L3-Proteinas G2

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Química y Textil

Escuela profesional de Ingeniería Química
Laboratorio de Bioquimica y Microbiologia (PI721A)
Informe N° 3
Identificación de Proteínas/Aminoácidos
Grupo 2
Integrantes:
Alumno 1.- Gamarra Garcia, Sara Mercedes 20191527C
Alumno 2.- Montes Arainga, Jan Paul 20191312G
Alumno 3.- Quispe Ayala, Araceli Ariana 20191099A
Docente responsable:
Prof. Dra. Jessica Ivana Nieto Juárez
Periodo Académico 2022-2

Fecha de realización del Informe: 12/10/22
Fecha de presentación del Informe: 19/10/22
Universidad Nacional de Ingeniería-Bioquímica y microbiología-PI721A
Índice
1. OBJETIVOS 3
2. DIAGRAMA DE FLUJOS 3
3. PARTE EXPERIMENTAL
3.1.Materiales y reactivos 6
3.2.Seguridad en el laboratorio 7
4. RESULTADOS Y DISCUSIONES 8
5. CUESTIONARIO 13
6. CONCLUSIONES 15
7. ANEXOS 16
8. REFERENCIA 19
1
INTRODUCCIÓN
Las proteìnas son las macromolèculas màs abundantes que se encuentran presentes en
las cèlulas vivas, en cuanto a su función biológica poseen una variedad y diversidad, las
proteínas están constituidas por aminoácidos unidos de forma covalente a través de enlaces
peptídicos, pues a partir de estos aminoácidos, los diferentes organismos pueden producir
productos como enzimas, hormonas, anticuerpos, entre otros. Pues estas proteínas tienen
diversas funciones como fuente de energía, soporte estructural de tejidos, responsables de
procesos biológicos a nivel celular, catalizadores de reacciones entre muchas más.
Se hace un análisis cualitativo de ciertas muestras para la identificación de proteínas,
así también de los aminoácidos, siendo estas pruebas la de solubilidad y desnaturalización,
donde esta prueba es una propiedad físico-química de las proteínas y aminoácidos que
depende de ciertos parámetros como el pH, peso molecular, carga eléctrica neta y de su
conformación en el caso de proteínas. También encontramos la prueba de Biuret que es una
prueba general para determinar las proteínas. Por otro lado, está la prueba de Xantoproteica
que sirve para identificar algunos aminoácidos aromáticos que son derivados del benceno.
Con la prueba de aminoácidos azufrados se puede identificar aminoácidos que contengan
azufre, como por ejemplo cisteína o metionina. Por último, la prueba isoeléctrica que viene a
ser el pH en el cual la molécula es eléctricamente neutra.
2
1. OBJETIVOS
1.1. Objetivos Generales
Diferenciar las diferentes pruebas cualitativas para poder identificar las proteínas y
aminoácidos presentes en cada muestra.
1.2. Objetivos Específicos
Observar en cada paso de cada experimento cualitativo que es lo que pasa con las
soluciones para poder identificar si son positivas o negativas.
2. DIAGRAMA DE FLUJOS
Figura 1
Prueba de desnaturalización
3
Figura 2
Prueba del punto isoeléctrico
4
Figura 3
Prueba Xantoproteica
Figura 4
Prueba de Biuret
5
3. PARTE EXPERIMENTAL
Tabla 1
Materiales usados en los experimentos
Materiales
Tubos de ensayo Gradilla para tubos de

150 x 15 mm ensayo
Vaso precipitado de Pinza para tubos

50 ml, 150 ml
Bagueta Vaso precipitado de 600

ml
6
Propipeta Piceta
Pipeta graduada de Plancha eléctrica

5 ml, 10 ml
Gotero Termómetro
Tabla 2
Reactivos controlados
Reactivos Controlado Reactivos Controlado
Acetato de plomo Controlado Cisteína Controlado
Alcohol etílico No controlado Nitrato de plata 2% Controlado
Ácido nítrico (cc) Controlado HCl 0.2% Controlado
NaOH 10% No controlado Tirosina Controlado
Sulfato de cobre No controlado Urea No controlado

0.1%
Tabla 3
Muestras
Muestras
Clara de huevo Leche
Gelatina sin color
7
4. RESULTADOS Y DISCUSIONES
Muestra Proteína principal
Clara de Huevo Tiene Albúmina (Gutiérrez, 2003)
Leche Tiene Caseína (Muler, 2020)
Colapíz Tiene Colágeno (Riesgo, s.f.)
Tirosina Según Zanin (2022) la tirosina es un

aminoácido no esencial.
Cisteína Según Aldas, Barrera y Guevara (2021), la

cisteína es un aminoácido azufrado.
5.1. Para la prueba de desnaturalización de las proteínas

Esta prueba se utiliza para la precipitación de las proteínas mediante la adición
de agentes desnaturalizantes,esto es debido a que hay una pérdida de sus estructura
tridimensional.Es utilizado para el aislamiento y purificación de las proteínas.
Agente desnaturalizante Observaciones
Claro de huevo + etanol Se forma dos fases,haciendo referencia

que son insolubles y mezcla
heterogenea,donde la fase superior es de
color blanco y la inferiores d e color
amarillo la clara de huevo,lo cual hace a
la precipitación de la proteina.
Clara de huevo + AgNO₃ Se forman dos fases,hace referencia que

son insolubles y heterogenea,donde la
capa superior es de color blanco lechoso
pero con menor intensidad que lo que
presento el etanol y la fase inferior se
8
encuentra dispersa.
Clara de huevo sometido a calor

En un minuto después del calentamiento
a 38°C se empezó a notar pequeñas
burbujas que indica el inicio de la
solidificación .
Clara de huevo + HCl Presentan una sola fase,mezcla

homogenea, pero mostrando unos
pequeños coágulos en sus interior por lo
cual la mezcla es de color amarillo de
baja intensidad con respecto a los otros
agentes desnautalizantes.
5.2.Método del Punto Isoeléctrico
Muestra Observaciones Resultado final
Leche 20 mL + Se calienta la temperatura hasta El pH medido en el

agua 20 mL
que llegue a 50°C,una vez peachímetro es de 4.71 dando
alcanzado la temperatura se añadió un resultado experimental casi
9 gotas de ácido acético agitando cerca al valor teórico de 4.6 ,el
constantemente mostrando una cual indica que esta solución es
cuajada después de la última soluble y las moléculas no
gota.Una vez que se presenta la precipitan y su carga eléctrica
aparición de esta cuajada se pasó a no es neutra sino está cargada
medir el pH.La agitacion afecta a negativamente.
la medida de pH porque sin
agitación dio un valor de 4.85
9
Leche Al medir el pH de la leche sin El pH de la leche experimental

añadir ácido acético mostró un es mayor al P.I.E de la caseína
resultado de 6.19 al momento de lo cual indica que las moléculas
medir con agitación y asegurando negativas se repelen entre sí y
que el electrodo del peachimetro permanezca en solución.
este limpio.
5.3. Prueba Xantoproteica
Clara de huevo Al momento de agregar HNO3 se En medio básico se formó un

ha desnaturalizado formando dos color anaranjado lo cual es
fases con coágulos en la parte positivo.
superior y un precipitado de color
amarillo.
Leche Al momento de agregar HNO3 se En medio básico se formó un

ha desnaturalizado formando color anaranjado lo cual es
sólidos, en la parte inferior color positivo.
amarillo y después del
calentamiento se nota el
precipitado amarillo.
10
Colapiz Al momento de agregar los No muestra color, por lo tanto

reactivos y después del baño maría, es negativo.
se mantiene incoloro.
Cisteína Al momento de agregar los No muestra color, por lo tanto

reactivos y después del baño maría, es negativo.
se mantiene incoloro.
Tirosina Después del baño maría se observa en medio ácido el color es

que el color cambió a amarillo amarillo, por lo cual es
positivo.
5.4. Prueba de Biuret
11
Clara de huevo Al agregar NaOH cambia de En medio básico se formó un

incoloro a un color amarillento, color violeta lo cual es
luego de agregar CuSO4 se forma positivo.
una dispersión de violeta intenso.
Leche Al agregar NaOH cambia de En medio básico se formó un

incoloro a un color blanco, luego color violeta lo cual es
de agregar 7 gotas de CuSO4 se positivo.
observa un cambio de coloración a
violeta no muy intenso.
Colapiz Al agregar NaOH se mantiene En medio básico se formó un

incoloro, luego de agregar 5 gotas color violeta lo cual es
de CuSO4 se observa dos fases, positivo.
donde la fase superior es de color
violeta y la fase inferior de un
color azul..
Cisteína Al agregar NaOH se mantiene En medio básico el color es

incoloro, luego de agregar 6 gotas marrón, por lo cual es negativo.
de CuSO4 se observa un cambio de
coloración a marrón.
12
Tirosina Al agregar NaOH se mantiene En medio ácido el

incoloro, luego de agregar 9 gotas color es turquesa, por
de CuSO4 se observa un cambio de lo cual es negativo.
coloración a turquesa.
5. CUESTIONARIO
1. Describir el principio, la reacción química y el resultado de la prueba de
Ninhidrina y Millón en la identificación de proteínas/aminoácidos. De ejemplos
Prueba de Ninhidrina ((Hidrato de tricetohidrindeno)
Sirve para identificar aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y un
carboxilo libre, reaccionan con la ninhidrina. La positividad se manifiesta por la aparición de
un color violáceo o amarillo. Debido a que las proteínas y los aminoácidos poseen esta
característica, la reacción sirve para identificarlos. Algunas soluciones de amonio y aminas,
dan la coloración característica, aparentemente debido a una oxidación y reducción
intermolecular de la ninhidrina en presencia de amoníaco. Los aminoácidos porina e
hidroxiprolina, que no poseen grupo amino sino imino (-NH-), dan un color rojo que pasa
rápidamente a amarillo.
Ejemplos
Comparación de ensayos de ninhidrina para la cuantificación de nanopartículas
Se ha reportado el uso de nanopartículas recubiertas con quitosán para la
inmovilización de enzimas, ligandos, azúcares, microorganismos, compuestos fenólicos,
entre otras. Esta capacidad es brindada por la capacidad del quitosán, el cual proporciona los
grupos aminos para enlazarse con compuestos. Sin embargo, la cantidad de compuesto ligado
13
en la superficie esta relacionado con la concentración de los grupos aminos que le provee el
quitosán a la nanopartícula. Es por esto por lo que se evaluaron dos metodologías para la
determinación de estos grupos aminos en nanomateriales. La síntesis de nanopartículas se
llevó acabo en un solo paso con Fe+2 y quitosán. Se evaluaron los dos métodos en las
nanopartículas, siendo una de las principales diferencias entre los métodos la concentración
de ninhidrina. Los resultados mostraron que la técnica con una mínima concentración de
ninhidrina mantenía una mayor estabilidad del cromóforo y por ende una lectura más fácil,
mientras que la técnica con mayor concentración de ninhidrina reaccionaba altamente
impidiendo la lectura de la muestra. Los resultados observados permiten tener una técnica
fácil para la determinación de los grupos amino en nanomateriales como lo son las
nanopartículas recubiertas con quitosán.
Prueba de Millón
Esta reacción es debida a la presencia del grupo hidroxifenilo (C₆H₄OH) en la molécula
proteica. Cualquier compuesto fenólico no sustituido en la posición 3,5 como la tirosina,
fenol y timol, dan positiva la reacción. El mecanismo de la reacción es poco conocido,
posiblemente por la formación del complejo óxido de mercurio y fenol.
2. Indicar el punto isoeléctrico de la ovoalbúmina, y explicar qué pasaría cuando
la proteína se encuentra a un pH de 5
La ovoalbúmina es una de las principales proteínas de la clara del huevo (60-65% de las
proteínas totales) tiene como característica anular las enzimas digestivas y por esta razón
señalan que es un mecanismo protector contra las bacterias exteriores agresivas al huevo.Su
punto isoelectronico de la fosfoglicoproteina o ovoalbumina es de 4.8.Lo cual si la proteína
se encuentra a un pH igual a 5 entonces este es mayor que el pH teórico (pH> P.I.E) lo cual
indica que la solución es soluble y no precipita y se encuentra con carga negativa,esto es
debido a que las moléculas se repelen entre sí.
14
6. CONCLUSIONES
En la prueba de desnaturalización de la clara de huevo con el calor es necesario este
agentes para que se logre la precipitación de la proteína,la proteína que más abunda en el
huevo es la albúmina,y así ocasiona la ruptura de su estructura tridimensional.
El pH(4.7) de la mezcla de la leche con agua destilada en igual proporción dio como
resultado un valor cercano al teórico(4.6) lo cual nos lleva a concluir que la mezcla se
encuentra soluble y de carga negativa debido a que los grupos carboxilo están desprotonados
(COO⁻) y los grupos amino estarían en su forma neutra (NH₂), además cuando no se medía el
pH con agitación(4.85) nos daba un valor más elevado que con agitación demostrando que la
agitación es influyente en la medición del pH.
Para que la precipitación,la disminución de la solubilidad y la facilidad de agregación
de las proteínas o aminoácidos ocurra el pH y el punto isoeléctrico tienen que ser iguales,es
decir,tiene que ser eléctricamente neutro.
En la prueba Xantoproteica se logró identificar a aquellos aminoácidos que presentan
algún anillo aromático derivado del benceno.
En la prueba de Biuret se logró identificar a aquellos proteínas y péptidos que
presentan que sean mayores a 2 aminoácidos. se evidenció que la prueba es positiva en las
muestras de la clara de huevo, leche y colapiz, dando un complejo de color violeta.
15
7. ANEXOS
16
17
18
8. REFERENCIAS
G, Ing. Y. & Guerra Molina, Dra. L. (2013, 6 septiembre). Caracterización físicoquímica y
contenido de proteínas de extractos fluidos del ostión de mangle (Crassostrea
rizophorae). Cuba de quimica. Recuperado 21 de enero de 2014, de
http://scielo.sld.cu/pdf/ind/v26n1/ind09114.pdf
Aldás, S., Barrera, J., & Guevara, E. (2020). Cisteína generadora de glutation y su
efectoantioxidante en pacientes con nutrición parenteralGlutathione-generating
cysteine and its antioxidant effect in patients on parenteralnutritio. Universidad
Técnica de Ambato. Ecuador, 4(1), 1–6.
https://doi.org/10.31243/mdc.uta.v5i4.1.1444.2021
Gutiérrez, L. (2003). ESTUDIO DEL APORTE PROTEICO EN LA COMBINACIÓN DE
SOYA Y CLARA DE HUEVO EN ALIMENTACIÓN DE POLLOS.
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA “UNAD”, 1(1), 17–25.
https://repository.unad.edu.co/bitstream/handle/10596/20127/legutierrezp%20.pdf?seq
uence=1&isAllowed=y
Zanin, T. (2022, 2 marzo). Tirosina: qué es, función y alimentos que lo contienen.
TUASÁUDE. Recuperado 9 de mayo de 2022, de
https://www.tuasaude.com/es/tirosina/
Riesgo, A. (s.f.). Propiedades de la gelatina. Nutrienda. Recuperado 8 de mayo de 2022, de
https://blog.nutritienda.com/propiedades-de-la-gelatina-tiene-tantas-proteinas-como-s
e-cree/
19

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Periodo Académico 2022-2

diversas funciones como fuente de energía, soporte estructural de tejidos, responsables de

procesos biológicos a nivel celular, catalizadores de reacciones entre muchas más.

Se hace un análisis cualitativo de ciertas muestras para la identificación de proteínas,

así también de los aminoácidos, siendo estas pruebas la de solubilidad y desnaturalización,

conformación en el caso de proteínas. También encontramos la prueba de Biuret que es una

Con la prueba de aminoácidos azufrados se puede identificar aminoácidos que contengan

ser el pH en el cual la molécula es eléctricamente neutra.

1.1. Objetivos Generales

aminoácidos presentes en cada muestra.

1.2. Objetivos Específicos

soluciones para poder identificar si son positivas o negativas.

Materiales usados en los experimentos

Tubos de ensayo Gradilla para tubos de

Vaso precipitado de Pinza para tubos

Bagueta Vaso precipitado de 600

Pipeta graduada de Plancha eléctrica

Reactivos Controlado Reactivos Controlado

Acetato de plomo Controlado Cisteína Controlado

Alcohol etílico No controlado Nitrato de plata 2% Controlado

Ácido nítrico (cc) Controlado HCl 0.2% Controlado

NaOH 10% No controlado Tirosina Controlado

Sulfato de cobre No controlado Urea No controlado

Clara de huevo Leche

Gelatina sin color

Muestra Proteína principal

Clara de Huevo Tiene Albúmina (Gutiérrez, 2003)

Leche Tiene Caseína (Muler, 2020)

Colapíz Tiene Colágeno (Riesgo, s.f.)

Tirosina Según Zanin (2022) la tirosina es un

Cisteína Según Aldas, Barrera y Guevara (2021), la

5.1. Para la prueba de desnaturalización de las proteínas

Agente desnaturalizante Observaciones

Claro de huevo + etanol Se forma dos fases,haciendo referencia

Clara de huevo + AgNO₃ Se forman dos fases,hace referencia que

Clara de huevo sometido a calor

Clara de huevo + HCl Presentan una sola fase,mezcla

5.2.Método del Punto Isoeléctrico

Muestra Observaciones Resultado final

Leche 20 mL + Se calienta la temperatura hasta El pH medido en el

Leche Al medir el pH de la leche sin El pH de la leche experimental

5.3. Prueba Xantoproteica

Muestra Observaciones Resultado final

Clara de huevo Al momento de agregar HNO3 se En medio básico se formó un

Leche Al momento de agregar HNO3 se En medio básico se formó un

Colapiz Al momento de agregar los No muestra color, por lo tanto

Cisteína Al momento de agregar los No muestra color, por lo tanto

Tirosina Después del baño maría se observa en medio ácido el color es

5.4. Prueba de Biuret

Muestra Observaciones Resultado final

Clara de huevo Al agregar NaOH cambia de En medio básico se formó un

Leche Al agregar NaOH cambia de En medio básico se formó un

Colapiz Al agregar NaOH se mantiene En medio básico se formó un

Cisteína Al agregar NaOH se mantiene En medio básico el color es

Tirosina Al agregar NaOH se mantiene En medio ácido el

1. Describir el principio, la reacción química y el resultado de la prueba de

Ninhidrina y Millón en la identificación de proteínas/aminoácidos. De ejemplos

Prueba de Ninhidrina ((Hidrato de tricetohidrindeno)

carboxilo libre, reaccionan con la ninhidrina. La positividad se manifiesta por la aparición de