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Informe #08
Informe #08
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DOCENTE:
LIMA-PERÚ
2022
INTRODUCCIÓN
¿A qué llamamos célula? La siguiente es una buena definición: una célula es la unidad
anatómica y funcional de los seres vivos. Las células pueden aparecer aisladas o
agrupadas formando organismos pluricelulares. En ambos casos la célula es la
estructura más simple a la que consideramos viva. Hoy se reconocen tres linajes
celulares presentes en la Tierra: las arqueas y las bacterias, que son procariotas
unicelulares, y las células eucariotas, que pueden ser unicelulares o formar organismos
pluricelulares. Las procariotas (anterior al núcleo) no poseen compartimentos internos
rodeados por membranas, salvo excepciones, mientras que las eucariotas (con núcleo
verdadero) contienen orgánulos membranosos internos. Uno de los compartimentos
membranosos de las células eucariotas es el núcleo.
Solo unos pocos tipos de bacterias causan enfermedades son las conocidas con el
nombre de patógenos. Las bacterias causan enfermedades mediante la producción
de sustancias nocivas (toxinas), la invasión de tejidos o ambas cosas. Algunas
bacterias pueden desencadenar una inflamación que puede afectar el corazón, los
pulmones, el sistema nervioso, los riñones o el tubo digestivo. Algunas bacterias
(como Helicobacter pylori) aumentan el riesgo de cáncer.
LAS BACTERIAS
Estos seres vivientes tienen relaciones con prácticamente todas las formas de vida del
planeta, ya sea a través de relaciones de comensalismo (como las bacterias que
proliferan sobre la piel), mutualismo (como las que colaboran con la digestión de los
alimentos en el intestino) o de parasitismo (como las causantes de infecciones y
enfermedades).
Cromosoma.- No está rodeado por membrana ni tiene forma definida, se propone que
su estructura es plegada.
Flagelos.- Estructuras compuestas por flagelina, cuya función es darle motilidad a las
bacterias.
PARED CELULAR
Las cubiertas que rodean la célula bacteriana se han identificado por medio de técnicas
de tinción en microscopía óptica y electrónica, y técnicas de aislamiento y
caracterización bioquímica de los componentes celulares.
Tanto las bacterias Gram positivas como las Gram negativas poseen una pared celular
de peptidoglicanos que les confieren su forma característica y les provee de protección
mecánica.
La envoltura celular bacteriana tiene como función principal evitar que la bacteria pierda
iones y otras moléculas a favor de gradiente de concentración con el exterior, menos
concentrado.
Según la distribución del peptidoglicano de la pared celular que las envuelve, se tiñen
de una forma u otra. Así, las bacterias que no se tiñen mediante esta técnica se
denominan Gram negativas. Están formadas por una pared más fina formada por
menos capas de peptidoglicano y una segunda membrana rica en lípidos (que repele la
tinción Gram), al microscopio aparecen incoloras.
PROCEDIMIENTO
En primer lugar, para realizar una tinción, lo que tenemos que tener son
microorganismos sembrados. Dichos microorganismos son sembrados el día anterior
mediante la técnica de siembra de estría múltiple, se dejan durante 24 horas a 37ºC en
la incubadora para así obtener las colonias de los diferentes microorganismos.
Siempre que “destapemos” una placa con colonias, deberá hacerse en condiciones de
esterilidad. Para conseguir estas condiciones podemos utilizar un mechero Bunsen o un
mechero de alcohol. Con el mechero, conseguiremos que se forme un ambiente de
esterilidad alrededor de la llama, por lo tanto, si trabajamos cerca del mechero, tendremos un
ambiente estéril.
A la hora de comenzar con la tinción, lo primero que hay que realizar es un frotis del
microorganismo, para ello hay que añadir una gota pequeña de agua destilada (cuanto mayor
sea la gota, tardará más tiempo en secarse).
Debemos coger la muestra con el asa bacteriológica previamente esterilizada. Para ello
encendemos el mechero de alcohol y ponemos el asa en posición vertical encima del
mechero hasta que el hilo del extremo del asa se quede totalmente incandescente.
Después debemos esperar a que se enfríe porque si tocamos con el hilo incandescente las
colonias podemos matar al microorganismo.
Abrimos la placa con las bacterias y con el asa tocamos en el agar para comprobar que éste
está frío.
A continuación, cogemos unas colonias de las bacterias y las extendemos sobre la gota de
agua destilada.
Una vez extendido, volvemos a esterilizar el asa, ya que todo material debe ser esterilizado
antes de volver a ser guardado. A continuación, lo que tenemos que hacer es fijar la muestra,
la cual se puede fijar con metanol o se puede fijar con calor. En este caso utilizaremos la
fijación por calor.
Tenemos que hacer movimientos circulares o en zig zag por encima de la llama del mechero,
levantando constantemente la muestra para que no se nos queme el tiempo suficiente para
que la muestra quede totalmente seca y por lo tanto fijada.
Una vez fijada la muestra apagamos el mechero por seguridad.
Vamos a utilizar diferentes reactivos para la tinción. En primer lugar el cristal violeta, en
segundo lugar el lugol,
usaremos también alcohol de 96º (el decolorante puede estar formado por una mezcla de
alcohol, alcohol-acetona y por diferentes mezclas), y por último la safranina.
Las bacterias gram positivas y las bacterias gram negativas tienen diferente grosor en el
peptidoglicano de su pared celular, de tal forma que cuando echemos el cristal violeta se nos
van a teñir tanto las gram positivas como las gram negativas. El lugol lo que hará, será fijar el
colorante del cristal violeta a las bacterias, con el alcohol (o mezcla decolorante), lo que
haremos será eliminar el cristal violeta de las gram negativas y por último, la safranina, va a
teñir solamente a las gram negativas que son las que están decoloradas. Por lo tanto, las
gram positivas estarán teñidas de cristal violeta y las gram negativas de safranina (color
fucsia).
El protocolo será aplicar a las bacterias fijadas cristal violeta durante un minuto, luego lavar
con el frasco lavador. A continuación, añadir lugol durante un minuto, volver a lavar con el
frasco lavador. Después, añadir durante 10 o 15 segundos la mezcla de alcohol o
alcohol-acetona…, lavar la muestra con el frasco lavador. Y finalmente, añadir safranina
durante un minuto y lavar con agua destilada.
Ahora vamos a añadir el lugol justo por encima de la zona de la muestra y esperamos otro
minuto.
Tras los 15 segundos de decoloración, aclararemos con agua destilada para que el alcohol
no siga actuando, porque si no paramos el proceso de decoloración a tiempo, todas las
bacterias quedarían decoloradas, no solamente las gram negativas y por lo tanto no
podríamos diferenciar unas de otras.
Por último, aplicamos a la muestra la safranina y la dejamos actuar durante otro minuto.
Transcurrido el minuto, volvemos a aclarar la muestra con agua destilada y dejaríamos que la
muestra se secara.
1. ¿Qué es un frotis?
Permite que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos
posible la morfología bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera
haber. Esto posibilita eliminar el movimiento que presentan los microorganismos en
las preparaciones en fresco. La retención de colorantes por las bacterias permite su
fácil observación bajo el microscopio, así mismo, que la membrana de la muestra se
quede adherida al portaobjetos.
El lugol, fijará el colorante del cristal violeta a las bacterias, con el alcohol (o mezcla
decolorante), lo que haremos será eliminar el cristal violeta de las gram negativas y
por último, la safranina, va a teñir solamente a las gram negativas que son las que
están decoloradas.
Escherichia coli.- Habitante usual del colon humano, está involucrada en las
llamadas “diarreas del viajero”,así como en meningitis neonatal e infecciones
urinarias.
CONCLUSIONES
1. Las bacterias son muy importantes para el desarrollo de la vida del hombre, no
necesariamente generan enfermedades sino que ayudan por sus roles químicos a
combatirlas.
3. Es por esta razón que debemos cuidar nuestro cuerpo, alimentarnos muy bien, hacer
ejercicio por lo menos tres veces a la semana, lavarnos las manos antes y después
de realizar cualquier actividad, dentro o fuera de casa.
4. Las tinción Gram, a través de sus procedimientos nos ayudan a determinar el tipo de
bacterias, tanto Gram positivas y Gram negativas, diferenciándose ambas por grosor
de su pared celular de peptidoglicano.