
deshidratan en etanol, y se añade la mezcla de Hibridación fluoróforo que se asocia al ADN
sondas. La muestra de ADN y la sonda de ADN de la muestra en el sitio diana.

se codesnaturalizan por calor y dejando un plazo

de al menos 4 horas para la reasociación.
• Análisis:
Se hace con microscopios de fluorescencia.
Se vuelve a formar la doble
Células de interfase positivas para Observación
hélice, la señal emitida por la
sonda se observa en el
una reordenación de t(9;22). microscopio de fluorescencia.
Tipos de sondas
utilizadas en FISH
Visualización en
metafase e interfase
Ventajas y desventajas de la técnica de
Hibridación por fluorescencia in situ (FISH)
VENTAJAS
Permite llevar a cabo el estudio cromosómico sin
necesidad de tener células en cultivo.
Permite detectar delecciones, adiciones y
translocaciones en interfase.
Permite llevar a cabo el análisis célula a célula y
describir su heterogeneidad celular de la muestra.
Técnica rápida (24 horas para una FISH estándar y
unos 4 días para otras aplicaciones).
Hibridación genómica comparada (CGH).Elevada
sensibilidad y especificidad.
¿Cuáles son la
posibilidades de la
citogenética
molecular con
FISH?
Otras técnicas de la citogenética molecular
DESVENTAJAS
 Variantes de la técnica FISH: aquí podemos incluir:
No es una técnica de cribado: requiere conocer la  Hibridación genómica comparada (CGH)
región que se va estudiar para disponer de una
sonda .  Cariotipo multicolor (SKY-FISH y M-FISH), consisten en marcar el material genético
de cada cromosoma con uno o varios fluorocromos, haciéndolos así diferenciables.
Disponer de la sustancias fluorescentes y el  FICTION (Inmunofenotipado fluorescente y citogenética en interfase como
microscopio de fluorescencia. herramienta para la investigación de neoplasias).
 Fiber - FISH
Requiere de personal cualificado: la visualización
 Análisis molecular: la técnica más destacable es la:
de los resultados requiere contar de señales
fluorescentes célula a célula.  PCR (reacción en cadena de la polimerasa), técnica que se caracteriza por su gran
aplicabilidad dado que amplifica secuencias específicas de ADN o ARN, y multiplica
Requiere la automatización de los resultados de por más de 100 el número de copias que se puedan obtener de un fragmento de
análisis. ADN en concreto, algo muy ventajoso para cualquier estudio que se realice.
 PCR sensible a metilación (MS-PCR), amplificación múltiple de sondas (MLPA),
análisis directo de genes por Southern Blot.
Laborioso y costoso.
 Variante de la citogenética molecular con FISH Variante de la citogenética molecular con FISH
Pintado de cromosomas o Cada cromosoma se ha
cariotipo espectral hibridado con sondas
marcadas con fluorocromos de
Hibridación genómica Cariotipado multicolor por FISH diferente color
de 24 colores: SKY, M-FISH y
comparada (CGH) COBRA-FISH
Marca el ADN del propositus con un Detectar simultáneamente varias secuencias
fluorocromo verde y el de referencia con diferentes. Los cromosomas
rojo (Hibridacion in situ). en el núcleo
Posibilidad de combinar varios fluorocromos en
El ADN del propositus y referencia concentraciones diferentes.
compiten por los mismos lugares
cromosómicos. Desarrollo de sistemas de análisis digital que
permiten pintar cada par cromosómico de un
Deleción 1p36 Duplicación 1q21.1-q32.1 Deleción 18q21.31-q22.2 color.
NO es útil para realizar screening Técnicas con 24 sondas fluorescentes:

• Cariotipo espectral (SKY)

NO detecta translocaciones balanceadas. • Técnica de FISH multicolor (M-FISH)
• Etiquetado de relacion binaria combinada Los cromosomas tras ser
(COBRA-FISH) identificados y ordenadas sus
1q21q32.1 imágenes

Variantes de la citogenética molecular con FISH

Variantes de la citogenética
FICTION molecular con FISH
(Inmunofenotipado fluorescente y
citogenética en interfase como herramienta
para la investigación de neoplasias) Fiber - FISH
• Detección simultanea de antígenos • La técnica de FISH se puede llevar a cabo también
celulares mediante inmunofluorescencia sobre fibras de ADN obtenidas a partir del núcleo de
y de alteraciones cromosómicas células.
mediante FISH en un único experimento • La Fiber-FISH permite aumentar la resolución desde
de hibridación. alrededor de 5 megabases (Mb) (si hablamos de
• En comparación con técnica FISH, el cromosomas), es de 50 Kb a 2 Mb (en el caso de
FICTION aporta la ventaja de poder núcleos en interfase) y hasta un limite de 5 Kb en el
identificar el tipo celular que lleva la caso de utilizar una fibra de ADN como diana.
alteración citogenética en medio de • Esta técnica ha sido de gran utilidad para el mapeo
una población heterogénea de células. de genes y el estudio de algunas translocaciones.
 1. Desnaturalizar

Metodologías
2. Hibridación
utilizadas en el
PCR
(Reacción diagnóstico de
Cadena mutaciones del
Polimerasa) gen FMR1

3. Extensión Se determina el número

de repeticiones CGG
y las interrupciones AGG

Futuro de la citogenética molecular

Aplicaciones de la citogenética molecular
Los avances se centran en la citogenética molecular, incluyendo técnicas como:
• Las matrices de hibridación de genómica comparativa (Microarray CGH)
• Matriz-SNP (Polimorfismo de un solo nucleótido) basada en cariotipos.
• Sistemas automatizados para contabilizar los resultados de preparaciones estándar de FISH.

Análisis genómico de
microdeleciones y
CGH array y Matriz-SNP microduplicaciones

Utilización de “chip” (superficie de sílice con

pequeños fragmentos de ADN genómico con
sondas en localización conocida)
Actividades de
Metacognición
cierre:
• ¿Qué aprendiste en esta clase?
• Síntesis conjunta.
• Se discute sobre las • ¿Cuáles son las dudas
respecto al tema desarrollado?
aplicaciones de la
citogenética molecular.

Referencia bibliográfica y de
imágenes
• Nussbaum, R. (2016). Thompson & Thompson, Genética en medicina.
8ª ed. Barcelona. Elsevier. http://bit.ly/38a4NYS
• Martinez, ML. (2010). Resumen de la evolución de las técnicas de
citogenética y genética molecular para la identificación de las
alteraciones genéticas del desarrollo embrionario. SEMERGEN 2010;
36(9):520-525.
• Espinet, B. y Col. (2015). Técnicas de citogenética molecular y sus
aplicaciones. Hospital de Mar de Barcelona.
• Torres E. (2018). Ventajas y limitaciones de la citogenética en la
medicina actual. Mem. Inst. Investig. Cienc. Salud. 2018; 16(2): 107-112.
 Nuestro ADN

Metodología Actitud Resultado

CREA IMPACTO POSITIVO Y

Colaboración
Significativa
Aprendizaje
Experiencial
Mentalidad
Emprendedora
Impacto
Social TRASCIENDE