Informe practica 6

Nombre: Miguel Ángel Carmona Gisbert

Curso: 1º Biotecnología G.R: 1.2

Objetivo: Observar y recontar el número de células vivas y muertas en el tejido del bazo

Material:

 Placa de Petri
 Jeringuilla
 Agua destilada
 Micropipetas
 Gasa
 Tubos eppendorf 2ml y 0.5ml
 Pipeta Pasteur
 Bazo de pollo
 Tampón PBS
 Colorante azul tripán
 Microscopio óptico
 Cámara de Neubauer
 Cubreobjetos

Procedimiento:

Primero se corta el bazo con un bisturí, y sobre una placa de Petri con una gasa se disgrega con
el embolo de la jeringuilla; una vez disgregado con la jeringuilla se añade PBS con la pipeta
Pasteur sobre la gasa con el bazo disgregado, para la obtención de las muestras de las células
de bazo, una vez tenemos esta muestra en la plaza de Petri, con la micropipeta se toma 1ml de
muestra y se coloca en un tubo eppendorf.

El tubo eppendorf se coloca en la centrifuga, equilibrando esta con otras 3 muestras, y se

centrifuga a 1800rpm durante 5 minutos. Una vez centrifugado, con la micropipeta se elimina
el sobrenadante y se sustituye por PBS nuevo, esto se agita para la dilución del agregado en el
nuevo PBS.

Se toma una muestra de suspensión celular con la micropipeta y se coloca en un eppendorf de

0.5ml, y se toma la misma cantidad de colorante azul tripán con la micropipeta. Esto se coloca
en la placa de Neubauer, y se cubre con un cubreobjetos, con el objetivo de crear una columna
de líquido; esto se observa al microscopio con la lente 10x, para realizar el recuento de células
vivas y muertas.

En el caso de que no se consigan ver claramente el número de células, debido a que estas se
superponen unas a otras por la alta concentración de la muestra, se deberá de rediluir la
muestra y volver a realizar el mismo proceso con la micropipeta con la muestra y el colorante
para poder recontar el número de células vivas y muertas. Estas células se distinguen ya que
las células vivas no se tiñen con el colorante, ya que no traspasa su membrana y por lo tanto
brillan en el microscopio, sin embargo, las células muertas si que se tiñen y por lo tanto no
brillan al observarlas al microscopio con la lente 10x.
Cuestiones:

En el caso de este grupo reducido, no se pudo realizar el recuento celular en la cámara de

Neubauer debido a que la muestra estaba muy concentrada y no había tiempo suficiente para
hacer una redilucion de la muestra y contar las células y por lo tanto obtener la viabilidad de la
muestra

Imagen capturada en el microscopio con una lente 10x en la cámara de Neubauer.