Citogenética

Estado del Arte

T.M Miguel Quintana Arias

Programa Citogenética
Programa Citogenética
Programa Citogenética
 Análisis del avance científico de la citogenética.

Historia de la citogenética.
• Se inicia con los trabajos de Walter Flemming,
citólogo australiano y profesor de anatomía, quien
publico las primeras ilustraciones de los ADN
cromosomas humanos en 1882.

• Usando de tintes de anilina, consiguió encontrar

una estructura que absorbía fuertemente los tintes
de basófilo, en el núcleo lo que denominó
cromatina. B.N Azúcar
P (-)
• Flemming investigó también el proceso de la
división celular y la distribución de los cromosomas
en el núcleo hermano, proceso que denominó
mitosis (1) HX
Giemsa
• Waldeyer introdujo la palabra cromosoma, de las
palabras griegas “cuerpo coloreado” en 1888 (2)

• (1)Flemming, W. (1882) In Zellsubstanz, Kern und

Zellteilung. Vogel, Leipzig
• (2)Waldeyer, W. (1888) Über Karyokineze und ihre
Beziehung zu den Befruchtungsvorgängen. Arch. Mikr.
Anat. 32, 1
 Análisis del avance científico de la citogenética. La herencia mendeliana se
refiere al tipo de herencia que se

Historia de la citogenética. puede entender de forma

sencilla como consecuencia de
un solo gen.
• Después del “redescubrimiento” de la herencia Medeliana en 1900, Sutton y Boverien desarrollaron
formalmente la “teoría cromosómica de la herencia”(3,4).
• Sutton combinó las disciplinas de la citología y la genética cuando el se refirió al estudio de los cromosomas
como citogenética.

• (3)Sutton, W.S. (1903) The chromosomes in heredity. Biol. Bull. Wood’s Hole 4, 231.(4) Boveri, T. (1902) Über
mehrpolige Mitosen als Mittel zur Analyse des Zellkerns. Verh. Phys-med. Ges. (Würzburg,N.F.) 35, 67–90.

ADN
Genes
Proteínas
Análisis del avance científico de la citogenética.

Historia de la citogenética.
• El mejoramiento de los lentes ópticos,
técnicas de tinción y manipulación de Técnica
tejidos durante los siglos XIX y XX ayudo a la
citogenética continuar avanzando. Histológica

• Por ejemplo, en 1912, von Winiwarter

concluyo que los hombres tienen 47
cromosomas y las mujeres 48 (5) Fijación Impregnación
• En 1923, Theophilus Painter estudiando
cromosomas meióticos de testículo, señalo
que los hombres tienen 48 cromosomas,
aunque dos años antes dijo en un reporte Aclaramiento
preliminar tenia 46 (6). Coloración
• También propuso el mecanismo de los
cromosomas sexuales X e Y.

• (6) Painter, T.S. (1923) Studies in mammalian spermatogenesis.

II. The spermatogenesis of man. J. Exp. Zool. 37, 291–336.(7)
Montaje
Levitsky G.A. (1924) Materielle Grundlagen der Vererbung.
Staatsverlag, Kiew
• •Un año después, Levitskyformulo el termino cariotipopara
referirse al ordenamiento ordenado de los cromosomas (7)
Análisis del avance científico de la citogenética.

Historia de la citogenética.
• La conclusión de Painter permaneció por mas de
30 años, a pesar de varios estudios por otros
autores obtenían en algunas de sus fotografías 23
pares de cromosomas. Quizás el hecho de situar a
los humanos como descendientes de los simios y
chimpancés (que tiene 48 cromosomas) les
influencio en no refutar ese resultado.

• Un hecho casual en el mejoramiento de

observación de cromosomas fue la aplicación de
soluciones hiposmóticas(10).

• (8) Fisher, A. (1946) Biology of Tissue Cells. Cambridge

University Press, Cambridge.(9) Hsu, T.C. (1952) Mammalian
chromosomes in vitro. I. The karyotype of man. J. Heredity 43,
167–172.(10) Hsu, T.C. and Pomerat, C.M. (1953) Mammalian
Chromosomes in vitro. II. A method for spreading the
chromosomes of cells in tissue culture. J. Heredity 44, 23–29

Concentración ADN

cromosomas
Análisis del avance científico de la citogenética.

Historia de la citogenética.
• En 1955, Ford y Hamerton usando la técnica del
shock hiposmótico, tratan de destruir el aparato del
huso mitótico de células precultivadas para
acumular células en metafase usando colchicina(11).

• Tjio fue a Suecia invitado por Levan a trabajar en su

laboratorio con fibroblastos de pulmón de embrión
humano y mejoran la técnica colchicina/shock
hiposmótico, y publican sus resultados en enero de
1956. Los cromosomas humanos tienen 2n=46
cromosomas.

• Ford y Hamerton pronto confirmaron el hallazgo de

Tjioy Levan (13).

• La era de la citogenética clínica estaba a la mano.

• (11) Ford, C.E. and Hamerton, J.L. (1956) A colchicine, hypotoniccitrate,

squash sequenceformammalianchromosomes. StainTechnol. 31, 247.(12)
Tjio, H.J. and Levan, A. (1956) The chromosome numbers of man.
Hereditas42, 1–6.(13) Ford. C.E. and Hamerton, J.L. (1956) The chromosomes
of man. Nature 178, 1020–1023.
Análisis del avance científico de la citogenética.

Historia de la citogenética.
• El concepto de que una anormalidad de los cromosomas
podría tener un efecto fenotípico no era aceptado aún.

• En 1932, Petrus Johannes Waardenburg sugirió que el

síndrome de Down podría ser la consecuencia de una
aberración cromosómica (14), un hecho que fue confirmado
27 años después por Jérôme Lejeuney y sus colegas (15).

• En 1959 se describieron otros 3 síndromes cromosómicos

que contribuyeron a la creencia de anomalías en los
cromosomas sexuales.
• Síndrome Turner con un solo cromosoma X y no Y (16).
• Síndrome Klinefelter con un X adicional (17). Síndrome XXX
(18).

• (14) Waardenburg, P.J. (1932) Das menschliche Auge und seine Erbanlagen. Bibliogr.
Genet. 7.(15)Lejeune, J. Gautier, M., and Turpin, R. (1959) Étude des chromosomes
somatiques de neuf enfants mongoliens. C.R. Acad. Sci. 248, 1721–1722(16) Ford, C.E.,
Miller, O.J., Polani, P.E., Almeida, J.C., de and Briggs, J.H. (1959) A sex-
chromosomeanomalyin a case ofgonadal dysgenesis(Turner’ssyndrome). LancetI, 711–
713.(17) Jacobs, P.A. and Strong, J.A. (1959) A case of human intersexuality having a
possible XXY sex-determining mechanism. Nature183, 302–303.(18) Jacobs, P.A. Baikie,
A.G., MacGregor, T.N., and Harnden, D.G. (1959) Evidence for the existence of the
human “superfemale.” Lancetii, 423–425
Análisis del avance científico de la citogenética.
Historia de la citogenética.
• En 1960 se reporto el “cromosoma filadelfia”
en la leucemia mieloide crónica (23),
demostrandose por primera vez una
asociación entre cromosoma y cáncer.
• En 1963, se reporto el síndrome de cridu chat
(“maullido del gato”) que involucra deleción
del brazo corto del cromosoma 5 (24, 25).
• En 1964 se describió el síndrome XXY
señalando el comportamiento agresivo y
retardo mental de estos pacientes (26),
• En 1965 se describió la inestabilidad
cromosómica con enfermedades asociadas al
síndrome de Bloom y anemia de Fanconi(27,
28).
• (23) Nowell, P.C. and Hungerford, D.A. (1960) A minute
chromosome in human chronic granulocytic leukemia. Science
132, 1497.(24) Lejeune, J., Lafourcade, J., Berger, R., et al. (1963)
Trois cas de délétion partielle du bras court d’un chromosome 5.
C.R. Acad. Sci. (Paris) 257, 3098–3102.(25) Lejeune, J., Lafourcade,
J., Grouchy, J. de, et al. (1964) Délétion partielle du bras court du
chromosome 5. Individualisation d’un nouvel état morbide.
Semin. Hôp. Paris 18, 1069–1079.(26)Jacobs, P.A., Brunton, M.,
Melville, M.M., Brittain, R.P., and McClermont, W.F. (1965)
Aggressivebehavior, mental subnormalityand the XYY male.
Nature 208, 1351–1352.(27) Schroeder, T.M., Anschütz, F., and
Knopp, F. (1964)
SpontanechromosomenaberrationenbeifamiliärerPanmyelopathie
. Hum. Genet. I, 194–196.(28) German, J. Archibald, R., and Bloom,
D. (1965) Chromosomal breakage in a rare and probably
genetically determined syndrome of man. Science 148, 506
-El cromosoma Filadelfia se encuentra en las
células leucémicas de casi todos los pacientes con Oncogenes
Leucemia mieloide crónica (CML).
-El intercambio de ADN entre los cromosomas
ocasiona la formación de un nuevo gen (un
oncogén) llamado BCR-ABL.
-Este gen produce la proteína BCR-ABL, la cual es
un tipo de proteína tirosina- cinasa.
-La leucemia mieloide crónica comienza Genes supresores de
durante la división celular, cuando se tumores
intercambia el ADN entre los
cromosomas 9 y 22.
-Parte del cromosoma 9 va al
cromosoma 22 y parte del cromosoma
22 pasa al 9.
-Ocurre una translocación, que da como resultado un
cromosoma 22 que es más corto de lo normal.
-Este nuevo cromosoma anormal se llama cromosoma
Filadelfia.
-El cromosoma Filadelfia se encuentra en las células
leucémicas de casi todos los pacientes con (CML).
-El intercambio de ADN entre los cromosomas ocasiona la formación de un nuevo
gen (un oncogén) llamado BCR-ABL.
-Este gen produce la proteína BCR-ABL, la cual es un tipo de proteína llamada
tirosina cinasa. (autofosforilación) Proteinas ---atp
-Esta proteína causa que las células de la CML crezcan y se dividan sin control.
Análisis del avance científico de la citogenética.

Historia de la citogenética.
División
• Se avanzaron en las técnicas celular

para cariotipos.
• En 1960, Nowell encuentra la
acción de la fitohemaglutinina
del frijol como componente
mitógeno (23, 24) permitiendo
el uso de la sangre periférica
como muestra.
• Antes se aspiraba la medula
ósea.
• (23) Nowell, P.C. and Hungerford, D.A. (1960) A minute chromosome
in human chronic granulocytic leukemia. Science 132, 1497(24)
Nowell, P.C. (1960) Phytohaemagglutinin: an initiator of mitosis in
cultures of normal human leukocytes. Cancer Res. 20, 462–466
Análisis del avance científico de la citogenética.

Historia de la citogenética.
• En 1968 Torbjörn Caspersson observo al teñir
cromosomas de plantas con quinacrina
fluorescente no se teñía todo el cromosoma,
sino producía una serie de brillos y zonas
oscuras (25).
• Luego posteriormente pudo reportar patrones
de “bandeos” únicos en pares de cromosomas
humanos (26,27).
• Postularon que la quinacrina de mostaza
(QM) se ligan preferencialmente a los
residuos de guanina en zonas ricas en G-C
produciendo “estriaciones” brillantes,
mientras que las zonas ricas en A-T son
oscuras.

• (25) Caspersson, T., Farber, S., Foley, G.E., et al. (1968)

Chemical differentiation along metaphase chromosomes.
Exp. Cell Res. 49, 219–222(26) Caspersson, T., Zech, L.,
and Johansson, C. (1970) Differential binding of alkylating
fluorochromesin human chromosomes. Exp. CellRes. 60,
315–319.(27) Caspersson, T., Lomakka, G., and Zech, L.
(1971) The 24 fluorescence patterns of the human
metaphase chromosomes—distinguishing characters and
variability. Hereditas67, 89–102
Análisis del avance científico de la citogenética.

Historia de la citogenética.
• En 1971 Drets y Shaw publicaron un método de bandeo de
cromosomas usando álcali y pre tratamientos salinos seguido
con tinción de Giemsa.
• (28) Drets, M.E. and Shaw, M.W. (1971) Specific banding patterns in human chromosomes.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 68, 2073–2077
Análisis del avance científico de la citogenética.
Ac

T.H Era molecular. Radioisotopos

• Ya hacia fines de los años ’60 Gall y Pardue

publicaron un trabajo en el cual demostraban
la localización espacial del ARN ribosómico
marcado radiactivamente en ovocitos.

• FISH: Este trabajo erigió los cimientos sobre los

cuales se desarrolló en años posteriores una
diversidad de metodologías basadas en la
hibridización de fragmentos de ácidos
nucleicos sobre cromosomas en metafase y
núcleos en interfase, denominadas técnicas de
hibridización in situ.

• Hacia principios de la década del ’80 se

desarrollaron metodologías de hibridización in
situ de ADN-ADN con marcación radiactiva.
• Sondas con secuencias repetitivas, marcadas
con fluoróforos
Análisis del avance científico de la citogenética.

Era molecular
• CISH: Hibridación in situ cromogénica.
Cromógeno IHQ
Marcadas (DAB)+ EZ
directa o
con (Peroxidasa)
indirecta
DIG o
Biotina

Hebras
complementarias
AC 2°
ADN
AC 1°
Hibridar
Análisis del avance científico de la citogenética.

Nuevas técnicas.
• Las técnicas M-FISH o SKY se basan en la cohibridación de 24 sondas de pintado
cromosómico marcadas con fluorescencia sobre metafases.
• El resultado de la hibridación permite visualizar simultáneamente cada par
cromosómico de un color diferente.
• Estas técnicas son muy útiles para determinar de forma inequívoca cariotipos complejos
y cromosomas no identificables con las técnicas de bandeo (cromosomas marcadores).
• Esta técnica presenta una limitación en aquellas patologías con un índice proliferativo
bajo debido a la necesidad de obtener células en división.
• Este tipo de sondas están diseñadas para diferenciar cada uno de los cromosomas
individualmente, o detectar simultáneamente los 46 cromosomas humanos completos.
La capacidad de detectar inversiones, deleciones, amplificaciones o translocaciones
tiene un límite de resolución de 2-3Mb.
Análisis del avance científico de la citogenética.

Nuevas técnicas.
• Multibanding FISH (RxFISH), técnica similar a las de M FISH o SKY, que permite la generación de
un patrón de bandas de distintos colores para cada cromosoma.
• Dicha metodología se basa en las homologías genómicas que existen entre la especie humana y
diferentes especies de mono.
• Las ventajas que ofrece respecto a las de M-FISH o SKY radica en que la de Rx FISH permite la
identificación de alteraciones estructurales dentro de un mismo cromosoma (inversiones y
translocaciones) y en que los puntos de rotura de los posibles reordenamientos pueden ser
localizados con mayor exactitud.
Análisis del avance científico de la citogenética.

Hibridación genómica comparada

(HCG).
• Es una técnica citogenética
molecular que permite detectar
cambios numéricos de
secuencias de ADN (deleciones,
ganancias y amplificaciones) en
un tejido tumoral.
• Dicha técnica se basa en la
hibridación in situ del ADN
tumoral y de un ADN control (+)
marcados con fluorocromos de
distinto color sobre metafases
normales.
• Después de la hibridación, las
variaciones numéricas del ADN
tumoral se cuantifican mediante
el coeficiente de intensidad de
fluorescencia entre el ADN
tumoral y el ADN normal.
Citogenética Molecular.
Cariotipo Espectral.
Distinguir las estructuras morfológicas de los cromosomas

ADN
• El ácido desoxirribonucleico (ADN) es un
polímero de alto peso molecular formado
por dos cadenas o hebras de monómeros
llamados nucleótidos. Cada nucleótido está
conformado por moléculas más pequeñas:
una base nitrogenada (adenina, guanina,
citosina o timina), un hidrato de carbono
(desoxirribosa) y un grupo fosfato.
• La estructura de los nucleótidos es siempre
la misma, sólo difieren en la base
nitrogenada que puede ser; púricas
(adenina, guanina) o pirimídicas (timina y
citosina).
• El conocimiento de los componentes del
ADN y otros antecedentes permitió a los
científicos Watson y Crick construir un
modelo tridimensional de la molécula.
• Este modelo propone la presencia de dos
• cadenas de nucleótidos entrelazadas en
forma de doble hélice. Cada una de estas
hebras se une a la otra por las bases
nitrogenadas mediante puentes de
hidrógeno, siguiendo un patrón fijo: la
adenina se une a la timina y la guanina a la
citosina. Los nucleótidos de cada cadena se
unen a través de los grupos fosfato y la
desoxirribosa
 Distinguir las estructuras morfológicas de los cromosomas

ADN
• El modelo descrito permite explicar cómo se pueden sintetizar nuevas moléculas de
ADN: el proceso comienza con la ruptura de los enlaces de hidrógeno y la consecuente
separación las dos cadenas complementarias.

• Esto permite que cada una de las cadenas sirva de molde para formar una cadena
complementaria nueva.

• En este proceso participa una serie de enzimas, una de ellas es la ADN polimerasa, que
permite el enlazamiento de los nucleótidos en las cadenas complementarias nuevas.
• Este modelo de duplicación del ADN (replicación o autoduplicación) se denomina
semiconservativo, ya que cada ADN sintetizado está formado por una cadena
“antigua”, que sirvió de molde, con la otra “nueva”.

• El ADN es capaz de determinar el fenotipo de un organismo a través de un proceso

denominado expresión génica.

• Mediante dicho proceso la información contenida en los genes del ADN es utilizada
para especificar la constitución de las proteínas de la célula.
• Recordemos que un gen tiene información específica para la síntesis de una proteína
determinada.

• Las proteínas que se sintetizan influyen en el fenotipo, desde rasgos visibles hasta otros
sólo observables bioquímicamente como es el caso de las enzimas y las proteínas
estructurales.

• Debido a que el ADN es una macromolécula, está imposibilitado para atravesar la

membrana nuclear para llegar hasta los ribosomas, lugar de síntesis de proteínas. Por
Síntesis de Proteínas
esto, se requiere la participación de otro ácido nucleico, el ácido ribonucleico (ARN), el
cual se diferencia del ADN en que el nucleótido de ARN posee uracilo en vez de timina
y en que el hidrato de carbono es una ribosa. Este ARN, por ser de menor peso
molecular que el ADN, sí puede salir por los poros de la membrana nuclear hacia los
• ribosomas.
Distinguir las estructuras morfológicas de los cromosomas

ADN.
• Transcripción: la información contenida en un gen del ADN se copia en un ARN mensajero
(ARNm) con la participación de la enzima ARN polimerasa.
• De esta manera, es el ARNm el que lleva la información codificada en cuanto al tipo, cantidad y
orden de los aminoácidos que formarán la futura proteína.
• Una vez que el ARNm ha copiado toda información desde el ADN sale del núcleo hacia los
ribosomas ubicados en el citoplasma celular.
• Notemos que el gen se copia de cada hebra de ADN separados (hebra templado del gen 1 y
hebra templado del gen 2).
• Copia del ADN se realiza en sentido 5’ – 3’
Distinguir las estructuras morfológicas de los cromosomas

ADN.
• Traducción: la información transcrita en el ARNm se utiliza para determinar la secuencia (orden) de
aminoácidos de una proteína.
• Una secuencia de tres bases nitrogenadas consecutivas o triplete del ARNm se llama codón.
• Éste lleva información, que se traduce en los ribosomas, para un aminoácido específico que
formará parte de la proteína.
• Los ribosomas se unen al ARNm y lo recorren “traduciendo” la información de sus codones.
• Aquí entra en juego otro tipo de ARN denominado ARN de transferencia (ARNt), que se encarga de
transportar un aminoácido determinado hasta los ribosomas.
 Distinguir las estructuras morfológicas de los cromosomas

Cromosomas Aparato microtubular en

Morfología del cromosoma: forma de huso, formado
durante la división
-Microscópicamente los cromosomas se observan como celular, cuya función es
estructuras delgadas y alargadas. posibilitar la migración y
la correcta separación de
-Tienen un brazo corto y otro largo separados por un los cromosomas en la
meiosis o de las
estrechamiento, llamado centrómero.
cromátidas en la mitosis.
-El brazo corto se designa como p y el brazo largo como q.

-El centrómero es una parte integral del cromosoma y,

funcionalmente, es el punto donde se une el huso mitótico.

-Los cromosomas metafásicos humanos presentan cuatro

formas básicas y se pueden clasificar de acuerdo a dos
criterios:1) Tamaño (longitud de los brazos corto y largo,)
2) Posición del centrómero. Cinetocoro: estructura de disco
trilaminar, situada en la zona
Cromosomas: centromérica de cada
cromosoma, donde ocurre la
-Cromosomas metacéntricos tienen brazos corto y largo de polimerización de los
una longitud similar, con el centrómero en el punto medio. microtúbulo del huso mitótico
que permitirán el
- Cromosomas submetacéntricos tienen los brazos corto y
desplazamiento de los
largo de longitudes desiguales, con el centrómero más cromosomas durante la mitosis
próximo a uno de los extremos.
-Cromosomas acrocéntricos tienen el centrómero muy
Telómero: región final de un
cerca de un extremo, con un brazo corto muy pequeño.
cromosoma que posee ADN no
-Cromosomas telocéntricos tienen el centrómero en un codificante que protegen de
extremo, de manera que las cromatidas se observan como cualquier daño. Con el tiempo los
filamentos rectos. telomeros se acortan tanto que las
células ya no pueden dividirse.
Distinguir las estructuras morfológicas de los cromosomas

Glosario.
• Citogenética: Parte de la genética que estudia los cromosomas y las
enfermedades relacionadas, causadas por un número o una estructura
anormales de los mismos.
• Cariotipo: Conjunto de los cromosomas de una célula, de un individuo
o de una especie, después del proceso en que se unen por pares de
cromosomas idénticos y se clasifican según determinados criterios.
• Aneuploídias: es una condición en la cual se presenta una mutación en
el número de cromosomas.
• Transcripción: síntesis de ARNm
• Traducción: síntesis de proteínas.
• FISH: hibridación in situ fluorescente.
• CISH: hibridación in situ cromogénica.
• HGC: hibridación genómica comparada.
Distinguir las estructuras morfológicas de los cromosomas

Ideograma.

Hombre XY Mujer XX
Distinguir las estructuras morfológicas de los cromosomas

Importancia Ideograma.
Trisomía par 21.
Cariotipo normal.
-Este cariotipo es un ejemplo
del Síndrome de Down, la
anomalía numérica más
frecuente en recién nacidos.
Se caracteriza por un
cromosoma 21 extra y el
cariotipo se escribe así:
47,XX,+21. La clave de la
descripción de cariotipo es:
47: el número total de
cromosomas (46 es lo normal).
XX: los cromosomas sexuales
(femeninos).
+21: indica que el cromosoma
extra es un 21.
 Distinguir las estructuras morfológicas de los cromosomas

• El conjunto de cromosomas de un individuo

Ideograma. F. elásticas

constituye su cariotipo.
• Para estudiar los cromosomas humanos se Antimitótico
cultivan linfocitos y mientras se están dividiendo
se tratan con colchicina, que interrumpe las
mitosis en metafase, que es el momento más
adecuado para observar los cromosomas.
• Después se someten a una solución hipotónica
para que se hinchen y dispersen, y por último se
tiñen con orceína acética y se fotografían a
través del microscopio.
• Los cromosomas se diferencian por su tamaño y
por su forma;
• En 1960 un grupo de expertos acordó ordenar
los cromosomas humanos de mayor a menor
tamaño, y dentro del mismo tamaño, por la
posición del centrómero.
• Los cromosomas se sitúan alineados por el
centrómero, y con el brazo largo siempre hacia
abajo.

• Existen 7 Grupos de cromosomas al ser

ordenados de mayor a menor tamaño:
• Cromosomas grandes: Grupo A --- 1,2 y 3 Meta y
Sub
• Grupo B --- 4 y5 Submeta

• Cromosomas medianos: Grupo C --- 6,7,8,9,10,11

y 12 + El X Submeta
• Grupo D --- 13,14 y 15 acrocentricos

• Cromosomas pequeños: Grupo E --- 16,17 y 18

Meta y Submeta

• Grupo G--- 21 y 22 + y acrocentricos

Técnica cariograma.
 Diferenciar técnicas asociadas a la
obtención de cromosomas. Técnicas en citogenética.
Aplicaciones clinicas.
• Estudio de los cromosomas en material directo
Cariograma en sangre para detectar
anomalías cromosómicas
• El análisis de cada metafase se realiza sistemáticamente (cromosomopatías) en niños con
comenzando con el recuento de los cromosomas y la trastornos genéticos, malformaciones
comparación de cada uno con su homólogo. congénitas, retraso mental, retraso
• Giemsa; se ordenan los cromosomas por tamaño de la pubertad, trastornos gonadales,
(midiendo el largo de los brazos). estudio de parejas con pérdidas
• Se elabora un cariotipo. reproductivas recurrentes o con
antecedentes de niños malformados
• El análisis del cariotipo es fundamental para identificar y
o mortinatos.
comparar especies, para estudiar variaciones dentro de
Exámenes de diagnóstico prenatal
una misma especie.
para detectar anomalías
• Cariotipo: conjunto de cromosomas de una celula, un cromosómicas fetales en útero
individuo o una especie, donde los cromosomas se unen cuando se detecta una malformación
por pares de cromosomas identicos y se clasifican por en la ecografía a partir de las 12-14
determinados criterios. semanas de gestación o cuando hay
• Ideograma: representación esquemática del tamaño, mayor riesgo de trisomía por edad
forma y patrón de bandas de todos los cromosomas. materna avanzada.
• Los cromosomas se ordenan alineados por el centromero Exámenes cromosómicos de tejidos
y con el brazo largo siempre hacia abajo. de restos de aborto para detectar
alteraciones cromosómicas de
biopsias de piel para detección de
mosaicos, es decir, de diversas líneas
celulares en un mismo paciente.
Mosaico genético:
Trastorno por el cual un individuo tiene 2 o
mas poblaciones de células que difieren en
su composición genética.
Existen células con cromosomas extra.
Estos estudios se pueden realizar en células
sanguíneas, células de piel, óvulos y
espermatozoides.
Diferenciar técnicas asociadas a la
obtención de cromosomas.

Técnica en Citogenética.
• Cultivos celulares: El cultivo de células y tejidos comenzó en 1907 cuando el investigador Ross
Harrison publicó el trabajo “ Observaciones de la fibra nerviosa viva en desarrollo”.
• En el mismo se describía una nueva técnica, el cultivo de tejidos para demostrar
experimentalmente cómo se originan las fibras nerviosas.
• Utilizando técnicas asépticas, Harrison tomó fragmentos del tubo neural de un embrión de rana, y
lo depositó en una gota de líquido linfático fresco (“medio de cultivo”) de rana colocado sobre un
cubreobjetos estéril.
• Una vez que la linfa coaguló, invirtió el cubre objeto sobre un portaobjeto de vidrio que poseía una
depresión, creando así un cultivo en gota suspendida, técnica utilizada por los microbiólogos para
estudiar las bacterias.
• Luego de numerosas y periódicas observaciones al microscopio pudo describir el desarrollo de
fibras nerviosas in Vitro a partir de las neuronas presentes en el tejido extirpado.
• Así además de argumentar el proceso ocurrido, resolvió los problemas del cultivo celular, como
el medio, la observación y la contaminación. (Dicto las bases para realizar cultivos celulares).
Diferenciar técnicas asociadas a la
obtención de cromosomas.

Técnicas en citogenética.
• Se podría hablar de tres tipos de cultivos:

• Cultivos celulares: Estudio In Vitro, constituido por células que pueden crecer y
mantenerse en suspensión (monocapa) por mas de 24 horas en condiciones
controladas.

• Cultivos primarios: Son cultivos preparados directamente de Biopsias (fragmentos

de tejidos o de órganos).

• Cultivos secundarios: Supone una disgregación celular ya sea por medios

enzimáticos o mecánicos. La suspensión celular se puede cultivar como una
monocapa adherente o en suspensión en el medio de cultivo.

• Cultivo de líneas celulares: Implica forzar a dividirse indefinidamente

determinadas células. Entre los cultivos de células más promisorios de interés en
medicina humana se encuentran las líneas de células madre embrionarias
humanas. Proviene de un cultivo primario que ha sido sometido a procesos que le
permitan la capacidad de ilimitada de dividirse (tumor). UV
Diferenciar técnicas asociadas a la
obtención de cromosomas.

Técnicas en citogenética.
• En 1960 Moorhead describió que los linfocitos se diferenciaban de la sangre
periférica pero que podían entrar en mitosis en condiciones in Vitro.
• Con este descubrimiento se pudo realizar el cariotipo a partir de sangre periférica,
lo que tiene varias ventajas: es un tejido fácil de obtener, permite la obtención de
gran número de metafases.

• Normalmente, los linfocitos son células inactivas, por lo tanto tienen que ser
estimuladas para dividirse.

• El agente estimulante más comúnmente utilizados es la fitohemaglutinina (PHA).

Diferenciar técnicas asociadas a la

Técnicas en citogenética.
obtención de cromosomas.

Ventajas del cultivo de Linfocitos

• Los linfocitos de sangre periférica, como sistema celular de ensayo, presentan una serie de características que los hacen
especialmente apropiados para su utilización en estas técnicas:

• a. Disponibilidad fácil y en gran número (1 ml de sangre contiene de 1 a 3 millones de linfocitos).

• b. Crecimiento en cultivo fácil tras ser estimulados con un mitógeno (normalmente fitohemaglutinina). Los linfocitos T son
los primeros en ser estimulados a entrar en mitosis.

• c. Poseen una amplia distribución en el organismo. Los linfocitos T no están permanentemente circulando, sino que hay una
recirculación entre la sangre y los tejidos extravasculares.

• d. Los linfocitos circulantes, normalmente, se encuentran en fase de no división (G0). Al cultivarlos en presencia del
mitógeno se estimula la división mitótica, lo que permite el estudio de los cromosomas en metafase.

• e. Los linfocitos tienen una vida media de unos cuatro años, aunque se pueden encontrar linfocitos que pueden sobrevivir
durante varias décadas. Esta propiedad es interesante, junto con el hecho de hallarse en fase de no división en el torrente
circulatorio, porque permite detectar efectos clastogénicos transcurrido algún tiempo desde la exposición, ya que las
lesiones en el ADN persisten.

• Otros materiales para la obtención de cromosomas en cultivo (método indirecto) también pueden ser fibroblastos, que
pueden ser extraídos a partir de tejido muscular o epitelial. Después de una autopsia los tejidos de los pulmones o los
riñones también pueden utilizarse para cultivo de células primarias.

• En humanos son utilizados piel, líquido amniótico (amniocitos), células de testículo, tumores sólidos (linfoma) y material de
concepción.
Diferenciar técnicas asociadas a la obtención
de cromosomas.

Técnicas en citogenética.
Protocolo.
• Procedimiento convencional utilizado para obtener cromosomas a partir de cultivo primario en suspensión de sangre
periférica:

• La sangre que se utiliza debe estar en condiciones de máxima esterilidad con heparina (anticoagulante), que puede ser
almacenada a temperatura ambiente (20 C0) hasta cinco días antes del inicio el cultivo.

• 0,3-0,5 ml de sangre en total de 10 ml de medio de cultivo (RPMI), con suero fetal bovino y PHA, se cultiva durante 72 horas
a 37 °C.

• Transcurridas las 72hs + 2hs se añade de Colcemid (colchicina) que inhibe las anafases (cromosomas se mueven a los polos)
por desintegración del huso mitótico, y se centrifuga.
•
• Se elimina el sobrenadante y las células son tratadas en una solución salina de ClK 0,075 M por 20-30 minutos.
•
• Se centrifuga, se descarta el sobrenadante y las células son fijadas con metanol- ácido acético (3:1) que se añade
rápidamente mientras se agita vigorosamente.

• Se centrifuga y se lavan en fijador nuevo tres veces, cada vez manteniendo las células en suspensión.
• En este último paso las células pueden ser almacenados durante años a menos 20 °C antes de realizar los extendidos
celulares.

• La suspensión de células es goteada en portaobjetos y se deja a temperatura ambiente para el secado.

• Finalmente se colorean con Giemsa u otro colorante.

• Se observan al microscopio y se fotografían para armar los cariotipos.

Diferenciar técnicas asociadas a la obtención
de cromosomas.
Material directo y preparados
cromosómicos. Material en división activa “in vivo” como
médula ósea, bazo, epitelio intestinal, muy
• La obtención de preparaciones para el análisis de cromosomas se realiza mediante útil en estudios citogenéticos de mamíferos,
diversas técnicas como el aplastado o la dispersión celular. Estas técnicas generalmente aves y reptiles. Un segundo tipo de material
presentan las siguientes etapas: es aquel tejido que tiene división
• a. Obtención del material. relativamente infrecuente en el organismo
como corazón, riñón e hígado a partir de los
• b. Pretratamiento: muchos tejidos requieren el uso de soluciones que permitan dispersar cuales se pueden realizar cultivos celulares.
o separar los cromosomas. En animales se usan soluciones salinas (Cloruro de Potasio, Un tercer tipo de material que normalmente
Citrato de Sodio, Cloruro de Sodio) o agua destilada, provocando un choque hipotónico a no se divide “in vivo” como los linfocitos de
la célula. Para estudiar las características de los cromosomas de una especie, o para sangre periférica de mamíferos, aves y
comparar especies distintas, se pueden utilizar agentes antimitóticos (colchicina, colcemid, reptiles. El cultivo más difundido en
hidroxiquinoleína, etc.) que actúan como inhibidores de la formación del huso mitótico. De humanos, es el de linfocitos de sangre
esta manera el número de metafases se incrementa de forma significativa. periférica de 72 horas. Este método es
rápido, relativamente económico y provee
un adecuado número de células en división
• c. Fijación: tiene por finalidad preservar las estructuras celulares que nos interesan. El (Watt y Stephen, 1986).
líquido fijador varía según la técnica a utilizar. El fijador más utilizado para técnicas con
tinción estándar es el llamado 3:1 (metanol o etanol: ácido acético). Para la realización de
técnicas inmunocitoquímicas en general se utilizan fijadores del tipo de los glutaraldehidos
o metanoles.

• d. Coloración: en las técnicas estándar se usan varios colorantes tales como: orceína,
hematoxilina acética, Feulgen y Giemsa. La elección del colorante depende de los fines
perseguidos. En inmunocitoquímica se utilizan fluorocromos con el fin de colorear la
cromatina (DAPI, Hoechst, Ioduro de propidio).
•
• e. Montaje: esta etapa consiste en preservar el preparado colocando un cubreobjeto y
sellándolo con parafina líquida, esmalte de uñas, bálsamo de Canadá o resinas sintéticas.
 Bandeo cromosómico.
• EL BANDEO CROMOSÓMICO con la técnica convencional de
tinción con Giemsa los cromosomas se tiñen intensamente y en
forma homogénea y se los puede contar y agrupar por su aspecto
general y eso era lo único que se podía hacer en los primeros
cariotipos.

• La identificación de cada cromosoma vino posteriormente con las

técnicas de bandeo. Estas técnicas que generan bandas
transversales permiten definir a cada cromosoma y estudiar su
estructura.

• Cada cromosoma tiene un patrón de bandas característico y

existen varias técnicas de tinción con fines específicos (Tabla I).

• El bandeo G es el más utilizado en citogenética clínica.

• El bandeo G se logra con un tratamiento controlado con tripsina

antes de la coloración con Giemsa y produce bandas claras y
oscuras en los cromosomas.

• Las bandas oscuras contienen ADN rico en bases A-T y las bandas
claras contienen ADN rico en G-C.

• Cuando un cromosoma está más elongado puede mostrar un

mayor número de bandas y esto se aprovecha para estudiarlo con
mayores detalles.

• La metodología que permite buscar alteraciones estructurales

mínimas se conoce como bandeo de alta resolución y se logra
obteniendo un buen cultivo y con preparaciones hechas en
metafase.

• Los cromosomas en la mitad de la metafase muestran un nivel de

resolución de 400 bandas mientras que los de alta resolución
alcanzan niveles de resolución de 550 y hasta de 850 bandas.
 Aplicaciones
• Bandeo G: recibe este nombre debido a que se utiliza el
colorante Giemsa, descubierto por Gustav Giemsa en
1948.
• Este bandeo ocurre por una respuesta diferencial de los
cromosomas al ser pre-tratados con tripsina antes de
ser teñidos.
• Corresponden a:
• Genes de replicación tardía, (regiones oscuras-
cromatina condensada) no puede ingresar la
maquinaria replicativa, son regiones ricas en A-T.
• Genes de replicación temprana, ricos en G-C (regiones
claras).
 Aplicaciones.
• Bandeo G: las aplicaciones del bandeo
G son las siguientes
• Corroborar alteraciones cromosómicas
previstas en el cuadro clínico.
• Identificación de cromosomas o
regiones cromosómicas implicadas en
rearreglos evidentes con tinción
homogenea. (patron de bandas?)
• Detectar aberraciones estructurales
que podrían pasar desapercibidas con
la técnica de tinción homogénea.
• Correlación fenotipo – cariotipo para
delinear nuevos sindromes
cromosómicos.
• Localización y mapeo de genes en
cromosomas y bandas específicas.
 Aplicaciones.
• Bandeo Q: Utiliza un colorante, llamado
mostaza de quinacrina para teñir los
cromosomas.
• Primer método de bandeo descubierto por
Caspersson en 1968.
• Detectar regiones ricas en A-T
(fluoresecente) y regiones opacas con
mayor concentración de G-C.
 Aplicaciones.
• Bandeo Q:
 Aplicaciones.
• Bandeo R:
• Tinción con Giemsa
previamente tratado
con calor.
• Adecuado para
mamíferos.

• Bandeo T:
 Aplicaciones.
Bandeo C: técnica descubierta por casualidad en un
experimento en donde ADN satelite de un ratón
marcado fue hibridizado in situ (Arrighi y Hsu 1971).
Esta tecnica produce una tinción oscura selectiva con
Giemsa sobre la heterocromatina constitutiva.
 Aplicaciones.
• Bandeo C:
 Bandeo cromosómico
• EL CROMOSOMA METAFÁSICO

• Todos los cromosomas alcanzan en la metafase su máximo grado de organización, ordenamiento y compactación.
• Cada cromosoma metafásico está constituido por dos cromátides unidas por el centrómero. Este centrómero o
constricción primaria divide al cromosoma en dos brazos que se designan p (petit) para el brazo corto y q para el
brazolargo.
• De esa manera, por ejemplo, 7p es el brazo corto del cromosoma 7 e Y q es el brazo largo del cromosoma Y.
• La posición del centrómero permite clasificar a los cromosomas en tres tipos principales:
• Metacéntricos: cuando el centrómero es más o menos central y los brazos son de aproximadamente igual longitud.
• Submetacéntricos: cuando el centrómero está alejado del centro y los brazos son desiguales.
• Acrocéntricos: cuando el centrómero está cerca de uno de los extremos y uno de los brazos es muy corto.

• Los cromosomas acrocéntricos humanos tienen satélites unidos por un tallo, excepto el Y.
• Ellos son los cromosomas 13, 14, 15, 21 y 22 y dichos satélites están constituidos por heterocromatina.
 Repaso
• LOS GRUPOS CROMOSÓMICOS

• Existen 24 cromosomas humanos distintos: los 22 autosomas, el X y el Y.

• Estos se pueden clasificar en 7 grupos, A, B, C, D, E, F y G, de acuerdo a su morfología y su tamaño de
mayor menor.
• Estos grupos se conformaron de acuerdo a la tinción standard con Giemsa que no permitía reconocer a
cada cromosoma individualmente y solo su pertenencia a un grupo.
• De todos modos, sigue siendo de utilidad par denominarlos por grupos cuando hay dificultades con el
bandeo.
 Anomalías cromosómicas
• Los reordenamientos estructurales implican rupturas y
uniones cromosómicas que pueden ocurrir en un
mismo cromosoma o entre 2 o mas de ellos (dan como
resultado complementos balanceados o no
balanceados).
• Anomalía cromosómica balanceada: no hay perdida
(delecciones), ni ganancias (duplicaciones) de material
hereditario.
• Anomalía cromosómica desbalanceada: si hay perdida
y ganancia de material hereditario, las cuales pueden
causar malformaciones congénitas, desarrollo sexual
alterado y discapacidad intelectual.
 Anomalias cromosomicas
• Cariotipo con Giemsa- Tripsina: tiene una
resolución en el rango de 450 a 550 bandas.
• La resolución de esta técnica permite observar
perdidas y ganancias de ADN.
 Anomalías cromosomicas
• FISH: puede detectar lesiones mas pequeñas
como microdelecciones y síndromes de micro
duplicación.
• Las sondas para FISH permite la observación
de secuencias especificas (locus). Este estudio
deberá realizarse en caso de sospecha
concreta.
 Anomalias cromosomicas
• MLPA: Técnica de amplificación de sondas
dependiente de ligandos múltiples.
• Técnica de reacción en cadena de la polimerasa
(PCR).
• PCR múltiple: que utiliza mas de 40 sondas.
• Cada sonda para una región de interés, permite
evaluar varias localizaciones en un mismo test.
• Permite observar perdidas y ganancias de 50 a 70
pares de bases.
 Anomalías cromosómicas
• Síndromes cromosómicos por anomalías numéricas.
• Sindrome de Down (trisomia 21): patologia que se
origina por la presencia de un cromosoma extra o de
un segmento especifico del cromosoma 21.
• Forma mas frecuente de retraso mental de origen
cromosómico.
• Fenotipo: retraso en el crecimiento uterino, hipotonía,
retraso en el desarrollo, déficit intelectual, cardiopatía
congénita, diabetes, obesidad.
 Anomalías cromosómicas
• Síndrome de Edwards (trisomía 18): segundo
síndrome mas común que afecta el numero de
autosomas y se debe a un cromosoma 18
extra.
• Retraso en el crecimiento intrauterino
• Mal formación cardiaca, renal, s.n.c,
gastrointestinal.
 Anomalias cromosomicas
• Sindrome de Patau (trisomia 13): síndrome
multimalformativo grave.
• Fenotipo: Macroftalmia, microcefalia,
malformaciones cardiacas.
 Anomalías cromosómicas
• Síndrome de Turner: monosomía
del cromosoma X.
• Afecta a pacientes fenotipicamente
femeninos (resultado de la perdida
de un cromosoma sexual, ya sea X o
Y o por alteraciones estructurales
en ellos)
• Fenotipo: Bajo peso, disgenesia
gonadal (pubertad atrasada),
anomalías cardiacas, hinchazón de
manos y pies.
 Anomalías cromosómicas
• Síndrome de Klinefelter (47 XXY): cromosoma
x extra en pacientes con fenotipo masculino.
• Fenotipo: Testículos pequeños, ginecomastia,
talla alta, problemas de aprendizaje e
infertilidad.
 Anomalías cromosómicas
• Síndrome de Wolff- Hirschhorn: se caracteriza
por una deleccion distal del brazo corto del
cromosoma 4.
• Fenotipo: Bajo peso para su edad.
• Dificultad para alimentarse
• Deficiencia en el crecimiento
• Microcefalia
• Defectos en el s.n.c
 Anomalías cromosómicas
• Síndrome de Cri-du-chat: se origina por la
eliminación de un segmento del brazo corto
del cromosoma 5.
• Fenotipo: Bajo peso, microcefalia, cara
redonda, puente nasal largo.
 Conclusiones
• Las cromosopatías originan múltiples anomalías
morfológicas en pacientes que requieren atención
pediátrica oportuna pero también la participación de
todos los médicos especialistas de nuestro sistema de
salud.
• En caso de sospecha de una entidad sindromica
originada por una alteración cromosómica tanto en
numero como en estructura, los pacientes deben ser
derivados con un genetista para evaluación clínica
(exámenes correspondientes, seguimiento del paciente
y asesoramiento integral a los padres)
Anomalías cromosómicas estructurales
• Estas consisten en alteraciones en la
estructura de los cromosomas.
• Estas alteraciones pueden ser de 2 tipos:
• Ganancia o perdida de material genético;
efecto fenotípico para el portador, ejemplo:
deleccion e inserción.
 Tipo de anomalias estructurales
• Delección: perdida de segmentos de un
cromosoma o de una cantidad pequeña de
material genético (1 gen).
• Ejemplos: síndrome de prader willi: delección
de una región del cromosoma 15 (paterno)
• Síndrome de angelman: deleccion del
cromosoma 15 (materno)
• Síndrome de Cri du chat: deleccion en el
cromosoma 5.
 Anomalías cromosómicas
• Inversión: se origina cuando el segmento de un
cromosoma cambia de orientación.
• Para que ocurra una inversión deben ocurrir 2
roturas dentro del mismo cromosoma, luego el
segmento gira 180º y se vuelve a unir.
• Tienen un impacto minimo sobre los individuos
portadores ya que no tienen perdida ni ganancia
de ADN.
• Si la inversion ocurre en una zona cromosomica
especifica y del tamaño si pueden tener efectos
negativos sobre los gametos.
• Translocación: intercambio entre 2 fragmentos de dos
cromosomas, el intercambio puede ser de 2 tipos:
• Translocación equilibrada: no ocurre aumento ni
perdida de material cromosómico, lo pacientes son
fenotípicamente normales pero pueden tener
problemas de esterilidad.
• Translocación desequilibrada: se produce aumento o
perdida de material cromosómico, tiene efectos
fenotípicos en los individuos.
• Los efectos son variables dependiendo de los
cromosómicos implicados.
• Existen 2 tipos de translocaciones
cromosómicas:
• Translocación recíproca: se producen por
transferencia de segmentos entre 2
cromosomas, se producen cambios en la
configuración pero no en el numero del
cromosoma.
• Translocación Robertsoniana: se produce por la
fusión de 2 cromosomas acrocentricos (13, 14,
15, 21 y 22). Estos cromosomas tienen el
centromero muy cerca del extremo final (brazo p
muy corto).
• Cuando se produce la fusion, se pierden los
extremos y los 2 cromosomas quedan unidos en
1, es por esto que los inidividuos portadores de
estas translocaciones tienen 45 cromosomas en
vez de 46.
 Nomenclatura en Citogenética
• Genomio: conjunto formado por un cromosoma de cada pareja en eucariontes (complemento cromosómico básico o
monoploide).
• Diploide: se denomina al individuo, linea celular o celula que tiene dos genomios completo, condicion normal en la mayoria
de los organismos superiores.
• El número diploide de cromosomas carácterísticos de una especie se indica normalmente como 2n= 46 n= 23
• Haploide: es la condición de un individuo, línea celular o célula que tiene un solo genomio. n= 23.
• Los Gametos son normalmente haploides.
Formulación cromosómica
 Formulación cromosómica.
• Las fórmulas cromosómicas comienzan
siempre indicando el número total de
cromosomas que posee el individuo seguido
de una coma y la especificación expresa de los
cromosomas sexuales que no tengan
anomalías estructurales.
• Un varón normal será 46, XY
• Una mujer normal será 46 XX
 Anomalías numéricas.
• Los individuos que tienen uno o unos pocos
cromosomas de mas o de menos se
denominan aneuploides.
• El individuo que tiene todos sus cromosomas
por parejas se les llama disómicos.
• El que tiene un cromosoma de mas se les
denomina trisomicos
• El que posee un cromosoma de menos se
denomina monosomico
 Anomalías numéricas.
• Si presenta alguna variación en el número de
cromosomas se indicara de la siguiente
manera:
• Sindrome de Turner (monosomia del
cromosoma X): 45 , X
• Sindrome de Down (varón): 47, XY, +21
 Anomalías estructurales
• Los individuos que tienen alterada la información
genética por pérdida, ganancia o cambio de posición
de segmentos cromosómicos, se dice que tienen
anomalías estructurales en sus cromosomas.
• Salvo casos de acumulación de la información genética
de dos cromosomas en uno por translocación,
corresponden a individuos con 46 cromosomas.
• Para poder establecer las formulas cromosomicas de
los individuos portadores de anomalias estructurales es
fundamental disponer de marcas a lo largo de los
cromosomas.
 Anomalías estructurales.
• Los cromosomas se encuentran divididos por el
centromero y este se divide en brazo corto (p) y
brazo largo (q).
• Cada brazo para su estudio se divide en regiones:
(Primer numero despues de p o q)
• Y estas regiones a su vez se dividen en bandas (las
bandas de referencia son las G, que tanto claras
como oscuras) y corresponden al segundo
numero despues del indicativo del brazo.
 Anomalías estructurales.
• El centrómero va a ser clave (punto de
referencia) en la nomenclatura.
• Las regiones se numeran desde el centrómero
al telómero, tanto en el brazo corto (p)como
en el brazo largo (q).
• La región 1 será siempre la más cercana al
centrómero y el número mas alto la mas
cercana al telomero.
 Anomalías estructurales.
• Para el segundo número (corresponde a las bandas),
las mas cercanas al centrómero tendrán numeración
mas baja.
• Las subbandas siguen la misma pauta que las bandas.
• La división entre regiones (primer numero) se dibuja
siempre en mitad de una banda; esta banda se
denominara como la primera banda del segmento de
numero mayor aunque en la representación parezca
que su mitad proximal (la mas cercana al centrómero)
pertenece a otra región.
Ideogramas Cromosomas.
 Distinta
Anomalías estructurales. resolución
(PB).

Ejemplo: la banda 2p21 --- será la

banda primera de la segunda
región del brazo corto del
cromosoma 2.
 Anomalías estructurales.
• Para la descripción de los cromosomas
pueden seguirse dos sistemas, el simplificado
o el detallado.
• En el sistema simplificado: los cromosomas
alterados se definen solo por los puntos de
rotura.
• En el sistema detallado: se describen los
cromosomas afectados de manera completa.
 Anomalías estructurales.
• Delección: es el cambio estructural que tiene
como resultado la perdida de un trozo de
cromosoma y de la información genética que
en este se contiene.
• Pueden ser de dos tipos:
• 1. Terminales: si la perdida es de un segmento
terminal (incluye un telómero)
• 2. Intersticiales o dilecciones: si la perdida es
de un segmento no terminal.
 Anomalías estructurales.
• Ejemplo: Varón con delección terminal del brazo
corto del cromosoma 4 con punto de rotura en
final de p1.5.
• Fórmula simplificada: 46, XY, del (4) (p1.5)

• Mujer con dilección intersticial del brazo corto del

cromosoma 5 con puntos de rotura y reunión en
p 14 y p13.
• Formula simplificada: 46, XX, del (5) (p13p14)
• Nota: en las formulas simplificadas cuando hay
dos puntos del mismo brazo se cita primero
siempre al mas cercano al centrómero.
 Anomalías estructurales.
• Cromosoma en anillo: consiste en la pérdida de dos
segmentos cromosómicos que incluyen ambos
telómeros, formandose un cromosoma circular. Es una
doble delección terminal con circularización del
cromosoma.
• El símbolo utilizado en la formulación para este tipo de
cromosomas es r.
• Ejemplo: Mujer con cromosoma 8 en anillo y puntos de
rotura y reunión en p23 y q24.
• Formula simplificada: 46, XX, r (8) (p23q24)
• Nota: Siempre se cita primero el punto de rotura y
reunión del brazo corto y después el del largo.
 Anomalía estructurales.
• Duplicación: consiste en la repetición o
duplicación de una sección del cromosoma.
• El símbolo utilizado para esta anomalía es
dup.
 Leucemia.
• Definición: Grupo de enfermedades malignas de la sangre.
• El diagnóstico temprano es esencial ----- Hematólogo ---
diagnóstico y tratamiento específico.
• Proliferación clonal autónoma y anormal de las células que
dan origen al resto de las células normales de la sangre.
• Célula temprana sufre un cambio genético que hará que se
produzca sin control una clona (colonia) anormal de sí
misma.
• Esta producción anormal es desordenada ya que las células
anormales se multiplican sin control por lo que ocupan el
espacio de la médula ósea normal y provocan anemia
progresiva, sangrado anormal y predisposición a
infecciones.
 Leucemia.

• Metástasis: células tumorales invaden otros

tejidos, producirá falla del funcionamiento del
órgano.
• S.N.C --- Leucemia aguda linfoblástica
 Leucemia mieloide aguda.
• Es una proliferación de células inmaduras (blastos) de
estirpe mieloide.
• El diagnóstico de las LMA se basa en los criterios de la
clasificación de la OMS (2009), que tiene en cuenta
datos citológicos, citoquímicos, inmunofenotípicos, y
genéticos.
• El estudio citogenético de los blastos completa la
caracterización de la leucemia.
• En esta enfermedad, la citogenética y la biología
molecular ayudan a decidir la terapia postremisión
(eliminar), con transplante hematopoyético (M.ósea).
 Leucemia mieloide aguda.
Citogenética --- Células leucémicas de – sangre
periférica y/o m. ósea. Detecta alteraciones en
un 60% de los casos (imprescindible).

Un gran número de anomalías genéticas de la

LMA son identificadas por RT –PCR o por FISH.

FISH: permite estudiar células en interfase,

ventaja sobre la citogenética convencional.
Clasificación citogenética con significado
pronóstico de las LMA.
Cariograma LMA.
 Leucemia mieloide crónica.
• En este tipo de Leucemia se produce una
translocación entre los cromosomas 9 y 22,
con la producción del cromosoma Filadelfia.
• El gen de fusión resultante (BCR- ABL).
• Desregulación de la actividad de las quinasas
intracelulares y permite la aparición de la
LMC.
• Tratamientos: inhibidores de la tirosinquinasa.
 Citogenética de la LMC.
• Se detectan en el 95% de los aspirados de m.
ósea la t(9;22)(q34;q11) y en el 5% restante se
verifican variantes de la translocación
convencional (cromosoma filadelfia críptico).
• La lectura de 20 metafases es suficiente
cuando se observa el cromosoma Filadelfia +
Cariotipo LMC.
 Leucemia linfoblástica aguda.
• La LLA corresponden al grupo de neoplasias
mas frecuentes en pediatría.
• La LLA comprende el 80% de todas las
leucemias agudas en pediatría.
• Aunque la etiología es desconocida, se han
descrito algunos factores predisponentes
como son los genéticos, virales y ambientales.
 Leucemia linfoblastica aguda
• Las manifestaciones clínicas suelen ser la
consecuencia de la ocupación de la m.ósea
por células leucémicas (anemia, trombopenia
y neutropenia).
• El diagnóstico se realiza por análisis
morfológico, citogenético y molecular del
aspirado de la m.ósea.
Cariotipo LLA
 Leucemia linfocítica crónica.
• Neoplasia que se origina en los linfocitos, en
concreto en linfocitos B maduros.
• Linfocitos B han sufrido una serie de cambios
de tipo neoplásico y esto hace que se
acumulen en los tejidos, en órganos linfáticos
y en la sangre.
• Aumento de los Linfocitos por encima de los
limites normale, reflejado en un examen de
sangre.
 Leucemia linfocítica crónica.
• Clínica: no se produce ningún síntoma de
enfermedad, ni los linfocitos provocan daño en
otros órganos ya que su acumulación no afecta su
funcionamiento.
• Clinicamente existen 2 tipos de LLC y se
diferencian por su agresividad en los sintomas.
• Para diferenciarlas, es necesario realizar pruebas
para la detección de anomalías cromosómicas
que estén afectando ciertos genes --- expresión
de proteínas específicas.
 Leucemia linfocítica crónica
• Incidencia: representa una tercera parte de los
casos de leucemia que se producen cada año.
• Afecta principalmente a adultos mayores (72
años).
• El riesgo es mayor en hombres.
• Antecedentes familiares de LLC aumentan el
riesgo.
 Leucemia linfocítica crónica.
• Citogenética: trisomía 12, del (13q), del (11q), del (17p)
y anomalías estructurales del cromosoma 14 o 6.
• Molecular: los linfocitos B están programados para
crecer y dividirse cuando entran en contacto con una
sustancia extraña (ag) y para producir una respuesta
apropiada con Ig al Ag que han reconocido.
• Estudios sugieren que la LLC se inicia cuando se
produce un error en el reconocimiento de un Ag a nivel
del ADN pero también se puede producir un error en el
mecanismo de comunicación celular, donde los
Linfocitos se activan sin haber encontrado el Ag.
 Biología molecular.
• Cancer: patología neoplásica caracterizada por
la producción de células anormales que
crecen descontroladamente.
• Se caracteriza por escapar a los puntos de
control del ciclo celular.
• El cancer puede afectar a individuos de todas
las edades, incluso a fetos, pero el riesgo de
sufrir esta patologia se incrementa con la
edad.
 Biologia molecular.
• El cancer es causado por anormalidades en el
material genético de las células, estas
anomalías pueden ser provocadas por
distintos agentes carcinogénicos.
Neoplasias hematologicas: son los linfomas,
leucemias (derivan del tejido linfoide y el
mieloide respectivamente).
Es la segunda causa de muerte detrás de las
enfermedades cardiovasculares.
 Biologia molecular.
• Morfologia del cancer: las celulas tumorales
tienen una morfologia alterada que depende
de la diferenciación celular (anaplasia).
• Anaplasia: es la ausencia de diferenciación
que conlleva a una falta de especialización o
de función celular y generalmente, cuanto
mas indiferenciado sea un cancer mas rapido
es su crecimiento y avance.
 Biologia molecular.
• Carcinogenesis: es la formación del cáncer por
medio de los carcinogenos o de las
enfermedades genéticas.
• Genetica del cancer: el cancer es una
enfermedad genetica producida por la
mutacion de determinados genes en una
celula determinada, lo que determina que
esta adquiera caracteristicas de cancer.
 Biologia molecular.
• Oncogenes: son genes mutados que
promueven la división celular descontrolada.
• Genes supresores tumorales: son los
encargados de detener la división celar y de
provocar la apoptosis. Cuando se mutan estos
genes, la célula se divide sin control.
• Genes de reparación del ADN: son genes
encargados de reparar daños en el ADN como
resultado de una mutación.
 Terminologia oncológica.
• Hipoplasia: mal crecimiento de un óegano o tejido
derivado del mal funcionamiento.
• Metaplasia: es el cambio de tejido especializado por
otro tambien especializado pero mas resistente a
alguna noxa.
• Aplasia: ausencia de crecimiento de un tejido u organo.
• Displasia: anomalía en el desarrollo de un tejido, con
crecimiento descontrolado, disposición desordenada
de las celulas.
• Neoplasia: masa de tejido anormal cuyo crecimiento es
excesivo en comparación con el tejido normal.
 Biologia molecular.
• P53:
• Retinoblastoma:
• Ciclinas:
 Biologia molecular.
• HER 2/Neu y tratamientos del cancer.
• Ras
• BCL-2
• ABL
• ALK
 Genetica.
• La organización de los genes en eucariontes es estructural y
funcionalmente mas complejas comparado con el resto de los otros
organismos. En el genoma eucarionte se encuentran 3 tipos de secuencias
de ADN, cuya proporción varía ampliamente entre los distintos
organismos.
• Genes de copia única o ADN no repetitivo: corresponden a genes
estructurales que codifican proteínas y ARN.
• Genes moderamente repetitivos: corresponden a genes de una longitud
de cientos de pares de bases que se repiten al menos 1000 veces. Dentro
de estos genes se encuentran los que codifican para proteínas como las
Histonas, las globulinas y también las que codifican para ARN r.
• Genes altamente repetitivos: el ADN repetitivo no codifica proteínas ni
ARN. Estas secuencias altamente repetitivas se les llama ADN satélite
porque su composición de sus bases permite su separación del resto del
ADN.
 Genetica.
• ADN altamente repetitivo: en el ratón, el ADN satélite se localizó
por hibridación in situ. Las celulas se inmovilizaron bajo una capa de
agar y se trataron con alcali para desnaturalizar el ADN. Luego se
incubo la muestra con ARN marcado con tritio, transcrito in vitro,
utilizando como molde el ADN satélite purificado de ratón.

• Los híbridos del ARN radioactivo y las regiones cromosómicas que

contenían ADN satélites fueron detectados mediante
autoradiografía.
• Resultado: casi todo el ADN satélite estaba localizado en los
centrómeros, los lugares de unión de los husos mitóticos, como se
observa.
 M.F.

El microscopio es un instrumento que nos permite amplificar muchas veces la

imagen de un objeto extremadamente diminuto, hasta hacerlo perceptible, es por
eso que para realizar adecuadamente el estudio de los tejidos el hombre se ha
auxiliado en él.

En el siglo XVI, un comerciante Holandés, se dedicaba a la fabricación de

microscopios, ya en esa época el hombre era capaz de aumentar en 300 veces los
objetos a través de estos instrumentos.

Con el correr de los años este aparato, se fue perfeccionando y hoy existen
variados tipos.
 FUNDAMENTOS
Microscopio De Fluorescencia
Se basa en que una sustancia
natural de la célula o un
colorante fluorescente….

¿Que es Fluorescencia?
Es un a interacción entre la radiación y la materia…

¿Cómo se produce?
La Absorción de la luz de excitación eleva la molécula del
fluorocromo…
 Términos
¿Qué Son los Fluorocromos o Fluoróforos?

Fluorocromo Long. Onda Abs. (nm) Long. Onda Emis. (nm)

Dapi 345 455
Fluoresceína (FITC) 494 520
Rodamina (TRITC) 540 570
Naranj. De acridina 460-502 526-650
Yoduro de propidio 536 617
 Tipos de marcaje.
• Método Directo: el fluoroforo va enlazado
directamente al AC primario (débil
señalización).

• Método indirecto: el fluoroforo va enlazado al

AC secundario (señalización fuerte).
 FISH.
• Tecnica que detecta secuencias de acidos nucleicos en
celulas o tejidos preservados mediante el empleo de
una sonda marcada con un fluoroforo, la cual va
dirigida hacia un lugar especifico del cromosoma y que
emite fluoresecencia, que puede ser observada por
medio de un microscopio de fluorescencia.
• La tecnica de FISH se en la capacidad que poseen los
acidos nucleicos para hibridarse entre si, es decir, la
existencia de determinada secuencia de ADN o ARN
que resulta complementaria con otra secuencia a
través de puentes de hidrógeno formados entre las
bases (A-T y G-C)
Microscopio Confocal

 El principio óptico: es el
excitar al fluorocromo así, este
libera una energía la cual pasa
el espejo dicroico luego sigue al
filtro de fotones según longitud
de onda y finalmente poder
apreciar el punto focal gracias
al pinhole.
Componentes

Fuente Luminosa Lámpara de

Láser Lámpara de
Vapor Luz Visible
Es necesario hacer
barrido para tener Mercurio Standard de cualquier
una imagen completa microscopio que nos
Localizar aquellas zonas permite localizar muestras
de interés para ser en campo claro o contraste
escaneadas en condiciones de fases
de confocalidad

Ese ayuda a la captación de imágenes y un software especializado que permite mejorar la

calidad de la imagen por disminución de la sensibilidad de los fotodetectores a intensidades
Sistema Eléctrico y bajas de fluorescencia, con lo que se reduce el ruido de fondo.
Software Especializado

Localizado tras la fuente luminosa denominado Pinhole de Excitación, cuya utilidad es

Diafragma Detección eliminar la luz proveniente de planos superiores e inferiores al plano focal, aumentando
con ello la claridad y resolución de la imagen
 APLICACIÓN
Microscopio De Fluorescencia

Autofluorescencia Fluorescencia Inducida

Detecta la fluorescencia Partes específicas de la

emitida por moléculas de muestra pueden ser
la muestra misma. observadas selectivamente,
mediante métodos de
tinción.

Inmunofluorescencia

Tinción de ADN

T. Comp. Celulares y Organelas

 Autofluorescencia Fluorescencia Inducida

Clorofila infrarroja, tiene la

peculiaridad de absorber
longitudes de onda mas allá
del espectro rojo llegando a un
máximo de 706 (nm). Se emplearon tres fluorocromos: DAPI,
GFP (proteína verde fluorescente ) y
rodamina .
 Anomalías cromosómicas
Numéricas
• Aneuploidías (Ej: Trisomía 21,
13, 18, Monosomía X)
• Poliploidías (Sólo se observan
en diagnóstico prenatal y en
citogenética en
oncohematología)
Estructurales
• Inversiones
• Inserciones
• Duplicaciones
• Deleciones (Ej: Sindrome de Cri Du
Chat/ Sindrome de Wolf)
• Cromosomas marcadores
• Anillos
• Isocromosomas
• Translocaciones