DIAGNOSTICO DE

LABORATORIO DE LAS
ENFERMEDADES VIRALES.
 DIAGNOSTICO DE LABORATORIO DE LAS
ENFERMEDADES VIRALES.

• El diagnóstico de las entidades virales es uno de los

mayores retos a los que se enfrenta la medicina actual.
• Conocer cuando una infección es de etiología viral es
muy importante porque determina un cambio en la
conducta clínica y en el manejo terapéutico del paciente.
• El diagnóstico viral por el laboratorio es de gran ayuda para
confirmar la etiología, así como para el seguimiento clínico
de la entidad.
• realizar un diagnóstico adecuado permite conocer la
epidemiología de la infección viral y determinar las
connotaciones que implica a nivel de salud pública.
• Se han introducido un gran número de nuevos métodos
diagnósticos de laboratorio de las infecciones víricas que
disponen de una mayor sensibilidad y permiten llevar a
cabo una identificación más rápida de los agentes víricos
obtenidos a partir de muestras clínicas.
• Cabe mencionar los nuevos reactivos de anticuerpos para
el análisis directo de las muestras .
• Las técnicas de genética molecular para la identificación
directa de genomas víricos.
• El interrogatorio del paciente y sus síntomas
proporcionan las primeras claves para el diagnóstico de
una infección vírica, a menudo tras excluir otros tipos de
infección (p. ej., bacteriana, fúngica).
• Al igual que la mayoría de los microorganismos, los virus
se pueden descubrir ya sea de una forma directa o
indirecta.
• Las PRUEBAS DIRECTAS son las que evidencian al
virus o algunos de los antígenos virales que se pueden
encontrar presentes en los tejidos o fluidos humanos.
• Las PRUEBAS INDIRECTAS son las que se utilizan
con más frecuencia y básicamente demuestran un
contacto del huésped con el agente viral mediante la
determinación de anticuerpos específicos contra el virus.
QUÉ PRETENDEN LAS PRUEBAS VIRICAS DE
LABORATORIO???

• 1) confirmar el diagnóstico identificando el agente vírico

de la infección.
• 2) seleccionar un tratamiento antivírico adecuado.
QUÉ PRETENDEN LAS PRUEBAS VIRICAS DE
LABORATORIO???

3) definir el cuadro patológico.

4) hacer un seguimiento epidemiológico de la
enfermedad.
5) educar a médicos y pacientes.
• En muchos casos el diagnóstico de infección viral se hace
por el cuadro clínico del paciente y la presencia de
anticuerpos contra el agente viral sospechoso
• Es necesario tener en cuenta que para un óptimo
diagnóstico de las entidades virales, debe haber una
adecuada indicación, recolección y transporte de las
muestras que se han de analizar para este propósito.
LOS MÉTODOS DE LABORATORIO PERMITEN
LLEVAR A CABO LAS SIGUIENTES TAREAS:

1.Descripción de los efectos citopatológicos (ECP)

inducidos por el virus en las células.
2. Visualización de partículas víricas al microscopio
electrónico.
LOS MÉTODOS DE LABORATORIO PERMITEN
LLEVAR A CABO LAS SIGUIENTES TAREAS:

3. Aislamiento y crecimiento del virus.

4. Detección de componentes víricos (p. ej., proteínas,
enzimas, genomas).
5. Evaluación de la respuesta inmunitaria del paciente
frente al virus (serología).
 METODOS DE LABORATORIO PARA
DIAGNOSTICAR INFECCIONES VIRICAS.

La sintomatología del paciente y sus antecedentes de viajes, la estación del

año y el diagnóstico de sospecha ayudan a determinar las técnicas adecuadas
para identificar a un agente vírico
 OBTENCION DE LA MUESTRA

• Un factor determinante y definitivo para el aislamiento

viral es la obtención temprana de una muestra adecuada,
esto debido a que la excreción del virus tiende a ser por
pocos días y la concentración de partículas virales
disminuye progresivamente con el tiempo
• Las muestras se deben tomar en las condiciones de mayor
esterilidad posibles.
• identificadas con el nombre del paciente
• lugar de procedencia
• el tipo de muestra
• la fecha y hora de la toma
• un resumen corto de la historia clínica con la solicitud de
examen que se desea realizar.
Para una muestra clínica adecuada es necesario tener en
cuenta factores adicionales que garanticen la conservación
de las partículas virales activas, como:

• el tiempo de transporte de la muestra.

• la temperatura
• el medio de preservación que se utilice para éste (es decir
medios de transporte que mantengan la viabilidad viral)
• Las muestras NO se deben dejar a temperatura ambiente
o en incubadora, tampoco es recomendable congelar y
descongelar las muestras, pues así se podría alterar la
estructura del agente viral
• Cuanto menor sea el intervalo transcurrido entre la
obtención de la muestra y su remisión al laboratorio,
mayor será la posibilidad de aislar un virus.
• La mejor forma de transportar y almacenar los virus es
en hielo y en un medio especial que contenga antibióticos
y proteínas, como albúmina sérica o gelatina.
• Cuando los virus encapsulados (p. ej., VHS, VVZ, virus de la

• gripe) se mantienen a temperatura ambiente o congelados a

• -20 °C se producen disminuciones significativas en los títulos
• de infección.

• Esto no constituye un riesgo para los virus no encapsulados (p. ej., adenovirus,
enterovirus).
CITOLOGIA
 CITOLOGIA

• El examen citológico de las muestras permite elaborar un

diagnóstico inicial rápido de las infecciones víricas que
producen unos EFECTOS CITOPATICOS característicos.
 CITOLOGIA
Entre estos EFECTOS CITOPATICOS observados
habitualmente en las muestras tisulares o los cultivos
celulares se pueden mencionar:
• modificaciones de la morfología celular, lisis
celular, formación de vacuolas, sincitios y
cuerpos de inclusión
PERO QUÉ SON ESAS MODIFICACIONES??

• SINCITIOS: son células gigantes multinucleadas formadas

como consecuencia de la fusión vírica de células individuales.

• Los paramixovirus y los virus VHS, VVZ y VIH estimulan la

formación de sincitios
• Célula multinucleada
(sincitio) en preparaciones de
cortes de nódulos linfáticos
de un paciente con una
infección por el VIH-1. La
fusión celular con la creación
de grandes células
multinucleadas es un efecto
citopático característico del
virus, pero no diagnóstico, de
una infección por el VIH-1.
Tinción Giemsa. Frotis de
linfadenopatía.
CUERPOS DE INCLUSION

• Constituyen cambios histológicos de las células provocados por

componentes víricos o bien alteraciones de las estructuras celulares inducidas
por los virus.

• Por ejemplo, los cuerpos nucleares de inclusión en ojo de búho presentes en

las células de tejidos infectados por citomegalovirus (CMV)
• Cuerpos de
Henderson-Paterson.
MICROSCOPIA
ELECTRONICA
 MICROSCOPIA ELECTRONICA

No es una técnica de laboratorio estándar en la

clínica, si bien se puede utilizar para detectar e
identificar algunos virus cuando existe un número
suficiente de partículas víricas.
• La adición de un anticuerpo específico del virus a una
muestra puede hacer que las partículas víricas se agrupen,
facilitando así la detección e identificación simultáneas
del virus (inmunomicroscopia electrónica).
• Este método es útil para la detección de los virus
entéricos, como los rotavirus, que se producen en
abundancia y que tienen una morfología característica.

• También se puede examinar si un tejido adecuadamente

procesado, procedente de una biopsia o una muestra
clínica, contiene estructuras víricas.
 AISLAMIENTO Y
PROLIFERACIÓN DE VIRUS.
pueden crecer en cultivos tisulares, huevos embrionados o
animales de experimentación.

En los laboratorios clínicos rara vez se utilizan animales de

experimentación para aislar virus.
A pesar de que todavía se utilizan huevos embrionados
para cultivar virus para algunas vacunas (p. ej., gripe).

Estos han sido sustituidos por cultivos celulares en el

aislamiento rutinario de los virus en los laboratorios
clínicos.
CULTIVO CELULAR
• Para cultivar virus se utilizan tipos específicos de células
de cultivo tisular.
• CULTIVO DE CELULAS PRIMARIAS. Se obtienen por
tratamiento de algún órgano animal específico con
tripsina o colagenasa.
• Las células obtenidas con este método se cultivan en
monocapa (fibroblastos o células epiteliales) o en
suspensión (linfocitos) en medios artificiales
complementados con suero bovino u otra fuente de
factores de crecimiento.
• Las células primarias se pueden separar con tripsina, se
diluyen y crecen en nuevas monocapas (subcultivos) para
convertirse en cultivos celulares secundarios
• Las líneas de células diploides son cultivos de un único
tipo de célula con los que se puede hacer un gran número
de pases, aunque finito, antes de presentar signos de
senescencia o experimentar cambios significativos en sus
características.
• Las líneas celulares tumorales y las líneas celulares
inmortalizadas a partir de tumores de pacientes o por
efecto de virus o compuestos químicos respectivamente,
se componen de células de un solo tipo que pueden ser
sometidas a pases continuos sin envejecer
FORMAS DE PROLIFERACION DE VIRUS.
 DETECCION VIRICA

• Un virus se puede detectar e identificar inicialmente

mediante la observación de los efectos citopáticos por él
inducidos en la monocapa celular o bien mediante
técnicas de inmunofluorescencia o de análisis genómico
del cultivo celular infectado.
GRACIAS!!!!!