ANÁLISIS DE HAPLOTIPOS DEL FACTOR

TRANSFORMADOR DE CRECIMIENTO TGF BETA EN

NEFROPATÍA DIABÉTICA

AUTORES.

Timana Moncayo Daniela Alexandra

Vivas Portillo Andres Felipe

Estudiantes de medicina, Universidad de Nariño

Pasto-Nariño-Colombia

INTRODUCCIÓN

La nefropatía diabética o comúnmente llamada

enfermedad renal, es una complicación que origina el
daño de los vasos sanguíneos de los riñones,
encargados de purificar los residuos de la sangre. Cabe
recordar que, dicha complicación es atribuida por el
padecimiento de Diabetes tipo 1 y 2 cuando son mal
controladas. Existe una proteína reguladora de
funciones que está implicada en dicha enfermedad, ella
es la TGFβ1. Cuando hay una sobre expresión de esta
(codificada por los genes TGFB1 y TGFB2), puede
desencadenar en la enfermedad. (1)
Como lo refiere Guerrero et al. (1) Para el estudio y
determinaciones de alteraciones genéticas que
atribuyan a dicha enfermedad, son de gran apoyo la
utilización de los mapas de restricción. Con ello se podrá
reconocer determinadas versiones de los genes que
codifican para ese tipo de proteínas y como esto puede
desencadenar en diferentes conformaciones de la
enfermedad de una delimitada población.
OBJETIVOS GENERALES.
Guerrero M. Burbano O. Manual de Prácticas de Bioinformática para Biología
Molecular. Editorial Universitaria. Colombia, Nariño, Pasto: Universidad de
Nariño; 2014
RESULTADOS
Acontinuacion, se exponen cuatro ARNm que codifican
para TGFβ1; teniendo en cuenta que estos contienen
diferentes cantidades de pares de bases en sus
secuencias. Se realiza los respectivos mapas de
restriccion con el empleo de las mismas enzimas de
restricción en cada secuencia de ARNm (TGBR1,
TGBR2, TGBR3 y TGBR4). Dicho prosediemiento se
realizo con ayuda de la biblioteca virtual “National
Library of Medicine” (para buscar las secuencias) y el
programador “pDRAW32” (para realizar los mapas de
restricción).
TABLA No1.
TGBR1

Valoración de las secuencias genómicas de los genes

TGFBR1 y TGFBR2, Identificación de variantes
genómicas con relación de la enfermedad renal y
comprensión y habilidad del manejo de las bases de
datos empleadas en la práctica.

METODOLOGÍA.

El desarrollo de esta práctica de laboratorio se basa en

el análisis de haplotipos del factor TGF Beta; práctica
que se pudo llevar a cabo, gracias a una serie de pasos Obtención de primera secuenciación de ARNm (TGBR1)
que están plasmados en el manual de laboratorio de la con el resultado de 6492bp. Resultado obtenido a partir
de intregar la secuencia “Nm_004612” en “pDRAW32”.
Universidad de Nariño. También, se realizó el respectivo
diagrama de flujo que se indica a continuación.

Imagen No 1: Diagrama de flujo, construcción de cDNA

silvestre de unc-22 y determinación de su ORF.
 ANÁLISIS DE RESTRICCIÓN ANÁLISIS DE RESTRICCIÓN

Se observa el empleo de las enzimas de restricción

(AIwNI, BsaI y Tsp45I) las cuales contienen de 2 a 10bp. Se observa el empleo de las enzimas de restricción (AIwNI,
Dicho empleo demuestra los respectivos cortes de la BsaI y Tsp45I) las cuales contienen de 2 a 10bp. Dicho
secuencia. empleo demuestra los respectivos cortes de la secuencia.
ELECTROFORESIS ELECTROFORESIS

Se observa el resultado de los fragmentos de la

secuencia del ARNm obtenidos a partir de los corten
Se observa el resultado de los fragmentos de la secuencia
que se realizo con las enzimas de restricción. Dichos
del ARNm obtenidos a partir de los corten que se realizo
fragmentos estan expresados en electroforesis
con las enzimas de restricción. Dichos fragmentos estan
representados en bandas que los indican por sus
expresados en electroforesis representados en bandas que
correspondientes pesos moleculares.
los indican por sus correspondientes pesos moleculares.

TABLA No2
TABLA No3
TGBR2
TGBR3

Obtención de segunda secuenciación de ARNm (TGBR2)

con el resultado de 4530bp. Resultado obtenido a partir de
Obtención de la tercera secuenciación de ARNm (TGBR3)
intregar la secuencia “NM_003242” en “pDRAW32”.
con el resultado de 2583bp. Resultado obtenido a partir de
intregar la secuencia “NM_000660.5” en “pDRAW32”.
ANÁLISIS DE RESTRICCIÓN
Se observa el empleo de las enzimas de restricción (AIwNI,
BsaI y Tsp45I) las cuales contienen de 2 a 10bp. Dicho
empleo demuestra los respectivos cortes de la secuencia.
ELECTROFORESIS
Se observa el resultado de los fragmentos de la secuencia
del ARNm obtenidos a partir de los corten que se realizo
con las enzimas de restricción. Dichos fragmentos estan
expresados en electroforesis representados en bandas que
los indican por sus correspondientes pesos moleculares.
TABLA No4
TGBR4
Obtención de la cuarta secuenciación de ARNm (TGBR4)
con el resultado de 3183bp. Resultado obtenido a partir de
intregar la secuencia “NM_003239.2” en “pDRAW32”.
ANÁLISIS DE RESTRICCIÓN
Se observa el empleo de las enzimas de restricción (AIwNI,
BsaI y Tsp45I) las cuales contienen de 2 a 10bp. Dicho
empleo demuestra los respectivos cortes de la secuencia.
ELECTROFORESIS
Se observa el resultado de los fragmentos de la secuencia
del ARNm obtenidos a partir de los corten que se realizo
con las enzimas de restricción. Dichos fragmentos estan
expresados en electroforesis representados en bandas que
los indican por sus correspondientes pesos moleculares.
DISCUSIÓN.
La nefropatía diabética es una enfermedad considerable
que está estrechamente relacionada con la diabetes tipo
1 y 2. Dicha enfermedad renal, interfiere en la función
principal de los riñones (eliminación de desechos), y en
la función de evacuar el exceso de liquido que se
encuentra en nuestro cuerpo. Debido a todo lo
mencionado anteriormente, se le considera de gran
severidad; por lo cual, cuando dicha severidad sigue en
progreso a lo largo de los años, puede desencadenarse
en una enfermedad renal crónica o también denominada
enfermedad renal de ciclo terminal. Esto originando a su
vez, síntomas como confusiones, sensación de falta de
aire, náuseas, vómitos, falta de apetito, fatiga, etc. Una
forma de prevenir esta enfermedad es manteniendo un
estilo de vida saludable, haciendo ejercicio, y
alimentándose adecuadamente.
Por otro lado, cuando la enfermedad está en progreso,
también existen afectaciones a niveles moleculares.
Para abarcar dichas afecciones, se deben tener en
cuenta conceptos que nos encaminen para la
compresión de la mencionada enfermedad.
Unas de las nociones a tener en cuenta, es la
compresión de las diferencias de los conceptos que
existen entre haplotipo, alelo, y la variante de un gen. En
primer lugar, debemos saber que un “haplotipo” es una
combinación de alelos distintos de un cromosoma en
común, que podrán ser transferidos juntos. En
resumidas cuentas, tenemos que un haplotipo será un
grupo de transformaciones del ADN que se realizaran a
lo extenso de un “cromosoma”; por lo tanto, un
“haplotipo” hará referencia a una mezcla de un “alelo” de
tan solo un “gen” o también podría darse el caso de
“alelos” de muchísimos “genes” en particular. (2)
En contraste, tenemos que un “alelo” es cada una de las
formas de elección que podrá tener el mismo “gen”,
además, debemos comprender que la expresión de un
gen va a dar lugar a la expresión de muchos alelos; con
ello, se lograra determinar muchas características en el
individuo, como puede ser el color de ojos, color de
cabello, etc. de tal manera que, esto conlleva a que
todos los seres humanos tengamos una variabilidad
genética distinta. (3)
Las enzimas de restricción son de una gran importancia
ya que están serán las encargadas de cortar el ADN
cuando reconocen una cierta secuencia especifica, y en
la practica lo pudimos evidenciar ya que estas tenían un
criterio el cual era cortar fragmentos de 2 a 10 partes, en
las 4 cadenas de ARN con las cuales nosotros
estábamos trabajando, como también se puede dar el
caso que nosotros elijamos una enzima que tenga un
rango mas alto de corte, estas enzimas de restricción
dentro de los laboratorios se las puede usar dentro de
toda la ingeniería genética para determinados métodos,
para realizar muchas modificaciones genéticas, y
también estas enzimas también podrán usarse para
realizar distintos métodos de clonación. (4)
La explicación desde un punto de vista genético para
que sea posible la variabilidad genética se basa en que
ocurre una afectación en la cadena de DNA que
conforma a un gen. Es decir, cuando se cambian
ordenes, aumento o deleciones en las bases
nucleotídicas de la cadena del DNA. Cuando lo
mencionado ocurre, se convierte en “mutaciones”; las
cuales, no todas desencadenaran en patologías, pues
esas variaciones han generado la supervivencia y
adaptación de las especies. La afectación de la
conformación de un gen puede ser transmitida por sus
descendientes, cuando hay variaciones de genes en
células sexuales, u ocurridas en el individuo por causas
externas (contaminación, nutrición, estrés, etc.),
recordando de que estas últimas no son transmitidas a
las siguientes generaciones, las primeras sí. (5) .
Para finalizar, debemos tener en cuenta que la
presencia de variantes génicas se va a poder catalogar
de muchas maneras. En primer lugar, se podrán
catalogar como: Variantes “patogénicas”, las cuales se
caracterizan principalmente por el desarrollo de
“enfermedades” que pueden desencadenar en la muerte
del paciente. A lo mencionado se le denomina
generalmente en la parte clínica y genética como
“mutaciones”, estas van a llevar a cabo un gran conjunto
de enfermedades dadas por este tipo de variantes, por
lo cual, ha llevado a que la ciencia demasiadas
indagaciones. En muchas ocasiones de la vida
cotidiana, estas variantes genómicas han causado
grandes variantes genéticas que han sido las causantes
de impedir que un individuo nazca con todas las
capacidades para realizar un determinado trabajo a lo
largo de su vida. Pero, algo muy importante que
debemos saber es que no todas las variantes son
patógenas, sino que también hay variantes
“probablemente patógenas” y algunas variaciones
genéticas que podrán ser probablemente “benignas”
donde las variantes no serán las culpables de causar
ningún tipo de afección. (6)
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. Guerrero M. Burbano O. Manual de Prácticas de
Bioinformática para Biología Molecular. Editorial
Universitaria. Colombia, Nariño, Pasto:
Universidad de Nariño; 2014
2. Haplotipo [Internet]. Conogasi. 2016 [cited 2022
Aug 28]. Available from:
https://conogasi.org/diccionario/haplotipo/
3. alelo [Internet]. Enciclonet.com. [cited 2022 Aug
28]. Available from:
https://www.enciclonet.com/articulo/alelo/
4. ¿Qué tipos de variantes de genes son posibles?
[Internet]. Medlineplus.gov. [cited 2022 Aug 28].
Available from:
https://medlineplus.gov/spanish/genetica/entend
er/variantesytrastornos/posiblesvariantes/
5. ¿Qué es una variante genética y cómo ocurren
las variantes? [Internet]. Medlineplus.gov. [cited
2022 Aug 28]. Available from:
https://medlineplus.gov/spanish/genetica/entend
er/variantesytrastornos/genvariante/
6. ¿Todas las variantes genéticas afectan la salud
y el desarrollo? [Internet]. Medlineplus.gov.
[cited 2022 Aug 28]. Available from:
https://medlineplus.gov/spanish/genetica/entend
er/variantesytrastornos/variantesneutral/