Célula

Tejido
Órgano Sistema

TÉCNICA
HISTOLÓGICA

Técnica histológica Técnica histológica

Son los métodos que se
utilizan para preparar un Esta técnica estudia una capa muy delgada de la muestra,
tejido para su estudio al susceptible de ser observada por transparencia en el
microscopio, de modo microscopio, conservando:
que preserven sus
características lo más 1. La forma y tamaño, lo más exactamente posible.
parecidas posibles a su
2. La estructura de las células y los tejidos.
estado natural
 Técnica histológica 1- Obtención de la muestra
Pasos:
1- Obtención de muestra En vida Post mortem
BIOPSIA NECROPSIA
2- Fijación
Deshidratación
3- Inclusión en parafina
Aclaramiento
4- Corte

5- Montaje

6- Coloración

1- Obtención de la muestra 2- Fijación

Consiste en sumergir la muestra Biológica en una
Muestra Sustancia o mezcla de Sustancias.

Preservar la estructura y la
Para qué se utiliza? composición química de las
células y de los tejidos

• Detiene el Metabolismo celular.

• Impide la autólisis (Degeneración
Enzimática).
• Evita la acción de gérmenes
(putrefacción)
• Endurece el tejido
 2- Fijación 3- Inclusión
La finalidad es permitir cortes muy delgados.
Tipos de fijadores: La sustancia de inclusión empleada es:
PARAFINA
Fijadores físicos -Desecación (extendidos o frotis)
debido a sus condiciones de penetrabilidad y
-Frío (congelación) consistencia.
-Calor

Fijadores químicos Simples -Formol: Formaldehído al 37%

Compuestos -Bouin

3- Inclusión 3- Inclusión
Se quita el agua de células y tejidos que componen la muestra,
porque la parafina no será miscible ni en agua ni en alcohol ACLARAMIENTO
Pasos: DESHIDRATACIÓN, ACLARAMIENTO, INCLUSIÓN.
Se utiliza XILENO o TOLUENO que son
miscibles tanto en Alcohol como en Parafina, y
DESHIDRATACIÓN sirve para extraer el Alcohol.

Se realiza en una serie de soluciones

alcohólicas de concentración creciente
hasta llegar al 100%
 3- Inclusión 4- Corte

El objetivo es que la
Parafina penetre en los
tejidos.
Con qué se
realiza:

Con el MICRÓTOMO.

Realiza cortes del bloque lo

Así se forma el
suficientemente delgados
taco que después
(5-10 μm de espesor) que
será cortado.
permitan el paso de la luz a
través de ellos.

5- Montaje 5- Montaje
Pasos:

Cada corte obtenido se monta sobre

un portaobjeto de vidrio

Disolver y extraer la parafina: se

realiza con XILOL.

Rehidratación: se realiza con

concentraciones descendentes de
Alcohol. 100%, 90%, 70% hasta agua.
 6- Coloración Técnica histológica

Como consecuencia de la acción de fijadores, alcoholes y

solventes (en las fases de la técnica histológica) hay
macromoléculas que se disuelven y se pierden tales como:
-Glucógeno
-Proteoglucanos
-Glucosaminoglucanos
-Lípidos
Por lo tanto, NO SE TIÑEN.

Coloración
Qué Moléculas se Tiñen: Técnica histológica de rutina
Las Moléculas Grandes que no se disuelven
durante la Técnica histológica y que forman Coloración dicrómica:
complejos Macromoleculares

Ejemplos:
HEMATOXILINA Y
1. Proteínas del Citoesqueleto.
2. Proteínas Extracelulares.
EOSINA
3. Nucleoproteínas.
4. Complejos de fosfolípidos y
Proteínas en las Membranas
 Fundamentos de la Coloración:
Molécula Aniónica
Tiene carga ( - )
HEMATOXILINA
Colorante básico, de
carga + (catiónico)
EOSINA
Colorante Ácido, de
carga - (aniónico)
Fundamentos de la Coloración:
Colorante Básico
Molécula Catiónica Colorante Ácido Tiene carga neta ( + )
Tiene carga neta ( - ) y reacciona con
Tiene carga ( + )
y reacciona con grupos aniónicos.
grupos catiónicos .
Reacciona con Grupos aniónicos: (carga -):
Fundamentos de la Coloración:
- Fosfatos de los ácidos
nucleicos. (heterocromatina,
nucléolos, ARN ribosomal)
- Sulfatos de GAG (matriz ACIDOFILIA Capacidad de los grupos catiónicos de reaccionar
extracelular) con un colorante ácido
- Carboxilo de las proteínas.
Reacciona con Grupos catiónicos: (carga +):
Proteínas básicas del
citoplasma
BASOFILIA Capacidad de los grupos aniónicos de reaccionar
Filamentos citoplasmáticos
con un colorante básico
Fibras extracelulares
Componentes membranosos
intracelulares
Los lípidos son extraídos del tejido por los solventes (alcohol y xilol)
durante el procesamiento
 TRICRÓMICO DE GOMORI
Para t. Conectivo y Muscular

TINCIONES
ESPECIALES

-Verde luz: tiñe de verde fibras colágenas

-Cromotropo: tiñe de color rojo pardo tejido muscular,
eritrocitos, citoplasmas
-Hematoxilina: tiñe de azul los núcleos

TRICRÓMICO DE AZÁN TRICRÓMICO DE MASSON

-Azocarmín (ácido): Tiñe núcleos de rojo
-Azul de anilina (básico): Tiñe de azul las
fibras colágenas
-Naranja G (ácido): Tiñe de naranja-
amarillo citoplasma, eritrocitos, tejido
muscular

Variante Mallory-Azán:
reemplaza azocarmín por
fucsina ácida -Hematoxilina férrica:
Tiñe de azul-negro los
núcleos
-Fucsina ácida: Tiñe rojo
intenso a rosado
eritrocitos, citoplasmas,
tejido muscular
Azul de anilina: azul
tejido conectivo y fibras
colágenas
 P.A.S P.A.S HyE
(ácido Peryódico-reactivo de Schiff) Identifica: Membrana Basal,
fibras reticulares,
carbohidratos, glucoproteínas,
GAG, mucina, glucógeno

Los tiñe de rojo-púrpura

Para tejido adiposo y lípidos en general se usan tinciones especiales:

TINCIÓN WRIGHT -Los más empleados son: SUDÁN III, SUDÁN IV, SUDÁN NEGRO
-Son colorantes indiferentes: sin afinidad por estructuras básicas o ácidas
-Son insolubles en agua

SUDÁN III
Tiñe de rojo la grasa
Para Células Sanguíneas
 ORCEÍNA ORCEÍNA
Para Fibras Elásticas

Fibras Elásticas ( Pardo)

ALDEHÍDO FUCSINA IMPREGNACIÓN ARGÉNTICA

-Los tejidos son tratados con sales de plata
-Se produce un precipitado al enfrentar las sales a un agente reductor

Identifica fibras nerviosas

Identifica fibras elásticas y fibras reticulares
(tonalidad violácea) (Pardo/Negro).
IMPREGNACIÓN ARGÉNTICA AZUL DE TOLUIDINA
Fibras Nerviosas (Pardo/Negro) METACROMASIA • Colorante básico
(catiónico)
• Tiñe los tejidos de azul:
ORTOCROMASIA
• Cuando se expone a
sustancias como
glucosaminoglucanos
sulfatados, heparina, etc
vira su coloración de
azul a púrpura:
METACROMASIA

Inmunocitoquímica
Inmunocitoquímica

Detectan al
antígeno en
células y tejidos
(los hace visibles)

+ Colorante
fluorescente

La especificidad de la reacción entre el

antígeno (Ag) y el anticuerpo (Ac), es el
fundamento de la inmunocitoquímica.
Método que se fundamenta en la especificidad de la
reacción entre el antígeno y el anticuerpo
 Inmunocitoquímica
• En el corte del tejido se demuestra la presencia el antígeno: se
incuba con una solución que contiene un ANTICUERPO
ESPECÍFICO contra el ANTÍGENO buscado.
• La reacción se puede visualizar de diferentes modos:
-El anticuerpo puede marcarse con una sustancia
fluorescente: FLUORESCEÍNA
-Al anticuerpo se le adosa una enzima: PEROXIDASA y se
detecta la reacción Ag-Ac por HISTOQUÍMICA ENZIMÁTICA
Histoquímica enzimática
• Método que evidencia la actividad enzimática en algunos tejidos,
tras el proceso de fijación
• La reacción enzimática convierte a unos sustratos solubles e
incoloros en PRODUCTOS INSOLUBLES Y COLOREADOS
poniéndose de manifiesto la enzima y el tejido que la posee

Se demuestra la presencia
de la enzima peroxidasa en
un leucocito (neutrófilo)

METACROMASIA

Azul de Toluidina: Los

gránulos de los mastocitos
se tiñen azul-púrpura
(metacromasia) MICROSCOPIO
 Poder de resolución
Microscopio
0,2 mm

óptico electrónico
2 μm MET 0,1 a 0,2 nm
Es el poder para diferenciar entre dos puntos u objetos cercanos
como diferentes, es decir la distancia mínima que debe existir entre
MEB 2,5 nm
dos puntos para que se visualicen separados.

Mientras más corta sea la distancia entre esos puntos A mayor poder de resolución
del objeto, más finos serán los detalles. mejor calidad de imagen

Microscopio Microscopio óptico

óptico electrónico

Objetivo

MEB

MET
 OBJETIVOS

SECOS DE INMERSIÓN

Microscopio óptico Microscopio óptico

Tipos: COMPUESTO, DE LUZ O DE CAMPO CLARO
• SIMPLE: LUPA

• COMPUESTOS, DE LUZ O DE CAMPO CLARO

• ESTEREOSCÓPICOS

• DE LUZ POLARIZADA

• DE CAMPO OSCURO

• DE CONTRASTE DE FASES
La muestra se observa más oscura que
• DE FLUORESCENCIA el campo que la rodea
• CONFOCAL DE BARRIDO
Compuesto por estar
constituido por dos sistemas de
lentes. (OBJETIVO Y OCULAR).
 Planos de corte
Microscopio óptico
DE CAMPO OSCURO
Tiene un condensador especial que hace que los rayos luminosos no penetren
directamente sino en forma oblicua, es decir la luz se dispersa o refracta por las
estructuras del espécimen.

Para observar
microorganismos

Microscopio óptico Microscopio electrónico

• DE TRANSMISION (MET)
DE CONTRASTE DE FASES • DE BARRIDO (MEB)
• DE FUERZA ATÓMICA

• Con vida
• Sin tinción

CULTIVOS

Se basa en modificaciones de la
trayectoria de los rayos de luz,
provocando contrastes en la
preparación.
 Microscopio electrónico Microscopio electrónico
DE TRANSMISIÓN (MET) DE BARRIDO (MEB)

Se observan superficies de células y de tejidos.

Permite observar la ultraestructura
de cortes finos de las células

IMAGEN FINAL MET VS MEB

Microscopio óptico Microscopio electrónico

Luz Haz de electrones

Muestra puede estar viva Muestra muerta

P.R. 0,2 μm P.R. 0,2 nm

Estructura celular Ultraestructura celular

Distintas técnicas histológicas Distintas técnicas histológicas

Imagen final en ocular Imagen final en pantalla