* ¿Con que objetivo se realizan los ensayos de presencia/ausencia y que diferencia

tiene con el recuento de microorganismos?

Los ensayos de presencia/ausencia son para DETECTAR, es un ensayo cualitativo.

Para detectar presencia de m.o se parte de una muestra DIRECTA.

Para detectar ausencia de m.o se hace un ENREQUECIMIENTO.

Los ensayos de recuento de m.o es para determinar qué cantidad de m.o hay en la
muestra, es un ensayo cuantitativo. Es directo, no se enriquece. Con un número alto de
bacterias (aprox 10^5??) se puede proceder a realizar un RECUENTO EN PLACA. Con un
número bajo de bacterias (aprox 10^2??) se puede proceder a realizar un RECUENTO POR
EL NÚMERO MÁS PROBABLE (NMP).

Recuento de microorganismos viables en placa (½ solido) UFC: sabiendo l acantidad

probablo de microorg en la muestra, hago diluciones seriadas en sol fisiologica o caldo
nutritivo. Luego plaqueo con espatula de Drigalsky aquellas donde piense que van a haber
entre 300 y 30 colonias

f de dil es la inversa de la
dil
Recuento por el numero mas probable (NMP): Se basa en el principio de que una única
célula viva puede desarrollarse y producir un cultivo turbio. El NMP requiere la realizacion
una serie de diluciones seriadas 1/10 de la muestra de cultivo, en un medio líquido
adecuado para el crecimiento de dicho organismo. Posteriormente, se incuban las muestras
de dichos tubos problema. Una vez que ha pasado suficiente tiempo como para que crezca
el microorganismo, se examinan los tubos. Aquellos tubos que fueron inoculados con una o
más células microbianas a partir de la muestra, se pondrán turbios, mientras que los tubos
que no recibieron ninguna célula permanecerán transparentes. A medida que se aumenta el
factor de dilución, se alcanzará un punto en el cual algunos tubos contendrán tan sólo un
organismo y otros, ninguno. Al determinar la probabilidad de que los tubos no recibieran
ninguna célula, se puede determinar el numero más probable de microorganismos
presentes en la muestra original, utilizando para ello una tabla estadística.

La precisión del número más probable aumenta con el número de tubos que se usan,
aunque cinco tubos por dilución se considera como una relación apropiada entre la
precisión y la economía. El método del NMP se utiliza para contar microorganismos que son
dificiles de cultivar en medio sólido. También se usa para determinar el número de células
de un cultivo mixto que pueden crecer en un medio líquido detcrminado. Por ejemplo, puede
emplearse para determinar la contaminación del agua potable, determinando el número de
bacterias que pueden crecer en un medio que contiene lactosa. Estas bacterias
probablemente sean Escherichia coli provenientes de aguas residuales contaminadas, y la
presencia de E. coli en el agua potable es una prueba presuntiva de contaminación.

El método del número más probable (NMP) proporciona un recuento de viables. Al

aumentar el factor de dilución, se alcanza un punto en el que algunos tubos contienen sólo
un organismo y los otros, ninguno. A partir del número, determinado por los tubos que
presentan turbidez en tres diluciones sucesivas (en este caso 5, 3, 1), puede determinarse
el número más probable de células estadisticamente (11,0) en la primera de las tres
diluciones, mediante una tabla de números más probables (Tabla 8.6). Este valor,
multiplicado por el factor de dilución nos proporciona el número de células viables de la
muestra.

*La cantidad de muestra representativa para un análisis, depende de la muestra en si?

En el caso de que no se aclare la cantidad de muestra a analizar, se podría tomar

arbitrariamente, por ejemplo, 10g de la muestra y disolverlo en 90ml de SF para que sea
representativo de dicha muestra.

Y en el caso de que si se sepa la cantidad del mismo, para determinar ausencia, habría que
tomar la totalidad de la muestra para analizar.

OBTENER CULTIVOS PUROS: compuestos por un solo tipo de mo. Se realizan sucesivos
aislamientos a partir de las colonias obtenidas. Si la concentración es baja:
 Puedo filtrar con membrana: y luego lo pongo en medio solido para q se desarrolle
 Enriquecer el medio líquido: agregando agente selectivo para enriq en el mo q
quiero. Luego siembro en medio solido.

DETERMINAR CANTIDAD DE MO EN UNA MUESTRA:

 METODOS DIRECTOS (nº de células):
 Filtración: cuando la cantidad de bacterias es baja, uso un filtro donde estas
queden retenidas. Paso eso a Petri.
 NMP:
 Recuento en placa:
 Recuento directo x microscopio: un volumen medido de suspensión bacteriana
dentro de un porta con rejilla graduada. La población debe ser grande para que
resulte, debido al peq tamaño de la muestra
 Contador coulter: para mo de mayor Tamayo. S un contador electrónico. La
suspensión bacteriana pasa por un orificio por donde fluye corriente eléctrica. Los
electrodos miden la resistencia. Cuando pasa la cel  la R aumenta.

 METODOS INDIRECTOS (masa celular):

 Turbidometria: La turbidez se mide con un espectrofotómetro. El espectrofotómetro
mide la cantidad de luz que transmite un cultivo líquido de células microbianas. Se
utiliza una curva patrón para relacionar las medidas en el espectrofotómetro con la
masa celula
 Actividad metabólica: Hay varios procedimientos por los que se puede usar la
actividad metabólica para medir el número de células: la tasa de formación de
productos metabólicos, tales como gases o ácidos, que produce un cultivo; la tasa
 de utilización de un substrato, como el oxígeno o la glucosa; la tasa de reducción de
determinados colorantes.
 Peso seco: centrifugo la muestra, elimino sobrenadante, seco y peso