UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

Escuela Profesional de Tecnología Médica Especialidad Laboratorio Clínico y

Anatomía Patológica

Curso: VIROLOGÍA

Tema: MÉTODOS DE AISLAMIENTO Y FORMAS DE

TITULACIÓN VIRAL

SEMANA 6 Mg. SANTOS ELIZABETH ULLOA BACA

INICIO

PODEMOS CONTAR
¿CUÁNTOS VIRUS HAY?
• Hoy vamos a ver algunos de los procedimientos que se
emplean para determinar el número de virus en un volumen
determinado y así establecer su concentración. Esto se
denomina “cuantificación”. La cuantificación vírica es esencial
en investigación y desarrollo, para preparar vacunas, o para
saber la cantidad de virus que se añaden a los cultivos
tisulares. Pero también en diagnóstico, para evaluar la
respuesta del paciente a la terapia antiviral.
• Se han descrito diversos métodos para cuantificar los virus,
valorando la infectividad de estos, o su ácido nucleico o sus
proteínas, o incluso contando directamente el número de
partículas. En este video vamos a hablar de algunos de ellos.
 Miremos un video

https://www.youtube.com/watch?v=CJUhT35S9EQ
DESARROLLO

MÉTODOS DE AISLAMIENTO Y TITULACIÓN VIRAL

DOSIS INFECTIVA PARA CULTIVO CELULAR (DICC50 o TCID50)

UNIDADES FORMADORAS DE PLACA UFPs o PFUs

 DOSIS INFECTIVA PARA CULTIVO CELULAR (DICC50 o TCID50)

Se mide la dilución a la cual el 50% de los individuos están infectados

Dosis infectiva al 50%: Cantidad de virus necesaria para producir

efecto citopático en el 50% de cultivos infectados.
DOSIS INFECTIVA PARA CULTIVO CELULAR (DICC50 o TCID50)
 DOSIS INFECTIVA PARA CULTIVO CELULAR (DICC50 o TCID50)

Dosis infectiva al 50%: Cantidad de virus necesaria para producir

efecto citopático en el 50% de cultivos infectados.
 DOSIS INFECTIVA PARA CULTIVO CELULAR (DICC50 o TCID50)
Para el cálculo de la Dosis infectiva en cultivo celular al 50% se emplea
el Método de Reed - Muench. Por ejemplo:
 UNIDADES FORMADORAS DE PLACAS (UFPS)

Es una medida que nos permite obtener el número

de partículas de virus capaces de formar placas por
unidad de volumen
Uno de los métodos más habituales para cuantificar virus es el ensayo de placas,
sobre todo en virus que lisan las células que infectan. Consiste en infectar cultivos
tisulares dispuestos en placas o en pocillos, con diluciones del virus problema. Un
primer paso es retirar el medio de cultivo para que el contacto entre los virus y las
células sea óptimo. Tras una breve incubación, se cubren los cultivos con agar
semisólido. De esta forma se evita que el virus se disperse libremente y tan sólo
infectará a células contiguas a las ya infectadas. Transcurridos unos días se puede
ver el desarrollo de zonas circulares transparentes, señal de que el virus ha lisado
las células. Estas son las denominadas “placas”. El número de placas depende del
número de viriones en el inóculo, y se asume que cada placa se formó a partir de
una partícula vírica en la muestra. Se cuentan manualmente, generalmente a simple
vista, siendo más fácil verlas tras retirar el agar semisólido y teñir las células, por
ejemplo, con cristal violeta. El resultado se expresa como unidades formadoras de
placa o PFU por mililitro. Para calcular este valor lo más correcto es añadir la
suspensión vírica por triplicado y hacer la media de los tres valores. Finalmente,
sólo queda dividir este valor por la dilución empleada y por el volumen añadido a la
placa.
UFPs = Nº DE PLACAS LÍTICAS / ML
• Ejemplo, una solución de virus de encefalitis transmitida por
garrapatas con una concentración de 1000 PFU/μl indica que 1 μl de la
solución contiene bastantes partículas de virus para producir 1000 placas
contagiosas en una mono-capa de células, pero no se puede hacer
ninguna inferencia sobre la relación de PFU respecto al número de
partículas de virus. El concepto de unidades que forman placa de virus es
equivalente al concepto de unidades que forman colonias de bacterias.34
•
Existen otras técnicas como la citometría de flujo o la PCR cuantitativa
(qPCR), que permiten una cuantificación exacta de las partículas totales o
de las copias de genoma vírico total, respectivamente, es decir, partículas
funcionales más partículas no funcionales. La unidad empleada para la
cuantificación mediante citometría, sería la de partículas víricas por
mililitro (vp/mL, del inglés: partículas virales).5
CIERRE

¿QUE APRENDIMOS HOY?