TEMA 2; ENZIMAS: CARACTERÍSTICAS GENERALES.

CINÉTICA
ENZIMÁTICA Y REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA.

Bibliografía

- Lehninger. Principios de Bioquímica. D.L. Nelson y M.M. Cox., 5ª ed. Ed. Omega. Barcelona, 2009.

- Bioquímica. C. K Mathews y K. E. van Holde, 3ª ed. Ed. McGraw-Hill/Interamericana, Madrid, 2002.

- Bioquímica. Fundamentos para Medicina y Ciencias de la Vida. W. Müller-Esterl. Ed. Reverté, Barcelona, 2008.

- Bioquímica. Libro de texto con aplicaciones clínicas. T.M. Devlin. 4ª ed. Ed. Reverté. Barcelona, 2004.

- Bioquímica Básica de Marks. Un enfoque clínico. C. Smith, A.D. Marks y M. Lieberman. 2ª ed. Ed. McGraw-
Hill/Interamericana. Madrid, 2006.

- Bioquímica Médica. JW Baynes y MH Dominiczak. 2ªed. MMV, Elsevier Ltd. 2008

TEMA 2: ENZIMAS

Definición
Las ENZIMAS son catalizadores biológicos que unen específicamente
ligandos o sustratos y aceleran eficazmente las reacciones bioquímicas
para generar productos de reacción.
TEMA 2: ENZIMAS

Grupo muy variado y especializado de proteínas

Otros catalizadores biológicos son ARN → Ribozimas

No afectan a la constante de equilibrio de la reacción química.

No afecta:
Constante de
-Al sentido de la reacción
equilibrio de
una reacción
-A las concentraciones de sustratos y
productos en el equilibrio
-A la eficiencia de la reacción

Actúan disminuyendo la energía libre de activación

TEMA 2: ENZIMAS

Clasificación de las enzimas

1. Óxido-reductasas:
Transferencia de electrones

Alcohol deshidrogenasa

2. Transferasas: Transferencia de grupos funcionales

Hexoquinasa

Glucosa Glucosa-6P
TEMA 2: ENZIMAS

Clasificación de las enzimas

3. Hidrolasas: Rotura de enlaces incorporando una molécula de agua

4. Liasas: Rotura o formación de enlaces covalentes por adición o

eliminación de grupos
TEMA 2: ENZIMAS
Clasificación de las enzimas
5. Isomerasas: Reacciones de isomerización: transferencia de grupos dentro de
la misma molécula

6. Ligasas: Formación de enlaces covalentes mediante reacciones de

condensación
TEMA 2: ENZIMAS

Cofactores y Coenzimas

Cofactor: Cationes metálicos

Coenzima: Moléculas orgánicas

TEMA 2: ENZIMAS

Cofactores y Coenzimas

Fe

Catalasa

Zn
Anhidrasa carbónica
TEMA 2: ENZIMAS

Cofactores y Coenzimas

Grupo Amino

Grupo CO2

Electrones y Grupo acilo

Grupo Aldehído
TEMA 2: ENZIMAS

Isoenzimas
Son variantes enzimáticas que catalizan la misma reacción, pero difieren en su
secuencia de aminoácidos, estructura, cinética, coenzimas o regulación.
2 ejemplos de isoenzimas por heteropolímeros

CREATÍN QUINASA (CK o también CPK)

CK-BB CK-MM
B B M M

CK-MB Se utiliza en
el diagn. de

Fuente de ATP M B infarto

agudo de
miocardio

LACTATO DESHIDROGENASA (LDH)

TEMA 2: ENZIMAS

A. Normal B. Infarto agudo miocardio C. Hepatitis aguda

Separación de isoenzimas
de la LDH según su masa Cuantificación relativa de
cada isoforma

Infarto agudo de miocardio vs. hepatitis aguda según la isoenzima

liberada a sangre, pero en la práctica no se realiza la diferenciación,
depende del contexto clínico.
TEMA 2: ENZIMAS

Mecanismo de Acción de las Enzimas

Estado de
transición
TEMA 2: ENZIMAS

Mecanismo de Acción de las Enzimas

La energía libre de Gibbs (G) considera conjuntamente
los conceptos de entalpía (H) y entropía (S) para
determinar si las reacciones son favorables
Estado de
G<0 → reacción favorecida (espontánea)
activación
G>0 → reacción no favorable
(transición) G=0 → reacción en equilibrio

G no se relaciona con la
velocidad de una reacción

La velocidad de una reacción depende de la

diferencia de energía libre del estado
activado (estado de transición).

G‡ alta → Velocidad baja

G‡ baja → Velocidad alta

Las enzimas disminuyen la energía libre

de activación (G‡ )de las reacciones
TEMA 2: ENZIMAS

Mecanismo de Acción de las Enzimas

Las enzimas utilizan diferentes estrategias de catálisis en su centro activo y
consiguen:
Estabilizar formas intermedias Favorecer la correcta orientación
correspondientes al estado espacial del/los sustratos
activado.

Interacciones para estabilizar

cargas y/o polaridad
TEMA 2: ENZIMAS

ESPECIFICIDAD ENZIMÁTICA
▪ De reacción: llevan a cabo reacciones únicas.

▪ De sustrato: a través de la complementariedad con su centro activo.

El centro activo

Presenta aa reactivos
Es asimétrico
TEMA 2: ENZIMAS

El centro activo distingue entre

estereoisómeros
Ej. epímeros de la
glucosa

El centro activo
posibilita la orientación
adecuada entre
sustrato y grupos o
elementos reactivos de
la enzima
TEMA 2: ENZIMAS

Mecanismo de Acción de las Enzimas

TEMA 2: ENZIMAS

Cinética Enzimática
Concepto de velocidad de reacción:
disminución de concentración de
sustrato o aparición de producto
por unidad de tiempo
V = d[S]/dt ó d[P]/dt
TEMA 2: ENZIMAS

Cinética Enzimática

d[P]/dt
Se alcanza una
saturación de la

Velocidad inicial V0
velocidad,
Vmax.
Velocidades iniciales
medidas a diferentes
concentraciones de sustrato

Concentración de sustrato [S]

Velocidad inicial V0

Concentración de sustrato [S]

TEMA 2: ENZIMAS

Cinética Enzimática ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN

k1 k2 Asume:
E + S  ES  E + P -Se forma un complejo reversible
k-1 k-2
ES
-Este complejo puede disociarse
de nuevo hacia E y S o continuar
hacia E y P
-El complejo ES está en estado
estacionario, se forma la misma
cantidad que se disocia

Vmax [S]
Vo = —————
Km + [S]
 Vmax [S]
Vo = —————
Km + [S]

Km ’

Vmax: Velocidad que se alcanza cuando toda la enzima está

saturada con el sustrato. (Número de moléculas de sustrato convertidas en producto
por unidad de tiempo)

Km: La concentración de sustrato a la cual la velocidad de

reacción alcanza la mitad de la velocidad máxima

➢Valores bajos de Km indican mayor afinidad de la enzima-sustrato; antes

se alcanza la ½ de la velocidad máxima)
Vmax [S]
Vo = —————
La V0 es proporcional a la [S], por
➢Cuando [S] es << Km →
Km + [S] tanto, lineal (y= ax)
TEMA 2: ENZIMAS

Cinética Enzimática
Determinados factores pueden afectar a los parámetros cinéticos de una enzima:

CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO → Cinética hiperbólica (ecuación de MM)

[S] bajas, velocidad lineal

[S] saturante, velocidad máxima

CONCENTRACIÓN DE ENZIMA → A mayor concentración de enzima, mayor

velocidad.

Enzima
Sustrato
Complejo enzima- Dos moléculas de sustrato transformadas en un tiempo X
sustrato
Producto

Cuatro moléculas de sustrato transformadas en el mismo tiempo X

 pH

Las enzimas tienen un pH óptimo

(o rango de pH óptimo) próximo
al ambiente en el que funcionan

TEMPERATURA
Tª óptima

Estos factores pueden afectar tanto a la afinidad del

sustrato (Km) como a la velocidad máxima de la reacción
(Vmax)
Y… PARA QUÉ SIRVE LA ECUACIÓN DE M-M?

Vmax y Km son parámetros

Vmax [S] cinéticos que nos dan
Vo = ———— información de cómo transcurre
la reacción catalizada por una
Km + [S] enzima y de si se afecta por
determinadas circunstancias.

Los valores de Km y Vmax de una enzima se podrían determinar experimentalmente

con solo medir la V0 a diferentes [S]

Vmax
V0 a [S]1
V0 a [S]2
Velocidad inicial V0

V0 a [S]3
Velocidades iniciales
--- medidas a diferentes
concentraciones de sustrato

Km Concentración de sustrato [S]

 Vmax [S]
Vo = ———— Pendiente

Km + [S]
Inversa → Ecuación de la recta
y= ax + b

.1

Gráfica de los dobles

recíprocos
o dobles inversos o de
LINEWEAVER-BURK

Conociendo la V0 para cada [S], nos permite calcular fácilmente Km y Vmax a partir
de la ecuación lineal (puntos de corte con los ejes)
TEMA 2: ENZIMAS

INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
La actividad enzimática debe ser controlada → inhibidores naturales o terapéuticos

A.- INHIBICIÓN REVERSIBLE

A.1.- Inhibición competitiva: sustrato e inhibidor compiten por

el mismo lugar de unión.
Fármacos Producto de reacción
también puede ser
inhibidor
competitivo
Sustrato
HMG-CoA
Inhibidor:
(síntesis de
colesterol) “estatina”
Vmax invariable

Aumenta la
Km Aumenta
la Km
Km
TEMA 2: ENZIMAS

INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
A.2.- Inhibición NO competitiva: el inhibidor se une a un
segundo lugar de la superficie enzimática, distorsiona la
enzima y resta eficiencia al proceso.
El inhibidor I no influye o
solo influye levemente en la
unión del sustrato A, pero
bloquea las reacciones
siguientes

Disminuye
la Vmax
TEMA 2: ENZIMAS

INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
B.- INHIBICIÓN IRREVERSIBLE
Inhibidores que se unen covalentemente al centro Muchas proteínas
plasmáticas son
activo de la proteína paralizándolo permanentemente inhibidores de
(Mecanismo de inhibición suicida) serín proteasas

Triada Intermediario covalente

Inh. de proteasa Conformación modificada
catalítica inhibidor acil-enzima
a1 del inhibidor
Ej. Elastasa
y su
inhibidor Rotura
del
inhibidor

Componente
aminoácido
libre

Otros inhibidores irreversibles

-Cianuro (CN-)→ Reacciona con iones metálicos de enzimas (Cu2+, Zn2+, Fe2+)
-Penicilina → Inhibe enzimas de la síntesis de la pared de la célula bacteriana.
TEMA 2: ENZIMAS

Regulación Enzimática
A) Control Genético.

- Inducción enzimática
- Inhibición enzimática

B) Modificación reversible No covalente.

- Ej; Enzimas Alostéricas

C) Modificación reversible covalente.

- Ej; Fosforilación

D) Proenzimas activadas por corte proteolítico → zimógenos

E) Compartimentalización.
TEMA 2: ENZIMAS

Regulación Enzimática de acuerdo a:

-Disponibilidad de sustratos
A) Control Genético.
-Utilización de productos
-Necesidades de la célula

Enzima
reguladora de -Controla pasos clave (limitantes de
la reacción velocidad)

-Reguladas por diversas señales

TEMA 2: ENZIMAS

B) Modificación reversible No covalente.

ENZIMAS ALOSTÉRICAS Cambian su

conformación tras la
unión de moduladores
alostéricos, afectando a
la afinidad de unión del
sustrato en un sitio
distinto, generalmente
de otra subunidad.

Homoalostérica,
Heteroalostérica,
por el mismo
por un modulador Activador o
sustrato en otra
Activador subunidad
en una región
reguladora
inhibidor
TEMA 2: ENZIMAS

B) Modificación reversible No covalente.

No sigue cinética de Michaelis-Menten,
sino que la cinética es sigmoidal.
En una enzima
homoalostérica:

Manifiesta
cooperatividad
entre
subunidades.

-Por debajo de una concentración umbral

de sustrato, la actividad es baja.
-Si la concentración de sustrato aumenta,
incrementa rápidamente la actividad
enzimática.
TEMA 2: ENZIMAS

C) Modificación reversible covalente.

Cadena lateral

❖ Fosforilación de Ser, Thr o Tyr

Mayoritaria

La fosforilación puede
modificar la afinidad por Cascadas de fosforilación: amplificación de la señal
el sustrato en el centro
activo
TEMA 2: ENZIMAS

D) Proenzimas activadas por corte proteolítico → zimógenos

Ej. Activación de enzimas proteolíticas en la digestión

Tripsinógeno

enteropeptidasa Péptido de
activación

Tripsina
Tripsina activa capaz de continuar procesos de activación
Enteropeptidasa/ Tripsina

Tripsinógeno
Tripsina
Se sintetizan como precursores
enzimáticos inactivos (ZIMÓGENOS
Zimógenos
Quimotripsina, O PROENZIMAS)
carboxipeptidasa A,
elastasa
Autoactivación
Proteínas
Activación de alimentación Péptidos y aa
otras proteasas