UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

CARRERA DE BIOLOGÍA

GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

Noviembre 2021 – Abril 2022

Asignatura: Laboratorio Integrador de Ciencias Básicas V

Docente: Francisco José Álvarez Nava
Semestre: Quinto Fecha de elaboración: 22 de julio de 2021

Fecha de la práctica: Número de práctica: 8

Tema Efecto Fenotípico de las Mutaciones Génicas

Introducción
Muchos estudiantes piensan que todas las mutaciones tienen consecuencias en el fenotipo.
Los estudiantes deben aprender que la estructura de las proteínas y, en consecuencia, la
función de las proteínas está determinada por una secuencia de nucleótidos del DNA. Sin
embargo, muchos estudiantes no se dan cuenta de que un cambio en la secuencia de
nucleótidos puede tener un efecto grande, pequeño o neutro en la proteína. Con esta
práctica, los estudiantes usan la simulación de síntesis de proteínas para mutar una secuencia
de nucleótidos de DNA, transcribirla y traducirla y observar la proteína resultante. Los
estudiantes profundizan su comprensión de la relación entre el DNA y las proteínas,
enfocándose particularmente en el impacto directo de las mutaciones en la secuencia de
aminoácidos.

Marco Teórico
Una mutación se define como cualquier cambio repentino que ocurre en el material
hereditario ya sea en la secuencia nucleotídica o en la organización del DNA que es
transmitido de una generación celular a otra ya se por mitosis o meiosis. Ellas pueden ser
perjudiciales, beneficiosas o neutras.

En los organismos multicelulares, las mutaciones pueden ocurrir células somáticas o en

Introducción células sexuales o de la línea germinal. Cuando las mutaciones ocurren en las células
somáticas estas son transmitidas a otras células a través del proceso de la mitosis y el efecto
de estas mutaciones somáticas va a depender del tipo de célula en que se producen y la etapa
de desarrollo del organismo. Si ocurre temprano en el desarrollo, se formará un gran clon de
las células mutadas. Las mutaciones somáticas se producen por azar en sólo un subconjunto
de células de ciertos tejidos y dan lugar al mosaicismo somático, como el que puede
apreciarse, por ejemplo, en muchos tipos de cáncer. Las mutaciones somáticas no pueden ser
transmitidas a la siguiente generación. En cambio, cuando las mutaciones ocurren en las
células que producen los gametos, llamadas células sexuales, estas mutaciones tienen el
potencial de ser transmitidas a las generaciones futuras.

Las mutaciones se pueden clasificar en tres grandes categorías: las que afectan el número de
cromosomas en la célula (mutaciones genómicas), las que alteran la estructura de un
cromosoma en concreto (mutaciones cromosómicas) y las que alteran genes concretos
(mutaciones génicas). Para efecto de esta práctica, solo nos referiremos a las mutaciones
génicas.

Las mutaciones génicas son cambios en la secuencia del DNA nuclear o mitocondrial, que van
desde una modificación tan pequeña como la de un solo nucleótido hasta cambios que
pueden afectar a muchos millones de pares de bases. Hay diferentes maneras de clasificar las
mutaciones génicas. Se pueden clasificar sobre la base de la naturaleza del efecto fenotípico
(la secuencia de aminoácidos de la proteína puede estar alterada o no); naturaleza molecular
de la mutación y sobre la base del agente causal de la mutación. El objetivo de esta práctica
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va dirigido a entender, a través de un sistema de simulación, los efectos fenotípicos de las
mutaciones génicas.

Clasificación según el Efecto Fenotípico de la Mutación

La mayoría de los fenotipos comunes en las poblaciones naturales de organismo se llaman el
fenotipo silvestre o salvaje (wild-type). Este fenotipo silvestre mide el efecto de la mutación.

Mutaciones con Sentido Errado o Cambio de Sentido (Missense Mutations)

En líneas generales, se puede decir que una mutación con sentido errado o cambio de sentido
es una sustitución de un solo nucleótido (o mutación puntual) que altera un codón en el
mRNA resultando en un aminoácido diferente en el producto proteico. Esto ocurre porque la
sustitución de un solo nucleótido en una secuencia de DNA puede alterar el código en un
triplete de bases y causar la sustitución de un aminoácido por otro en el producto génico.
Esas mutaciones se denominan mutaciones de cambio de sentido («missense» en inglés)
porque alteran el ≪significado≫ de la cadena codificante del gen, al especificar un
aminoácido diferente. En muchos trastornos, como las hemoglobinopatías, la mayoría de las
mutaciones detectadas son mutaciones de cambio de sentido.

Otras sustituciones de bases que se producen tanto dentro como fuera de las secuencias
codificantes de un gen también pueden tener efectos pronunciados en los productos génicos,
o interferir de manera directa en el propio proceso de trascripción. Por ejemplo, ciertas
mutaciones en la region 5’ del promotor o en la region 3’ no traducida del gen de la β-globina
conducen a un descenso pronunciado de la cantidad producida de mRNA procesado y maduro
de la β-globina.

Mutaciones que Generan una Terminación Prematura de la Traducción

Las mutaciones puntuales en una secuencia de DNA que causan la sustitución del codón
normal por un aminoácido en uno de los tres codones de terminación se denominan
mutaciones sin sentido («nonsense» en inglés). Como la traducción del mRNA cesa al alcanzar
un codón de terminación, una mutación que convierte una secuencia codificante presente en
un exón en un codón de terminación ocasiona que la traducción se detenga a medio camino
de la secuencia codificante del mRNA. Las consecuencias de las mutaciones que causan una
terminación prematura son dos. En primer lugar, el mRNA portador de una mutación
prematura es a menudo inestable (degradación del mRNA por mutación sin sentido), y eso
imposibilita la traducción. Incluso cuando el mRNA es lo suficientemente estable como para
ser traducido, la proteína truncada suele ser tan inestable que es rápidamente degradada en
la célula.

Una mutación puntual, además de crear un codón de terminación prematuro, puede destruir
el codón de terminación normal y permitir que la traducción continúe hasta alcanzar el codón
de terminación siguiente. Esa mutación crea una proteína con aminoácidos adicionales en su
extremo carboxilo y, además, puede alterar toda función de regulación ejercida por la región
3’ no traducida justo a partir del codón de terminación normal.

Mutaciones que Generan Cambio o Corrimiento en el Marco de Lectura

Algunas deleciones e inserciones afectan sólo a un pequeño número de pares de bases.
Cuando el número de bases implicadas no es un múltiplo de tres (es decir, no es un número
entero de codones) y cuando ocurren en una secuencia codificante, el marco de lectura se
altera empezando en el punto de inserción o deleción. Las mutaciones resultantes se
denominan mutaciones de cambio de marco de lectura (frame shift mutations). Por eso, en el
punto de inserción o deleción se crea una secuencia diferente de codones, que codifica unos
pocos aminoácidos anormales seguidos de un codón de terminación en el marco cambiado.
Por el contrario, si el número de pares de bases insertadas o delecionadas es un múltiplo de
tres, no se produce un cambio de marco y los aminoácidos correspondientes serán insertados
o delecionados en el producto génico traducido.

Mutaciones Silentes y Neutrales

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Una mutación silente es aquella que altera un codón, pero debido a que el código genético es
degenerado (es decir un aminoácido puede ser codificado por uno o más codones) se codifica
el mismo aminoácido. En cambio, una mutación neutral altera la secuencia de los
aminoácidos de la proteína, pero no cambia su función ya que el aminoácido reemplazado es
químicamente similar o el aminoácido afectado tiene poco influencia sobre la función de la
proteína. Estos tipos de mutaciones no tienen ningún efecto porque el cambio no altera la
secuencia primaria de aminoácidos o porque, aunque lo haga, el cambio resultante en la
codificación de ese aminoácido no modifica las propiedades funcionales de la proteína.
Mutaciones con Pérdida de Función y Mutaciones con Ganancia de Función

Las mutaciones con pérdida de función generan la pérdida completa o parcial de la función
normal de la proteína ya que la secuencia de aminoácidos de la proteína es tan alterada que
ya no funciona correctamente. Esta mutación puede ocurrir en la región reguladora que
afecta a la transcripción, traducción y corte y empalme del mRNA. Por su parte, la mutaciones
con ganancia de función provocan la aparición de un rasgo nuevo u origina la aparición del
rasgo en tejidos inapropiados o en momentos inapropiados del desarrollo.

Mutaciones Condicionales y Mutaciones Letales

Las mutaciones condicionales son aquellas que se manifiestan solamente bajos ciertas
condiciones ambientales. En cambio, las mutaciones letales son aquellas que causan la
muerte del organismo sin permitir que este se reproduzca.

Mutaciones en el Procesamiento del RNA

El mecanismo normal que convierte los transcritos iniciales de RNA en mRNA maduro
requiere una serie de modificaciones, como la adición del capuchón en el extremo 5’, la
poliadenilación en el extremo 3’ y el corte y empalme (splicing). Todos esos pasos en la
maduración del RNA dependen de secuencias específicas en el mRNA. Se han descrito dos
tipos generales de mutaciones de sitios de corte y empalme. Para que los intrones del RNA no
procesado se separen y los exones se empalmen para dar lugar a un RNA maduro, es
necesaria una secuencia específica de nucleótidos, situada en la unión exón-intrón (sitio
donante 5’) o en la unión exón-intrón (sitio aceptor 3’), o cerca de ellas. Las mutaciones que
afectan a esas bases necesarias, tanto en el sitio donante como en el sitio aceptor, interfieren
y, a veces, impiden totalmente el proceso de corte y empalme normal del RNA en ese. Un
segundo tipo de mutaciones que afectan al proceso de corte y empalme implica una
sustitución de bases del intrón que no afecta a la secuencia misma de los sitios donantes o
aceptor. Esa variedad de mutaciones crea sitios donantes o aceptores alternativos, que
compiten con los sitios normales durante el procesamiento del RNA. Por tanto, en esos casos
al menos cierta proporción del mRNA maduro puede contener secuencias de intrones que
están ensambladas de forma incorrecta.

General: Simular los efectos fenotípicos de las mutaciones génicas.

Específicos:
OBJETIVOS • Interpretar los efectos de las secuencias wild-type de un gen sobre la transcripción y
traducción.
• Identificar los efectos fenotípicos que producen diferentes tipos de mutaciones sobre la
transcripción y la traducción de la proteína mutada.

RESULTADOS DE Simula de síntesis de proteínas al mutar una secuencia de nucleótidos de DNA, y observa la
APRENDIZAJE proteína resultante.

Materiales Y Equipos:
MATERIAL O Procesador de palabras Word y PowerPoint de Microsoft.
RECURSOS
Materiales provistos por el estudiante

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Ordenador o laptop.

Conexión de internet

Debido al estado de confinamiento y al cierre temporal de los laboratorios de la Facultad de

Ciencias Biológicas de la Universidad Central, esta práctica de laboratorio se limitará al
ejercicio interactivo a través de plataformas de simulación on line.

Este ejercicio de simulación que los estudiantes realizarán será a través de

https://www.biologycorner.com/worksheets/DNA-sim.html

Los estudiantes tendrán que mutar secuencias de DNA hipotéticas y observar las secuencias de
RNA que se transcriben y observar e interpretar el efecto de la mutación sobre la proteína
codificada. Posteriormente, los estudiantes asociados en diferentes grupos discutirán e e
interpretarán sus observaciones en conjunto y elaborarán un informe grupal definitivo.

1. Instrucciones-Procedimiento–Actividades

Parte 1
Inicie la simulación. https://www.biologycorner.com/worksheets/DNA-sim.html

De click en “Edit DNA”

Ingrese esta secuencia de nucleótidos de DNA (¡NO DEJE ESPACIO ENTRE LETRAS!):
ATGCTCTGTTTTATCTACGTCTCACCAACAGCCCATCAGAACAAGGATGAGTGGCGAAGCGGA

Luego, haga clic en “Transcribe” y observe la simulación.

Después, haga clic en “Translate” y observe la simulación.

Examine la proteína resultante.

Identifique qué tipo de aminoácido es el traducido.

Toma una captura de pantalla de la proteína.

Parte 2
Sustituye la Timina por una Adenina en el noveno nucleótido.

Haga clic en “Edit DNA” para editar la secuencia de nucleótidos del DNA y cámbiela manualmente.

Vuelva a ejecutar la simulación y examine la proteína resultante.

Compare la nueva proteína con su captura de pantalla de la Parte 1.

Realice este nuevo ejercicio.

Sustituye la Timina por una Citosina en el noveno nucleótido.

Vuelva a ejecutar la simulación y examine la proteína resultante

Compare la nueva proteína con su captura de pantalla de la Parte 1.

Parte 3:

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Determine de cuántas formas pueden alterar un codón dado, pero manteniendo el mismo aminoácido.
(Recuerde: algunos aminoácidos solo pueden ser producidos por un único codón, mientras que otros,
como la leucina, tienen seis posibles codones).

Realice el mayor número posible de cambios en una secuencia determinada sin cambiar la proteína
resultante.

Cambie algunos nucleótidos en una secuencia determinada y describa cómo cambia la forma de la proteína
resultante. Toma capturas de pantalla. (Nota: algunos cambios de aminoácidos alteran la forma,
mientras que otros tienen propiedades similares al aminoácido original, lo que conduce a una forma
similar).

Inserte o elimine uno o dos nucleótidos en algún lugar de la secuencia dada y examine el efecto.

2. Resultados esperados-obtenidos

1. Discuta en el grupo de trabajo las siguientes preguntas y prepare el informe sobre la base a éstas.
2. ¿Una mutación del DNA siempre cambia la proteína? ¿Por qué o por qué no?
3. ¿Qué es un codón stop o de parada y qué "evita" que suceda?
4. Además de la mutación por sustitución, ¿de qué otras formas pueden mutar una secuencia de
nucleótidos de DNA?
5. Los estudiantes presentan capturas de pantalla de sus nuevas proteínas, describen lo que encontraron y
debaten las respuestas a los desafíos en la Parte 3.
6. ¿Cuál es la diferencia de impacto cuando se produce una mutación en una célula sexual frente a una
célula somática?

3. Discusiones y Conclusiones

Los estudiantes clasificarán los diferentes efectos fenotípicos de las mutaciones simuladas y obtendrán
conclusiones sobre estas diferencias con respecto al efecto fenotípico que tiene la proteína mutante. Ellos
reflexionarán sobre las consecuencias de estas mutaciones sobre enfermedades hereditarias humanas
monogénicas y en cánceres.

4. Recomendaciones
N/A

5. Referencias

- Karp G & Araiza Martínez ME. 2011. Biología celular y molecular: Conceptos y experimentos (6a ed.).
México D.F.: McGraw- Hill.
- Lodish H. et al. 2006. Biología Celular y Molecular, Quinta Edición, Editorial Médica Panamericana.
6. Evaluación

COMPONENTE TEÓRICO
Presentación de un evaluativo individual sobre los fundamentos teóricos de la práctica previamente discutidos con
el docente.

COMPONENTE PRÁCTICO
Elaboración grupal de un informe de los ejercicios de simulación realizados en la práctica en una presentación de
Powerpoint, incluyendo capturas de pantalla. La presentación de Powerpoint deberán transformarla a un documento
en pdf identificando los integrantes del grupo, y posteriormente cargarlo a la plataforma del Aula Virtual.

RECOMENDACIONES
Emita sugerencias para mejorar la práctica.
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Elaborado por: Francisco José Álvarez Nava Revisado por: Aída Beatriz Álvarez Molina

Firmado electrónicamente por:

FRANCISCO
JOSE ALVAREZ
NAVA

Francisco José Álvarez Nava FIRMA: Santiago Buitrón

FIRMADO DIGITALMENTE FIRMADO DIGITALMENTE
Fecha: 18-11-2021

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