Análisis Instrumental

Katherine Paredes Gil

Dra. Fisicoquímica Molecular
Profesora Asistente
Departamento de Química, FCNMM
Investigadora, PIDi
K.paredesg@utem.cl

2do Semestre 2022

 La cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC)

• La HPLC es una técnica cromatográfica de reparto o

posición en la que la muestra se fracciona entre una fase
móvil que es líquida y una fase estacionaria.

• Utiliza una presión muy elevada para forzar el paso

del disolvente por una columna que contiene partículas
muy finas, consiguiendo así separaciones de gran
resolución.

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 La cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC)

• Debido a estas presiones el equipo para HPLC es

elaborado y costoso.

• Es la técnica más utilizada de todos los tipos de

cromatografía de elución, conociéndose como al
desplazamiento de un soluto de la fase estacionaria por
un disolvente.

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 La cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC)

Los tipos de cromatografía líquida de alta resolución suelen clasificarse según el mecanismo de
separación o el tipo de fase estacionaria.

– Cromatografía de reparto
• Fase inversa o reversa
• Fase normal

– Cromatografía de adsorción o líquido-sólido

– Cromatografía iónica

– Cromatografía de exclusión por tamaños o en geles

3
5
 Cromatografía de Reparto

• La más utilizada

• Para compuestos polares, no iónicos, de baja a moderada masa molecular (<3000).

• En la actualidad se incluye la separación de compuestos iónicos derivatizados (formación de

pares iónicos).
Cromatografía de Reparto

se puede subdividir en:

Cromatografía con fases unidas

Cromatografía Liquido-Liquido
químicamente (enlazadas)

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La diferencia entre estas técnicas radica en la forma como se retiene la fase estacionaria
sobre las partículas soporte del relleno.

Líquido-líquido: fase estacionaria liquida se retiene sobre la superficie del soporte por
adsorción física.

Desventaja: pérdida de fase estacionaria por disolución en la fase móvil.

Fase unida químicamente: la fase estacionaria se une químicamente a la superficie del

soporte.
Soporte más común es la sílice. Diámetro entre 3, 5 o 10 μm; porosidad (hasta 0.80).

5
 Cromatografía de Reparto

Fase Normal (FN)

– Fase móvil apolar/ Fase estacionaria polar La Fase Estacionaria es de naturaleza fuertemente polar (ej. silicagel), y la
Fase Móvil es no polar (como n-hexano o THF).

El componente menos polar se eluye primero, debido a que relativamente es el más soluble en la fase
móvil y un aumento de la polaridad de la fase móvil provoca una disminución del tiempo de elución.

• Relleno polar (agua o trietilenglicol soportado sobre sílice o alúmina y fase móvil apolar.
• Competencia del disolvente y del analito por el relleno es determinante de los factores de retención.
• Elución a pH >7.5 puede ocurrir hidrólisis del siloxano.
Tipos de relleno siloxano para fase normal:
amino (C3H6NH2) (los más polares)
diol (C3H6OCH2CHOHCH2OH) (polaridad intermedia)
dimetilaminopropil (C3H6N(CH3)2) (polaridad intermedia)
ciano (C2H4CN) (los menos polares)
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 Cromatografía de Reparto

Fase inversa (FI) o reversa

– Fase móvil polar/ Fase estacionaria no polar
Fase Estacionaria es no polar (hidrofóbica), y la Fase Móvil es un líquido polar (agua y metanol o acetonitrilo).
Los componentes más polares aparecen primero, y un aumento de la polaridad de la fase móvil aumenta el
tiempo de elución.

Columnas (Fase Estacionaria) R= mas común- C8 (n-octil) o C18 (n-octildecil).

• Los grupos están en posición perpendicular a la superficie generando una estructura de cepillo o brocha.
• Cuanto mayor es el numero de átomos de carbono en R mayor es la eficacia.
• Fase estacionaria no polar (hidrocarburo).
• Cambios de solvatación del analito en el disolvente es determinante de cambios de factores de retención.

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Los métodos en fase inversa, los componentes más polares aparecen primero, y un aumento de la polaridad
de la fase móvil aumenta el tiempo de elución.

En cromatografía fase normal, el componente menos polar se eluye primero, debido a que relativamente es
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el más soluble en la fase móvil provoca una disminución del tiempo de elución.
 Criterios de Selección

Polaridad de la fase estacionaria similar a la de los analitos (Evitar tiempos de retención muy altos).
Fase móvil con polaridad distinta a la fase estacionaria

Polaridad creciente:
Hidrocarburos < éteres < ésteres < cetonas < aldehídos < amidas < aminas < alcoholes < agua

Cuantitativamente la polaridad se puede determinar con el índice de polaridad ( P’ )

medida numérica de la polaridad
– Si P’ Varia a 2 ( no-polar) a 10.2 ( altamente polar) relativa de varios disolventes
– En una mezcla P’AB= AP’A+ B P’B

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Índice de polaridad: describe cuantitativamente la polaridad del solvente en el reparto

Solvente Indice de polaridad (P’)

Fluoroalcanos < -2
Ciclohexano 0.04
Tolueno 2.4
Cloroformo 4.1
Etanol 4.3
Acetato de etilo 4.4
Metanol 5.1
Nitrometano 6.0
Etilenglicol 6.9
Agua 10.2

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métodos para mejorar la resolución de una columna cromatográfica: factor de capacidad k’ y factor de selectividad α

En HPLC el factor de capacidad k’ puede ser manipulado cambiando la composición de la fase móvil (solvente).
Mejor relación resolución/tiempo cuando k’=2-5
se puede cambiar α eligiendo un relleno de columna distinto.

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 Cromatografía de Adsorción ( Líquido-Sólido)

Fases estacionarias: sílice y alúmina

Selección de la Fase Móvil
Para optimiza k’ y α se varia la composición de la FM se utiliza la fuerza del eluyente eO.
Se eligen dos solventes compatibles uno con eO pequeña y otro con eO grande. Se varían hasta obtener una k’
adecuada.
Fuerza del disolvente eO (energía de adsorción por unidad de superficie). eO varía no linealmente con la relación de
volúmenes de dos disolventes.
Elección de disolventes
Un aumento de 0.05 unidades de eO disminuye k’ en un factor de 3-4. Cambios de  se logran por ensayos previos con
distintos disolventes.
Ensayos por cromatografía de capa fina.
Aplicaciones de la cromatografía de adsorción
Para compuestos no polares con masa molecular < 5000
Compuestos con solubilidad limitada en disolventes acuosos.
Complementario con Reparto y Separación de isómeros. 11
Fuerza del solvente (energía de adsorción del solvente por unidad de área del
adsorbente). Se mide con el parámetro de Snyder (eO).

Solvente eO (SiO2) eO (Al2O3)

Fluoroalcanos 0.00 -0.25
Ciclohexano 0.01 -0.2
Tolueno 0.22 0.29
Cloroformo 0.26 0.4
Etanol 0.70 0.88
Acetato de etilo 0.48 0.58
Metanol 0.75 0.95
Etilenglicol 0.90 1.11
Agua grande grande

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Cromatografía de Adsorción ( Líquido-Sólido)

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 Cromatografía de Intercambio Iónico

La FE posee una superficie iónicamente cargada de carga opuesta al ion de la muestra.

Esta técnica se utiliza casi exclusivamente con muestras iónicas o ionizables.
FM es un buffer acuoso en donde el pH y la fuerza iónica se utilizan para controlar el tiempo de elución.
Rellenos
Partículas esféricas porosas copolímeros de estireno y divinilbenceno (8%) emulsionados (estables entre pH 0 y 14).
Activación por grupos ácidos (sulfónico) o básicos (aminas cuaternarias).
Nuevos desarrollos: partículas esféricas (30 a 40 μm), no porosa, de vidrio o polímero, recubierta con resina de
intercambio iónico (menor difusión)

Fase móvil
Disoluciones acuosas con metanol u otros disolventes orgánicos y especies iónicas
para formar un buffer.

13
 Cromatografía de Intercambio Iónico

La separación mediante intercambiadores iónicos se realiza por lo general, en dos fases:

i) las sustancias a separar se unen al intercambiador utilizando condiciones que originan una unión
fuerte y estable;

ii) a continuación, se eluye de la columna con buffers de diferentes pH o diferente fuerza iónica,
compitiendo los componentes del buffer con el material por los sitios de unión.

13
https://www.youtube.com/watch?v=Y0AuVre6XfI&list=PL2JhuHo3iZYijoulX
XFQBqWfE84bMQTyL&index=2

Intercambio ANIÓNICO

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 Cromatografía de exclusión por tamaño

Separación de compuestos de alto peso molecular-proteínas, polímeros, ácidos

grasos, azucares.

FE = partículas poliméricas o de sílice que contienen una red de poros

Las moléculas son atrapadas en los poros y eliminadas por el flujo de FM.

moléculas > poro son excluidas- salen antes

moléculas < poro penetran y eluyen después.
moléculas ~ poro se retienen, tiempo de elución intermedio.
16
La columna se rellena con material de tamaños de poro controlados, la muestra es
filtrada según su tamaño molecular solvatado.

Moléculas más grandes se eluyen rápidamente a través de la columna y moléculas más

pequeñas penetran dentro de los poros de las partículas que empaquetan la columna y
eluyen más tarde.

También se llama cromatografía de gel filtración o gel permeación

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 Cromatografía de exclusión por tamaño
se puede subdividir en:

Cromatografía de filtro en gel Gel permeables

Cromatografía de filtración en gel se utilizan Gel permeables se basan en disolventes no

disolventes acuosos y rellenos hidrofílicos. polares y en rellenos hidrofóbicos.
Aplicaciones de filtración en gel:
- Consiste en separar las moléculas de alto peso molecular de productos naturales de las especies de bajo peso molecular y de las sales.
Por ejemplo, un gel con un límite de exclusión de varios miles, puede separar bien las proteínas de los aminoácidos y de los péptidos de bajo peso
molecular.

Aplicación Gel permeables :

- Una de las aplicaciones más útiles del procedimiento de filtración en gel consiste en
separar las moléculas de alto peso molecular de productos naturales de las especies de
bajo peso molecular y de las sales
- separación de una serie de ácidos grasos con pesos moleculares entre 116 y 344
mediante un relleno de poliestireno con un límite de exclusión de 1000 16
La Figura 4.14 ilustra una aplicación de la cromatografía de exclusión por tamaños a la determinación de glucosa, sacarosa y
fructosa en cuatro tipos de zumos de fruta. El relleno, con un límite de exclusión de 1000, era un polímero de poliestireno
entrelazado de características hidrofilícas por la incorporación de grupos sulfónicos. Una columna de 25 cm con este relleno tenía
7600 platos a una temperatura de trabajo de 80ºC.

23
 Ventajas y desventajas de cromatografía de exclusión por tamaños

Ventajas
1.- Tiempos de separación cortos y bien definidos [todos los solutos salen de la columna entre dos límites]
2.-Bandas estrechas, que conducen a una buena sensibilidad
3.-No hay pérdida de muestra, porque los solutos no interaccionan con la FE
4.-No se desactiva la columna por interacción del soluto con el relleno.

Desventajas:
1.- Debido a que la escala de tiempos en el cromatograma es corta, sólo se pueden acomodar un número
limitado de bandas.
2.-No es aplicable a muestras de componentes semejantes, como las mezclas de isómeros.
20
 Solventes como Fase Móvil

Compuestos con interacciones más fuertes con la fase móvil que con la fase estacionaria eluirán más
rápidamente de la columna (tiempos de retención menores).
Interacciones químicas entre la muestra, la fase móvil y el relleno de la columna, determina el grado de migración
y separación de componentes contenidos en la muestra.
La fase móvil puede ser alterada en el transcurso del análisis para manipular las interacciones de los
componentes de la muestra con la fase estacionaria.

Elución politípica: utilizan varios modos cromatográficos en una misma columna.

Elución por gradiente: los distintos analitos son eluídos con incremento de la composición
de la fase móvil con polaridad muy diferentes en la fase orgánica.

Elución Isocrática: composición constante de la fase móvil

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Elución Isocrática ( un solo solvente de composición constante)

21
Elución en Gradiente

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 HPLC comparada con la técnica clásica

Columnas de pequeño diámetro (2-5 mm), de acero inoxidable

Empaquetamiento de las columna con partículas muy pequeñas(3, 5 y 10 mm) y con un continuo desarrollo
de nuevas sustancias para ser utilizadas como fase estacionaria.

Fase móvil con Altas presiones de entrada y flujo controlado.

Introducción precisa de la muestra sin necesidad de grandes muestras;

Detectores capaces de trabajar con velocidades de flujo pequeñas y detección de pequeñas

concentraciones

Instrumentos automáticos estandarizados

Análisis rápido

Alta resolución
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 Instrumentación

Los componentes básicos de un sistema para

HPLC son:

• Depósitos para la fase móvil

(disolventes)
• Sistema de bombeo para proporcionar
presión a la fase móvil.
• Sistema de inyección de muestras.
• Columna cromatográfica.
• Termostatos para las columnas.
• Detectores
• Sistema para el tratamiento de datos y
registrador.

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30
 Cromatografía
CROMATOGAFIA líquidaDE
LIQUIDA deALTA
alta presión
Presión(HPLC)
(H.P.L.C.)

Jeringa o válvula
Gases
para la muestra
disueltos
Introducción
Desgasificador Preco- de la muestra
lumna
de disolventes Espacio térmico
Abastecimiento
de disolvente Columna analítica
Medidor
Filtro de presión Lectura

Bomba
Amplificador
Válvula de
seguridad y purga Descarga Recolección
o descarga 25
32
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 Recipientes para la fase móvil

• Un equipo de HPLC está equipado con uno o más recipientes de vidrio o de acero inoxidable, cada uno de los cuales
contiene de 200 a 1000 mL de un solvente.
• Los recipientes, a menudo, se equipan con un sistema para eliminar los gases disueltos (generalmente oxígeno y
nitrógeno) interferentes (burbujas).
• Las burbujas provocan ensanchamiento de banda e interfieren en el funcionamiento del detector
• Un desgasificador, puede consistir en un sistema de bombeo al vacío, un sistema de destilación, dispositivos para
calentar y agitar los disolventes, o sistemas de purga.
• Los sistemas de purga permiten arrastrar los gases disueltos fuera de la solución mediante burbujas de un gas inerte
de baja solubilidad.
• Los recipientes que se utilicen para almacenar la fase móvil tienen que ser inertes. -Botellas de vidrio y tubos de
teflón. Provistos de unos filtros, indispensables para eliminar los gases disueltos y partículas que pueda contener la
fase móvil

27
 Algunas FM usadas en HPLC pueden ser químicamente activas:
- Ácidos
- Bases
- Líquidos corrosivos
Es esencial que los componentes del sistema estén fabricados con materiales resistentes, por lo que
la mayoría de las partes en contacto con la fase móvil suelen estar fabricadas con acero inoxidables.

Los disolventes son del grado HPLC y los más usados son:
- Agua, Acetonitrilo
- Soluciones tampón acuosas
- Solventes orgánicos como el metanol
Deben ser espectroscópicamente puros, exentos de partículas sólidas y desgasificados esto se lleva a
cabo con un gas inerte muy poco soluble como el helio. Como FE lo más común es usar partículas
microporosas esféricas de sílice muy puro con diámetro de 5 a 10 m, que son permeables al disolvente.

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 Tratamiento de los disolventes

Una separación que utiliza una elución con gradiente, es más eficiente
que la elución isocrática (un solo solvente).

Una vez que comienza la elución, se varía la relación de los disolventes de forma programada.
Los instrumentos de HPLC a menudo están equipados con unos dispositivos que permiten introducir los
disolventes desde dos o más recipientes en una cámara de mezcla a una velocidad que varía
continuamente.
La relación de volumen de los disolventes se puede modificar lineal o exponencialmente con el tiempo.

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 Sistema de Bombeo

El sistema de bombeo tiene características:

1) La calidad de una bomba es determinada por el grado de estabilidad y reproducibilidad del flujo que genera.
2) La generación de presiones por encima de 6000 psi 40 Mpa (400 atm)
3) Un flujo libre de fluctuaciones
4) Un intervalo de caudales de 0.1 a 10 mL/min
5) El control y la reproducibilidad del caudal mejor del 0.5% relativo
6) componentes resistentes a la corrosión (acero inoxidable o Teflón)

Se utilizan tres tipos de bombas:

Bombas recíprocas
Bombas de jeringa o de desplazamiento
Bombas neumáticas o de presión constante
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 Bombas recíprocas

• Corresponden al 90% de los sistemas de HPLC comerciales.

• Consisten en una pequeña cámara en la que el disolvente es “empujado” por el movimiento de vaivén de un pistón accionado
por un motor de arrastre.

Amortigua el flujo
pulsado que se produce

Se abren y cierran
alternativamente, controlan el
Las principales ventajas son:
flujo del disolvente hacia dentro y
• Posee un pequeño volumen interno (35 a 400mL) hacia fuera de un cilindro
•Alcanza grandes presiones de salida (por encima de 10000 psi)
•Fácil adaptación a la elución con gradiente
• Caudales constantes que son prácticamente independientes de la contrapresión de la columna y de la viscosidad del disolvente.

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 Bombas de desplazamiento
Consisten en grandes cámaras equipadas con un émbolo (como una jeringa) que se activa por un mecanismo de
tornillo accionado mediante un motor paso a paso.
También producen un flujo independiente de la viscosidad y de la contrapresión.
Las principales desventajas incluyen una capacidad de disolvente limitada (250mL aprox) y gran incomodidad para
cambiar el disolvente.

Bombas neumáticas
En las más comunes, la FM se encuentra en un recipiente plegable colocado en una vasija que puede presurizarse
mediante gas comprimido
Son baratas y están exentas de impulsos, aunque tienen una limitada capacidad y presión de salida. Además el
caudal depende de la viscosidad del disolvente y de la contrapresión de la columna.
No se pueden utilizar en la elución de gradiente, estando limitadas a presiones menores de unos 2000 psi.

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 Sistema de Inyección de Muestra

Comúnmente el factor limitante de la precisión en las medidas de HPLC es la reproducibilidad con que se puede
introducir la muestra en la columna.
El medio más simple es la introducción de muestras inyectando con una jeringa a través de un elastómero
(septum) que se cierra herméticamente.
En cromatografía de líquidos el método más ampliamente utilizado para la introducción de la muestra utiliza
bucles.

Hay bucles intercambiables que permiten la

elección de la muestra desde 5 a 500mL

35
Válvula de Inyección

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 Precolumnas

Se coloca delante de la columna, para aumentar la vida de la

columna.
Elimina no solo la materia en suspensión y los contaminantes de
los solventes, sino también los componentes de la muestra que
se unen irreversiblemente a la fase estacionaria.
La composición de relleno de la precolumna debe ser semejante a
la columna , aunque el tamaño de partícula es mayor para
minimizar la caída de presión.

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 Precolumnas

• La mayoría de las columnas para cromatografía de líquidos tienen una longitud

entre 10 y 30 cm.
• En general son rectas, acoplando dos o más columnas si es necesario.
• Poseen, en general, un diámetro interno de 4 a 10 mm, con tamaño de partículas de
los rellenos más comunes de 5 o 10 mm.
• Este tipo de columna tiene de 40000 a 60000 platos/metro.
• Las columnas actuales son de alta eficacia, de menores dimensiones.
• Pueden tener diámetros internos que oscilan entre 1 y 4.6 mm, y se rellenan con
partículas de tamaño de 3 o 5 mm
• Ventaja rapidez y el mínimo consumo de solvente

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 Tipos de rellenos de la columna
Relleno pelicular:
• Bolas de vidrio o polímero, no porosas y esféricas (diámetro 30-40µm),sobre su superficie se deposita una
capa delgada y porosa de sílice, alúmina o una resina de intercambio iónico.
• Se utilizan ampliamente en las precolumnas y no en las columnas analíticas.

Relleno Partícula porosa:

• Micro-partículas de sílice, alúmina o resinas de intercambio iónico aunque la sílice es la mas común.
Partículas de sílice (tamaño de poro, 3 y10 µm ).

Las partículas de sílice se sintetizan aglomerando partículas de sílice de tamaños

inferiores al micrón en unas condiciones tales que se forman partículas mayores con
diámetros muy uniformes. Las partículas que resultan se recubren muchas veces con
películas orgánicas, que se unen químicamente o físicamente a la superficie.

39
 Relleno de columna

Partículas de sílice (tamaño de poro, 10 nm)

a) Agregado de partículas esféricas, área Superficial
150 m2/g
b) Estructura esponjada, área superficial 300m2/g.

40
Columnas monolíticas de sílice.

41
 Detectores

El detector de HPLC debe tener un volumen interno mínimo a fin de

reducir el ensanchamiento de banda.

Los detectores en cromatografía de líquidos son de dos tipos básicos.

a) Los detectores basados en una propiedad de la disolución:

responden a una propiedad de la fase móvil, tal como el índice de refracción, la
constante dieléctrica, o la densidad, que se modifica por la presencia de los analitos.

b) los detectores basados en una propiedad del soluto responden a alguna de las
propiedades del soluto, como la Absorbancia UV, fluorescencia o intensidad de difusión
que no son propias de la fase móvil.

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 Detectores

- Detector de absorbancia
- Detector de fluorescencia
- Detector de índice de refracción
- Detector de dispersión de luz
- Detector electroquímico
- Detector de Conductividad
- Detector por espectroscopia de masas

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 Celda de Detector Ultravioleta en HPLC

Cubeta de flujo en forma de Z

Para minimizar el ensanchamiento de banda extra-columna,
el volumen de las cubetas debe ser lo menor posible de 1 a
10 micrólitros.

suelen presentar valores de sensibilidad alrededor de 10-8 a 10-9

g/ml del analito. en cualquiera de sus modalidades, equipan dos
de cada tres sistemas de HPLC

se basan en la absorción de la radiación, regida por la conocida ley de Lambert-Beer 44

 Detector Ultravioleta con filtros

Es el detector de absorción UV más simples son los fotómetros de filtros con una lámpara de
Hg como fuente.

Lo más común en estos casos es aislar la línea intensa a 254 nm por medio de filtros; en
algunos equipos también se pueden utilizar las líneas a 250, 313, 334 y 365 nm empleando
otros filtros. Resulta obvio que este tipo de detector se utiliza de forma restringida para
aquellos solutos que absorben a alguna de estas longitudes de onda.

Algunos grupos funcionales orgánicos y diversas especies inorgánicas exhiben una banda
ancha de absorción a una o más de esas longitudes de onda.

45
 Detector Ultravioleta con monocromadores

• Los detectores espectrofotométricos de ultravioleta más potentes son

los instrumentos de series de diodos. Permiten recoger el espectro
completo de la muestra
• Cromatogramas tridimensionales útiles para la determinación
cuantitativa.

Detector de absorbancia en el infrarrojo

– Con transformada de Fourier

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 Detector absorbancia en el infrarrojo

Existen dos tipos de detectores de infrarrojo.

a) El primero con barrido de longitud de onda que proporcionan tres segmentos de filtro semicirculares.

b) El segundo, mucho más sofisticado, es un tipo de detector infrarrojo que se basa en los instrumentos
de transformada de Fourier. Las cubetas de los detectores de infrarrojo son semejantes a las de
radiación ultravioleta excepto en que las ventanas se construyen de cloruro de sodio o de fluoruro de
calcio. Las longitudes de la cubeta oscilan de 0.2 a 1.0 mm, y los volúmenes de 1.5 a 10 μL. Los
instrumentos de infrarrojo más sencillos pueden trabajar a una o más longitudes de onda;
alternativamente, se pueden obtener los espectros de los picos parando el flujo en su tiempo de elución.
Los instrumentos con transformada de Fourier se utilizan de manera análoga a los instrumentos de
series de diodos para las medidas de absorbancia ultravioleta que se han descrito en la sección anterior.

Se emplea en aquellos analitos que absorben radiación infrarroja

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 Detector de dispersión de luz

El efluente de la columna pasa a un nebulizador donde se convierte en

una fina niebla mediante un flujo de N2 o aire.
Las finas gotas se llevan en un tubo de conducción a temperatura
controlada y ocurre la evaporación de la FM, y unas finas partículas de
analito que pasan a través de un haz de rayo láser.
Mediante un fotodiodo de sílice se detecta
la radiación dispersada perpendicular al flujo.

Ventajas de este tipo de detector es que su respuesta resulta

ser aproximadamente la misma para todos los solutos no volátiles.
Además es notablemente más sensible que el detector de índice de refracción.

Este detector responde a todos los solutos menos volátiles que la fase móvil y su
límite de detección se encuentra entre 0.1 y 1 ng. 48
 Detector de Índice de Refracción

Es casi universal, responde a casi cualquier soluto.

La sensibilidad es unas mil veces menor que la de un detector ultravioleta, y no es útil en gradiente.

El disolvente pasa a través de la mitad de una

cubeta y el efluente de la columna pasa por la
otra mitad.
Los dos compartimentos están separados por
una placa de vidrio montada a un ángulo tal que
si las dos disoluciones difieren en índice de
refracción se produce una desviación del haz
incidente.
Son muy sensibles a la temperatura

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 Detector Electroquímico

Estos dispositivos se basan en 4 métodos electroanalíticos (amperometría, voltametría,

conductimetría y coulombimetría).

Elevada sensitividad

El analito debe contener grupos susceptibles de sufrir procesos redox.

Es bastante selectivo, porque sólo ciertos analitos se oxidan o se reducen con facilidad.

Pueden detectarse por oxidación: fenoles, aminas aromáticas, peróxido y mercaptanos.

Y por reducción: cetonas, aldehídos y nitrilos.

50
https://www-jove-com.ezproxy.utem.cl/es/v/10156/high-performance-liquid-
chromatography-(hplc)

59
 ¡Gracias!
¿Preguntas?
Pueden consultarme a mi correo
K.paredesg@utem.cl
52