Trafico intracelular

La célula es un sistema que posee 2. Transporte a través de membranas

múltiples compartimentos en su
citoplasma, los cuales han podido ser 3. Transporte por vesículas
observados y reconstruidos a través de
El transporte al núcleo es simple, basta con
microscopias electrónicas. Cuando se
la NLS, y el poro es de carácter hidrofílico
generan proteínas en la célula estas deben
al igual que las proteínas. Pero, el
ir a los compartimentos adecuados para su
transporte a otros organelos como la
distribución, lo cual es un problema
mitocondria es ms complicado, debido a
prioritario.
que las proteínas necesitan pasar a través
Trafico de proteínas en la célula: Las de una membrana hidrofóbica, por lo que
proteínas durante su proceso de síntesis, la proteína requiere de una señal de
adquieren señales peptídicas (u otro tipo identificación que le permita su paso.
de modificación) que las etiquetan,
Señales peptídicas: El péptido señal usado
marcan y poseen secuencias que las
para esta identificación, está compuesto
dirigen hacia ciertos organelos. La
por aminoácidos hidrofóbicos. Este es el
presencia de la señal de destino o targeting
encargado para ir al RE. Las proteínas que
es primordial
van a la membrana plasmática se secretan
o dirigen a organelos como Golgi,
lisosomas o peroxisomas.

Lumen compartimentos membranosos: El

interior lumen de los compartimentos
membranosos derivados de la membrana
plasmática es topológicamente
equivalente al medio extracelular. Esto
debido a que son formados por
invaginaciones de la membrana.

Existen 3 modos básicos de transporte

para que las proteínas lleguen a sus
organelos de destino:

1. Transporte a través de poros:

poros nucleares

VIa secretora y
reTIculo endoplasmico
El RE es el primer organelo de la ruta
exocitica, este corresponde a un sistema
complejo de membranas dispuestas en
formas de sacos aplanados y túbulos
interconectados entre que comparten el
mismo espacio interno.
Está compuesto por el retículo rugoso, que
se caracteriza por tener ribosomas y tener
forma de sacos aplanados; y el retículo
endoplásmico liso, que posee una forma
más tubular. El lumen de estos 2 RE está
conectado.
Re LISO
Tiene conformación de sacos aplanados y
túbulos de 30~60nm de diámetro. Es
continuo con el RER y abundante en
células que sintetizan hormonas
esteroidales y en neuronas.
Entre sus funciones están la síntesis de
lípidos (fosfolípidos y colesterol); síntesis
de hormonas esteroidales y sales biliares;
reacciones de desintoxicación de
compuestos liposolubles (citocromo
P450).
Re rugoso
Se conecta con la membrana de la
envoltura nuclear. Sus cisternas poseen
muchos ribosomas, el espacio de cada
cisterna es de aprox 20~30nm.
Funciones:
 Síntesis de proteínas de secreción y
de membrana (ruta exocitica)
 Glicosilación de proteínas
 Plegamiento proteínas chaperonas
RER BIP, calnexina, calreticulina.
 Formación de puentes disulfuro, en
proteínas extracelulares
principalmente.
 Secreción y recaptura de calcio
 Activación de la respuesta a
proteínas mal plegadas: UPR.
Técnicas de estudio
Para estudiar la vía secretora inicialmente
se hicieron estudios de pulso y caza y
autorradiografía EM. Esto consistía en
darle a un animal un pulso de un Descubrimiento Señales de
aminoácido/molécula radioactiva. Se
destinación
esperaba, y al cabo de un tiempo se
observaba hacia donde se había dirigido el
Proteínas que contienen una señal
aminoácido, el cual ya debería haber sido
especifica son transportadas hacia dentro
dirigido hacia la formación de proteínas.
organelo.
En la imagen se
La proteína marcado se puede producir en
ven flechas que
un sistema de traducción libre de células a
corresponden a
partir de un mRNA purificado y
depósitos de
aminoácidos radioactivos
plata que
quedaban en el
lugar al estar ahí
el aminoácido
marcado, se
observan en el
RER.

Purificación de fragmentos del

RER y REL : Microsomas

Si la traducción in vitro se contaminaba

con microsomas rugosos, algunas
proteínas sedimentaban, lo que indicaba
que estaban incorporadas con moléculas
mas grandes, es decir los microsomas. Se
descubrió que todas
las proteínas que
sedimentaron con
Mediante la homogenización de RE, se microsoma poseían
generar fragmentos del retículo un péptido
(microsomas) los cuales son especifico en común.
posteriormente Estos experimentos
separados mediante llevaron a la idea de
centrifugación en destinación en la
microsomas del RER y célula.
REL.
Se comprobó además como un control que
las proteínas que sedimentaron no eran
resistentes a la proteólisis, si no que
estaban protegidas por el microsoma.

Translocación de
proteínas a través de la
membrana del RER
Corresponde a la primera etapa de la vía
secretora. Grunter Blobel definió que las
proteínas poseen señales intrínsecas que
gobiernan el transporte y localización en
las células. Aka, existe un péptido Las proteínas que son sintetizadas en el
codificado en el mensajero que cuando la RER pertenecen a la vía secretora o ruta
proteína empieza a sintetizarse, la dirige al exocítica, que se basa en la circulación de
RE. proteínas de membrana plasmática y
secreción.
Hipotesis de señal de importe de
proteínas al lumen del RE: Para la translocación de proteínas al RER,
el primer paso es el reconocimiento del
Las proteínas cruzan la membrana del RER
péptido señal por la partícula SRP. La SRP
en un estado desplegado a través del canal
es la encargada del reconocimiento de la
proteico llamado translocón. El péptido
señal, al hacerlo detiene la traducción, se
señal es removido al pasar por este canal.
une al ribosoma y lo lleva a la membrana
del RER. Para la traducción esta partícula
podrá ser reconocida en el RER por el
receptor de la partícula SRP, para así
comenzar la translocación co-
traduccional.

El péptido señal está compuesto de

aminoácidos hidrofóbicos.
Los ribosomas libres se encuentran en el
citosol y unidos a la membrana del RE.
Estos al empezar a traducir un mRNA que
contenga la secuencia señal RE son
reconocidos por la SRP y llevados al RE, en
donde la subunidad grande es la que se
une al RE para la translocación.
péptido señal, el cual es
cortado por la peptidasa señal.

En el caso de las proteínas de

transmembrana, estas
presentan una translocación
que se interrumpe y así
quedan ancladas a la
membrana. Estas proteínas
El SRP posee tambien actividad GTPasa, la
poseen el péptido señal, y además otras
cual es requerida para la separación de
señales de secuencia stop, los cuales son
este de su receptor en la mb del retículo.
segmentos hidrofóbicos, que permiten la
La síntesis de la proteína se reanuda en la inserción de la proteína, pero no el corte
membrana del retículo endoplásmico, mediante la peptidasa señal.
donde ocurre la translocación co-
traduccional. Glicosilación de proteínas
En esta el péptido Las proteínas que van a ser transportadas
señal sale del poro hacia afuera de la célula (secreción),
translocador para poseen modificaciones que son
permitir que la cadena glicosilaciones, estos son grupos de
naciente de azucares ramificados que se unen a la
aminoácidos continúe asparagina cuando la proteína está
translocada en el ER.
translocando hacia el
RE. El translocón
posee un agujero
mediante el cual la
proteína en síntesis va avanzando, además
se abre para liberar el péptido señal.

Las proteínas que entran al lumen del RE

pasan la membrana mediante la
translocación y son liberadas, sin tener el
Las glicosilaciones son importantes xk los
azúcares atraen moléculas de aguas y
protegen a la molécula. (en el medio
extracelular). La glicosilación indica
también la secreción de la proteína.
Este proceso se
llama N-
glicosilación,
ocurren en un
alto porcentaje
la glucosiltransferasa, la cual añade una
glucosa a la proteína. Cuando se llega al
correcto plegamiento, la glucosidasa saca
la glucosa y así la proteína puede seguir la
ruta exocitica y salir del RE.
Además de la calnexina, se tienen otras
chaperonas en el RER: calreticulina,
ERp57 y BIP/Grp78.
Retro-translocación de

proteínas mal plegadas

de proteínas en
células
eucariotas, las
cuales son
secretadas o van
a formar parte
de la mb
plasmática.

Control de calidad: ciclo

deglucosilación/glucosilación

Unfolded Protein
Response (UPR)
Si las proteínas son mal plegadas en el
retículo, se inducen las señales UPR que
generan un aumento de las chaperonas en
el RE para la recuperación del correcto
plegamiento de las proteínas.

La chaperona BIP/Grp78 se asocia a

receptores de UPR en la membrana del
Si la proteína unfolded pasa mucho tiempo RER y las mantiene inactivas. Si se
en el citosol, va perdiendo azúcares,
acumulan proteínas mal plegadas, la
proteína será reconocida por su azúcar
(glucosa) por la calnexina (chaperona que chaperona se suelta de los receptores, los
se une a proteínas incompletas), la cual cuales se fosforilan y activan el UPR.
asegura que las proteínas se mantengan en
el lumen del retículo hasta que se plieguen
de manera correcta, las proteínas mal
plegadas o incompletas son detectadas por
Modificaciones
postraduccionales en el
RER
Pueden ocurrir en el RER:
 Corte del péptido señal
 N-Glicosilación
 Formación de puentes disulfuro
 Trimming de glucosa por la
glicosidasa y plegamiento protéico.
Trafico intracelular
vesicular
Una vez que las proteínas cruzan la mb del
RER o quedan insertas, estas deben
transitar hacia los otros compartimientos
o ser exportadas el medio extracelular y la
mb plasmática.
El tráfico de vesículas permite que las
proteínas vayan a distintas direcciones.
Este tráfico incluye la vía de biosíntesis y
secreción de proteínas, y la vía endocítica.
Las vesículas se encargan de llevar
material (cargo) ya sea del lumen o de la
membrana del compartimiento donor,
hacia otro compartimiento blanco o diana.
Se ha observado que las vesículas poseen
3 tipos principales de proteínas de
cubierta: COPII, COPI y Clatrina.
Dependiendo de la cubierta de la vesícula
se observan distintos roles y blancos.
Formación Vesículas
cubiertas con clatrina
Fue la primera cubierta de vesícula
purificada y caracterizada. Participan en el
proceso de endocitosis donde son
generadas a partir de la membrana
plasmática como
compartimiento
donor o a partir
del trans-golgi.
Son estructuras
bastante
regulares.
La cubierta de
clatrina está formada por un complejo
proteico formado por 6 cadenas, 3 largas y
3 ligeras. La estructura que forman se
llama triskelion, que corresponde a la
proteína que forma la cubierta de clatrina
organizándose en una red pentagonal
hexagonal como basket.
El ensamble de la cubierta de clatrina
induce a la curvatura/invaginación de la
mb y así la formación de la vesícula.

En la mb se encuentran proteínas
receptoras las cuales se asocian con
ciertos cargos, a lo que posteriormente
empiezan a reclutan proteínas
adaptadoras, las cuales son las que
reclutan a los triskelion para la formación
de la cubierta de clatrina.
Los cargos pueden ser proteínas de mb o
solubles; existe una serie de señales que
les dan selectividad a las proteínas que
serán reclutadas, así deben poder unirse a
una proteína receptor/adaptador.
Las proteínas adaptoras o adaptinas,
sirven de conectores entre señales y la
cubierta. Además, los fosfatidil inositoles y
GTPasas le dan selectividad y vectoralidad
a la formación de la vesícula en el
reclutamiento de las cubiertas.
Los adaptadores de clatrina o complejos
AP, están formados por varias
subunidades que reconocen en los
receptores señales específicas.
Dependiendo de la señal de la cola de la
proteína citosólica de la vesícula, reclutan
ciertos tipos de clatrina mediante los
complejos adaptadores.
Así existen distintos adaptadores ubicados
en la zona de la mb donde se formará la
vesícula, que reconocen distintas
proteínas, y reclutan las distintas
cubiertas (clatrina, copI o copII)
dependiendo de la ruta que va a ser
tomada por la vesícula.
En el reclutamiento específico de cubiertas
y destinación de vesículas participan otros
tipos de moléculas. Existen señales
lipídicas o lípidos complejos que
participan en la selectividad de los cargos
o vesículas: el fosfatidil-inositol (PIP) es
una de estas señales de formación de
vesículas, dependiendo del tipo de PIP se
generan distintas señales para la
formación de vesículas.
Los PIP basan sus señales en el grupo
inositol: si se fosforilan hidroxilos sus
estructuras serán reconocidas por
distintas proteínas las cuales median o
inducen la formación de vesículas a través
de reclutamiento selectivo de cargos.
Entonces, la formación de una vesícula
dependerá de:
 Las señales de los receptores que
reconocen
 La proteína que se va a transportar
 La presencia de ciertos lípidos en la
membrana
Además de señales, debe haber proteínas
que serán reclutadas a las zonas donde se
va a yemar la vesícula, que favorecen que
se forme la estructura y le dan
vectorialidad. Estas proteínas son las GTP-
asas monoméricas.
Las GTPasas monoméricas hacen que el
proceso de ensamble de la molécula o
vesícula se ensamble con una dirección-
sentido, esto ya que no sirve formar la
vesícula por equilibrio ya que se puede
devolver y desarmar; en el fondo la
GTPasa obliga a que el proceso de síntesis
se produzca de manera unidireccional.
Las GTPasas funcionan como
interruptores o switch moleculares. En su
forma con GTP unido son activas y
reconocen proteínas efectoras
activándolas. La unión de GTP es
estimulada por las GEF, así activando la
estimulada por las GAP, inactivando las
GTPasas. Un ejemplo de GTPasa
monomérica es la Ran que participa en el
transporte de núcleo/citoplasma. En el
proceso de endocitosis participan otras
GTPasas monoméricas como las Rab o
Sar1, que poseen el mismo mecanismo de
funcionamiento. También requieren
enzimas GEF y GAP.
Finalmente, la vesícula debe desprenderse
de la membrana. El ensamble de la
cubierta induce la curvatura de la mb y la
vesícula se desprende de la mb por
yemación.
La proteína (enzima) que promueve este
desprendimiento es la dinamina, esta
corta/estrangula el tallo de la vesícula
haciendo que las membranas plasmáticas
se fusionen y separen del origen usando
ATP (pinching off). En células que poseen
un mutante de dinamina la yemación se ve
inhibida.
(Toda la descripción dada para las
vesículas con cubiertas de clatrinas es
análoga para las cubiertas con COPI o
COPII)
Liberación de vesículas
La vesícula tiene que ir a fusionarse con
una mb blanco, para esto la cubierta de la
vesícula debe desensamblarse, proceso
que suele requerir energía (GTP).
El uncoating es necesario para que las
proteínas receptoras de la vesícula puedan
ser reconocidas por la membrana blanco y
poder fusionarse con esta.
Para que la vesícula pueda ser incorporada
debe haber un reconocimiento específico.
Parte de este reconocimiento
consiste en que ciertas GTPasas (las
Rab) interactúan con los tethering
factors que se encuentran en la mb
blanco en pos de acercar la vesícula
a la mb. Existen distintos tipos de
RAB que dan direccionalidad y
especificidad. (Es distinta una RAB
 para la formación de vesículas vs la
usada para el reconocimiento por
una membrana aceptora). Las Rab
se acoplan al citoesqueleto para
participar en el transporte de
vesículas.
Así después viene el reconocimiento de la
vesícula por los SNAREs.
Cuando la vesícula está siendo formada, se
incluye en esta proteínas de
reconocimiento: los v-snare, estos facilitan
el reconocimiento y acoplamiento de la
vesícula en la membrana aceptora para
que reciba el cargo, reconociéndolos con
los t-snare ubicados en el compartimiento
aceptor.
Los t y v-snares se entrecruzan formando
un hélice de 4 hebras, esto genera un
desplazamiento de agua y acercamiento de
las membranas para su fusión. Existen
distintos tipos de snares y dependiendo
del conjunto en la vesícula y el aceptor se
indica si se da el acoplamiento.
Una vez que ocurre la fusión, los snares
deben disociarse para poder ser usados en
otro ciclo de fusión de membranas, para
esto se requiere de ATP y la proteína NSF.
Proteínas de cubierta COPII
Estas inducen la formación de vesículas
que yeman desde el RE al Golgi. Las
proteínas de cubierta corresponden a la
Sec13 y Sec31, siendo Sar y Sec23 las
proteínas de membrana que reclutan la
cubierta de COPII.
Proteínas de cubierta COPI:
Inducen la formación de vesículas que
yeman desde Golgi hacia el RE. La
vesícula está formada por ARF1,
coatómero (complejo protéico) y
proteínas de membrana que reclutan el
coatómero.
En las proteínas de cubierta COPI y
COPII también participan las GTPasas:
Las proteínas GEF al activarse y reconoce
el cargo (cola citosólica) activan las
GTPasas (Arf1 para COPI o Sar1 para
COPII) promoviendo el intercambio de
GDP por GTP. La GTPasas entonces activas
se unen al cargo y estimulan la unión de
los adaptadores que reclutan las cubiertas.
Aparato de GOLGI y
exocitosis
El aparato de Golgi es el segundo organelo
de la ruta exocítica, este es un organelo
difícil de explicar porque es un sitio de
intersección, no solo recibe vesículas del
ER y envía a la membrana, también recibe
endosomas desde la membrana, hay
proteínas que las devuelve al retículo, etc.
Es la gran estación de transferencia de la
ruta.
Golgi
pertenece al sistema de endomembranas,
es una colección de discos de membrana
fusionados y aplanados conocidos como
cisternas (dictosomas), estos poseen
cierta curvatura. En células animales se
localiza generalmente próximo al
centrosoma, en las cercanías del núcleo.
En células vegetales se pueden encontrar
múltiples aparatos.
Previo a la entrada del Golgi se encuentra
la red cis del Golgi, y a la salida se tiene la
segunda red de túbulos llamada trans-
golgi.
Funciones de Golgi:
 Empaqueta proteínas en vesículas
antes que sean enviadas a su
destino.
 Estacion de recolección y envio de
productos proteicos recibidos del
RE
 Es la intersección de las vías
secretora, lisosomal y endocítica.
 Modificación de proteínas para la
secreción o para ir a otros
organelos. Principalmente
glicosilación.
Tránsito de proteínas
desde RE a GOLGI
Las proteínas que entraron al RE inician
su viaje a lo largo de al vía secretora al ser
destinados a Golgi a través de vesículas
cubiertas de COPII. Estas brotan de los RE
exit sites (sitios sin ribosomas).
Respecto a la formación de vesículas con
cubierta COPII, Sec23 es parte de una
proteína que recluta a las GTPasas que
tienen que ver con la formación de estas
mediante el reclutamiento de las proteínas
de cubierta.
La SAR1 es una GTPasa reclutada por un
receptor que une cargo, pero antes de eso
debe ser activada , por lo que una GEF le
cambia el GDP por GTP, recluta a esta
GTPasa monomérica, la cual se recluta en
la membrana. Al estar en la mb se une a la
Sec24 y Sec23 para reconocer a la proteína
receptora, la cual es capaz de reconocer el
cargo.
Una vez que se forma este complejo
cargo-receptor-adaptadores-GTPasa-Sar;
se reclutan las proteínas sec13-31 que
forman la cubierta COPII.
Entonces, se requieren receptores,
adaptadores y GTPasas para la formación
de la vesícula.
Existe una selección de las proteínas que
salen del RE, las proteínas de membrana
son reclutadas en forma activa y
concentradas, poseen señales de salida
(exit signals). Las proteínas solubles del
lumen deben unirse a los receptores
cargo que poseen señales de salida. Una
baja tasa de proteínas sale sin señal,
incluyendo las residentes. Proteínas con
alta síntesis salen por defecto del RE. Lo
que tienen en común, es que las proteínas
salen solo correctamente ensambladas.
(Igual existen proteínas que se
quedan residentes en RE o aquellas que
carecen de señal de destinación y se
quedan en el citoplasma).
Las clatrinas entonces son proteínas de
cubierta que participan en la formación de
vesículas en la ruta exocítica, desde trans
Golgi, con el adaptador AP1 y en la
formación de vesículas en la ruta
endocítica, desde la membrana
plasmática, con el adaptador AP2.
incorporación de
proteínas de re a
Golgi
Las vesículas no llegan y se fusionan
directamente, si no que existe un
proceso de fusión de las vesiculas de forma
homotípica, lo que significa que las
vesiculas destinadas a Golgi, pueden
encontrarse con otras vesículas
fusionándose entre ellas, formando el
sistema túbulo vesicular, el cual se ira
desplazando hacia la cara cis del golgi vía
microtúbulos [es un compartimiento
intermedio que madura a ser una
cisterna cis del golgi]. Este sistema
vesicular previo a cis-Golgi se llama
Compartimiento intermedio ER-Golgi
(ERGIC)cop
Tránsito Retrogrado mediado
por COPI
Es un tránsito que se da desde Golgi para
devolver aquellas proteínas o lípidos que
son residentes del RE pero salieron por
defecto de este. Se devuelven aquellas
proteínas solubles que tengan la señal de
retención en el RE KKXX o KDEL.
principalmente glicosilacion para la
secrecion.
Las proteínas glicosiladas a medida que va
madurando el Golgi, se van viendo
modificadas por enzimas que cortan
azucares. Así los carbohidratos que entran
a Golgi son distintos que los que salen.
Además, ocurre procesamiento

Si la proteína BIP pierde su secuencia

KDEL es secretada fuera de la célula.

proteolítico de las proteínas.

TRANS GOLGI:
SEGREGACION FINAL
Del trans-golgi las proteínas salen con
El trafico de vesiculas con COP1 también
señales específicas que reclutan vesículas
se usa para ensamblar vesiculas en el Golgi
cubiertas de clatrinas generalmente; estas
para devolverse a el reticulo. El trafico
proteínas pueden tomar 3 rutas.
retrogrado se genera una vez que ya se han
formado los túbulos del ERGIC.

Con el trafico retrogrado las cisternas en el

golgi se van especializando o madurando
(cambiando su composicion)
concentrandose componentes especificos
del golgi hacia la cara trans.

Golgi posee compartimentos

funcionalmente distintos
El este organelo se presentan distintas
composiciones de enzimas y proteínas a
medida que va madurando, esto en pos de
las modificaciones proteicas que hace,