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UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS-ESPE

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y DE LA AGRICULTURA


INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
DISEÑO DE PROCESOS

Integrantes: - Bryan Mangui Fecha: 9/05/2018 NCR:4225


- Marianela Mariño
- Sofía Ocaña
- Santiago Salazar

Operaciones básicas

Los bioprocesos generan productos útiles mediante el procesamiento de ciertos materiales


de partida. Las operaciones o etapas individuales del proceso que cambian o separan
componentes se denominan operaciones básicas. Aunque los objetivos específicos de los
bioprocesos difieren para cada sector de la industria, cada esquema de proceso puede
visualizarse como una seria de operaciones que aparecen una y otra vez en diferentes
sistemas.

El termino operación básica se refiere generalmente a las etapas físicas del procesos. Las
transformaciones químicas o bioquímicas son objeto de la ingeniería de reacciones. Los
caldos de fermentación son mezclas complejas de componentes que contienen productos
en solución diluida. En el bioprocesamiento, cualquier tratamiento del caldo de cultivo
después de la fermentación se conoce como procesamiento posterior. El propósito del
procesamiento posterior es concentrar y purificar el producto para la venta; en la mayoría
de los casos, esto solo requiere una modificación física. Aunque cada esquema de
recuperación será diferente, el procesamiento posterior sigue una secuencia general de
pasos.

i. Eliminación de células:
Un primer paso común en la recuperación del producto es la eliminación de las células
del licor de fermentación. Esto es necesario si la biomasa en sí es el producto, o si el
producto está contenido dentro de las células. La eliminación de células también puede
ayudar a la recuperación del producto de la fase líquida. La filtración y la centrifugación
son operaciones típicas de la unidad para la eliminación de células.

ii. Aislamiento primario:


Existe una amplia variedad de técnicas para el aislamiento primario de productos de
fermentación a partir de células o caldo sin células. El método utilizado 'depende de las
propiedades físicas y químicas del producto y el material circundante. El objetivo del
aislamiento primario es eliminar componentes con propiedades significativamente
diferentes de las del producto. Típicamente, los procesos para el aislamiento primario
tratan grandes volúmenes de material y son relativamente no selectivos; sin embargo, se
pueden lograr aumentos significativos en la calidad y concentración del producto. Las
operaciones unitarias como la adsorción, la extracción de líquidos y la precipitación se
utilizan para el aislamiento primario.

iii. Purificación:
Los procesos para la purificación son altamente selectivos y separan el producto de las
impurezas con propiedades similares. Las operaciones típicas de la unidad son
cromatografía, ultrafiltración y precipitación fraccional.

iv. Aislamiento final:


La pureza final requerida depende de la aplicación del producto. La cristalización, seguida
de centrifugación o filtración y secado, son operaciones típicas utilizadas para productos
de alta calidad, como los productos farmacéuticos.

El proceso de recuperación del producto puede constituir una parte sustancial del coste
de producción total de producción del producto de fermentación. Por ejemplo, la relación
del coste de fermentación y el de recuperación del producto es aproximadamente 60:40
para antibióticos como la penicilina. Para antibióticos más recientes, esta relación se
invierte de manera que la recuperación del producto es más costosa que la fermentación.
Muchos de los nuevos productos de biotecnología como las proteínas recombinantes y
los anticuerpos monoclonales requieren procesos muy caros de tratamiento posterior que
constituyen un 80-90% del coste total del proceso.

Cuanto mayor es la concentración de partida más barato resulta el producto final. Cada
etapa del proceso de recuperación incluye alguna pérdida. Si la concentración de partida
es muy baja se necesitan más etapas de recuperación, y por lo tanto, mayores pérdidas y
costes.

1. Filtración
En la filtración, las partículas sólidas se separan de una mezcla liquido-sólido forzando al
fluido a pasar a través de un medio filtrante o tela filtrante que retiene las partículas. Los
sólidos se depositan en el filtro y, a medida que el depósito o la torta de filtración
aumentan en espesor, presentan una mayor resistencia a la filtración. La filtración se
puede realizar usando equipos de vacío o de presión positiva. La diferencia de presión
ejercida a través del filtro para separar el fluido de los sólidos se denomina caída de
presión de filtración. La facilidad de filtración depende de las propiedades del sólido y
el fluido; la filtración de sólidos incompresibles cristalinos en líquidos de baja viscosidad
es relativamente sencilla. Por el contrario, los caldos de fermentación pueden ser difíciles
de filtrar debido al pequeño tamaño y la naturaleza gelatinosa de las células y al
comportamiento viscoso no newtoniano del caldo. La mayoría de las tortas de filtro
microbiano son compresibles, es decir, la porosidad de la torta disminuye a medida que
aumenta la caída de presión a través del filtro. Esto puede ser un problema importante
que causa tasas de filtración reducidas y una mayor pérdida de producto. La filtración de
caldos de fermentación generalmente se lleva a cabo en condiciones no asépticas; el
proceso debe, por lo tanto, ser eficiente y confiable para evitar la contaminación indebida
y la degradación de productos lábiles.
Los auxiliares de filtración, como la tierra de diatomeas, se han utilizado ampliamente en
la industria de la fermentación para mejorar la eficacia de la filtración. La tierra de
diatomeas, también conocida como kieselguhr, es el esqueleto fundido de las diatomeas.
Los lechos empaquetados de kieselguhr granulado tienen una porosidad muy alta; solo
alrededor del 15% del volumen total de kieselguhr empacado es sólido, el resto es espacio
vacío. Tal alta porosidad facilita el flujo de líquido alrededor de las partículas y mejora la
tasa de filtración a través del lecho de partículas. Los filtros se aplican de dos maneras.
Como se muestra en la figura 1 (a), el coadyuvante de filtración se puede utilizar como
una capa preliminar en el medio filtrante para evitar el bloqueo del filtro por sólidos que
de otro modo se encajarían en los poros de la tela.

Figura 1. a) Filtración de torta con coadyuvante, b) Esquema de un filtro de tambor


rotatorio

Equipos de filtración

Los filtros de placa son adecuados para la filtración de pequeños lotes de fermentación;
este tipo de filtro acumula gradualmente biomasa y debe abrirse periódicamente y
eliminarse de la torta de filtración. Los procesos más grandes requieren filtros continuos.
Los filtros de vacío de tambor giratorio, como el que se muestra en la figura 1 (b), son los
dispositivos de filtración más ampliamente utilizados en la industria de la fermentación.
Un tambor horizontal de 0,5-3 m de diámetro se cubre con un paño de filtro y se gira
lentamente a 0,1-2 rpm. La tela se sumerge parcialmente en un recipiente agitado que
contiene material para filtrar. Cuando una sección del tambor entra al líquido, se aplica
un vacío desde el interior del tambor. Se forma una torta en la superficie de la tela mientras
el líquido pasa a través de tuberías internas hacia un tanque de recolección. A medida que
el tambor gira fuera del depósito, la superficie del filtro se aplica líquido de lavado que
se aspira a través de la tela y se recoge en un tanque de retención separado. Después del
lavado, la torta se deshidrata mediante la aplicación continuada del vacío.

Teoría de la filtración
La teoría de la filtración se usa para estimar la tasa de filtración. Para una caída de presión
dada a través del filtro, la tasa de filtración es mayor justo cuando comienza el filtrado.
Esto se debe a que la resistencia a la filtración es mínima cuando no hay sólidos
depositados. La orientación de las partículas en el depósito inicial de la torta es muy
importante y puede influir significativamente en la estructura y la permeabilidad de todo
el lecho filtrante. La caída excesiva de presión y las altas velocidades iniciales de
filtración pueden provocar el taponamiento de la tela filtrante y una resistencia muy alta
al flujo. La resistencia al flujo debido a la tela filtrante se puede considerar constante si
las partículas no penetran en el material; la resistencia debido a la torta aumenta con el
grosor.

La velocidad de filtración se mide generalmente como la velocidad a la que se recoge el


líquido filtrado. La tasa de filtración viene dada por la siguiente expresión:

Donde A es el área del filtro, V es el volumen del filtrado, t el tiempo de filtración, Δp es


la caída de presión a través del filtro, µ es la viscosidad del fluido, Mc la masa total de
solidos la torta, α es la resistencia especifica media de la torta y rm incluye el efecto de la
tela filtrante y de cualquier partícula introducida en el filtro.

Sil la torta filtrante es incompresible, la resistencia especifica de la torta α no varía con la


caída de presión a través del filtro. Sin embargo, las tortas de los caldos de fermentación
raramente son incomprensibles. Por ello, a medida que las tortas se van comprimiendo,
la velocidad de filtración disminuye. Para una torta comprensible, α puede relacionarse
con Δp de manera empírica:

Donde s es la comprensibilidad de la torta y α’ es una constante que depende en gran


medida del tamaño y morfología de las partículas depositadas en la torta. El valor de s es
cero para solidos incomprensibles, mientras que se acerca a la unidad para materiales
altamente comprensibles, α está también relacionado con la propiedad media de las
partículas en la torta por la expresión:

Donde kv es un factor que depende de la forma de las partículas, a es la superficie


especifica de las partículas, ε es la porosidad de la torta.
Siempre es útil considerar diferentes métodos que pueden mejorar la velocidad de
filtración. De la relación entre variables existentes en la ecuación puede adoptarse varias
estrategias:

i. Aumentar el área de filtración


ii. Aumentar la caída de presión
iii. Disminución de la masa de la torta
iv. Reducir la viscosidad del liquido
v. Reducir la resistencia especifica de la torta
La integración de la ecuación permite el calcular el tiempo necesario para la filtración.
Antes de la integración es necesario utilizar la expresión de sólidos en función del
volumen filtrado:

Reemplazando:

Integrando:

Donde

Y,

2. Centrifugación
Separar materiales de densidad diferente, tamaño grande y viscosidad del líquido baja.
Favoreciendo también radio grande de centrifuga y alta velocidad de giro. En un bio
procesos, separa las células del caldo de fermentación, eliminando desechos, para recoger
precipitados y preparar medios de fermentación. Efectiva para partículas pequeñas no
filtrables. El lodo de células concentrado y espeso, tiene más líquido que la torta filtrada.

Se utilizan centrifugas esterilizables cuando hay recirculación en el fermentador para


prevenir contaminación del producto. Centrifugas industriales generan calor debido al
rozamiento, se hace necesaria una ventilación. Centrifugas de giro rápido generan
aerosoles que causan infecciones o alergias, se hace necesarias cabinas aislantes.

Problemas a nivel industrial: la tensión mecánica aumenta en proporción al radio,


disminuyendo velocidades, descargas continuas también la afectan.

Equipos de centrifugación. De acuerdo a su estructura interna:

- De cesta tubular.- Industria farmacéutica y alimentos. Entra el flujo de


alimentación a presión por abajo, adquiere velocidad (13 y 16 mil veces la
gravedad) y asciende a través de la cesta. Cuando ésta gira, las partículas son
lanzadas y colisionan con las paredes. Se recoge el líquido por arriba y los sólidos
por separado.
- Ultracentrífuga.- Producción de vacunas, aislamiento de enzimas y purificación
de ARN polimerasa. Cesta tubular estrecha. Recuperar precipitados finos de
soluciones de alta densidad, romper emulsiones y separar coloides (ribosomas o
mitocondrias). Fuerzas de 105 y 106 veces la gravedad, opera de forma
discontinua. Accionada por turbina de aire, opera a baja presión para reducir la
generación de calor.
- De discos.- Simple sólidos extraídos manualmente, de descarga continua con
boquillas y de descarga intermitente con válvulas, descarga automática concentra
sólidos en la periferia y los descarga mediante dispositivo.
Los discos se separan por 0,3mm, giran con la cesta y dividen el líquido en finas
capas. La alimentación es por el inferior, asciende por los agujeros de los discos.
Desarrollan entre 5000 y 15000 veces la fuerza de la gravedad. Para mayor
eficiencia se recomiendo 0,01-0,03 kg/m3 de diferencia de densidades y 0,5um
mínimo de diámetro de partícula.

Teoría de la centrifugación

La efectividad depende de la velocidad que alcanzan las partículas.


𝜌𝑝 −𝜌𝑡
Ley de Stoke (gravedad) 𝑢𝑔 = 𝐷𝑝2 𝑔
18𝜇

𝜌𝑝 −𝜌𝑡
Velocidad terminal de la centrifuga 𝑢𝑐 = 𝐷𝑝2 𝜔2 𝑟
18𝜇

𝜔2 𝑟
La relación entre 𝑢𝑐 y 𝑢𝑔 , se denomina efecto centrifugo o número g 𝑍= 𝑔

Centrifugas de industriales de 300 a 16000 Z, centrifugas de laboratorio Z de 500000.

La sedimentación sucede cuando las partículas que se alejan del centro de rotación,
chocan con las paredes, aumentando la velocidad angular, el tamaño de la partícula, la
diferencia de densidades y disminuyendo la viscosidad, se mejora la velocidad de
sedimentación. Además del tiempo de exposición suficiente.
𝑄
El factor sigma es el rendimiento, en centrifugas continuas es ∑ = 2 𝑢 . Si dos equipos
𝑔
𝑄1 𝑄2
cumplen con una misma efectividad ∑ = ∑ , se puede hacer un cambio de escala.
1 2

El rendimiento de cualquier equipo puede desviarse de las predicciones teóricas por


ejemplo por la forma, distribución de tamaño de partículas, distribución no uniforme del
flujo, interacción entre partículas durante sedimentación.
2𝜋𝜔 2 (𝑁−1)
Para una centrifuga de discos ∑= (𝑟23 − 𝑟13 )
3𝑔 𝑡𝑎𝑛𝜗

𝜋𝜔 2 𝑏 2𝜋𝜔 2 𝑏𝑟 2
Para una centrífuga de cesta tubular ∑ = (3𝑟22 + 𝑟12 ) aproximarse a ∑=
2𝑔 𝑔

Ejemplo 2. Recuperación de células en una centrífuga de discos

Una centrifuga de discos opera en continuo a 5000 rpm para la separación de levadura de
panadería. Con una velocidad de alimentación de 60 L/min, se recupera el 50% de las
células. A velocidad de centrifugación constante, la recuperación de sólidos es
inversamente proporcional al caudal.

a) ¿Qué caudal se necesitará para alcanzar una recuperación del 90% de las
células si la velocidad de centrifugación se mantiene a 5000 rpm?
50%
× 60 𝐿/ min = 33.31 𝐿/𝑚𝑖𝑛
90%
b) ¿Qué velocidad de operación se necesitará si se desea alcanzar una
recuperación del 90% con un caudal de 60L/min?
Recuperación del 90% con Q=33.31 L/min y 𝜔=5000rpm
𝑄1 ∑1 33,3 𝐿/𝑚𝑖𝑛
= = = 0,56
𝑄2 ∑2 60 𝐿/𝑚𝑖𝑛
Se utiliza la misma centrifuga y los parámetros geométricos son iguales
∑1 𝜔2
= 𝜔12 = 0,56
∑2 2
Por lo tanto
𝜔12 (5000 𝑟𝑝𝑚)2
𝜔22 == = 4,46 × 107 𝑟𝑝𝑚2
0,56 0,56
𝜔2 = 6680 𝑟𝑝𝑚
3. Dispersión de células
Centrifugación y filtración para recuperar el producto de los caldos de fermentación. La
biomasa es un subproducto. Este método sirve para desprender el material deseado como
enzimas y proteínas recombinantes que permanecen en la biomasa. Métodos mecánicos
como molienda con abrasivos, agitación a elevada velocidad, bombeo a alta presión y
ultrasonidos. Métodos no mecánicos como el choque osmótico, congelación y
descongelación, digestión enzimática de paredes celulares, disolvente y detergentes.
- Homogenización de alta presión
Fuerzas de cizalla altas para dispersar células. Incorpora una válvula ajustable con
una restricción a través de la cual las células son forzadas a pasar a 550 atm. Con
organismos filamentosos se producen taponamientos.
𝑅𝑚
Relación de la dispersión de células en el equipo: 𝑙𝑛 (𝑅 ) = 𝑘𝑁𝑝𝛼
𝑚 −𝑅

Rm cantidad máxima de proteínas para la sepración


R cantidad de proteína obtenida
N número de pasos a través del equipo
K constante de velocidad, dependiente de temperatura
P presión de operación
α medida de resistencia de células a dispersión

Temperaturas hasta 50°C, pero se recomienda enfriar el equipo a 0-4°C para minimizar
la desnaturalización.

Etapa ideal

Operaciones para la separación primaria de productos, se basa en la transferencia de


materia en diferentes fases para alcanzarla. Equipo consta de etapas donde las fases entran
en contacto. La efectividad de cada una depende del diseño del equipo, propiedades
físicas y relaciones de equilibrio.

Dos líquidos inmiscibles entran con caudales volumétricos diferentes. Cada una con
concentración única de A, concentraciones de no equilibrio. Mezcla vigorosa (fuerza
impulsora para el cambio de concentración). A se transfiere. La mezcla va a un
sedimentador donde hay separación gracias a la gravedad. Sale un líquido ligero u otro
pesado, con concentraciones de A diferentes, cercanas al equilibrio. Cambio de
concentración en etapa real menor a la ideal. Requiere más etapas de separación.

En etapa ideal, las dos corrientes de salida están en equilibrio y no se produce más
transferencia de materia de A aunque se pongan en contacto nuevamente las fases. Usada
para diseño de operaciones básicas, balances de materia, de energía y relaciones de
equilibrio entre fases.

4. Extracción líquida en dos fases acuosas


Aislar productos farmacéuticos de fuentes animales o vegetales. Se recuperan por
transferencia a un disolvente apropiado. El equipo más simple, es el embudo de
separación a escala de laboratorio. Mediante agitación el soluto diluido se transfiere de
un disolvente a otro. Se interrumpe la agitación, se deja separar. La fase con el soluto
concentrado se lleva a purificación (precipitación o cristalización).
𝐶𝐴𝑜
Coeficiente de reparto 𝑘= , si K>1, el componente A se concentra en la fase
𝐶𝐴𝑙
superior, K<1, A se concentra en la fase inferior. Directamente relacionado con la
afinidad bioespecífica por un polímero y la energía libre superficial de los componentes.

La distribución se ve afectada por el tamaño, carga eléctrica e hidrofobicidad de las


partículas.
𝑉𝑢 𝐶𝐴𝑢 𝑉𝑢 𝐶𝐴𝑢
El rendimiento en fase superior es 𝑌𝑢 = =𝑉 , donde Vu es el volumen
𝑉0 𝐶𝐴0 𝑢𝐶𝐴𝑢 +𝑉𝑙 𝐶𝐴𝑙

de la fase superior, Vl de la fase inferior, Vo el volumen inicial de la solución con el


producto.
𝑉𝐶 𝑉𝑙 𝐶𝐴𝑙
El rendimiento en fase inferior es 𝑌𝑙 = 𝑉 𝑙𝐶 𝐴𝑙 = 𝑉
0 𝐴0 𝑢𝐶𝐴𝑢 +𝑉𝑙 𝐶𝐴𝑙

𝑉𝑢 𝑉
Rendimiento máximo 𝑌𝑢 = 𝑉 y 𝑌𝑙 = 𝑉 +𝑉𝑙 𝐾
𝑉𝑢 + 𝑙 𝑙 0
𝐾

𝐶
Factor de purificación o concentración 𝛿𝑐 = 𝐶 𝐴𝑙 , cuando el producto se distribuye en la
𝐴0
𝐶𝐴𝑙
parte inferior, 𝛿𝐶 = 𝐶 , cuando el producto se distribuye en la fase superior.
𝐴0

Ejemplo 3. Recuperación de enzimas mediante extracción acuosa

Se utiliza la extracción en dos fases acuosas para la recuperación de α-amilasa de una


solución. Se añade una mezcla de polietilenglicol-dextrano y la solución se separa en dos
fases. El coeficiente de reparto es 4,2. Calcular la máxima recuperación posible de enzima
cuando:

a) La relación de volumen de las fases superior e inferior es 5


Como el coeficiente de reparto es mayor a 1, la enzima prefiere la parte superior.
El rendimiento en equilibrio se calculará para la fase superior.
𝑉𝑢
𝑉𝑙 5
𝑌𝑢 = 𝑉𝑢 1 = 1 × 100 = 95%
+ 5+
𝑉𝑙 𝐾 4,2

b) La relación de volumen de las fases superior e inferior es 0,5


0,5
𝑌𝑢 = 1 × 100 = 68%
0,5+
4,2

Un aumento en el volumen relativo de la fase de extracción favorece la recuperación del


producto deseado.

5. Adsorción
La adsorción es un fenómeno superficial donde los componentes de un gas o líquido se
concentran en la superficie de partículas sólidas o en la interfase de líquidos. Es le
resultado de las fuerzas electrostáticas, de Van der Walls, de reacción o cualquier otra
fuerza de unión entre átomos individuales iones o moléculas.
Puede distinguirse 4 tipos de adsorción.: de intercambio, física, química y no especifica.
En el bioproceso se emplea varias operaciones diferentes de adsorción para la obtención
de productos médico y farmacéuticos. La adsorción de intercambio iónico se utiliza para
la recuperación de aminoácidos, proteínas, antibióticos y vitaminas. La adsorción sobre
carbono activo es un gran método para la obtención de acido cítrico y se utiliza tmbn para
el tratamiento de aguas residuales.

La adsorción presenta mayor selectividad, pero menor capacidad que la extracción. Este
proceso es idóneo para el aislamiento de proteínas. La sustancia que va a ser concentrada
en la superficie se denomina adsorbato mientras que el material al que se une el adsorbato
es el adsorbente. El material adsorbente ideal prosee una alta superficie pro unidad de
volumen lo cual se alcanza si el sólido tiene un entramado de finos poros en el interior.
Para la adsorción de moléculas biológicas se utilizan normalmente carbones y resinas
sintéticas basadas en polímeros de estireno, divinilbenceno o acrilamida.

Una operación típica de adsorción consta de las siguientes etapas:

1. Etapa de adsorción o de contacto: el soluto se une a la resina de adsorción


2. Etapa de lavado: para eliminar el material residual que no se haya adsorbido
3. Desorción o elución de adsorbato en un diluyente apropiado
Las condiciones de desorción deben ser capaces de vencer las fuerzas físicas o iónicas
con las cuales se une el adsorbato a la resina.

4. Lavado para eliminar el eluyente residual


5. Regeneración de la resina de adsorción para retomarla a su condición inicial
La resina debe cambiarse tras varios ciclos de regeneración

Relaciones de equilibrio para la adsorción.

Las relaciones de equilibrio determinan la cantidad de material que puede adsorberse en


una determinada superficie. Los datos de equilibrio de la adsorción se denominan
isotermas de adsorción.

Para el adsorbato A una isoterma indica la concentración de A en la fase adsorbida frente


a la concentración de A en la fase sin adsorber a una determinada temperatura. Las
isotermas son útiles para la selección del adsorbente y para medir los niveles de
rendimiento del sistema.

Una de las isotermas de adsorción más sencilla es la isoterma de Langmuir, la cual se


expresa de la siguiente manera:

C*AS: es la concentración de equilibrio o carga de A en el adsorbato con unidades ( kg de


soluto / kg de solido)
CASm : es la carga máxima de adsorbato correspondiente al recubierto total mediante una
monocapa de todos los centros de adsorción posibles.

C*A: es la concentración de equilibrio de soluto en la fase de fluido(kg/m3)

KA: constante

La adsorción de tipo Langmouir se aplica a sistemas:

 Las moléculas adsorbidas forman solo una monocapa en la superficie


 Todos los centros del adsorbente tienen la misma posibilidad de adsorción
 No existen interacción entre las moléculas adsorbidas en centros adyacentes.
En muchos casos reales no se cumplen las tres condiciones a la vez. Hay algunos
adsorbente comerciales que presenta superficies irregulares y sus cetros de adsorción no
serán todos iguales. De la misma manera en muchos casos reales si van a existir
interacción entre las moléculas adsorbidas.

En sistemas liquido-solido se utilizan ampliamente isotermas Freudlich:

Esta ecuación se aplica a una gran variedad de antibióticos hormonas y esteroides.KF y n


son constantes características de cada sistema de adsorción. Las dimensiones de KF
dependen de las dimensiones de C*AS y C*A y del valor de n. Si la adsorción es favorable
n>1 o si es desfavorable n<1.

Existen muchas otras isotermas de adsorción que dan lugar a curvas C*AS vs C*A. Pero
en todas ellas los datos de equilibrio de adsorción deben calcularse experimentalmente ya
que aún no se conocen con exactitud los mecanismos de adsorción.

EJEMPLO 4: Recuperación de anticuerpos mediante adsorción.

Un licor libre de fermentación de células contiene 8*10-5 mol/litro de inmunoglobulina


G se pretende recuperar al menos el 90% de este anticuerpo mediante adsorción en una
resina sintética no polar. Los datos de equilibrio experimentales se ajustan a la siguiente
expresión:

𝐶𝐴𝑆 = 55 ∗ 10−5 𝐶𝐴∗

Donde 𝐶𝐴𝑆 es mol de soluto adsorbido por cm3 de adsorbente y 𝐶𝐴∗ es la concentración de
soluto en la fase líquida en mol/litro. ¿Qué cantidad mínima de resina se necesita para
tratar 2 m3 de licor de fermentación en un tanque agitado de una etapa?
Solución:

La cantidad de resina necesaria es mínima en el equilibrio. Si se adsorbe el 90% del


antibiótico, la concentración residual en el líquido es:

Sustituyendo este valor para C*A en la expresión de la isoterma se obtiene la carga de


equilibrio de la inmunoglobulina:

La cantidad del anticuerpo adsorbido es:

Por lo tanto, la masa de la adsorbente necesaria es:

La cantidad mínima de resina necesaria es: 𝟏. 𝟔 ∗ 𝟏𝟎𝟓 cm3 o 0.16 m3

Características del rendimiento de los adsorbentes en lecho fijo

Se han desarrollado varios equipos para las operaciones de adsorción entre los que se
incluyen:

 Reactores de lecho fijo


 Lecho móvil,
 Lecho fluidizado
 tanques agitados
De todos ellos el que más se utiliza son los reactores de lecho fijo por su mayor área de
adsorción por unidad de volumen. Un adsorbente de lecho fijo es una columna o tubo
vertical relleno de partículas de adsorbente. El líquido que contiene el soluto se hace pasar
por el lecho y la cantidad de producto retenido aumenta con el tiempo.

Al principio la resina situada en la parte superior absorbe rápidamente el soluto y la


solución pasa a través de la columna libre de soluto y abandona el sistema con una
concentración del efluente cercana a cero.

Conforme continua el flujo de solución, la región del lecho donde existe la mayoría de
adsorción (zona de adsorción) va descendiendo ya que la resina de la parte superior se va
saturando de soluto en equilibrio con la concentración en el líquido CAi.
Finalmente, la zona de adsorción alcanza el fondo del lecho, la resina está casi saturada y
la concentración del efluente empieza a aumentar (este punto se llama punto de ruptura).

Cuando la zona de adsorción para atreves del fondo del lecho la resina no puede adsorber
más soluto y la concentración del efluente recobra su valor inicial. En este punto el lecho
esta totalmente saturado de adsorbato y debe ser regenerado. La curva de ruptura muestra
la concentración de soluto en el efluente o volumen de material procesado en función del
tiempo. La forma de esta curva influye en el diseño y operación delos adsorbente en lecho
fijo. La porción de la curva de ruptura entre dos tiempos la cantidad de soluto perdido en
el efluente (área bajo la curva entre esos dos tiempos). Para evitar esto las operaciones de
adsorción se paran generalmente antes de que el lecho este completamente saturado.

Análisis ingenieril de los adsorbente de lecho fijo

En el diseño de un adsorbente de lecho fijo debe calcularse la cantidad de resina y el


tiempo requerido para la adsorción de una determinada cantidad de soluto. Los
procedentitos de diseño incluyen la predicción de la curva de ruptura y el tiempo de
aparición del punto de ruptura. La forma de la curva de ruptura se ve afectada por factores
como velocidad de alimentación, concentración del soluto en la alimentación, la
naturaleza del equilibrio de adsorción y la velocidad de adsorción. Los cálculos para su
diseño son mucho más complejos que para otras operaciones.

Existen muchas incertidumbres asociadas al diseño y al cambio de escala de los sistemas


de adsorción. Incluso en los sistemas de adsorción comerciales rara vez se alcanza el
equilibrio de adsorción por lo que el rendimiento final se controla con la velocidad global
de adsorción

6. Cromatografía
La cromatografía es una técnica analítica comúnmente utilizada para separar una mezcla
de sustancias químicas en sus componentes individuales, de modo que los componentes
individuales puedan analizarse a fondo. La base de la cromatografía es migración
diferencial, es decir el retraso selectivo de las moléculas al pasar por un lecho de
partículas de resina.

Se pueden emplear diferentes tipos de cromatografía dependiendo del producto que se


quiera separar de una mezcla, entre estas tenemos:

Cromatografía de adsorción: El soluto interacciona con sitios activos de la superficie de


la fase estacionaria (sólida). Intervienen fuerzas de van der Walls, enlaces de hidrógeno,
etc. La elución se realiza por diferencia de polaridad de las moléculas.

Cromatografía de reparto: Se basa en la diferencia de distribución del soluto entre dos


disolventes inmiscibles entre sí. En este caso la elución se da por hidrofobicidad.

Cromatografía de intercambio iónico: Existe una atracción electrostática entre el soluto


y densos aglomerados de grupos cargados eléctricamente en el relleno de la columna. La
elución se da con cambios de pH, o por gradientes salinos.
Cromatografía en gel: Las moléculas se separan en una columna empacada con partículas
de porosidad conocida. Las moléculas grandes se mueven a una velocidad mayor. La
elución se da por el tamaño de las moléculas.

Cromatografía de afinidad: Se da por una especificidad de enlaces de biomasa, es decir


por uniones específicas entre proteínas y ligandos, esto da una excelente purificación. La
elución se la hace por cambios de pH, fuerza iónica, o solución tampón.

Migración diferencial

Constituye la base de la cromatografía. Suponiendo una mezcla de componentes A y B


que presentan diferentes afinidades de equilibrio para una determinada fase estacionaria;
se hace pasar un pequeño volumen de mezcla por la columna, entonces A y B son
retenidos. Cuando se hace pasar la solución de elución ambos serán alternativamente
adsorbidos y desorbidos en posiciones inferiores de la columna mientras fluya el eluyente.
Si B desorbe más fácilmente que A este pasa más rápido por la columna.

Existen varios parámetros para caracterizar la migración diferencial.

Ve: Volumen del eluyente necesario para transportar el soluto a través de la columna hasta
que sale a su máxima concentración. Cada componente tiene su volumen de elución
diferente.

Vo: Volumen hueco. Volumen del líquido existente en la columna que no se encuentra en
el interior de las partículas.

k: Factor de capacidad

δ: Selectivdad o retención relativa

Estas ecuaciones son válidas para todos los tipos de cromatografía revisadas excepto para
la cromatografía de filtración por gel.

Para la cromatografía en gel se tiene las siguientes ecuaciones:

donde:

vT: Volumen total

Vs: Volumen del gel

V0:Volumen hueco
Vi: Volumen interno de los poros

El volumen de eluyente para solutos parcialmente excluidos se calcula con la siguiente


ecuación:

Donde:

Kp: Coeficiente de reparto del gel. La fracción de volumen interno disponible para el
soluto. Se calcula:

Donde:

a: masa del gel seco

Wr: Valor de ganancia de agua. Volumen de agua tomado por masa de gel seco.

Si el gel es suministrado ya mojado e hinchado se usa la siguiente ecuación:

𝜌𝑔 : densidad del gel húmedo.

𝜌𝑤 : densidad del agua.

EJEMPLO 5:

Para separar dos hormonas A y B se utiliza una columna de cromatografía de gel a escala
piloto empaquetada con resina Sephacryl. La columna tiene 5 cm de diámetro y 0,3 m de
altura. El volumen hueco es 1,9 x 10−4 m3. El valor de ganancia de agua del gel es 3
x10−3 𝑚3 𝑘𝑔−1 Sephacrul seco. La densidad del gel húmedo es de 1,25x103 kg 𝑚−3. El
coeficiente de reparto de la hormona A es 0,38 y el de la hormona B es 0,15. Si el caudal
de eluyente es de 0,71l /h,¿cuál es el tiempo de retenció para cada hormona.

Solución:

El volumen total de la columna se determina:

El volumen hueco ya nos da el enunciado:


El volumen interno se calcula con la siguiente ecuación:

Se calcula los valores del volumen de elución usando kp para A y B

El tiempo de retención se calcula con la relación t=ve/Q, donde Q es el caudal:

CONCLUSIONES

Las operaciones básicas son procesos físicos e individuales los cuales buscan recuperar,
concentrar y purificar el producto de interés a partir del caldo de fermentación.

La filtración es una operación básica o proceso unitario que consiste en la separación de


sólidos en una suspensión a través de un medio poroso o filtrante. La selección de un
equipo de filtración en general requiere un estudio de las especificaciones y objetivos del
proceso junto con una evaluación de la capacidad y características del equipo de
filtración. Para bioprocesos se deben tomar en cuenta varios aspectos como: la
comprensibilidad de la torta, la viscosidad de la torta, localización del producto de interés,
entre otros.

La centrifugación y disrupción celular son procesos que se utilizan para aislar el producto
deseado que se encuentra mezclado con el caldo de fermentación; el objetivo es realizar
la operación con la mayor eficiencia y obtener pureza alta. Así como la extracción líquido-
líquido que utiliza disolventes inmiscibles para la transferencia de materia que se desea
separar.
La cromatografía es una técnica empleada para la resolución de mezclas y aislamiento de
componentes, basada en la migración diferencial de los solutos sobre una fase
estacionaria.

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