Reactivo para

Prueba Técnica de siembra

Fundamento interpretación de Resultados e interpretación
bioquímica o evaluación
resultados

Positivo: crecimiento bacteriano con un intenso color

Esta prueba sirve para determinar
si un organismo es capaz de
utilizar citrato como única fuente
de carbono y compuestos
Citrato
amoniacales como única fuente de
nitrógeno en su metabolismo,
provocando una alcalinización del
medio
azul en el pico de flauta.
Negativo: ausencia de crecimiento y permanencia del
color verde del medio de cultivo.
Sembrar con un asa
Azul de La prueba positiva se representa por la producción de
de siembra en la
Bromotimol, como color azul oscuro en el término de 24 a 48 horas, que
superficie inclinada
indicador de pH indica la utilización de citrato con formación de
del medio e incubar a
productos alcalinos. La prueba también puede
37 ºC
considerarse positiva sin que haya color azul, si hay
durante 24-48 horas.
desarrollo visible en la estría de siembra. Una
interpretación positiva basada en la lectura del trazo
se puede confirmar incubando por 24 horas más,
momento en que habitualmente se produce color azul.

Taco ácido (amarillo): Glucosa fermentada. Bisel ácido

(amarillo): Lactosa y/o sacarosa fermentada. Taco ácido
Esta prueba se recomienda para la A partir de un cultivo (amarillo): Glucosa fermentada. Bisel alcalino (rojo):
identificación de patógenos puro del Lactosa y/o sacarosa no fermentada. Taco alcalino (rojo)
entéricos gram negativos. Se microorganismo en y bisel alcalino (rojo): Ninguno de los tres glúcidos es
emplea para detectar la estudio, con aguja de fermentado La aparición de burbujas en el taco indica que
Triple la fermentación se ha efectuado con producción de gas.
fermentación de lactosa, sacarosa y inoculación inocular
azúcar Sin reactivos Un ennegrecimiento en el medio indica la producción de
glucosa, con formación de ácido y el medio de cultivo,
hierro (TSI) ácido sulfhídrico
gas, y también para detectar picando el fondo y
producción de ácido sulfhídrico. extendiendo sobre la A) Rojo/rojo B) Control (sin inocular) C) Rojo/amarillo
(Universidad Central de superficie del mismo. D) Amarillo/amarillo E) Rojo/amarillo con H2S
Venezuela, n.d.)
A) Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de
azúcares.
B) Anaranjado/anaranjado (control, sin inocular).
C) Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la
 glucosa.
D) Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa,
lactosa y/o sacarosa.
E) El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico (H2S).
D) La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce
gas.
A: ácido= amarillo K: alcalino= rojo Formación de burbujas: Producción de gas Ennegrecimiento
de la superficie del medio: Producción de H2S

Es un medio semisólido que se

utiliza para el estudio de la Movilidad: Observar si el crecimiento o turbidez
formación de indol, movilidad y va más allá de la línea de siembra
Sembrado con ansa Positivo: se observa un crecimiento y turbidez que
SH2 en las bacterias entéricas
puntiforme, en abarca más allá de la línea de siembra.
gram negativas. Las cepas móviles
profundidad y en el Negativo: se observa crecimiento sólo en la línea
pueden observarse por la turbidez
centro del tubo. de siembra, el resto de la superficie se observa
que producen alrededor del punto
Inocular el caldo con límpida.
de siembra. Apropiado para
Sulfuro el microorganismo e Producción de SH2:
enterobacterias como E. coli,
Indol incubar a 37 ºC reactivo de Positivo: ennegrecimiento del medio.
Salmonella typhimurium y
Motilidad durante 24- 48 horas. Erlich/Kovacs Negativo: no se observa cambio de color en el
Shigella flexneri
(SIM) Transcurrido ese medio de cultivo. Indol: agregar 3 a 5 gotas del
El indol es uno de los productos de
tiempo añadir 4 o 5 Reactivo de Indol (Provisto separadamente).
degradación del aminoácido
gotas de reactivo
triptófano. La presencia de la Cepas indol positivas: desarrollo de
Kovacs, resbalando Observar el cambio de color en la parte superior
enzima triptofanasa en la bacteria color rojo luego de agregar el
por la pared del tubo del tubo. Positivo: La parte superior del tubo
provoca la hidrólisis del reactivo de Kovac´s o de Erlich (2).
sin agitar cambia a rojo. Negativo: No se observa color rojo.
aminoácido y su desaminación, Cepas indol negativas: sin cambio
produciendo indol, ácido pirúvico (Brizuela-Lab, n.d.)
de color (1)
y amoníaco.

Incorporando gelatina a diversos Del crecimiento de un

medios para determinar la cultivo puro de 18 a
capacidad de un organismo de 24 h y con ayuda de el
Licuefacció
producir enzimas de tipo asa de cultivo, tomar
n de la Sin reactivos
proteolítico que, a su vez, son un inoculo espeso y
gelatina
detectadas por la digestión o hacer una punción en
licuefacción de la gelatina presente el medio hasta una
se evalúa dicha capacidad. Estas profundidad de 1.5
 enzimas, que son capaces de cm a 2.5 cm
POSITIVO:
gelatinósis, se denominan
a) Medio licuado
gelatinasas.
b) Tubo control: medio sólido
NEGATIVO:
a) El medio se mantiene sólido , volver a
incubar durante un periodo adicional
b) Tubo control: medio sólido
(Ruiz Ruiz, 2010)

Esta prueba se realiza para Una coloración roja, indicadora de la presencia de

determinar la capacidad de un ácidos provenientes de la fermentación de la glucosa,
Transfiera 5 mL del constituye un resultado positivo, una coloración
microorganismo de fermentar la
cultivo a un tubo y Rojo de metilo amarilla constituye una reacción negativa.
Rojo de glucosa con producción de ácido
añada 5 gotas de (4-6 gotas) como (Universidad Central de Venezuela, n.d.)
metilo por la vía ácido mixta o con
solución indicadora indicador
producción de un producto final
de Rojo de Metilo
neutro (acetoína) por la vía
butanodiólica.

Esta prueba se realiza para A 1 mL de cultivo

determinar la capacidad de un
microorganismo de fermentar la
Voges‐ glucosa con producción de ácido
Proskauer por la vía ácido mixta o con
producción de un producto final
neutro (acetoína) por la vía
butanodiólica.
añada 12 gotas (± 0,6 La aparición de un color rosado constituye una reacción
mL) de α- naftol al Naftol en medio positiva indicadora de la presencia de acetoína, producto
5% en etanol y 4 básico con potasa de la fermentación de la glucosa. El resultado negativo lo
gotas (± 0,2 mL) de (KOH 40%) indicará una coloración amarilla o cobriza en la superficie
KOH al 40%, agite y durante la primera hora.
deje reposar por 5 a (Laboratorios Microkit, 2020)
10 minutos.

Es una prueba que indica del tipo Añadir a uno de Amarillo=ácido=crecimiento producción de metabolitos ácido
de metabolismo energético: Inocular por picadura los cultivos
Prueba O‐F respiratorio (O) o fermentador (F). (con hilo de siembra) parafina estéril Verde= neutro= no hay metabolitos
en dos tubos Se suele utilizar glucosa como dos tubos por cada para aislarlo del
sustrato. Se detecta la acumulación bacteria. aire. Incubar a 37
de ácidos con un indicador oC durante 24
 ácido-base (azul de bromotimol). horas
La bacteria se inocula con el hilo Se usa el medio
recto (por picadura ) y se incuba en semisólido de
condiciones de aerobiosis (sin Hugh-Leifson al
parafina) y de anaerobiosis (con que se le añade
parafina, tubo cerrado), glucosa para
simultáneamente. observar si el
metabolismo de
No metaboliza el CHO Metabolismo fermentativo Metabolismo Oxidativo
este azúcar es
llevado a cabo por
vía oxidativa o
fermentativa. (Universidad de Granada, n.d.)
También se usa
azul de
bromotimol como
indicador

El medio de cultivo Un cambio de color (rojo) dentro de los 30 seg indica prueba
líquido se inocula completa con resultado positivo. Si no cambia de color, se agrega
introduciendo en él Reactivo A (ácido directamente al tubo una pizca (unos 20 mg) de polvo de cinc
Sirve para determinar la capacidad
una carga de bacterias sulfamídico al purísimo, totalmente exento de nitratos o nitritos, y se observa el
de un organismo de reducir el
de la cepa en estudio 0.8% en ácido cambio de color durante otros 30 seg, al cabo de los cuales se
nitrato en nitritos. Para ello, el
mediante el asa acético glacial 5N) realiza la interpretación final.
medio manitol movilidad
bacteriológica. Se y reactivo B
Reducción incorpora 1 g/l de nitrato potásico
incuba a 37ºC durante (α-naftilamina al Positivo: Color rojo
del nitrato y para revelar la presencia de
24 horas y tras la 0.5% en ácido
nitritos después de su incubación
incubación se añaden acético glacial 5N)
se añaden los reactivos A y B de Negativo: Ausencia de color indica:
dos gotas de los que se añadirán
Griess-Ilosvay en cantidades 1) Nitratos no fueron reducidos
reactivos A y B de tras la incubación.
iguales (1ml aprox.). 2) Nitratos reducidos a productos diferentes al nitrito
nitratos que revelarán
la presencia de 3) Adicionar Zn para reducir nitratos a nitritos, si aparece coloración roja se confirma
nitritos en el medio. que la reacción es negativa.

Medio utilizado para diferenciar A partir de un cultivo

microorganismos en base a la puro del
Urea Rojo de fenol (Universidad Central de Venezuela, n.d.)
actividad ureásica. Se utiliza para microorganismo en
identificar bacterias que hidrolizan estudio, estriar la
 urea, tales como Proteus spp. otras
enterobacterias y estafilococos.
Esta prueba se utiliza para
determinar la capacidad de los
microorganismos para hidrolizar la
urea, formando dos moléculas de
amoníaco por la acción de la
enzima ureasa
superficie del medio
Una reacción positiva (hidrólisis de la urea) es
en el pico de flauta.
indicada por un cambio de color del amarillo
Se recomienda no
(pH 6,8) al rojo cereza (pH 8,1 o más alcalino).
punzar la capa
profunda para Rojo-rosa= alcalino= hidrólisis de urea= libera
controlar el color. NH3
Tomar una colonia del Amarillo= ácido=utiliza sacarosa en medio
medio e inocularla en Surraco o glucosa en Christensen
la superficie del agar
1. Sin inocular
urea inclinado. No
2. Prueba (-)
insertar el inóculo en
3. Prueba (+)
la base del agar
inclinado, puesto que Microorganismos que hidrolizan la urea: el medio de cultivo es de color rosado-rojizo.
sirve como control de Microorganismos que no hidrolizan la urea: el medio de cultivo permanece de color
color. amarillo.

Referencias

Brizuela-Lab. (n.d.). SIM Medio. Medio de cultivo deshidratado. https://www.brizuela-lab.com.ar/manuales/SIM%20medio.pdf

Laboratorios Microkit. (2020). M-IDENT ®-VOGES PROSKAUER. https://www.microkit.es/fichas/VOGES-PROSKAUER-KIT.pdf

MDM Científica. (2021). SERIES DE IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA (UREA, CITRATO, LISINA, SIM Y TSI).

https://mdmcientifica.com/wp-content/uploads/2021/03/IS-24-SERIES-DE-IDENTIFICACION-BIOQUIMICA.pdf

MacFaddin J.F. (2003). Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de gran importancia clínica. 3 edición.Editorial Médica Panamericana S.A. Buenos Aires,

Argentina
Ruiz Ruiz, F. (2010). Pruebas Bioquímicas: Licuefacción de gelatina. https://biolprocariotas.files.wordpress.com/2010/03/pract-121.pdf

Universidad Central de Venezuela. (n.d.). REACCIONES EN EL AGAR HIERRO-TRIPLE AZUCAR (Agar TSI).

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/tsi.pdf

Universidad Central de Venezuela. (n.d.). ROJO DE METILO Y VOGES PROSKAUER.

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/proskauer.pdf

Universidad Central de Venezuela. (n.d.). UREASA. http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/ureasa.pdf

Universidad de Granada. (n.d.). Prueba O-F, Oxido fermentativa o de Hugh-Leifson. https://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-v/pb-v-3-of.htm

Universidad de Las Palmas de Gran Canaria. (n.d.). Pruebas bioquímicas de identificación de bacterias.

https://www2.ulpgc.es/hege/almacen/download/35/35729/pruebas_bioquimicas_de_identificacion_de_bacterias.pdf

Universidad Miguel Hernández. (2021). Prácticas de microbiología.

https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-microbiologia/home/colaboradores-umh?authuser=0