E.

P de Ingenieria Biotecnologica UCSM Inmunología Básica

PRACTICA Nº 5

INMUNOAGLUTINACION
DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS

I. OBJETIVOS

 Determinar los grupos ABO y Rh en hematíes, mediante la utilización de

antisueros comerciales.
 Determinar los grupos ABO en plasma, mediante la utilización de hematíes.
 Reconocer una reacción de aglutinación debida a una reacción antígeno-
anticuerpo.

II. INTRODUCCION

La aglutinación se caracteriza por la formación de agregados visibles como

resultado de la interacción de anticuerpos específicos y partículas insolubles que
contienen determinantes antigénicos en la superficie (epitopes).Estas pruebas son
altamente sensibles, utilizadas en el diagnóstico de virus, bacterias, protozoarios y
hongos; enfermedades auto-imunes; detección de hormonas y determinación de
grupos sanguíneos, (figura 1). Son de fácil ejecución ya que pueden realizarse en
láminas, placas o tubo, lectura visual la cual depende solamente del tamaño de los
agregados formados, es de bajo costo, presenta buena especificidad y
reproductibilidad.

Fig.1.- Aglutinación

La determinación del grupo sanguíneo es una práctica habitual e imprescindible,

para la transfusión de componente hemáticos. La razón está en que el sistema
inmune de algunos individuos rechaza los hematíes de otros. Esta reacción
inmunológica está mediada por anticuerpos y es fácilmente visible in vitro
mediante reacciones de aglutinación. Se conocen más de 20 grupos de antígenos
eritrocitarios siendo los más importantes a efectos transfusionales los antígenos
del sistema H / ABO y los del sistema Rhesus (Rh). Existen otros pero no causan
problemas trasnfusionales como por ejemplo: MNS, Kell, Kidd, duffy, Lutheran,
Diego, Chido, Rogers, Colton, Lewis, etc.
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Sistemas ABO

Contiene cuatro fenotipos principales de ABO: A, B, O y AB. Los cuatro fenotipos

están determinados por la presencia o ausencia de dos antígenos (A y B) en los
eritrocitos. Son controlados por un solo gen con tres alelos (A,B, i), el alelo A da
tipos A, el B tipos B y el alelo i tipos O (o “cero”) siendo A y B son alelos
dominantes sobre i. Así, las personas que heredan dos alelos ii tienen tipo O; AA o
Ai dan lugar a tipos A; y BB o Bi dan lugar a tipos B. Las personas AB tienen
ambos fenotipos por tener una relación de codominancia

Este sistema también se caracteriza por la presencia o ausencia de anticuerpos

generados naturalmente y que son denominados isohemaglutininas (Suelen ser
IgM), dirigidos contra los antígenos A y B ausentes. Se cree que la fuente de
inmunización de dichos Ac naturales está en el intestino y por bacterias
ambientales que se ha demostrado poseen estructuras como el ABO en sus
paredes de lipopolisacárido, esto es muy importante desde el punto de vistas
transfusional (Tabla 1, figura 2).

Dichos grupos sanguíneos están distribuidos entre la población mundial de raza

blanca aproximadamente de la siguiente manera: grupos A y O 44-46% de cada
uno, grupo B al 8-9% y grupo AB minoritario con un 3-4%.

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Sistema Rhesus

Se han identificado más de 40 antígenos del sistema Rh aunque no se sabe

cuantos genes son responsables de este sistema. Son proteínas integrales de
membrana con un contenido lipídico alto. D es el antígeno Rh más inmunogénico y
por tanto el más importante a efectos transfusionales. La presencia de D da lugar
al Rh+, mientras que la ausencia (d) da lugar al Rh-. Los anticuerpos anti D, que
son IgG, aparecen en la circulación de los individuos Rh- sólo tras una exposición
previa a sangre D, por ejemplo por una transfusión de hematíes o tras la gestación
de un feto D.

Fig. 2 Grupos Sanguineos

TIPS PARA ENTENDER LA TIPIFICACION DE GRUPOS SANGUINEOS

 Los grupos sanguineos se heredan según las leyes geneticxas. Son 4 tipos y
reciben el nombre de grupos sanguineos ABO.
 En toda transfusion sanguinea se debera determinar con mucho cuidado los
grupos sanguineos de cada donador y cada receptor. El paciente solo recibira
sangre de su propio grupo.

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 La tipificacion de los grupos sanguineos se realiza:

- Probando los globulos rojos (para reconocer sus antigenos) con sueros
clasificadores conocidos, anti A, anti B, y anti AB.
- Probando suero (para identificsr sus anticuerpos) con globulos rojos de
ensayo conocido, perteneciente a los grupos A, B y O.
 En los hospitales pequeños y en caso de urgencia, puede ser que el paciente
deba recibir sangre de un grupo distinto del suyo, según las siguinetes reglas:

El paciente que tenga:

- Grupo Sanguineo A: Debera recibir sangre del grupo A; si no se
dispone de ella, usar sangre del grupo O.
- Grupo Sanguineo B: Debera recibir sangre del grupo B; si no se
dispone de ella, usar sangre del grupo O.
- Grupo sanguineo AB: Debera recibir sangre del grupo AB; si no se
disponede ella, usar sangre del grupo A, del grupo B o del grupo O (en
este orden)

III. MATERIALES

 Portaobjetos
 Lancetas de un solo uso
 Algodón
 Agua oxigenada
 Tubos eppendorf
 Centrifuga para tubos eppendorf Micropipetas y puntas de 10, 50 y 100uL
 Soluciones y reactivos
 Solución anti-A
 Solución anti-B
 Solución anti-D (anti Rh)
 Una gota de sangre
 Suero salino fisiológico (NaCl 0.85%) EDTA

IV. PROCEDIMIENTO

Determinación de ABO y Rh en Hematíes

1. Preparar un portaobjetos rotulado con las iniciales del voluntario.

2. Se limpia el pulpejo de un dedo (tal como se realizó para extraer la muestra para
frotis sanguíneo) con un algodón humedecido en alcohol y se pincha con la
lanceta.
3. Colocar tres gotas de sangre (aproximadamente 0.5 cm de diámetro, 25-50μl)
sobre un portaobjetos completamente limpio.

4. Añadir el Anti cuerpo anti-A (25μl) a una de las gotas de sangre, el anti-B a la
siguiente y finalmente el anti-D a la restante.
5. Mezclar con una punta de pipeta durante unos segundos
6. Determinar la aglutinación e interpretar el resultado.
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Determinación de ABO y Rh en plasma

1. Pipetear en un tubo eppendorf 10 μl de sangre de los diferentes grupo hemáticos

obtenido en la experiencia anterior (A, B, AB, O) y rotular.
2. Centrifugar el tubo1minuto a 2500rpm y descartar el sobrenadante.
3. Resuspender el pellet y añadir 1mL de suero fisiológico.
4. Repetir el paso 2.
5. Resuspender en 490 μl de suero fisiológico y a esto se denominará hematíes al
2% (v/v).
6. Aparte, extraer 1mL de sangre de un estudiante X en un tubo eppendorf
conteniendo anticoagulante y centrifugar 5 minutos a 2500rpm
7. Extraer el plasma y depositar 50uL en dos tubos eppendorf. Pueden también
prepararse controles negativos (suero fisiológico) y positivos si es que hubiera
suero anti-A,B.
8. Pipetear 25μl de hematíes A en un tubo y hematíes B en el otro y mezclar.
9. Centrifugar a 2500rpm por 15 segundos.
10. Dispersar el pellet y determinar aglutinación.

Desarrollo

Hacer un esquema de los pasos seguidos para desarrollar la práctica, graficar el

resultado.

Cuestionario

1. ¿Cuál fue la finalidad de mezclar los hematíes al 2% con el suero de un estudiante

X?
2. ¿Explica brevemente en qué consiste la enfermedad del Rh?
3. ¿Cuál es la alternativa para evitar la isoinmunización materno fetal y como actúa?
4. Explique brevemente a qué se le llama fenotipo Bombay.
5. Qué características distinguen a los eritrocitos de las otras células sanguíneas?