L6-Microscopio G2

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Química y Textil

Escuela profesional de Ingeniería Química
Laboratorio de Bioquimica y Microbiologia (PI721A)
Informe N° 6
Manejo y observación en el microscopio óptico
Grupo 2
Integrantes:
Alumno 1.- Gamarra Garcia, Sara Mercedes 20191527C
Alumno 2.- Montes Arainga, Jan Paul 20191312G
Alumno 3.- Quispe Ayala, Araceli Ariana 20191099A
Docente responsable:
Prof. Janet Rojas Orosco
Periodo Académico 2022-2

Fecha de realización del Informe: 30/11/22
Fecha de presentación del Informe: 07/12/22
Universidad Nacional de Ingeniería-Bioquímica y microbiología-PI721A
Índice
Laboratorio de Bioquimica y Microbiologia (PI721A) 0
INTRODUCCIÓN 1
1. OBJETIVOS 3
1.1. Objetivos Generales 3
1.2. Objetivos Específicos 3
2. MARCO TEÓRICO 3
3. PARTE EXPERIMENTAL 11
4.1. Materiales y reactivos utilizados 11
4.2. Experiencia 12
4. CONCLUSIONES 14
5. RESULTADOS 15
6. CUESTIONARIO 15
7. ANEXOS 18
8. REFERENCIAS 19
1
INTRODUCCIÓN
El microscopio es una de las herramientas que los biólogos utilizan para estudiar la
vida. Es igualmente útil para el estudiante que está aprendiendo conceptos biológicos. El
microscopio de luz es básicamente un sistema óptico para magnificar y un sistema de
iluminación para poder hacer visible el objeto.
El microscopio compuesto consiste de por lo menos un par de sistemas de lentes: a)
ocular: lente por donde se mira, (b) objetivos: son lentes que están más cerca del espécimen y
que tienen valores de magnificación entre 4x y 100x. La microscopía envuelve tres conceptos
básicos: magnificación, resolución y contraste. La resolución es la habilidad de distinguir dos
puntos como puntos separados, por lo tanto, a mejor resolución más clara la imagen.
El ojo humano funciona como un sistema de lentes, el ojo normal no puede enfocar un
objeto que esté a menos de 10 cm de distancia, esto quiere decir que se pueden distinguir dos
puntos en un objeto que estén separados por 0.1mm.
La mayoría de las células son microscópicas y por eso dependemos del microscopio
para su observación, pues este instrumento es delicado y costoso que consiste de partes
mecánicas que permiten movimientos precisos para ajustar la distancia entre el espécimen y
los lentes.
2
1.OBJETIVOS
1.1. Objetivos Generales
Conocer el funcionamiento, componentes, cuidados y limpieza del microscopio
óptico, de igual manera preparar las muestras biológicas in vivo (fresca) e in vitro (tinción)
para la observación microscópica y analizar su estructura.
1.2. Objetivos Específicos
● Comprender la función de cada una de las partes del microscopio.
● Analizar en qué dirección se mueve un objeto o estructura bajo el microscopio con
relación a la dirección del movimiento que se le da a la laminilla con la mano.
● Preparar una o varias laminillas con el respectivo cuidado y observar bajo el
microscopio.
● Usar el microscopio de forma apropiada para enfocar algún detalle en la laminilla.
2. MARCO TEÓRICO
Según Gray (1964), en el estudio de una muestra de fango activo, el microscopio
óptico es una herramienta indispensable que nos va a permitir no sólo la identificación y
cuantificación de las distintas especies pobladoras (bacterias y protozoos, principalmente),
sino el conocimiento de otras características relacionadas con la estructura de la unidad
morfológica y estructural de dicha suspensión biológica, es decir, el flóculo de fango activo.
Así por ejemplo, ante la presencia de un problema de operación de tipo biológico que se
manifestará como una deficiente separación sólido-líquido en el clarificador, las técnicas de
identificación de microorganismos y de estudio de la estructura flocular, van a hacer posible
el aislamiento y cuantificación de los organismos responsables así como el conocimiento del
nivel de repercusión sobre la organización del flóculo. Un examen microscópico de estas
3
características requiere de distintos niveles de observación que, entre otros aspectos, se han
de corresponder con distintas necesidades en la magnificación. Así pues, el aumento
requerido para una primera exploración de la muestra, no será el mismo que el necesario para
la observación en detalle de la estructura corporal de un protozoo ciliado. La capacidad de
aumento de un microscopio se denomina magnificación (M) y se corresponde con la
expresión: Magnificación= M ocular x M objetivos x M optovar (si éste existe).
Figura 1
Partes básicas del microscopio óptico
Los elementos de un microscopio óptico
Según Montalvo (2010), se requiere de unos elementos básicos representados por objetivos
(10x, 20x, 40x y 100x), algunos de ellos dotados de contraste de fases, un micrómetro ocular
calibrado y equipo de microfotografía. Como material accesorio de microscopía son
necesarios: una cámara de recuento (Neubauer, Neubauer improved y/o Fuchs-Rosenthal, p
4
ej.) para el cómputo de pequeños flagelados o, empleada también, en ciertas técnicas de
cuantificación de bacterias filamentosas, portaobjetos, cubreobjetos de varios tamaños (24 x
24 mm y 18 x 18 mm, principalmente), aceite de inmersión y solución limpiadora para las
lentes. En la descripción de las distintas partes de un microscopio, podemos encontrarnos con
los siguientes elementos mecánicos, de iluminación y ópticos:
Platina
La platina está situada sobre el estativo o soporte y sobre ella se coloca el
portaobjetos, que mediante un sistema de traslación dotado de mandos, podrá hacerse
desplazar en las dos direcciones del plano (x e y). Reglas milimétricas situadas sobre la
platina permiten conocer el alcance del movimiento así como la localización precisa de
cualquier área de interés de la preparación.
Mandos de enfoque
Permiten el desplazamiento en el plano vertical de la platina, alejando o acercando la
preparación hacia los elementos ópticos. El enfoque macrométrico permite una aproximación
rápida a la preparación o enfoque “grueso”, mientras que el micrométrico proporciona un
enfoque “fino” de la misma.
Fuente de iluminación
Suele ser una lámpara halógena de bajo voltaje (6-12 v y 25-100 W), cuya
luminosidad puede ser regulada mediante un potenciómetro. La iluminación es una cuestión
de especial importancia en el caso de la microfotografía. Es recomendable controlar el haz
lumínico cada cierto tiempo, lo que puede hacerse en la revisión anual del microscopio.
Filtros
Situados sobre un portafiltros, los más habituales son el filtro verde y el azul.
Mientras que el verde se utiliza en la óptica de contraste de fases, al aumentar el poder de
5
resolución, el filtro azul se emplea en campo claro, para observar tinciones o resaltar
contornos en organismos vivos.
Condensadores
Situados al pie del cuerpo principal se encuentran el condensador de campo y su
diafragma, quienes tienen como misión amplificar y colimar los rayos luminosos proyectados
por la fuente luminosa. Situados en la parte inferior a la platina se encuentran el condensador
de apertura, con su diafragma y elementos de centrado. Este condensador tiene como misión
hacer converger la luz hacia la preparación. El centrado del condensador se realiza cerrando
el diafragma de campo y llevando al centro el punto luminoso con ayuda de los mecanismos
de centrado.
Objetivos
Los objetivos están considerados los elementos más importantes en la formación de la
imagen microscópica, ya que estos sistemas de lentes establecen la calidad de la imagen en
cuanto a su nitidez y la capacidad que tiene para captar los detalles de la misma (poder de
resolución). Están constituidos también por un juego de lentes, en este caso, convergente y
divergente, para eliminar, en la medida de lo posible, una serie de aberraciones que afectarían
la calidad de las imágenes formadas. Las lentes se disponen dentro de un soporte o camiseta
de metal, en cuyo exterior están inscritas una serie de anotaciones numéricas que indican, el
aumento propio del objetivo, la apertura numérica, el tipo de material con que están tallados
las lentes (de fluorita o semi apocromáticos) o la calidad que tendrán las imágenes, al
anularse en la construcción de los objetivos, algunas aberraciones de las lentes (acromáticos,
apocromáticos, aplanáticos etc.) o si se debe usar alguna sustancia de inmersión (Montalvo,
2010).
Los objetivos también se clasifican de acuerdo al medio que existe entre el objeto
examinado y la lente frontal del objetivo. De acuerdo a esta característica son secos o de
6
inmersión. Son objetivos secos aquellos que entre el objeto observado y el objetivo solamente
existe el aire; en cambio se denominan objetivos de inmersión aquellos que requieren que
entre la preparación y la lente frontal del objetivo se coloque una sustancia líquida, ésta puede
ser agua, glicerina o un “aceite de inmersión”, natural como el “aceite de cedro” o aceites
artificiales. Dependiendo de las aberraciones corregidas los objetivos pueden ser:
● Acromáticos
● Semiapocromáticos
● Apocromáticos
● Planapocromáticos
Técnicas microscópicas
Si anteriormente se mencionan las distintas necesidades de magnificación en el
estudio de una muestra, también es cierto que la observación de microorganismos más
pequeños como bacterias, determinadas estructuras de protistas o la propia organización del
flóculo, que pueden ser dificultosas en campo claro, son más fácilmente observables con
otras técnicas microscópicas, como es el contraste de fases. Normalmente, el equipamiento
microscópico en un laboratorio de aguas residuales, tan sólo cuenta con la óptica de contraste
de fases, además de la de campo claro. Las restantes técnicas microscópicas y otras no
recogidas aquí, se utilizan en investigación (Wollman et.al, 2015).
El campo claro
Es la iluminación “normal”. Los componentes de la muestra se visualizan gracias a las
diferencias de contraste que existen entre ellos y el medio que los rodea, las diferencias de
contraste se producen porque las células o elementos más grandes, como los flóculos de
fango activo, absorben o dispersan la luz en diferentes grados. Por esta razón, esta
iluminación se emplea con tinciones ó muestras en las que los microorganismos son
7
pigmentados, ya que el contraste se incrementará debido al color, el contraste de la
preparación también puede controlarse en campo claro con el diafragma del condensador
(diafragma de apertura).
El contraste de fases
Es una técnica que se utiliza para estudiar preparaciones de densidades homogéneas,
en las que la baja capacidad de absorción de la luz de sus elementos (las células y el medio),
hace que la imagen obtenida no presente diferencias de luminosidad entre ellos. El contraste
de fases permite la visualización de células sin necesidad de tinción, este tipo de óptica se
basa en el hecho de que las células poseen índices de refracción distintos al medio y por lo
tanto producen un desvío en los rayos de luz que las atraviesan, que son retardados, este
efecto es amplificado por un anillo especial que posee el objetivo de los microscopios de
contraste de fases, lo que da lugar a la formación de una imagen oscura con un fondo
brillante.
Características que define la calidad del microscopio óptico
Cuatro son las características que definen la calidad de un microscopio compuesto: La
luminosidad, el poder de definición, el poder de penetración y la potencia.
1. La luminosidad es la cantidad de luz que alcanza al ojo del observador. Las
imágenes deben poseer buena iluminación la cual depende del sistema de
iluminación del microscopio y de la calidad del sistema óptico.
2. El poder de definición es la capacidad de proporcionar imágenes con
contornos nítidos. Esta también depende de la calidad del sistema óptico. Un
microscopio definirá bien cuando tenga objetivos apocromáticos y oculares
compensados, es decir cuando se hayan corregido las aberraciones de
esfericidad y cromática.
8
3. El poder de penetración es la capacidad de permitir la observación simultánea
de dos o más planos en el objeto observado.
4. La potencia total del microscopio se calcula multiplicando la potencia
(aumentos) del objetivo por la potencia del ocular y por el factor de tubo
(normalmente igual a 1, si la longitud del tubo es la correcta, generalmente de
160 mm y si no hay ninguna lente intermedia). En el caso de un objetivo
25/0.55 y un ocular 10X/18, con un factor de tubo 1, la potencia del
microscopio es de 25X10X1 = 250:1. La potencia depende del poder de
resolución del microscopio.
Por poder de resolución de un sistema óptico entendemos su capacidad para
distinguir como distintos y separados dos puntos muy próximos entre sí. Es pues su
capacidad de reproducir detalles, el límite de resolución de un microscopio se define como la
distancia mínima a partir de la cual ya no es posible distinguir la separación entre dos puntos.
El poder de resolución de un microscopio óptico y por consiguiente su límite de resolución se
calcula con la fórmula (Epelbaum, 2010).
El poder de resolución depende de la longitud de onda de la luz empleada, del índice
de refracción (n) del medio por el que pasa la luz y del ángulo de desviación (θ) que esta
sufre y por lo tanto de la apertura numérica (AN) del objetivo.
Normas para el uso del microscopio óptico
Con el objetivo de menor aumento (4X) recorre toda la preparación ayudándote con
los mandos 4 y 5 de la figura 1 hasta que localices la estructura que te interese observar. Para
ello desplaza la pletina de derecha-izquierda y de delante-atrás.
Una vez localizada la estructura enfoca e ilumina la preparación como hemos
indicado en el apartado anterior. Cambia al siguiente objetivo y vuelve a enfocar. Sigue esta
metodología con el resto de objetivos como el de 40X y superiores, una vez seleccionada la
9
zona a observar, el enfoque se realizará solo con el micrométrico pues si se utiliza el
macrométrico se puede romper la preparación.
Para utilizar el objetivo de inmersión, una vez enfocado e iluminado
convenientemente el campo con el objetivo de 40X, gira el revólver lateralmente de tal suerte
que quede en una posición intermedia entre el objetivo de 40 y el de 100X. Pon una pequeña
gota de aceite de inmersión sobre la zona del espécimen a observar, es decir sobre la zona
iluminada por el haz del condensador, a continuación gira el revólver hasta poner el objetivo
de 100X sobre dicha zona iluminada. Enfoca la preparación utilizando exclusivamente el
micrométrico. Una vez finalizada la observación con el objetivo de inmersión límpialo así
como la preparación con alcohol-éter y un papel suave.
Terminada la observación limpia los objetivos, oculares y la preparación. Coloca el
objetivo de 4X en posición de observación, baja la intensidad de la luz, apaga el microscopio
mediante el interruptor, desconecta la fuente de alimentación y cubre el microscopio con su
funda.
Otras Clasificaciones de microscopios
Microscopio electrónico
A diferencia de los microscopios ópticos, el microscopio electrónico usa electrones en
vez de luz visible (fotones) para formar imágenes de muestras diminutas. Ya que la longitud
de onda de los fotones es muy pequeña en comparación con la luz visible, los microscopios
electrónicos nos permiten aumentar aún más la imagen de la muestra que deseamos observar.
Los microscopios electrónicos se clasifican en:
Microscopio electrónico de barrido (SEM)
Permite la observación de células enteras, sin necesidad de cortes finos, de modo que
aparecen los relieves originales y las superficies externas. Los electrones son dirigidos a la
superficie de la muestra y forman imágenes tridimensionales, entregando información
10
morfológica de la muestra analizada. Tiene una amplificación entre 1,000 a 200,000
aumentos.
Microscopio electrónico de transmisión
Gracias a este tipo de microscopio podemos observar la ultraestructura de muestras
biológicas, el análisis de materiales nanoestructurados. La detección y cuantificación de
impurezas o elementos minoritarios presentes en materiales puros, entre otros. (Scai,2018)
3.PARTE EXPERIMENTAL
4.1. Materiales y reactivos utilizados
Tabla 1
Materiales usados en los experimentos
Materiales
Portaobjetos Cubreobjetos
Asa de siembra 1 jeringa estéril
2 vidrio de reloj Caja de fósforo
Mechero de Piceta
alcohol
11
Tijera Pipeta pasteur
Cuchillo o bisturí Microscopio

o escalpelo compuesto
4.2. Experiencia
4.2.1.Preparación de la muestra
4.2.1.2 Líquidas
Con ayuda de una pipeta Pasteur colocar una gota de la muestra en el centro de un
portaobjeto limpio y cubrirlo con un portaobjeto,colocando de forma inclinada con un
ángulo de 45º para luego dejar caer formando así la muestra.Se puede observar la muestra a
través del microscopio con menor aumento y mayor aumento (4x y 10x).
4.1.1.2 Alimento contaminado con hongos
Con la pipeta Pasteur colocar una gota de la muestra en el centro de un portaobjeto
limpio,luego con la ayuda de un mechero y la asa de siembra, tomar la muestra frotando la
asa de siembra sobre los hongos en la muestra retirando así la mayor cantidad.
Tener presente que la asa de siembra debe calentarse al rojo vivo sobre la flama del
mechero.Después,Colocar el cubreobjeto y observar al microscopio.
4.1.1.3.Cebolla
Cortar por la mitad la cebolla y desprender con una pinza la epidermis, que es una
capa delgada y transparente.Colocar una gota de agua en el centro de un portaobjeto y sobre
12
ella extender la epidermis . Luego, cubrir la muestra con un cubreobjeto.Observar al
microscopio.En otro portaobjeto, extender de nuevo la epidermis y agregar una o dos gotas de
reactivo de azul de metileno, hasta que la muestra esté totalmente cubierta. Dejar que
reaccione con el reactivo por 5 minutos, para que la muestra se tiñe. Luego, con la ayuda de
la pipeta Pasteur, enjuagar con agua destilada hasta que no suelte colorante, para retirar el
exceso de tinción.Finalmente, poner una gota de agua sobre la piel de la cebolla, y sobre ella,
cubrir con un cubreobjeto. Observar en el microscopio
4.1.1.4.Sangre
Con la ayuda de una aguja fertilizada y el area tambien se procede a retirar una gota
de sangre que era colocada en el portaobjeto para después desparramarse por toda la área y
colocar un porta objeto después para luego ser observado en el microscopio
4.2.2.Observaciones
Yogurt
Se observan formas de bacilos y de cocos.
Vista de Yogurt 10x.
Pan contaminado
Se observa contaminación de una colonia de hongos con coloración blanca.
13
Vista del pan 10x.
Epidermis de la cebolla
Se presenta una forma poligonal, la cual son los rectángulos alargados de las células.
Con el objetivo de 40x es posible observar la estructura multicelular que presenta.Aquí se
pudo observar la aprende celular de la cebolla,su estructura de las células son acopladas sin
dejar espacios libres y se observa el ciclo del cloroplasto al reaccionar con la luz.
Vista de la cebolla 40x.
Sangre
Se presenta en forma de circunferencias que hace referencia a los glóbulos
blancos,están agrupados en forma de pequeñas bolas en grupo,esto se pudo observar con una
ampliación de x40.Aquí las células están agrupadas en forma pequeños grupos dispersados.
4. CONCLUSIONES
El microscopio es un instrumento de laboratorio que se utiliza como herramienta que
permite al estudiante, describir las características y funciones de distintos organismos
unicelulares y pluricelulares.
14
El azul de metileno ayuda a teñir todas las bacterias por igual, tiñe las estructuras
presentes en el citoplasma de la bacteria, comportándose de la misma forma con una bacteria
y otra.
La deshidratación se ocasiona debido a que las células ya no cuentan con suficiente
líquido en su cuerpo, lo cual ocasiona mal puesto que dichas células y sus organelos
dependen del agua.
5. RESULTADOS
Se observa en el yogurt dos organismos Gram positivos, los cuales fueron los cocos y
bacilos, los cocos tienen forma redondeada y los bacilos alargada o de bastón, en este caso
presentan una forma alargada.
En el alimento de pan contaminado, se llegaron a observar los hongos en el trozo de
pan, estos de coloración ploma, esta coloración es característica de los mohos, los cuales se
reproducen por esporas, llamado científicamente como Rhizopus stolonifer.
En la epidermis de la cebolla sin el azul de metileno no se puede percibir muy bien la
estructura en cambio con el azul de metileno si lo notamos mejor, esto se debe a que al
agregar el azul de metileno las células absorben el colorante y quedarán teñidas del mismo
color, esto hace que genere un incremento en el contraste.
En el caso de la sangre, se verán con un dominio predominante los glóbulos rojos,
hematíes o eritrocitos teñidos de color rojo por la eosina. No tienen núcleo y son más
delgados por el centro que por los bordes.
6.CUESTIONARIO
15
1. Describa el funcionamiento de un microscopio electrónico y una aplicación
práctica.
El microscopio electrónico debe su función a un haz de electrones que son generados
por un cañón electrónico, los cuales son impulsados por un alto voltaje y focalizados por
medio de lentes magnéticas formando una imagen en una placa fotográfica. La longitud de
onda de estos, es más corta que la luz visible, así es que se consigue una resolución más alta
en el rango de las estructuras atómicas.
Aplicaciones biomédicas de la microscopía electrónica y el análisis elemental con
espectrómetro de Rayos X
Entre las aplicaciones del análisis elemental con rayos X en la biomedicina está la
identificación de depósitos de metales pesados en tejidos, como el cobre en tejido hepático de
pacientes con enfermedad de Wilson, el plomo en eritrocitos de pacientes con saturnismo, el
mercurio en piel, el arsénico en las intoxicaciones y carcinomas de piel, el tetraóxido de
osmio en traumatismos de piel, etc. También, es posible analizar la composición de cristales
urinarios y litiasis renal y vesicular. El análisis de la etiología de la microlitiasis renal
representa un ejemplo de aplicación de esta técnica. Esta patología puede ser multicausal y
representa uno de los problemas de salud cuya importancia se reconoce cada día más. Entre
las posibles causas se mencionan las infecciones bacterianas debidas a agentes ureasa
positivos, principalmente Klebsiella pneumoniae, Proteus spp y Ureaplasma urealyticum. La
ureasa de estas bacterias hidroliza la urea excretada por la orina, produciendo amonio que
eleva el pH, lo que favorece la precipitación de cristales de fosfato de calcio. Esto unido a
otros problemas subyacentes como alteraciones anatómicas o reducción del flujo urinario
induce la formación de microlitiasis y cálculos renales. Actualmente, otra teoría infecciosa
involucró a Nanobacteria, un género de bacterias 10 a 100 veces más pequeñas que la
mayoría de las bacterias conocidas. En todo caso, se destaca que el tamaño y número de
16
cristales urinarios de oxalato de calcio o fosfato de calcio, cuya relación con la porosidad de
las células de los canalículos pueden llevar a la formación de núcleos de precipitación sobre
los que se seguirá depositando más calcio, lo que agrava el problema. Para comprender mejor
la génesis de las urolitiasis es importante conocer la composición y distribución del calcio en
la matriz de los cálculos y poder demostrar los sitios de deposición de fosfato de calcio
amorfo en relación con la deposición de cristales de oxalato de calcio (Schwille,1999)
2. ¿Qué es un objetivo de inmersión? De un ejemplo.
Este indica que, entre la muestra y la lente frontal del objetivo, se debe colocar una
sustancia líquida, como agua, glicerina o un aceite de inmersión. Por ejemplo, se pueden usar
en aplicaciones donde es requerido un gran aumento y alta resolución.
3. Explique, ¿por qué el número de aumentos de un microscopio óptico es limitado?
Los microscopios ópticos están limitados a un aumento máximo de 1500x por la
difracción de la luz. Esta limitación se debe a la longitud de onda de la luz. Las
combinaciones de objetivo y ocular que generen un aumento superior a 1500x resultará en un
aumento vacío, es decir, sin ganancia de resolución y, por ello, sin añadir detalles a la imagen.
17
7. ANEXOS
18
8. REFERENCIAS
Jenkins, D., Richard, M. G. y Daigger, G. T. (2004). Manual on the Causes and Control of
Activated Sludge Bulking and Foaming. Lewis Publishers.
Gray, P. (1964). Handbook of Basic Microtechnique. Mc Graw Hill Nook Co. New York. 302
pp.
Lovato, L (2001). Instrucciones de manejo. Axiostar plus. Microscopio de luz transmitida y
Fl.
Epelbaum, S. (2010). Historia de la estereoscopia y sus aplicaciones. Archivos de
Oftamologia, 81(2), 62-67.
Montalvo, C. (2010). Microscopia. Recuperado de http://histologiaunam.
mx/descargas/ensenanza/portal_recursos_linea/apuntes/2_ microscopia.pdf
[Consultado el 7 de enero de 2016].
Wollman, A. J. M., Nudd, R., Hedlund, E. G., & Leake, M. C. (2015). From Animaculum to
single molecules: 300 years of the light microscope. Open Biology, 5(4), 150019. Doi:
https://doi.org/10.1098/rsob.150019
Schwille PO, Schmiedl A, Herrmann U, Fan J, Gottieb, D, Manoharan M, Wipplinger LI.
Magnesium, (1999) citrate magnesium citrate and magnesium alkalicitrate as
modulators of calcium oxalate crystalization in urine: Observation in patients with
recurrent idiopathic calcium urolithiasis.
19

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Periodo Académico 2022-2

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Manejo y observación en el microscopio óptico

microscopio de luz es básicamente un sistema óptico para magnificar y un sistema de

iluminación para poder hacer visible el objeto.

El microscopio compuesto consiste de por lo menos un par de sistemas de lentes: a)

básicos: magnificación, resolución y contraste. La resolución es la habilidad de distinguir dos

puntos en un objeto que estén separados por 0.1mm.

Manejo y observación en el microscopio óptico

1.1. Objetivos Generales

Conocer el funcionamiento, componentes, cuidados y limpieza del microscopio

para la observación microscópica y analizar su estructura.

1.2. Objetivos Específicos

● Comprender la función de cada una de las partes del microscopio.

● Analizar en qué dirección se mueve un objeto o estructura bajo el microscopio con

relación a la dirección del movimiento que se le da a la laminilla con la mano.

● Preparar una o varias laminillas con el respectivo cuidado y observar bajo el

● Usar el microscopio de forma apropiada para enfocar algún detalle en la laminilla.

Según Gray (1964), en el estudio de una muestra de fango activo, el microscopio

óptico es una herramienta indispensable que nos va a permitir no sólo la identificación y

cuantificación de las distintas especies pobladoras (bacterias y protozoos, principalmente),

sino el conocimiento de otras características relacionadas con la estructura de la unidad

morfológica y estructural de dicha suspensión biológica, es decir, el flóculo de fango activo.

manifestará como una deficiente separación sólido-líquido en el clarificador, las técnicas de

identificación de microorganismos y de estudio de la estructura flocular, van a hacer posible

el aislamiento y cuantificación de los organismos responsables así como el conocimiento del

nivel de repercusión sobre la organización del flóculo. Un examen microscópico de estas

Manejo y observación en el microscopio óptico

de corresponder con distintas necesidades en la magnificación. Así pues, el aumento

la observación en detalle de la estructura corporal de un protozoo ciliado. La capacidad de

aumento de un microscopio se denomina magnificación (M) y se corresponde con la

expresión: Magnificación= M ocular x M objetivos x M optovar (si éste existe).

Partes básicas del microscopio óptico

Los elementos de un microscopio óptico

calibrado y equipo de microfotografía. Como material accesorio de microscopía son

necesarios: una cámara de recuento (Neubauer, Neubauer improved y/o Fuchs-Rosenthal, p

Manejo y observación en el microscopio óptico

ej.) para el cómputo de pequeños flagelados o, empleada también, en ciertas técnicas de

cuantificación de bacterias filamentosas, portaobjetos, cubreobjetos de varios tamaños (24 x

24 mm y 18 x 18 mm, principalmente), aceite de inmersión y solución limpiadora para las

lentes. En la descripción de las distintas partes de un microscopio, podemos encontrarnos con

los siguientes elementos mecánicos, de iluminación y ópticos:

La platina está situada sobre el estativo o soporte y sobre ella se coloca el

portaobjetos, que mediante un sistema de traslación dotado de mandos, podrá hacerse

cualquier área de interés de la preparación.

Permiten el desplazamiento en el plano vertical de la platina, alejando o acercando la

rápida a la preparación o enfoque “grueso”, mientras que el micrométrico proporciona un

enfoque “fino” de la misma.

luminosidad puede ser regulada mediante un potenciómetro. La iluminación es una cuestión

de especial importancia en el caso de la microfotografía. Es recomendable controlar el haz

Mientras que el verde se utiliza en la óptica de contraste de fases, al aumentar el poder de

Manejo y observación en el microscopio óptico

contornos en organismos vivos.

Situados al pie del cuerpo principal se encuentran el condensador de campo y su

por la fuente luminosa. Situados en la parte inferior a la platina se encuentran el condensador

Los objetivos están considerados los elementos más importantes en la formación de la

imagen microscópica, ya que estos sistemas de lentes establecen la calidad de la imagen en

anularse en la construcción de los objetivos, algunas aberraciones de las lentes (acromáticos,

apocromáticos, aplanáticos etc.) o si se debe usar alguna sustancia de inmersión (Montalvo,