INFORME 03-Micro de Alimentos

“AÑO DEL FORTALECIMIENTO DE LA SOBERANÍA NACIONAL”
UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
FAMILIA BACILLACEAE
INFORME N° 03
CURSO : Microbiología de alimento
INTEGRANTES :
Chamba Ordinola Pedro Honorato
Coveñas Pulache, Viviana Lizeth
Gonzales Palomino Luis Miguel
DOCENTE : Blgo. María Dorothy Torres de León. M.Sc.
SEMESTRE ACADÉMICO : 2022-I
PIURA- PERÚ
2022
INTRODUCCIÓN
El género Bacillus consta de bacilos grandes, grampositivos, esporógenos con endospora
generalmente central de forma cilíndrica o helicoidal; aerobios estrictos o facultativos,
catalasa positiva. Están ampliamente distribuidos en la naturaleza: suelo, vegetación, agua y
aire; son frecuentemente contaminantes de cultivos de muestras clínicas en el laboratorio.
Únicamente nueve especies se han relacionado a procesos infecciosos en el humano.
(García
- 1998).
Están dispuestos en estreptobacilos. Poseen una cápsula de ácido glutámico. Casi todos
ellos son saprófitos y, como tales, se los encuentra en el suelo, el agua y los vegetales.
Merced a la utilización de técnicas de DNA, se han dividido en varios géneros que agrupan
hasta setenta especies. Algunas especies tienen una utilidad práctica, dado que se las utiliza
para controlar ciclos de esterilización. (Negroni – 2009).
El Bacillus anthracis es una bacteria que forma esporas aeróbicas que producen
enfermedad en humanos y animales. Las bacterias se encuentran en dos formas: ántrax
cutáneo y ántrax por inhalación. El ántrax cutáneo es una infección de la piel causada por
contacto directo con la bacteria. El ántrax respiratorio o por inhalación es una enfermedad
infecciosa causada por la inhalación de esporas de la bacteria. Aunque el ántrax afecta
comúnmente a animales con pezuñas como las ovejas y cabras, los seres humanos también
pueden adquirir esta enfermedad. El ántrax es un agente potencial para ser usado como
arma biológica o bioterrorismo. (Werner – 2013)
Objetivos:
 Describir las diferentes pruebas bioquímicas y su aplicación en la determinación de
las especies de la familia Bacillaceae.

 Determinar el perfil bioquímico de Bacillus cereus.
II. MATERIALES Y MÉTODOS:
MATERIALES:
 Tubos con agar glucosa rojo de fenol

 Tubos con agar xilosa rojo de fenol
 Tubos con agar arabinosa rojo de fenol
 Tubos con caldo nitrato
 Tubos con gelatina nutritiva
 Tubos con agar citrato
 Tubos con agar nutritivo
 Tubos con caldo urea
 Tubos con caldo MR_VP
 Placas con agar leche
 Placas con agar yema de huevo
 Placas con agar almidón
 Placas con agar sangre
 Reactivos: alcohol cetona, lugol, alcohol etílico de 95o, reactivo de Gries
 Colorantes: verde de malaquita, cristal violeta, safranina
PROCEDIMIENTO:
1. Disponer de cultivos jóvenes de cepas sospechosas de ser Bacillus para proceder
a su coloración de gram y coloración de esporas.
2. Realizar la prueba de la catalasa con agua oxigenada en un porta objeto
3. Proceder a las siembras de los tubos y placas con medios de cultivo para
las pruebas bioquímicas de identificación.

A.- FERMENTACIÓN DE LA GLUCOSA
Se procedió a inocular una asada en tubos de ensayo que contenían agar glucosa
rojo de fenol, posteriormente se incubaron a 30°C durante 24 horas a 1-2 semanas.
Luego se realizó la observación, considerándose prueba positiva si se produce ácido y
gas.
B.- FERMENTACIÓN DE LA XILOSA
Se inoculó una asada en tubos de ensayo que contenían agar xilosa rojo de fenol,
después se incubaron a 30°C durante 24 horas a 1-2 semanas. Posteriormente se realizó
la observación respectiva, con la prueba positiva cuando se presentó ácido y gas.
C.- FERMENTACIÓN DE LA ARABINOSA
Se procedió a inocular una asada en tubos de ensayo que contenían agar arabinosa
rojo de fenol, después se incubó a 30°C durante 24 horas a 1-2 semanas. Luego se
realizó la observación, considerándose prueba positiva si se produce ácido y gas.
D. HIDRÓLISIS DE ALMIDÓN
Se inoculó en forma de estrías radiadas en placas con agar almidón.
Posteriormente se incubó a una temperatura la cual fue de 30°C durante 24 horas a
1- 8 días. Y se cubrió la superficie de la placa con solución de lugol o alcohol de 95°C
E. PRUEBA DE VOGUES PROSKAUER
Se inoculó tubos de ensayo con caldo MR-VP. Posteriormente pasaron a incubación
a una temperatura la cual fue de 37°C en un tiempo de 48 horas.
Se pipeteó, por separado 1 ml del cultivo a un tubo de prueba vacío, y se adicionó
0.6 ml de solución de α - naftol (5%) y 0.2 mL de solución de KOH (40%).

Se agitó el tubo, y se dejó en reposo por un tiempo el cual fue de 2 a 4 horas.
Finalmente se observaron los resultados.
F. DIGESTIÓN DE LA CASEÍNA
Se sembró por un solo toque en el centro de una placa de agar leche con la
superficie seca. Posteriormente paso a incubación a una temperatura la cual fue de 30°C
en un tiempo de 2 a 8 días. Finalmente se observaron los resultados.
G. ACTIVIDAD GELATINASA
Se preparó placas de agar gelatina, con la superficie seca, luego se procedió a
inocular haciendo estrías con una asa en sentido radial. Se Incubo a 30oC por 2 a 8 días.
Después se cubrió la superficie de la placa con la solución de bicloruro de mercurio. Se
eliminó la solución después de más o menos 5 minutos de contacto y lavar las colonias
con agua corriente. La aparición de una zona clara alrededor de las estría indico
hidrólisis de la gelatina.
H. ACTIVIDAD LECITINASA
Se preparó placas de agar yema de huevo, con la superficie seca, luego se inoculo
haciendo estrías con una asa en sentido radial. Luego se incubo a 30oC por 24 a 48
horas. La aparición de una zona opaca alrededor de las colonias indico una reacción
positiva.
I. ACTIVIDAD HEMOLISINA
En placas de agar sangre, con la superficie seca, se inoculo haciendo estrías con una
asa en sentido radial. Luego se incubo a 30oC por 24 horas. La aparición de una zona
clara alrededor de las estrías indico reacción positiva.
J.- REDUCCIÓN DE LOS NITRATOS

Se inoculó una asada del microorganismo, en tubos que contenían caldo nitrato. Se
incubó a 30ºC durante 24 horas. Se añadió el reactivo de Gries y se observó la
coloración que presentaba. La aparición de un color rosado o rojo indicaría presencia de
nitritos. Se confirmó en caso de no desarrollo del color rojo, la presencia o ausencia de
nitratos.
K.- UTILIZACIÓN DEL CITRATO COMO FUENTE DE CARBONO
Se inoculó el tubo con agar citrato con el cultivo puro de un medio sólido, con
mucha precaución, pues la transferencia de nutrientes con el inóculo podría invalidar la
prueba. Se incubó el medio a 30ºC por 24 a 48 horas. La asimilación del citrato sería
indicada por un crecimiento visible acompañado de un viraje al color azul.
L.- HIDRÓLISIS DE LA ÚREA
Se inoculó una asada del microorganismo en tubos que contenían caldo úrea. Se
incubó el medio a 30ºC durante 24 horas. Se consideró al microorganismo úrea positiva,
si ocurrió un viraje al color rojo grosella.
III. RESULTADOS
Bacilo Gram positivo.

Coloración de Gram
100X. Arévalo (2013).
Bacillus sp.
Coloración
de Gram 100X. The
Bacillus cereus. Método

de Wirtz: Verde de
Malaquita- Safranina.
400X. Las estructuras
ovales teñidas de verde
son las endosporas.
a. b.
Medio Agar glucosa
Sustrato Glucosa
Producto Producción de ácido y gas
Reactivo revelador Rojo fenol
Prueba positiva El medio cambia su color a

amarillo (tubo a)
Prueba negativa: El medio mantiene un color

naranja-rojizo (tubo b)
Bacillus cereus*
*B. cereus fermenta anaerobicamente la glucosa
Medio Agar xilosa
Sustrato Xilosa

amarillo

naranja-rojizo
Bacillus cereus
Medio Agar arabinosa
Sustrato Glucosa

amarillo (tubo b)

naranja-rojizo (tubo a)
a. b.
Bacillus cereus
Bacillus cereus Prueba positiva:

presencia de halos
blancos alrededor de las
colonias
Hidrólisis (+): Si al añadir lugol

se observa aureolas transparentes
que rodean a las bacterias
Hidrólisis (-): No hay
producción de amilasa, es por
eso que no hay aclaramiento
(aureolas)
Bacillus cereus
Prueba negativa: no viró

de rosado a carmesí.
Bacillus cereus
Prueb negativa:
acrecimiento mínimo.
G. ACTIVIDAD GELATINASA
Bacillus cereus
Cepas aisladas en el medio de

cultivo de Bacillus cereus agar
base con una adición de yema
de huevo.
Al realizar una tinción de Gram para identificar con

microscopía la estructura de los microorganismos
presentes, para este caso se espera que sea una
estructura alargada Gram positiva.
Coloración azul producto de la adición de la yema de huevo y por consiguiente la
degradación del mismo. B. cereus control positivo.
Bacillus cereus, reacción positiva
para el test de hemolisis.

PRUEBA
POSITIVA:
VIRAJE A AZUL
Medio Caldo Urea
Enzima Ureasa
Sustrato Urea
Prueba positiva Viraje del medio (pH 6.8) a

rojo grosella (pH 8.1 o más).
Prueba negativa: No se produce color.
La urea es hidrolizada por una enzima específica, la ureasa. para dar dos moléculas de
amoníco. En solución la urea se hidroliza carbonato de amonio como producto final.
IV.DISCUSIÓN
Esta prueba bioquímica es recomendada para la confirmación de las colonias de
Bacillus cereus pudiendo emplear caldo rojo de fenol con 1% de glucosa, y el cambio
de color del medio, gracias al reactivo indicador rojo de fenol, indica la fermentación de
glucosa. Se puede sellar con óleo mineral estéril para corroborar la fermentación
anaeróbica (Hajdenwurcel, 1998).
La xilosa, es un carbohidrato que se considera un sustrato importante en la
producción de alcohol. La presencia de coloración naranja rojiza en el medio, indica la
no fermentación de la xilosa, es decir no se presenta producción de gas o ácido, por lo
que el indicador rojo fenol mantiene ese mismo tono, es importante mencionar que sin
la producción de gas no se genera ruptura del medio (Garcia et al., 2004).
La Arabinosa o conocida como azúcar de pectina, es un monosacárido de cinco
carbonos, que en el caso de la familia Bacillaceae no son capaces de poder fermentarlo,
por lo que no se produce gas o ácido en el medio arabinosa rojo de fenol, por lo que la
reacción de Bacillus cereus es negativa, presentando una coloración rojiza.
Uno de las pruebas para el perfil enzimático de las bacterias, es el de la hidrólisis de
almidón, donde se pone a prueba la actividad de la α amilasa y β amilasa. Según
MacFaddin (2004) la fracción amilosa del almidón es la que se combina mucho más
con
el yodo y produce un complejo azul intenso, profundo. El complejo amilosa-yodo es un
complejo de adsorción de almidón y yodo más que un compuesto definido. Las
moléculas de yodo están atrapadas dentro de la hélice no ramificada de unidades de
glucosa de la cadena de amilosa para formar un compuesto de inclusión azul. Si esta red
se desintegra, como ocurre durante la hidrólisis del almidón, el color azul se pierde. El
curso de la hidrólisis del almidón en una placa o tubo producido por el yodo cambia
gradualmente de un color azul intenso, a un púrpura y luego a una falta de color.
Además, afirma que experimentalmente se comprueba que Bacillus cereus es positiva
para hidrólisis de almidón.
Para la Reacción Vogue Proskauer, la prueba se basa en la detección de acetoína, un
precursor en la producción del 2,3-butanodiol y un producto final neutro derivado del
metabolismo de la glucosa. La prueba de VP está basada en la reacción entre el
diacetilo, que deriva de la acetoína, y le núcleo guanidina (NH:C(NH2).NH.R) presente
en la peptona en condiciones alcalinas. Se ha mostrado que el diacetilo puede
reaccionar con compuestos que contienen el núcleo guanidina, como arginina,
agmatina, creatina, dicianamida y ácido guanidinacéticol. La creatina entonces sería una
fuente adicional del núcleo de guanidina que se incorpora al medio; es necesario un
grupo de NH2 libre disponible en la molécula de guanidina para el desarrollo del color
(MacFaddin, 2004).
Según López (2020) entre todos sus componentes, las proteínas de la leche poseen
un alto valor biológico debido a la presencia de aminoácidos esenciales y a su adecuada
digestibilidad para el ser humano. Las proteínas de la leche están representadas por las
caseínas y proteínas del suero. Las caseínas, son los principales componentes proteicos
de la leche con un 80% del total, las que están ampliamente categorizadas de acuerdo a
sus subtipos correspondientes, tales como αs1-caseína, β-caseína, αs2-caseína, κ-
caseína y γ-caseína
Los péptidos antimicrobianos derivados de las caseínas de la leche muestran ciertas
ventajas desde ese ámbito, puesto que matan células diana rápidamente, presentando un
amplio espectro de actividad puesto que exhiben actividades contra diversas bacterias
Gram positivas y Gram negativas, entre los que se encuentran Staphylococcus spp,
Bacillus cereus, Escherichia coli, Salmonella typhi y Listeria monocytogenes, además
de levaduras y hongos. Sus mecanismos no son del todo específicos y en consecuencia
los patógenos no pueden generar gran resistencia como sí ocurre con algunos
antibióticos, lo que según conlleva a que la tasa de multiplicación bacteriana sea menor
respecto a la tasa de muertes generada.
G. ACTIVIDAD GELATINASE
En el caso del agar gelatina nutritiva nos ayudamos con rojo fenol para esta prueba
de Bacillus cereus, la cual muestra la capacidad de ciertos microorganismos para
hidrolizar la gelatina a péptidos y aminoacidos, mediante la acción de enzimas
específicas denominadas gelatinasas. En el caso de Bacillus cereus dio positivo debido
a su aparición de la zona opaca alrededor de las colonias.
Concluido el tiempo de incubación, se sucedió a revisar las cajas de Petri, donde se
esperaba una coloración azul producto de la adición de la yema de huevo y por

consiguiente la degradación del mismo. Con este resultado, se procedió a realizar una
tinción de Gram para identificar con microscopía la estructura de los microorganismos
presentes, para este caso se espera que sea una estructura alargada Gram positiva. Las
pruebas arrojaron como resultado al realizar microscopía, organismos con un fenotipo
análogo al del grupo B. cereus control positivo.
El medio de cultivo agar sangre ovina proporciona el crecimiento de la gran
mayoría de las bacterias Gram-positivas que en este caso fue el de (Bacillus cereus), a
partir de una base rica y complementada, ofreciendo óptimas condiciones de desarrollo
para microorganismos no fastidiosos. La conservación de los eritrocitos íntegros favorece
la formación de halos de hemólisis nítidos, facilitando la diferenciación de algunas
especies hemolíticas. En el caso de Bacillus cereus, para el test de hemolisis la reacción
fue positiva.
El desarrollo de una coloración rojo - violeta indica la presencia de nitritos
(reducción del nitrato). Si no hay desarrollo de color, agregar zinc en polvo y esperar 1
h. El desarrollo de coloración rojo - violeta indica que no hubo reducción de nitratos.
Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de un microorganismo para
reducir los nitratos a nitritos o gas nitrógeno libre, una característica que a menudo tiene
valor diferencial. Para determinar si el nitrato ha sido reducido a nitrito, después de la
incubación, añádale al medio de cultivo, 2 gotas de solución A, y luego 2 gotas de la
solución B del reactivo de Gries y mezcle. La aparición de una coloración rosada o roja
indica que los nitratos han sido reducidos a nitritos (MacFddin, 2004).
Según Rodríguez (2019) si se forma un color rojo, o rosado, antes de treinta
segundos es que había nitritos (Nitrato positivo). En caso contrario, se le añaden 20 mg
de polvo de Zn al medio. Si aparece color rosa es que había nitratos que no se habían
reducido (Nitrato negativo), y si aparece el mismo color es que se habían reducido los
nitratos, pero no a nitritos. Tras añadir los reactivos α-Naftilamina y ácido sulfanílico en
el tubo con el microorganismo problema, el medio ha adquirido un color rojo que indica
que se han reducido los nitratos a nitritos. Por tanto, el microorganismo es Nitrato
positivo y posee la enzima nitrato reductasa.
Con respecto a la prueba de asimilación del citrato, MacFaddin (2004) afirma que la
energía puede ser proporcionada a algunas bacterias en ausencia de fermentación o
producción de ácido láctico, por la utilización del citrato como única fuente de carbono.
Sin embargo, vale resaltar que un organismo de este tipo, también utiliza como su única
fuente de nitrógeno a las sales de amonio. Las sales de amonio (p. ej., fosfato de
amonio) son degradadas a amoníaco (NH3), lo cual aumenta la alcalinidad. Las
bacterias extraen el nitrógeno de las sales de amonio con producción de amoníaco, lo
que conduce a la alcalinización del medio y a la conversión de NH32+ a hidróxido de
amonio (NH4OH). La utilización de los ácidos orgánicos y sus sales como una fuente
de carbono produce carbonatos y bicarbonatos también alcalinos con la posterior
degradación. El medio de citrato de Simmons contiene un indicador de pH: azul de
bromotimol (BTB) que permanece verde en un medio con pH de 6,9 y vira a azul de
Prusia oscuro en un medio alcalino de pH 7,6. Se vuelve amarillo en un medio ácido.

Con respecto al estudio del hidrólisis de urea por las bacterias; MacFaddin (2004)
afirma que la urea es hidrolizada por una enzima específica, la ureasa (o urea
amidohidrolasa), para dar dos moléculas de amoníaco; se trata de una enzima
constitutiva, no adaptativa, debido a que es sintetizada por ciertas bacterias sin tomar en
consideración la presencia o la ausencia de sustrato. El indicador de iones de hidrógeno
rojo fenol, presente en la prueba, muestra la producción de ureasa por los miembros de
la subfamilila Proteeae mediante la demostración disminuida de la concentración de
iones de hidrógeno a causa de la formación de las dos moléculas de amoníaco (NH3).
Para la interpretación de resultados se considera una cepa positiva para ureasa si el
caldo presenta un color cereza intenso. Entre los microorganismos positivos
mencionados por MacFaddin se encuentra Proteus mirabilis y Proteus vulgaris;
Escherichia coli es ureasa negativa.
IV. CONCLUSIONES
En esta práctica se realizó la descripción de pruebas bioquímicas que ayudan en la
determinación y diferenciación de especies de la familia Bacillaceae presentes en los
alimentos, las cuales fueron: prueba de la catalasa, fermentación de la glucosa, xilosa y
arabinosa, hidrólisis de almidón, prueba de Vogues Proskaeur, digestión de la caseína,
actividad de la gelatinasa, actividad lecitinasa, actividad hemolisina, reducción de los
nitratos, utilización del citrato como fuente de carbono e hidrólisis de la úrea.
Se determinó el perfil bioquímico de Bacillus cereus, el cual se muestra en la Tabla
01 en anexos.
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Arévalo, M. (2013). Bacillus: género bacteriano que demuestra ser un importante solubilizador de
fosfato - Scientific Figure on ResearchGate. Available from:
https://www.researchgate.net/figure/Figura-3-Bacillus-Gram-positivos-Coloracion-de-
Gram-100X-Arevalo-Moreno-2013_fig3_316654267 [accessed 3 Jan, 2022]
García Araceli; Zamudio Mercedes. (1998). “Manual: microbiología médica: 9o semestre”.

Universidad Nacional Autónoma De México.
García, M., Quintero, R. y López-Munguía, A. (2004) Biotecnología alimentaria. Limusa Noriega

editores.
Hajdenwurcel, J. (1998) Atlas de microbiología de alimentos. TecLab.
López, K. (2020). OPTIMIZACION DE LA DIGESTION ENZIMATICA ASISTIDA POR

MICROONDAS PARA LA OBTENCION DE PEPTIDOS BIOACTIVOS A PARTIR DE
α-CASEINA DE LA LECHE. Concepción- Chile.
MackFaddin, J. (2004). Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia

clínica. Tercera Edición. Buenos Aires- Argentina.
Madigan M. T., Martinko J.M. y Parker J. (2004) Brock: Biología de los Microorganismos - 10ma
Edición ISBN:84-205-3679-2
Negroni, M. (2009). “Microbiología Estomatológica”. 2da Edición. Editorial Medica Panamericana.

México.
Rodríguez, F. (2019). Prueba de reducción de Nitratos. Laboratorio de diagnóstico clínico.

https://medlineplus.gov/spanish/ency/esp_imagepages/9092.htm
VII. ANEXOS
Tabla 01. Perfil Bioquímico de Bacillus cereus
Pruebas bioquímicas Bacillus cereus
Gram (+) Endosporas centrales

Coloración de esporas (Método de Wirtz) (+) Esporas teñidas de verde malaquita
Catalasa (+)
Fermentación de la glucosa (+)
Fermentación de la xilosa (-)
Fermentación de la arabinosa (-)
Hidrólisis de almidón (+)
Prueba de Vogues Proskauer (-)
Digestión de la caseína (-)
Actividad gelatinasa (+)
Actividad lecitinasa (+)
Actividad hemolisina (+)
Reducción de los nitratos (+)
Utilización del citrato (+)
Hidrólisis de la úrea (+/-)
 (+): Presencia
 (-): Ausencia
 (+/-): Variable
 (ND): No definido
Tabla 02. Características fenotípicas que permiten la diferenciación de miembros del grupo
Bacillus cereus y otras especies de Bacillus

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

CURSO : Microbiología de alimento

Chamba Ordinola Pedro Honorato

Coveñas Pulache, Viviana Lizeth

Gonzales Palomino Luis Miguel

DOCENTE : Blgo. María Dorothy Torres de León. M.Sc.

SEMESTRE ACADÉMICO : 2022-I

generalmente central de forma cilíndrica o helicoidal; aerobios estrictos o facultativos,

catalasa positiva. Están ampliamente distribuidos en la naturaleza: suelo, vegetación, agua y

aire; son frecuentemente contaminantes de cultivos de muestras clínicas en el laboratorio.

Únicamente nueve especies se han relacionado a procesos infecciosos en el humano.

para controlar ciclos de esterilización. (Negroni – 2009).

enfermedad en humanos y animales. Las bacterias se encuentran en dos formas: ántrax

infecciosa causada por la inhalación de esporas de la bacteria. Aunque el ántrax afecta

arma biológica o bioterrorismo. (Werner – 2013)

las especies de la familia Bacillaceae.

II. MATERIALES Y MÉTODOS:

 Tubos con agar glucosa rojo de fenol

 Reactivos: alcohol cetona, lugol, alcohol etílico de 95o, reactivo de Gries

 Colorantes: verde de malaquita, cristal violeta, safranina

1. Disponer de cultivos jóvenes de cepas sospechosas de ser Bacillus para proceder

a su coloración de gram y coloración de esporas.

2. Realizar la prueba de la catalasa con agua oxigenada en un porta objeto

las pruebas bioquímicas de identificación.

rojo de fenol, posteriormente se incubaron a 30°C durante 24 horas a 1-2 semanas.

Luego se realizó la observación, considerándose prueba positiva si se produce ácido y

B.- FERMENTACIÓN DE LA XILOSA

después se incubaron a 30°C durante 24 horas a 1-2 semanas. Posteriormente se realizó

la observación respectiva, con la prueba positiva cuando se presentó ácido y gas.

C.- FERMENTACIÓN DE LA ARABINOSA

realizó la observación, considerándose prueba positiva si se produce ácido y gas.

Se inoculó en forma de estrías radiadas en placas con agar almidón.

Posteriormente se incubó a una temperatura la cual fue de 30°C durante 24 horas a

1- 8 días. Y se cubrió la superficie de la placa con solución de lugol o alcohol de 95°C

E. PRUEBA DE VOGUES PROSKAUER

Se inoculó tubos de ensayo con caldo MR-VP. Posteriormente pasaron a incubación

a una temperatura la cual fue de 37°C en un tiempo de 48 horas.

Se pipeteó, por separado 1 ml del cultivo a un tubo de prueba vacío, y se adicionó

0.6 ml de solución de α - naftol (5%) y 0.2 mL de solución de KOH (40%).

Finalmente se observaron los resultados.

en un tiempo de 2 a 8 días. Finalmente se observaron los resultados.

Se preparó placas de agar gelatina, con la superficie seca, luego se procedió a

Después se cubrió la superficie de la placa con la solución de bicloruro de mercurio. Se

clara alrededor de las estrías indico reacción positiva.

J.- REDUCCIÓN DE LOS NITRATOS

incubó a 30ºC durante 24 horas. Se añadió el reactivo de Gries y se observó la

coloración que presentaba. La aparición de un color rosado o rojo indicaría presencia de

nitritos. Se confirmó en caso de no desarrollo del color rojo, la presencia o ausencia de

K.- UTILIZACIÓN DEL CITRATO COMO FUENTE DE CARBONO

mucha precaución, pues la transferencia de nutrientes con el inóculo podría invalidar la

indicada por un crecimiento visible acompañado de un viraje al color azul.

L.- HIDRÓLISIS DE LA ÚREA

incubó el medio a 30ºC durante 24 horas. Se consideró al microorganismo úrea positiva,

si ocurrió un viraje al color rojo grosella.

Bacilo Gram positivo.

Bacillus cereus. Método

Medio Agar glucosa

Producto Producción de ácido y gas

Reactivo revelador Rojo fenol

Prueba positiva El medio cambia su color a

Prueba negativa: El medio mantiene un color