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Efeitos da Combinação da Bebida Fermentada de Kefir com Extrato Hidroetanólico de

Guaraná (Paullinia cupana) sobre os Parâmetros Bioquímicos e Histologia de Ratos


Diabéticos
La diabetes mellitus (DM) es un como unsimbiosis entre levaduras y bacterias
trastornometabólico heterogéneopor la en formde granos de kéfir7. es una cultura
presencia de hiperglucemiaalteración de la mixtaque contiene, por ejemplo, los
secreción de insulina, accióndeficiencia de génerosKluyveromyces, Candida,
insulina o ambos1. LALa hiperglucemia Saccharomyces yvarias bacterias del ácido
crónica de la diabetes esrelacionados con láctico del géneroLactobacillus, Lactococcus,
complicacionesmicrovascularesrelativamente Leuconostoc,Bacillus y Acetobacter que se
específico a largo plazoafectar los ojos, los combinan ycontenido en una matriz de
riñones y los nervios, así como elmayor proteínas ypolisacárido llamado “Kefiran”
riesgo de enfermedades cardiovasculares. quese forman durante el crecimiento celular
TúLos criterios de diagnóstico para la bajocondiciones aeróbicas7,8Paullinia
diabetes sonbasado en los umbrales de cupana var. sorbilis, conocidopopularmente
glucosa en sangre y esespecialmente como Guaraná, tiene susemillas
asociado con la retinopatía2. ampliamente utilizadas9. En Brasil, elEl
guaraná es muy consumido ya que es
El estrés oxidativo es la principal causa
unbebida alta energia y
de las complicaciones de la diabetes, se suplementosalimentos, principalmente por
origina en ladiabetes mellitus como sucaracterística estimulante en el sistema
resultado de la altaniveles de glucosa en nerviosocentral (SNC). Este efecto está
sangre, donde la especieoxígeno reactivo asociado con laalto contenido en cafeína,
(ROS) y la producción deLos radicales libres además de contener otrosmetilxantinas,
(RL) superan la capacidad dedefensa del incluidas la teofilina y la teobromina,además
organismo al alterar el equilibrio de de polifenoles como catequinas
oxidación-reducción celular3 yepicatequinas10 Esta composición ha
sidoasociado con las actividades biológicas
Manejo eficiente de la diabetes mellitus del guaraná,que incluyen actividad
requiere un control continuo del nivel de antimicrobiana,antioxidante y
azúcar en elsangre para minimizar el riesgo quimioprofiláctico encarcinogénesis y
decomplicaciones diabéticas2. Así, los efectos antigenotóxicos9,10La asociación de
antioxidantesLas estrategias naturales y Kéfir y Guaraná(Paullinia Cupana) podría
terapéuticas son una de las estrategiaspara resultar enpropiedades beneficiosas
el tratamiento de la diabetes4. A pesar de combinadas. SiendoPor lo tanto, este trabajo
que hayvarias categorías de medicamentos tiene como objetivo evaluar los efectosde
antidiabéticos,estos medicamentos kéfir de agua y extracto hidroetanólico
posiblemente tengan efectosefectos deguaraná (Paullinia cupana),
secundarios significativos o son muy caros5. usadondividualmente o en asociación, para
Enen comparación con la droga sintética, las mejorarparámetros bioquímicos e histología
plantaslos naturales tienen menos toxicidad de ratasdiabéticos
y sonsin efectos secundarios6.
Resumen
El kéfir es una bebida fermentada.conocida
como una excelente fuente de probióticos La asociación de kéfir y guaraná, ambos
con posibles beneficios para la salud. Es una reconocidos por sus convenientes efectos
bebida tradicional de Oriente Medio sobre la salud, podría resultar en
originaria demiles de años, presentándose propiedades beneficiosas para el tratamiento
Efeitos da Combinação da Bebida Fermentada de Kefir com Extrato Hidroetanólico de
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de la diabetes mellitus (DM). El objetivo de proceso dese repite la fermentación hasta el
este trabajo fue evaluar los efectos del kéfir final de laexperimento. Los granos que no
de agua y el extracto hidroetanólico de estaban siendoutilizados se conservaron en
guaraná (Paullinia Cupana), utilizados una solución deAzúcar morena. Los animales
individualmente o asociados, en la mejora de recibieronmismo kéfir (0,2 ml/100 g) (28)
los parámetros bioquímicos e histológicos de durante 48 horassiempre que el pH fuera de
ratas diabéticas. Los animales se dividieron ±4.o Preparación del extracto hidroetanólico
en 5 grupos experimentales. Grupo 1: ratas deGuaraná (Paullinia Cupana)Se utilizó
sin DM, grupo 2: ratas con DM, grupo 3: guaraná deshidratadosuministrado por
ratas con DM tratadas con kéfir de agua, Sylvestre Natural Ingredients,una industria
grupo 4: ratas con DM tratadas con extracto brasileña ubicada en Tatuí-SP.Este fue
hidroetanólico de guaraná, grupo 5: ratas sometido a una extracciónhidroalcohólico
con DM tratadas con kéfir de agua y guaraná para obtener fraccionessoluble y también
hidroetanólico extraer. Después del para una mayor concentración,basado en la
tratamiento, se evaluaron los efectos de metodología descrita en la literatura13El
estas formulaciones sobre la glucosa en extracto hidroetanólico se obtuvo
ayunas, el colesterol, los triglicéridos, la pormaceración de guaraná en polvo en
creatinina y las enzimas alanina etanol a 70º,en la proporción 100g/1L, por 7
aminotransferasa (ALT) y aspartato días. Posteriormente, esto fuefiltrado y
aminotransferasa (AST). El kéfir, el guaraná y sometido a evaporación a 50°C hasta
las dietas combinadas previnieron la lamáxima eliminación de disolventes. el
hiperglucemia en ratas diabéticas (p extractoobtenida se mantuvo en
refrigeración.os animales
MATRIZ Y MÉTODO
Este estudio fue aprobado previamentepor el
la producción de kéfirLos granos de kéfir de
comité de ética institucional sobre el uso
agua fueronmultiplicado en el Laboratorio de
danimales (Dictamen N° 18A/2018).
Nutrición deUniversidad José do Rosario
FueronSe utilizaron 50 ratas Wistar
Vellano(UNIFENAS) – Campus Alfenas,
macho.adultos, con un peso corporal inicial
azúcarmuscovado, del mismo lote, adquirido
que oscila entre180-300g, aportados por el
enMercado local.Los granos de kéfir se
vivero deUniversidad José do Rosario
lavaron conagua destilada e inoculados en
Vellano. Túos animales fueron alojados en
una solución deazúcar moreno 30g/L, en la
jaulas colectivasconteniendo cinco individuos
concentración de50g/L (50g de granos de
cada uno, a temperaturacontrolado (25±1ºC)
Kéfir en 1L de soluciónde azúcar moreno) en
en un ambiente con ciclo12h luz/oscuridad.
un vaso Erlenmeyer
comida recibidaesecie específica (alimento
limpio. Se dejó reposar durante 24 comercial) eber agua ad libitum, siendo
horasatemperatura ambiente para sometido aeríodo de adaptación de 10 días.o
lafermentaciógranos El recipiente está Inducción de diabetes mellitusPara la
tapado sólo contoalla de papel, debido a la inducción de la diabetes, se basóen Abdullah
producción de gases11 et al., 2018 1los animales eranpreviamente
en ayunas durante 12 horas,con agua
Después de la incubación, la bebida proporcionada ad libitum. Posteriormente,
efervescentese filtró separando los granos los animalesrecibió una dosis intraperitoneal
que se lavan yutilizado en un nuevo lote12El
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(140 mg/kgpeso) de solución de colesteroltotales, triglicéridos, creatinina,
monohidrato de aloxanoSigma-Aldrich Inc, St TGO y TGP
Louis, MO, EE. UU.). Despuésuna semana, se
La determinación de glucosa en ayunas,
recolectó sangre deola y verificó el nivel de
colesteroltotal (TC), triglicéridos (TG),
glucosa en sangreor el glucómetro G-TECH
aspartatoaminotransferasa (AST),
Lite (Accumed Prod.Medicina. Hospital
alaninaaminotransferasa (ALT) y creatinina
Limitado). Los animales que obtuvieron
séricase determinaron en suero por el
ySostuvo una glucosa en sangre superior a
métodoenzima colorimétrica. Tus niveles
200 mg / dlueron considerados diabéticos.
eranmedido a través de un analizador
Los animalescuyos valores glucémicos fueron
bioquímicoMindray (Addlife) de marca
intermediosentre 120 y 200 mg/dl fueron
automatizado conKits de prueba (Kovalent)a
nuevamentesometido al protocolo de
preparación histológicaDespués de la
inducción. Una veque se desarrolló la
eutanasia, las muestraobtenido de órganos
diabetes, los animalesse dividieron
(corazón, hígado, páncreas yriñones) se
aleatoriamente en diferentes
fijaron en formalina neutra al 10%durante 24
Grupos horas y luego, después de la fijación,
elmuestras fueron preparadas en el
Sorteo experimental
Laboratorio dePatología, donde se realizó lo
Los animales se mantuvieron con una siguientepasos: 1) Recolección,
dietaestándar y agua ad libitum, distribuidas
2) identificación del material
en 5grupos (n=10), como se describe en la
tabla 1,y tratado con agua, kéfir, Evaluación macroscópica),
extractoácido hidroetanólico de guaraná o
3) fijación/escisión,
una combinación deKéfir + Extracto
Hidroetanólico de Guaranádurante 30 días. 4) deshidratación (uso de alcohol etílico
Peso y consumo de agua yración de los enconcentraciones progresivas: 70%, 80%,
diferentes grupos experimentalesfueron 95%,100%, con un tiempo de permanencia
evaluados a lo largo del tratamiento.o de 60minutos en cada fase. Se realizaron
Obtención de muestras biológicasAl final de dosbaños en alcohol al 100% para
los 30 días, después de un ayuno de 10 evitarmoléculas de aguas residuales; 5)
horas,los animales fueron anestesiados con Diafanizacióncon xileno I, xileno II y xileno III,
isoflurano2%, la sangre se recogió por 6) Impregnación(baños de parafina/horno),
punción cardíaca. 7) inclusión(cajas de acrílico)
Las muestras de sangre de los animales ,8) Microtomía, cortes semi-serie de 5µm de
fuerorecogido en tubos siliconados (sin espesor en la direccióna lo largo de las
aditivos)para obtener el suero. fueron piezas,
centrifugados a1500g durante 10 minutos a
temperatura ambientemedio ambiente, y el 9) conjunto de cuchillascon tinción tricrómica
suero se separó paradeterminación de de Masson, barnize identificación de los
glucosa en sangre en ayunas, funciónfunción portaobjetos (número anterior delmuestra).
renal, función hepática y perfil lipídico.o Posteriormente, estas diapositivas
Evaluación de glucosa en sangre en ayunas, fueronometido a evaluaciones microscópicas
de luzbinocular (Nikon E200) por un
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examinador,siendo que no sabía a qué cambiosde biomarcadores hepáticos en
grupopertenecían los cortes histológicos animales. Anvestigar los niveles séricos de
analizados.o Análisis estadísticTodos los AST (Figura 2),los grupos tratados con
resultados se expresaroncomo media más o guaraná y loscombinación Kefir con guaraná
menos el error estándar,sometids a análisis presentadadiferencias significativas cuando
de varianza (ANOVA) ycomparada por la se compara con losgrupo control diabético,
prueba de Scott-Knott (1974) con lanivel de acercándose máslos valores del control no
significancia del 5%14. Los análisis diabético. EnEn relación a los valores de ALT
fueronrealizado a través del programa (Figura 3), hubodiferencia significativa para
estadístico deanálisis de varianza (SISV los grupos tratadoscon Kéfir, guaraná y la
combinación de Kéfircon guaraná, y en los
RESULTADOS
dos últimosgrupos hubo valores más
El tratamiento de animales con alloxan(140 similares a losgrupo control no diabético.
mg/kg de peso) hiperglucemia inducida
Tales tratamientos podrían serpromoviendo
enanimales de los grupos 2, 3, 4 y 5, y los
una mejora en los niveles de
tratamientoscon Kéfir (0,2mL/100g), extracto
estosbiomarcadores hepáticos.La
hidroetanólicode guaraná (300mg/Kg) y Kéfir
dislipidemia es una complicacióncomún en la
(0,2mL/100g)combinado con extracto
DM tipo 1 no controlada, y puedeestar
hidroetanólico deguaraná (300mg/Kg)
relacionado con los hábitos del paciente.
mostró alteracionessobre el perfil glucémico
Ende acuerdo con los resultados
En cuanto a los pesos de los animales,Se
presentados(Cuadro 3), se observa un
puede observar en la (Tabla 2) que en la
aumento del colesteroltotales y triglicéridos
primeraquincena de tratamiento las ratas no
en animales diabéticosen comparación con
diabéticas,uvo, en promedio, mayor peso
los animalesdiabéticos, pero los tratamientos
que eldiabéticos y no hubo diferencia
nopromovió una diferencia significativa en
significativaentre los grupos de ratas
elaumento de estos valores.
diabéticas y losdiabéticos tratados. En la
segunda quincena delos grupos de Al analizar la función renal(Figura 4) a través
tratamiento no mostraronDiferencias de los niveles de creatinina, sese visualizó un
significativas.de los animales de estudio aumento en el valor de los vanimales
diabéticos en comparación con los que
El consumo de alimento de los grupos no
notienen.diabetes, los grupos tratados con
fuenfluido en la primera quincena de
DM Kefir y DMguaraná mostró una mejora
tratamiento, en la segunda quincena los sisimilares a los valores del grupo
gruposcon DM consumieron una mayor sindiabetes. En cuanto a la combinación en el
cantidad departe. El consumo de agua en la grupo DKéfir + guaraná, el tratamiento no
primeraquincena fue significativamente promovióuna mejora y el valor estaba cerca
diferente entrelos grupos evaluados. En la dedel grupo diabético.
segunda quincena lagrupos con DM tratados
características histológicas del tejido tales
con guaraná y DMtratado con la
comohiperemia (todas las muestras) (Figura
combinación Kefir + guaranámostraron
5), además dede una acumulación anormal
similitud en el consumo deagua, siendo estos
de colágeno (fibrosis)en las áreas viables del
más pequeños que los gruposdiabéticos y
miocardio (Figura 6).Usando como
DM tratados con Kéfir.Se observaron
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parámetros: el puntaje de fibrosisfue 0 por (entre 5 y 20% de la superficieárea) y 3 (por
ausencia o menos del 1% del área, 1(entre 1 encima del 20% del área).
y 5% de la superficie, 2 (entre 5 y 20% de la
DISCUSIÓN
superficieárea) y 3 (por encima del 20% del
área) Este estudio reveló que las dietas conKéfir de
agua y extracto hidroalcohólico deguaraná
el hígado Tinción tricrómica de Masson
(Paullinia cupana) utilizadoindividualmente o
proporcionó un análisis claro y uniforme de en asociación impidió lahiperglucemia en
la características morfológicas de las ratas diabéticas enen comparación con el
muestras tales comohiperemia (todas las grupo de control de ratones,en consonancia
muestras) y atrofia, además defibrosis con los objetivos propuestosen el trabajo. El
periportal y perilobulillar (Figura 7).Usando tratamiento asociado impidió laaumento de
como parámetros: el puntaje de fibrosisue 0 los niveles de aspartato en
por ausencia o menos del 1% del área, sueroaminotransferasa, y tanto
1(entre 1 y 5% de la superficie, 2 (entre 5 y eltratamiento conKéfir, guaraná o una
20% de la superficieárea) y 3 (por encima del combinación de ellosevitó el aumento de
20% del área) alaninaaminotransferasa, teniendo mayor
importancia en lalos dos últimos grupos, y los
portaobjetos teñidos con Tricromo
grupos tratados conKéfir y con guaraná
deMasson, que permitió una clara
mostraron una mejoríaen los niveles de
yuniformidad de las características
creatinina.La elección del extracto
histológicastrastornos tisulares como
hidroetanólico deguaraná (Paullinia cupana)
hiperemia (todas las muestras) yfibrosis
se basó epropiedades reportadas en la
periductal (Figura 8) y perilobulillar.Usando
literatura científica,un estudio mostró que
como parámetros: el puntaje de fibrosisfue 0
catorce compuestosfenoles fueron
por ausencia o menos del 1% del área,
caracterizados en muestras depolvo de
1(entre 1 y 5% de la superficie, 2 (entre 5 y
guaraná, incluida la catequina,epicatequina,
20% de la superficieárea) y 3 (por encima del
además de derivados flavonoidesoligómeros
20% del área)
conocidos como procianidinas,como
los riñones dímerode procianidina tipo B, trímerode
procianidina tipo A yprocianidina tipo A21.
Para el análisis Además, ya estáevidenció que la
histomorfológico,portaobjetos teñidos con coadministración de Paulliniacupana retraso
Tricromo deMasson, que permitió una clara en el aumento de peso corporal,aumento de
yuniformidad de las características la glucosa en sangre y disminución de los
histológicastrastornos tisulares como niveles de azúcar en sangretriglicéridos22 En
hiperemia (todas las muestras),inflamación una evaluación in vitro de laextracto
crónica, con presencia de célulascélulas hidroetanólico de guaraná en laviabilidad
mononucleares, atrofia leve y celular y proliferación de célulasCélulas
fibrosisperitubular y periglomerular (Figura mononucleares de sangre
9).Usando como parámetros: el puntaje de periféricaexpuestas aaltos niveles de glucosa,
fibrosisfue 0 por ausencia o menos del 1% los resultados indicaroque el extracto mostró
del área, 1(entre 1 y 5% de la superficie, 2 actividad positivaestadísticamente
significativo aumentando laproliferación
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celular y la disminución de los niveles sanguíneos20además deconducir a la
dedsDNA extracelular incluso cuando se disfunción mitocondrialhepatocitos que
combinancon un alto nivel de glucosa, lo que causan disfunción hepática.La investigación
indica quepdría utilizarse para mejorar ha encontrado que la hiperglucemiase
launcionamiento del organismo relacionó con la apoptosis de los
humanosanos, así como los pacientes con hepatocitosinducida por radicales hidroxilo
diabetestipo 2 en ratasdiabéticos tipo 117nefropatía
diabéticaafecta del 30% al 40% de las
La literatura muestra que los
personas con DMtipo 1 y 10% a 40% de
polifenolestienen beneficios potenciales para
aquellos con DM tipo 2,representando la
la saluddebido a sus propiedades, incluyendo
principal complicaciónenfermedad
laantioxidantes y antiinflamatorios, lo que
microvascular de la diabetes y la principal
sugiere queestos pueden ser importantes en
causa deinsuficiencia renal terminal en todo
la dieta comoTerapia dietética para la
el mundo. OControl de la presión arterial y
prevención y el control dediabetes y sus
glucosa en sangre.juega un papel clave en la
complicaciones15. además, elLos polifenoles
reducción del riesgo yprogresión de la
de la dieta pueden inhibir la α-amilasa yα-
nefropatía diabética2,3,21 existeuna relación
glucosidasa, la absorción de glucosa en
compleja y bidireccional entre lahígado y
elintestino por el cotransportador de
diabetes, ya que la diabetes esa menudo
glucosajunto con los iones de sodio (SGLT),
acompañado de enfermedadenfermedad del
estimulan lasecreción de insulina y reducir la
hígado graso no alcohólico (NAFLD, por sus
producción deglucosa hepática, es decir, han
siglas en inglés)16, yla evidencia científica
sidoasociado con una disminución de la
muestra que el dañoenfermedad hepática en
digestión decarbohidratos a nivel intestinal y
pacientes con DM tipo 1controlada es una
la regulación yalteración del transporte de
complicación común causadapor
glucosa, queayuda a controlar el azúcar en la
hiperglucemia16,17
sangre1
La incidencia de NAFLDy el hepatocarcinoma
Recientemente, los polifenoles también han
es considerablementmayor en diabéticos en
sidointroducidos como agentes
comparación conno diabéticos18El hígado es
potencialesneuroprotectores en la diabetes
un órgano.metabólica esencial para la
además de actuar en elcombatir otras
conservación dehomeostasis metabólica del
enfermedades y suscomplicaciones15. Estos
cuerpo, pero sumecanismo del trastorno
datos están enconcordancia con los datos de
metabólico inducidopor diabetes en el
este estudio, ya queque el tratamiento de
hígado aún no escompletamente
animales diabéticos conprincipales
conocido17En ese trabajo habíaevaluó los
complicaciones asociadas conpatogenia de la
biomarcadores hepáticos delanimales, y
diabetes19
tratamiento con guaraná y kéfircon guaraná
Estudios muestranque hay un aumento en el impidió el aumento de los nivelesAST en
nivel de marcadores deestrés oxidativo en suero, y ambos tratamientos con
diabéticos19 yesto puede conducir a Kefir,guaraná o su combinación impidió
complicaciones tales como mal laAumento de ALT, con mayor significación
funcionamientoanormalidades endoteliales, en elúltimos dos grupos, mostrando que las
estructurales yinflamación en los vasos
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pruebasdisminución del daño hepático en en este estudio, impidió el aumentode los
ratasdiabéticos niveles séricos de AST y ALT y los
grupostratado con kéfir asociado con
El kéfir ha sido investigado portienen efectos
guaranámostró una mejora en los niveles
terapéuticos significativos paraalgunas
decreatinina Y estos resultados se deben al
patologías y entre ellas la diabetes.
hechoque la ingesta de kéfir aumenta el nivel
Unaestudio fue diseñado para determinar el
deglutatión peroxidasa y disminuye el nivel
efectokéfir protector contra el daño
demalondialdehído que interviene en el
oxidativo tambiéncomo cambios histológicos
controldel estrés oxidativo. Por otro lado, el
y bioquímicosque se producen en los tejidos
kéfir puedese unen a los radicales
renales de las ratasdiabéticos El kéfir
superóxido y también inhibenla peroxidación
disminuyó el daño renalcausada por la
del ácido linoleico, y cómoComo resultado, el
diabetes, y por lo tanto concluyóque la
kéfir incluso ejerce unacontra el cáncer a
suplementación con kéfir puede
través de una propiedadantioxidante y
contribuipara un mejor control del estrés
reduce el daño del ADN17,25
oxidativo, yen consecuencia a la mejora de
las funcionesriñones, sugiriendo su uso para Así, consideramos que tanto el extractoácido
retrasar laprogresión de la nefropatía hidroetanólico de guaraná (Paullinia
diabética26corroborando los datos del cupana)En cuanto a la bebida fermentada de
presente estudio.Otros investigadores han kéfir, se utilizasola o, como novedad en la
observado que en ratonesdiabéticos literaturacientífico, asociado, tiene
suplementados con kéfir hubo unaaumento efectosterapias importantes para los
de la actividad de las enzimas intestinales pacientesdiabéticos Debido a las
yabsorción de D-galactosa por vesículas propiedades de esta dieta,estos compuestos
demembrana con bordes de cepillo, y que deben seguir siendoinvestigado por los
ellas ratas de este grupo tenan glucosa en efectos potencialesprotector contra las
sangresignificativamente menor, lo que complicaciones secundarias de
indica que lasuplemento podría beneficiar en
MD
la digestión deproteínas y reducir el índice
glucémico27 CONCLUSIÓN
Se observaron resultados similares enotros El guaraná, ya reconocido por suefectos
experimentos con reducción significativade antioxidantes en la literatura, en este
glucosa en sangre en ratas diabéticas estudiodemostró una reducción de la glucosa
tratados con kéfir, además de observar en sangre. Los resultadosindicó que el
otrosefectos protectores como la tratamiento con guaraná, eltratamiento con
disminución del estrésoxidativo que ralentiza kéfir y su asociacióntienen un efecto
la progresión decomplicaciones de la antihiperglucemiante y puedenayudar a
diabetes1,8, y estos resultadosse puede controlar el nivel glucémico y por lo
comprar con los hallazgos de estetrabajo, tantominimizar el riesgo de complicaciones
mostrando estas características de en la DMEn cuanto a las enzimas hepáticas
esteprobiótico cuando se usa solo oasociado. (AST y ALT),Los datos preliminares mostraron
una mejoraen los niveles de biomarcadores
Dietas con kéfir aislado y asociadoal guaraná
hepáticos.
previno la hiperglucemia en ratasdiabéticos

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