Instituto tecnológico de la paz

Departamento de ingenierías

Ingeniería bioquímica

Docente: Ricardo Torres Romero

Asignatura: Operaciones I

López Aguilar, Aleydis Anaid

Grupo 6F

Resumen de unidad 4

La Paz Baja California Sur a 3 de junio del 2022.

En la obra escrita en 2002, Bioprocess Engineering, capitulo 11, por los autores
Michael L. Shuler y Fikret Kargi, explican los conceptos fundamentales de la
recuperación y purificación de productos, mismos que ayudan a la comprensión en
su totalidad de las bioseparaciones.

La recuperación y purificación de un producto de fermentación es de suma

importancia para cualquier proceso industrial y comercial. Las dificultades de estos
procesos radican principalmente en la naturaleza del producto. Los productos
pueden ser la biomasa, un componente extracelular o un componente intracelular.
Las principales operaciones unitarias utilizadas para la recuperación y purificación
de productos son las siguientes:

La separación de sólidos como biomasa, partículas insolubles y macromoléculas

del caldo de fermentación es el primer paso en la recuperación del producto.
Ejemplos de pretratamiento son el tratamiento térmico, el ajuste del pH y la fuerza
iónica, y la adición de coagulantes y floculantes.
Si el producto es biomasa, la separación de sólidos es el paso principal en la
recuperación del producto. Si el producto es un compuesto soluble, los sólidos
deben separarse del líquido antes de que el líquido se siga procesando para
recuperar y purificar el producto soluble. Para la recuperación de productos
intracelulares, las células deben romperse y otros productos celulares deben
separarse del producto deseado. Los principales métodos utilizados para la
separación de biomasa son: filtración, centrifugación y coagulación y floculación.

La filtración es el método con más eficiencia para la separación de células y

partículas sólidas grandes. El caldo de fermentación se pasa a través de un medio
filtrante y se forma una torta de filtración. Filtros rotativos continuos o filtros precapa
de vacío rotativos son los tipos más empleados en bioprocesos. La tasa de filtración
para una operación de filtración a presión constante está determinada por la
resistencia de la torta y el medio filtrante:

𝑑𝑉 𝑔𝑐 ∆𝑝𝐴
= 𝜇
𝑑𝑡 (𝑟𝑚 + 𝑟𝑐 )

Dónde 𝑉 es el volumen de filtrado, 𝐴 es el área superficial del filtro, ∆𝑝 es la caída

de presión a través de la torta y el medio filtrante, 𝜇 es la viscosidad del filtrador,
𝑟𝑚 es la resistencia del medio filtrante, y 𝑟𝑐 la resistencia de la torta.

La centrifugación se utiliza para separar partículas de tamaño entre 100 y 0,1 𝜇𝑚

del líquido por fuerzas centrífugas. La sedimentación de partículas en una
suspensión de alta densidad de partículas se nombra sedimentación obstaculizada.
Las fuerzas que intervienen sobre una partícula sólida que se asienta en un líquido
por fuerzas gravitatorias son la fuerza gravitatoria (FG), fuerza de arrastre (FD) y la
fuerza de flotación (FB). En un campo centrífugo, la velocidad terminal de
separación de las partículas, 𝑈0 , viene dada por la siguiente ecuación:

𝑔𝐷𝑝2 (𝜌𝑝 − 𝜌𝑓 )
𝑈0 =
18𝜇

𝜌𝑓 es la densidad del fluido, donde 𝐷𝑝 y 𝜌𝑝 son el diámetro de partícula y la

densidad.

La coagulación y floculación se utilizan para crear agregados celulares antes de la

centrifugación, la sedimentación por gravedad o la filtración para optimizar el
rendimiento de estos procesos. La coagulación es la formación de minúsculos
flóculos a partir de coloides dispersos empleando agentes coagulantes, que suelen
ser electrolitos simples. La floculación es la aglomeración de estos pequeños
flóculos en partículas sedimentables más grandes utilizando agentes floculantes.
Los electrolitos simples utilizados en la coagulación son ácidos, bases, sales e
iones. Los polielectrolitos utilizados en la floculación son compuestos orgánicos
solubles en agua de alto peso molecular, que pueden ser aniónicos, catiónicos o no
iónicos.

Ya que las células se separan del caldo líquido, si el producto deseado es

intracelular, es necesario provocar una incisión en las células para librar los
productos intracelulares. Los principales métodos de disrupción celular se dividen
en mecánicos y no mecánicos. Los métodos mecánicos se pueden aplicar a un
medio líquido o sólido. Algunos métodos aplicados a un medio líquido son:

Los vibradores ultrasónicos se utilizan para romper la pared celular y la membrana

de las células bacterianas. Algunos tipos son: la prensa francesa, que es un cilindro
hueco en un bloque de acero inoxidable que se llena con pasta celular y se
encuentra sometido a altas presiones. El Dyno-Mill es un homogeneizador
mecánico que utiliza perlas pequeñas, está disponible en tamaños de hasta 275 l y
proceso hasta 2000 kg/h de suspensión celular.

Para medios sólidos, la prensa Hughes se compone de un bloque partido con un

medio cilindro hueco en cada cara. Por otro lado, en la prensa X, la ruptura celular
se produce debido a la deformación de los organismos incrustados en el hielo.

La desnaturalización por calor es un problema potencial importante. Este efecto se

puede mitigar mediante la adición de un agente reductor y un agente quelante.

La extracción de líquidos se emplea para separar productos inhibidores de

fermentación. Un dispositivo importante para la extracción líquido-líquido de
productos de fermentación es el extractor centrífugo Podbielniak. La rápida rotación
del extractor Podbielniak produce un campo centrífugo que promueve de manera
rápida los dos fluidos en contracorriente. Un producto se puede extraer y devolver
a otra fase en un periodo breve de tiempo. Por otra parte, la extracción en dos fases
acuosa es un enfoque en desarrollo activo para la extracción de proteínas solubles,
entre dos fases acuosas que contienen polímeros incompatibles como
polietilenglicol (PEG). Las fases acuosas típicas utilizadas para este fin son PEG-
agua/dextrano-agua y PEG-agua/K-fosfato-agua. PEG/dextrano y PEG/K fosfato
son razonablemente inmiscibles.

Las proteínas en un caldo de fermentación se pueden separar de otros

componentes por precipitación usando sales. Algunos ejemplos son el sulfato de
estreptomicina y sulfato de amonio. Los dos métodos más utilizados son los
siguientes: Salting-out mediante la adición de sales inorgánicas como alta fuerza
iónica, y la reducción de la solubilidad a bajas temperaturas mediante la agregación
de disolventes orgánicos.
El Salting-out de las proteínas consiste en aumentar la fuerza iónica de una solución
que contiene proteínas agregando sales. Por otra parte, la adición de disolventes
orgánicos a bajas temperaturas induce la precipitación de proteínas al decrecer la
constante dieléctrica de la solución, esto da como resultado fuerzas electrostáticas
más fuertes entre las moléculas de proteína, facilitando la precipitación de proteína.
La precipitación de disolventes se puede usar con adición de sal, ajuste de pH y
baja temperatura para optimizar la precipitación. Un método de esta clase, es la
precipitación isoeléctrica, que consiste en la precipitación de proteínas en su punto
isoeléctrico.

La adsorción de solutos de medios líquidos a sólidos es una práctica frecuente en

la separación de materiales solubles del caldo de fermentación. En la adsorción
física, las fuerzas débiles, son dominantes; sin embargo, en la adsorción de
intercambio iónico, se utilizan fuertes enlaces iónicos. El adsorbente más utilizado
para aplicaciones de tratamiento de aguas residuales es el carbón activado. Las
resinas de intercambio iónico y otros adsorbentes poliméricos se pueden emplear
para separaciones de proteínas de compuestos orgánicos pequeños. La capacidad
de adsorción se modifica según el adsorbente, el adsorbato, las condiciones
fisicoquímicas y las propiedades superficiales del adsorbente y del adsorbato.
Existen varios tipos de contactores sólido-líquido para la adsorción de solutos. Entre
estos se encuentran los contactores de lecho empacado, lecho móvil, lecho
fluidizado o recipiente agitado.

La diálisis es una operación de separación por membrana utilizada para la

eliminación de solutos de peso molecular mínimo (100 < MW < 500) e iones
inorgánicos (10 < MW < 100) de una solución. Un ejemplo distinguido es el uso de
membranas de diálisis para eliminar la urea (MW = 60) de la orina en dispositivos
de riñón artificial. En otras áreas, como la biotecnología, la diálisis se emplea para
prescindir sales de una solución de proteína.

La ósmosis es la exportación de moléculas de agua de una región de alta a una

baja concentración, cuando estas dos fases están separadas por una membrana
selectiva. La presión osmótica se puede expresar por
 𝜋 = 𝐶𝑅𝑇(1 + 𝐵2 𝐶 + 𝐵3 𝐶 2 + ⋯ )

Dónde C es la concentración del soluto, Tes la temperatura, R es la constante de

los gases, y 𝐵2 𝐶 + 𝐵3 𝐶 2 son los coeficientes viriales para el soluto.

En la ósmosis inversa (RO), se aplica presión sobre una fase que contiene sal, lo
que promueve al disolvente de una región de baja a una alta concentración y da
como resultado la concentración de moléculas de soluto (sal) en un sitio
determinado de la membrana.

Las aplicaciones de RO en bioseparaciones son pocas, ya que el método necesita

altas presiones y se basa en la eliminación de solventes. Otro problema con las
membranas de ósmosis inversa es la deposición de moléculas de soluto en las
superficies de la membrana, lo que produce grandes resistencias para el flujo de
solvente.

Las membranas pueden servir como un tamiz molecular para separar moléculas de
soluto de diferente tamaño molecular. Según el corte del tamaño molecular, se
pueden aplicar diferentes membranas para la separación de proteínas de diferente
peso molecular. La microfiltración o filtración microporosa (MF) se utiliza para
separar especies, como bacterias y levaduras, que van de 0,1 a 10 𝜇𝑚 de ancho.
Los ultrafiltros se utilizan para macromoléculas con un rango de peso molecular de
2000 a 500 000 𝜇𝑚. En algunos ultrafiltradores las membranas tienen estructura
anisotrópica. En una membrana anisotrópica, se forma una capa delgada con
pequeños poros sobre una estructura gruesa y altamente porosa. La capa delgada
suministra selectividad, mientras que la capa más gruesa facilita soporte mecánico.
Los filtros microporosos generalmente son isotrópicos y pueden poseer una
estructura de trayectoria abierta y tortuosa, lo que induce que las partículas queden
atrapadas dentro del filtro, o pueden tener poros bien definidos de tamaño uniforme.

En la filtración de flujo cruzado, la presión se aplica de manera paralela a la

superficie de la membrana. Este proceso también se llama filtración de flujo
tangencial. Es decir, el fluido fluye paralelo a la superficie de la membrana y pasa a
través de la membrana, dejando los solutos en una fase líquida por encima de la
membrana.

Las tres principales aplicaciones de la ultrafiltración son la concentración, la

purificación y la diafiltración. Las membranas de ultrafiltración se utilizan para la
separación de proteínas, enzimas, pirógenos, desechos celulares y virus de los
medios de fermentación. La microfiltración se maneja principalmente para
concentrar suspensiones bacterianas y de levaduras y proveer un sobrenadante
libre de células.

La cromatografía se aprovecha para separar mezclas en componentes pasando una

mezcla fluida a través de un lecho de material adsorbente. En la cromatografía de
elución la columna constituyente se compone de partículas adsorbentes, que
pueden ser sólidas, un sólido poroso, un gel o una fase líquida inmovilizada en o
sobre un sólido. Cuando se trata de grandes cantidades de material, la
cromatografía de desplazamiento es útil. La principal ventaja es el potencial de un
mayor rendimiento, y separación de solutos que puede ser difícil de obtener en
algunas situaciones. La cromatografía de adsorción se basa en la adsorción de
moléculas de soluto en partículas sólidas, mediante fuerzas débiles de Vander
Waals e interacciones estéricas. La cromatografía de partición líquido-líquido se
basa en los diferentes coeficientes de partición de las moléculas de soluto entre una
fase líquida adsorbida y una solución de paso. La cromatografía de intercambio de
iones se fundamenta en la adsorción de compuestos cargados eléctricamente, en
partículas de resina de intercambio iónico por fuerzas electrostáticas. La
cromatografía de filtración en gel se basa en la penetración de moléculas de soluto
en pequeños poros de partículas de empaquetamiento en función del tamaño
molecular y la forma de las moléculas de soluto. La cromatografía de afinidad se
basa en las interacciones químicas específicas entre moléculas de soluto y ligandos.
La cromatografía hidrofóbica (HC) se fundamenta en interacciones hidrofóbicas
entre moléculas de soluto y grupos funcionales en partículas de soporte. En la
cromatografía líquida de alta presión (HPLC) se aplica una alta presión de líquido a
la columna empaquetada. La HPLC proporciona una resolución rápida y alta de las
moléculas de soluto.

La electroforesis se utiliza para la separación de biomoléculas cargadas en función

de su tamaño y carga en un campo eléctrico. En un campo eléctrico, la fuerza de
arrastre sobre una partícula cargada se equilibra con las fuerzas electrostáticas
cuando la partícula se desplaza con una velocidad terminal constante. La
precipitación de proteínas en un gradiente de pH en su punto isoeléctrico se conoce
como enfoque isoeléctrico. Dado que el tamaño y la carga de las moléculas de
proteína difieren a un pH determinado, la velocidad terminal de las proteínas será
diferente, por ello, las proteínas se aislarán entre sí en un campo eléctrico. Ciertos
geles, como el agar o la poliacrilamida, se utilizan para las separaciones de
proteínas mediante electroforesis en gel. La electroforesis en gel es una importante
técnica de separación analítica.

La electrodiálisis es un método de separación por membrana utilizado para la

separación de moléculas cargadas de una solución por medio de la aplicación de
una corriente eléctrica continua. Las membranas poseen grupos de intercambio
iónico y tienen una carga eléctrica fija. Este método es muy práctico en la
concentración de electrolitos y proteínas. Se encuentra impulsado por fuerzas
electrostáticas y se puede utilizar para transportar sales de baja a alta
concentración. Las membranas de intercambio iónico son utilizadas en la
electrodiálisis, son resinas de intercambio iónico en forma de lámina. Contienen
contraiones móviles que trasladan corriente eléctrica. Por otro lado, la membrana
de intercambio catiónico se constituye de poliestireno con grupos sulfonato
cargados negativamente unidos a grupos fenilo en poliestireno.

Los principales pasos finales en la purificación de productos de fermentación son la

cristalización y el secado. La cristalización actúa a bajas temperaturas, lo que
disminuye la degradación térmica de los materiales sensibles al calor. Las
operaciones se ejecutan a altas concentraciones y, por lo tanto, los costos unitarios
son mínimos y los factores de separación son efectivos. Los cristales de alta pureza
se recuperan utilizando filtros de tipo Nutsche por lotes o filtros centrífugos.

La eliminación del solvente del producto húmedo purificado se realiza mediante un

proceso de secado. Al elegir las condiciones de secado, se deben tomar en cuenta
las propiedades físicas del producto, su sensibilidad al calor y el contenido de
humedad final deseable. Los parámetros que intervienen en el secado son los
siguientes: propiedades físicas del sistema sólido-líquido, propiedades intrínsecas
del soluto, condiciones del ambiente de secado y parámetros de transferencia de
calor.

Algunos tipos de secadores utilizados para bioprocesos son los siguientes: El

secador de bandejas se usa principalmente en productos farmacéuticos. La
liofilización se utiliza para antibióticos, soluciones enzimáticas y suspensiones
bacterianas. También existen, secadores de tambor rotatorio. Los secadores por
pulverización son costosos, pero son el método predilecto para materiales sensibles
al calor. Los secadores de cinta transportadora neumática son muy apropiados para
materiales sensibles al calor y que se oxidan fácilmente.