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Alvaro Hernndez Hernndez TABLA DE PRUEBAS BIOQUMICAS MICROBIOLOGA INGENIERA

EN BIOTECNOLOGA UPQROO
Prueba Medio Fundamento Consisten Inocul Condicion Resultados Observaciones
Bioqumica de cia del acin es de
cultivo medio Incubaci
n
Fermentacin Caldo Utiliza un indicador de ph Lquido Por Tiempo: Positivo: Amarillo *por lo regular las bacterias que
de glcidos bsico con determinado glcido difusi 24-48 (cido) fermentan un glcido son
rojo de que determina si una n, horas Negativo: Rosa-Rojizo anaerobios facultativos.
fenol bacteria ha degradado el inculo Temperatu (alcalino) *hay ocasiones en el que algunas
mismo en varios denso ra: 35-37 Naranja bacterias necesitan prolongar la
productos terminales. C incubacin 24 horas ms (cuando
hay color naranja)
Prueba de Citrato Determina si un mo Slido Estra Tiempo: Positivo: Crecimiento y *El inculo debe ser liviano, si es
citrato de puede utilizar citrato inclinado nica 24-48 no cambia de color o grande, compuestos orgnicos de
Simmon como nica fuente de (pico de en horas azul intenso en pico de la pared celular de bacterias en
s carbono para flauta) superf Temperatu flauta. descomposicin pueden liberar
metabolismo y cie del ra: 35-37 Negativo: Sin carbono y nitrgeno como para
crecimiento, provoca pico de C crecimiento color verde dar falso-positivo.
alcalinidad. flauta
Licuefaccin Gelatina Determina la capacidad Semislido Picadur Tiempo: Positivo: Medio licuado *al trmino de la incubacin el
de gelatina nutritiva de un mo para producir a 18-24 (lquido) tubo debe ser enfriado durante
enzimas proteolticas vertical horas Negativo: Medio slido dos horas para determinar
(gelatinasas) (2cm) Temperatu licuefaccin
ra: 35-37
C
Prueba de Leche El tornasol incorporado a Lquido Difusi Tiempo: Rojo rosado: cido *Formacin de cogulo:
leche con tornasol la leche es un indicador n 18-48 (fermentacin de Coagulacin de la protena de la
tornasol ada de ph y de xido horas lactosa) leche
reduccin indicando Temperatu Azul purpreo: sin *Gas, Produccin de burbujas en
diversas funciones ra: 35-37 cambio la campana de Durham
metablicas: C Azul: Alcalino; no *Ayuda a la diferenciacin del
Fermentacin de lactosa fermentacin, gnero Clostridium
Reduccin del tornasol organismo ataca sust.
Formacin de cogulo Nitrogenadas.
Peptonizacin (digestin) Blanco: Reduccin
Formacin de gas tornasol
Aclaracin de medio:
Digestin
Reduccin de Leche El azul metileno: los Lquido Difusi Tiempo: Positivo: Incoloro; *Se utiliza para diferenciar
leche con azul con azul electrones producidos por n, 18-24 reduccin enterococos (especies de
de metileno de un sustrato oxidable son inculo horas Negativo: Azul; no hay Streptococcus del grupo D)
metileno desplazados de su ciclo denso Temperatu reduccin.
normal, si hay reductasa, ra: 35-37
y reduce el colorante.
Prueba de Bsico Determina el Semislido Picadur Tiempo: 18 Amarillo: cido * Los bacilos no fermentadores de
fermentacin Hugh metabolismo oxidativo o (permite a, - 24 horas Burbujas: Gas crecimiento lento pueden no
y oxidacin Leifson, fermentativo de un observaci inculo Temperatu Verde: alcalino producir cambios de color durante
(O/F) O/F glcido. La diferencia n de poco ra: 35-37 varios das, y especies que son
depende de movilidad) denso. C Oxidativo no particularmente activas sobre
requerimientos de Picar fermentador aminocidos pueden hacer que
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oxgeno atmosfrico y de ambos reacciones cidas dbiles
la fosforilacin inicial. Son tubos Fermentador reviertan con el tiempo,
necesarios dos tubos de aproxi confundiendo la interpretacin .
cada medio. El medio en madam * Fundamentalmente para
un tubo se expone al aire, ente No oxidativo, no diferenciar gneros intestinales no
el otro se cubre con hasta fermentador entricos, Gram negativos de la
aceite mineral o parafna 0.6 mm Familia Enterobacteriaceae.
lquida estriles. Las de * Ayuda a la diferenciacin entre
bacterias oxidativas fondo. los gneros de Familia
producen cidos solo en Micrococcaceae.
el tubo abierto expuesto Micrococcus oxida glucosa
al oxgeno atmosfrico; Staphylococcus fermentan
los mo fermentadores glucosa
producen cidos en * Ayuda a la identifcacin de
ambos tubos; y las Enterobacterias Fermentadoras de
bacterias no sacarolticas glucosa: Escherichia coli
son inertes en este Oxidativas de glucosa:
medio, que permanece Pseudomonas aeruginosa
con un pH alcalino No sacaroltico: Especies de
despus de la incubacin. Moraxella
Prueba de Agar Determina la capacidad Slido en Estra Tiempo: Positivo: Rojo rosado *En muchas especies, la reaccin
Ureasa urea de de un organismo de pico de en pico 18-24 intenso en el pico de positiva de ureasa se detecta
Christen desdoblar la urea flauta (cola de horas flauta primero por un cambio de color
sen formando dos molculas de flauta Negativo: Amarillo rojo en la parte de pico de flauta,
de amoniaco por la pescado) (no Temperatu el cual, al principio se vuelve rojo
accin de la enzima hacer ra: 35-37 *Se usa para diferenciar porque la accin alcalina,
ureasa produciendo un punci C los organismos Proteus resultado de la degradacin de
cambio de color rojo en el n). ureasa positivos de pequeas cantidades de urea, es
medio otros miembros de las aumentada por las aminas
enterobacterias, otros formadas a partir de la
gneros son positivos descarboxilacin oxidativa de los
retardados aminocidos en la parte del medio
expuesta al aire.
Prueba de Medio Determina la capacidad Lquido Difusi Tiempo: 24 Positivo: Rojo rosado en *Agregar directamente los
Voges- de Clark de algunos organismos n - 48 horas la superfcie del medio reactivos al tubo despus de la
Proskauer y Lubs de producir un producto (presencia de acetona). incubacin en el siguiente orden:
(caldo fnal neutro, la acetona a Temperatu Negativo: Amarillo. 1) 0.6ml de alfa naftol 2) 0.2ml de
RM/VP) partir de la fermentacin ra: 35-37 Puede formarse un color KOH 3) Agitar el tubo suavemente,
de glucosa. C cobrizo pero aun as la dejar reposar de 10 a 15 minutos
Las bacterias que utilizan reaccin es negativa. antes de la interpretacin.
esta va producen solo *El orden de adicin de los
pequeas cantidades de *Microorganismos reactivos es importante, ya que la
cidos mixtos que son positivos inversin de incorporacin dar
insufcientes para Klebsiella pneunoniae, como resultado un dbil positivo o
disminuir el pH del medio Yersinia enterocolitica falso negativo. No debe
de rojo de metilo, lo *"Microorganismos excederse un volumen exacto de
bastante como para negativos KOH ya que el exceso puede
producir un cambio de Escherichia coli ocultar una reaccin VP
color. K. ozaenae dbilmente positiva.
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Prueba de rojo Medio La prueba de rojo de Lquido Difusi Tiempo: Positiva: Rojo en la *Rojo de metilo. Adicionar 5 gotas
de metilo de Clark metilo se basa en el n 48 horas superfcie del medio (pH al tubo previamente incubado.
y Lubs empleo de un indicador Temperatu = 4.4) Algunas Interpretar el resultado del color
(caldo de pH para determinar la ra: 35-37 bacterias pueden inmediatamente.
RM/VP) concentracin de iones C producir menores *Conservacin: Guardar el
hidrgeno presentes cantidades de cido a reactivo en refrigeracin (4 C)
cuando un organismo partir del sustrato por mientras no se usa.
fermenta glucosa. Las ello es posible que * No debe intentarse interpretar
bacterias RM positivas aparezca un color un resultado con el rojo de metilo
producen cidos estables naranja. Esto indica una despus de menos de 48 horas de
manteniendo una alta prueba positiva. incubacin.
concentracin de iones Negativo: Amarillo (pH * Microorganismos positivos
hidrgeno hasta alcanzar = 6) naranja Escherichia coli
cierta concentracin y Especies de Yersinia
entonces cesa toda *Microorganismos negativos
actividad. Enterobacter aerogenes
Los organismos RM Enterobacter cloacae
negativo tambin Klebsiella
producen cidos, pero
tienen una menor
concentracin de iones
hidrgeno porque hay
una reversin hacia la
neutralidad debida a la
nueva degradacin de los
cidos orgnicos en
carbonatos.
Reduccin de Caldo Determinar la capacidad Lquido Difusi Tiempo: Adicionar directamente * Raramente es necesaria una
nitratos con de un organismo de n, 18-24 al tubo: Alfa - incubacin prolongada de hasta 5
nitrato reducir el nitrato en inculo horas naftilamina 1 ml y cido das. La mayora de los
nitritos. Est indicada por denso Temperatu sulfanilico 1 ml. organismos capaces de reducir el
la aparicin de color ra 35 - 37 Positivo: rosa a rojo nitrato, lo hacen dentro de las 24
cuando el nitrito C intenso Negativo: horas.
reacciona con los dos. Amarillo * Se interpretan los resultados un
minuto despus de adicionar los
reactivos
*Una prueba negativa indica que los nitratos, no han sido reducidos o que han sido reducidos a otros productos, como amoniaco, nitrgeno molecular, xido
ntrico u xido nitroso e hidroxilamina. Dado que los reactivos de prueba detectan solo nitritos, este ltimo proceso llevara a una lectura falsa negativa.
Por ende, es necesario agregar una pequea cantidad de polvo de zinc a todas las reacciones negativas.
*Los iones zinc reducen nitratos a nitritos y la aparicin de color rojo despus del agregado de zinc indica una reaccin positiva.
* Ayuda a la identifcacin de Enterobacterias que por lo general son positivas.
Todas las Enterobacterias, con excepcin de ciertos tipos de Enterobacter agglomerans y especies de Erwinia, reducen nitratos a nitritos.

Prueba de Agar Determina la capacidad Slido en Estra Tiempo: Adicionar Cloruro frrico *Conservacin: Guardar los
Fenilalanina fenilalan de un organismo de pico de en pico 18-24 10% reactivos en refrigeracin y
ina desaminar la fenilalanina flauta de horas de 4-5 gotas a un tubo colocarlos en frascos oscuros para
en cido fenilpirvico por flauta, incubado evitar la descomposicin.
su actividad enzimtica, inculo Temperatu Hacer rotar * Esta actividad enzimtica es
con la consiguiente denso. suavemente el tubo caracterstica de todas las
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acidez resultante. ra 35 - 37 para que el crecimiento especies de Proteus y del grupo
El aminocido aromtico C se separe. Providencia , y se usa para
fenilalanina sufre una Esperar de 1 a 5 separar estos dos gneros de
desaminacin oxidativa minutos para leer la otros miembros de las
catalizada por un reaccin. Enterobacterias.
aminocido oxidasa para Positiva: Rojo claro a
producir el cido cetnico intenso en el pico de
flauta.
Negativo: Amarillo
Sulfuro, indol Medio Determinar si un Semislido Picadur Tiempo: 24 * cido sulfhdrico * Prueba de indol :Reactivo de
y movilidad: SIM organismo es mvil o en forma a en - 48 horas Positivo: Kovacs Adicionar 5 gotas y agitar
SIM inmvil, si es capaz de vertical forma Temperatu Ennegrecimiento del suavemente el tubo Interpretar
liberar cido sulfhdrico vertical ra 35 - 37 medio inmediatamente.
por accin enzimtica de C Negativo:Sin * Color naranja en la superfcie del
los aminocidos que Los ennegrecimiento medio. Indica desarrollo de
contienen azufre cultivos *Indol escatol, un compuesto metilado
produciendo una reaccin que van a Positivo: Anillo rojo en la que puede ser el precursor de la
visible de color negro y someterse superfcie del medio. formacin de indol. La reaccin
por ltimo la capacidad a pruebas Negativa: No se positiva despus de 24 horas
de desdoblar el indol de indol produce color Negativa: indica una prueba completa.
la molcula triptfano, debern Color naranja en la Si el cultivo de 24 horas es
adems que la ser superfcie del medio. negativo deber incubarse otras
consistencia del medio incubados *Movilidad 24 horas y repetirse la prueba.
permite la observacin de aerbicam Positiva. Los organismos
la movilidad de algunas ente mviles migran de la
bacterias. lnea de siembra y se
1.Produccin de cido difunden en el medio
sulfhdrico provocando turbiedad.
2. Produccin de indol Negativa. Crecimiento
3. Movilidad bacteriano acentuado
siguiendo la lnea de
siembra
Agar hierro Agar Determina la capacidad Slido en Picadur Tiempo: 18 Rojo en pico de flauta: *Una bacteria productora de H2S
triple azcar: hierro de un organismo de pico de a y - 24 horas alcalino; degradacin puede dar tal cantidad de
TSI triple atacar un hidrato de flauta estra aerbica de precipitado negro de sulfuro
azcar carbono especfco en pico Temperatu glucosa. Amarillo en ferroso que oculte completamente
(agar incorporado en un medio de ra: 35 - 37 capa profunda: cido; la acidez producida en la capa
hierro de de crecimiento bsico, flauta C degradacin anaerbica profunda. Sin embargo, si se
Kligler, con produccin o no de de la glucosa. forma H2S es que existe en la
AHK) gases, junto con la 2. Amarillo en pico: capa profunda una condicin
determinacin de posible cido Amarillo en cida, aun cuando no se observe,
cido sulfhdrico. capa profunda: cido y debe ser registrada como tal.
3. Rojo en pico de *Es esencial que se interprete la
flauta: alcalino Sin fermentacin al trmino de 18
cambio de color en capa 24 horas de incubacin, ya que
profunda: alcalina. una interpretacin prematura o
4. Produccin de H2S: demorada dar formas de
precipitado negro fermentacin no vlidas que
5. Produccin de gases: llevarn a errores en el
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Produccin de burbujas, agrupamiento del gnero o
descomposicin del especie.
Reacciones de TSI
medio, ligera muesca 1. K / A (Fermentacin de
*Pico de flauta alcalino / profundidad alcalina (K/K). No fermentacin de hidratos de
del medio sobre el glucosa solamente)
carbono. Caracterstico de bacterias no fermentadoras como Pseudomonas aeruginosa.
*Pico de flauta alcalino / profundidad cida (K/A). Glucosa fermentada, lactosa no costado del tubo o 2. A / A (Fermentacin de
fermentada. Caracterstico de bacterias no fermentadoras de lactosa como especies de desplazamiento del glucosa y lactosa)
Shigella. medio del fondo, 3. K / K (No fermentacin de
*Pico de flauta alcalino / profundidad cida (negra) (K/A/H2S). Glucosa fermentada, lactosa dejando un espacio glucosa y lactosa).
no fermentada; produccin de H2S. Caracterstico de bacterias no fermentadoras de lactosa libre. *Este tipo de pruebas se utilizan
y productoras de H2S como: Salmonella, Arizona, Citrobacter y algunas especies de Proteus. para la identifcacin primaria de
*Pico de flauta cido / profundidad cida (A/A). Glucosa y lactosa fermentadas. los miembros de las
Caracterstico de coliformes que fermentan lactosa como: E. coli y grupo Enterobacterias
Agar lisina- Base de Mide la capacidad Slido en Por Temperatu K/K = azul de Prusia * La descomposicin de los
hierro: LIA descarb enzimtica de un pico de picadur ra: 35 37 /azul de Prusia aminocidos se produce
oxilasa organismo para flauta a y C Desaminacin anaerbicamente.
de descarboxilar un estra, Tiempo: 18 oxidativa /
Moller aminocido (lisina y inculo 24 horas descarboxilacin
arginina) para formar una liviano. K/A= azul de prusia / lila
amina, con la No desaminacin
consiguiente alcalinidad. Produccin de H2S =
El aminocido L-lisina Ennegrecimiento del
sufre la descarboxilacin medio Produccin de
para dar cadaverina y gas = Burbujas o
CO2 por accin de la levantamiento del
enzima especfca medio de cultivo de las
lisinadescarboxilasa. paredes del tubo
Movilidad, MIO El medio MIO se utiliza Semislido Por Tiempo: 24 Ornitina descarboxilasa * Prueba de indol :Reactivo de
indol y para la identifcacin de en forma picadur 48 horas Positivo: color prpura Kovacs
ornitina: MIO Enterobacterias sobre la vertical a, en del medio Adicionar 5 gotas y agitar
base de movilidad, la forma Temperatu Negativo: Color amarillo suavemente el tubo Interpretar
produccin de ornitina vertical ra: 35 37 en el fondo del tubo que inmediatamente.
descarboxilasa y de indol. C puede ser prpura al *Indica desarrollo de escatol, un
fnal. compuesto metilado que puede
Microorganismos ornitina positivos
Indol ser el precursor de la formacin
Especies de Enterobacter
Positivo: Anillo rojo en de indol.
Proteus mirabilis
la superfcie del medio. *La reaccin positiva despus de
Proteus morganii
Negativa: No se 24 horas indica una prueba
Yersinia enterocolitica
produce color Negativa: completa.
Microorganismos ornitina negativos
Color naranja en la *Si el cultivo de 24 horas es
Especies de Klebsiella
superfcie del medio. negativo deber incubarse otras
Enterobacter aglomerans
*Movilidad 24 horas y repetirse la prueba.
Proteus vulgaris
Positiva. Los organismos *Se leen las reacciones de
Proteus rettgeri
mviles migran de la movilidad y de ornitina
Yersinia pestis
lnea de siembra y se descarboxilasa antes de agregar
Yersinia pseudotuberculosis
difunden en el medio el reactivo de Kovacs para la
provocando turbiedad. prueba de indol.
Negativa. Crecimiento
bacteriano acentuado
siguiendo la lnea de
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siembra
Oxidasa Los discos contienen oxalato de - En tubo: a partir de Generalmente dentro Positivo: *La prueba debe realizarse
dimetil-para-fenilendiamina, el cual un cultivo puro, hacer del minuto, y a observacin de utilizando cultivos frescos
es el sustrato de la enzima oxidasa. una suspensin temperatura ambiente color rojo- (18-24 horas), y que no
Los microorganismos que producen la densa en 0.2 ml de se detectan los fucsia en el provengan de medios con
enzima oxidasa se evidencian porque agua destilada resultados positivos. disco y/o azcares con pH cido.
en presencia de oxgeno atmosfrico estril, y agregar un Una reaccin lenta, solucin. * Se recomienda utilizar una
y citocromo c, se oxida el sustrato disco de OX. pasado los 2 minutos, Negativo: el varilla de vidrio, plstico o
presente en los discos a un debe considerarse disco madera.
compuesto de color rojo-fucsia. negativa permanece sin
cambio de
color.

Catalasa *La catalasa es una enzima que *Peroxido de La *Los eritrocitos poseen
descompone el peroxido de Hidrogeno al 3% produccin ctalasa, por lo cual se
Hidrogeno (H2O2) en agua y oxigeno. almacenado en rpida y debe evitar tomar
El peroxido de Hidrogeno se forma frasco mbar en fro. sostenida colonias de agar sangre
como uno de los productos fnales del *Cultivo de 18-24 de para evitar falsos
metabolismo aerobio de los hidratos horas del burbujas o positivos.
de carbono. Si se permite que se microorganismo a efervescen
acumule resulta letal para la clula probar cia
bacteriana. constituye
*La prueba de la catalasa se usa con una
mucha frecuencia para diferenciar reaccin
miembros de la familia positiva
Micrococaceae de miembros de la
familia Streptococcaceae.

Microorganismos fermentadores de carbohidratos: No fermentadores de adonitol: Providencia stuartii.


Fermentadores de glucosa: Todos los miembros de las No fermentadores de inulina: Streptococcus del grupo D.
Enterobacteriaceae. No fermentadores de sacarosa: Otras especies de Yersinia
Fermentadores de glucosa y lactosa: Escherichia coli, Klebsiella y grupos
Enterobacter. "Microorganismos positivos citrato
Fermentadores de manitol: Staphylococcus aureus Especies de:
Fermentadores de inositol: Proteus rettgeri Salmonella
Fermentadores de lactosa: Neisseria lactamica Arizona
Fermentadores de adonitol: Providencia alcaligenes. Citrobacter
Fermentadores de inulina: Streptococcus salivarius y Streptococcus Enterobacter
sanguis. Klebsiella
Fermentadores de sacarosa: Yersinia enterocolitica. Serratia licuefaciens
Fermentadores de salicina: Listeria monocytogenes. Pseudomonas cepacia
Microorganismos no fermentadores de Carbohidratos:
No fermentadores de lactosa: Enterobacterias patgenas como "Microorganismos negativos citrato
Salmonella y Shigella. Edwarsiella
No fermentadores de manitol: Staphylococcus epidermidis. Yersinia enterocoltica
No fermentadores de salicina: Especies de Corynebacterium. Escherichia coli
No fermentadores de rafnosa: Otras especies de Aeromonas. Shigella
No fermentadores de inositol: Proteus morganii. Yersinia pseudotuberculosis
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Otras especies de Moraxella Serratia marcescens
Proteus morganii Pseudomonas aeruginosa Especies de Flavobacteriumm

"Microorganismos positivos en licuefaccin de gelatina "Microorganismos negativos en licuefaccin de gelatina


Staphylococcus aureus Listeria monocytogenes
Staphylococcus epidermidis (lenta)
Serratia liquefaciens