EFECTO HIPOGLUCEMIANTE Y ANTIOXIDANTE DEL EXTRACTO ALCOHLICO Y ACUOSO DE ALLOPHYLUS COMINIA (L) SW.

L. Safonts Grenier*, Y. Canel del Calvo*, A. Cuellar Cuellar**, G. Martnez Snchez**, C. Rodrguez Torres* *Grupo Empresarial LABIOFAM, Ciudad de la Habana, **Instituto de Farmacia y Alimentos, Ciudad de La Habana

Resumen
Nuestro Grupo Empresarial LABIOFAM, se ha propuesto comprobar los efectos beneficiosos del Allophylus cominia (L) sw en el tratamiento de la diabetes, para lo cual ha desarrollado una estrategia que comprende la obtencin del extracto alcohlico y acuoso, la comprobacin de su actividad biolgica como hipoglucemiante a travs de un modelo experimental de diabetes inducida por estreptozotocina (STZ) y como antioxidante mediante tres modelos experimentales: Determinacin de la capacidad reductora de hierro frrico (FRAP), determinacin de la capacidad secuestradora de DPPH y actividad antioxidante in vitro, empleando homogenado de cerebro. Adems se realiz la toxicidad aguda oral. Se comprueba que dichos extractos carecen de toxicidad en una evaluacin aguda a las dosis de 2000 mg/ Kg de peso corporal, que presentan efecto antioxidante experimental siendo el efecto ms potente en el extracto acuoso y que presentan efecto hipoglucemiante a las dosis de 25 mg/kg de peso corporal. Estos resultados corroboran el uso tradicional que se infiere a las decocciones de la planta y establecen un procedimiento que permite el uso de estos extractos como terapia alternativa para el tratamiento de la diabetes.

Introduccin
Allophylus cominia (L) Sw es un arbusto de amplia distribucin en Cuba donde se conoce popularmente como palo de caja, perteneciente a la familia de las Sapindceas. En la medicina tradicional cubana es muy popular como remedio casero, entre otros, para el tratamiento y la cura de la Diabetes. El objetivo de este trabajo es evaluar la actividad de los extractos acuoso y alcohlico de Allophylus Cominia (L) Sw como hipoglucemiantes y/o antioxidantes.

aumentando el nmero de veces del cambio del disolvente.

Toxicidad aguda
Se utilizaron 3 hembras y 3 machos de ratas adultas con un intervalo de peso corporal entre 150 y 200 g, a los cuales se les retir el alimento 18 horas antes de la administracin, mantenindoseles el libre acceso al agua. Los animales se pesaron al inicio, semanalmente y al final del ensayo. Se prepar una solucin en agua recin destilada de la sustancia de prueba que permiti la administracin de una dosis fija de 2000 mg/kg. Se utiliz un volumen de solucin de 2 mL/100 g de peso corporal. Las ratas se observaron constantemente durante las primeras 24 horas, continuando la observacin diaria durante un perodo de 14 das.
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Materiales y mtodos Preparacin de extractos

Los mismos se realizaron por el mtodo de maceracin acortando el tiempo de extraccin y

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Actividad hipoglucemiante
Para la induccin de diabetes experimental se inocularon 50 mg/Kg de estreptozotocina va intravenosa a ratas mantenidas 24 h en ayuna. El grupo Control recibi una inyeccin intraperitoneal de solucin amortiguadora buffer citrato (0,1M, pH 4,5) 2 mL/Kg. Se realiz una administracin oral diaria de ambos extractos durante 7 das. Transcurridas 48 h se procedi a la determinacin de las concentraciones de glucosa en suero y se tomaron muestras de sangre del plexo ocular.

Actividad antioxidante in vitro, empleando homogenado de cerebro

Al colocar la sustancia o muestra biolgica en el medio, podemos conocer si esta inhibe o no los procesos peroxidativos de los fosfolpidos, que se pueden medir por el incremento de los niveles de MDA (malondialdehdo) durante el proceso de incubacin.

Resultados y discusin
Toxicidad aguda
La administracin oral de ambos extractos no provoc letalidad a la dosis empleada. Durante los 14 das de observacin no se manifestaron signos txicos ni en la piel, ni en los ojos y membranas mucosas. No se evidenci presencia de temblores, convulsiones, salivacin, diarrea, sueo y coma. Tampoco se detectaron cambios patolgicos a nivel macroscpico luego de la autopsia realizada a cada animal. Los animales no experimentaron retardo del crecimiento y el aumento de los pesos corporales se comport de manera normal; encontrndose diferencias significativas (p < 0,01) en el peso de estos, para ambos sexos, entre el primer da y el ltimo da del ensayo y a los siete das con respecto al da 14. Estos resultados hicieron que los dos extractos evaluados no clasifiquen como txicos.

Actividad antioxidante
Determinacin de la capacidad reductora de hierro frrico del plasma (FRAP). Los estudios se realizan estableciendo comparaciones con grupos controles, blancos o patrones. Para el ensayo se tomaron 3,4 mg teniendo en cuenta el porcentaje de los slidos totales, se disuelven en 10 mL de etanol y se tom como solucin madre de concentracin 0,34 mg/mL. Para el ensayo se tomaran las cantidades de 6, 30, 60, 90 y 120 L (espectrofotmetro) y 1, 5, 10, 15 y 20 L (SUMA, completar en todos los casos a un volumen final de 120 L con agua bidestilada) a una de 593 nm.

Determinacin de la capacidad secuestradora de DPPH

Se tomaron 5 mg de los extractos, teniendo en cuenta el porcentaje de slidos totales, se disuelven en 10 mL de etanol, se tom una solucin madre de concentracin 0,05 mg/mL. Para el ensayo se tomaron las cantidades de 10, 25, 50, 75 y 100 L (espectrofotmetro) 2,5; 6,25; 12,5; 18,75 y 25 L (SUMA). Se calcula la concentracin de la muestra que inhibe el 50% de la decoloracin del DPPH a 517 nm.

Actividad hipoglucemiante
El siguiente grfico representa las concentraciones de glucosa en sangre luego de la administracin oral durante 7 das de 50 mg/Kg de peso corporal de los extractos acuoso y etanlico de Allophylus cominia (L) sw

Fig. 1 Concentracin plasmtica de glucosa. Leyenda: a letras diferentes indican diferencias significativas p<0,05. Barra clara, corresponde a las concentraciones de glucosa 2 das despus del reto con STZ, excepto en el grupo control negativo. Barra oscura, corresponde a las concentraciones de glucosa 7 das despus del tratamiento con extracto acuoso y extracto etanlico o placebo (grupo control negativo y STZ). STZ, estreptozotocina.

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Los niveles de glucosa sangunea se incrementaron significativamente (p < 0,001) en los grupos experimentales con respecto al grupo control luego de la inyeccin de STZ. Como puede apreciarse, en los animales hiperglucmicos tratados con las sustancias de ensayo, se produjo una disminucin significativa (p < 0.001) en este parmetro con respecto al control diabtico, siendo esta disminucin ms marcada en el grupo tratado con el extracto etanlico de A. cominia (L) sw .

En el extracto etanlico total se encontr una correlacin entre la concentracin y el porcentaje de decoloracin del DPPH de r= 0,983. En este caso la concentracin que provoc una decoloracin del 50 % del DPPH fue 43,77 g/mL (intervalo 33,90g/mL -53,63 g/mL).

Actividad antioxidante in vitro, empleando homogenado de cerebro

Esta actividad fue elevada para ambos extractos, en el caso del extracto acuoso se encontr una correlacin entre la concentracin y el porcentaje de inhibicin de la peroxidacin espontnea de r= 0,936. En este caso la concentracin que provoc una inhibicin del 50% de la peroxidacin lipdica fue 0,79 mg/mL (intervalo 0,56 mg/mL -1,02 mg/mL). Por otra parte, en el caso del extracto etanlico total se encontr una correlacin entre la concentracin y el porcentaje de inhibicin de la peroxidacin espontnea de r=0,989. En este caso la concentracin que provoc una inhibicin del 50 % de la peroxidacin lipdica fue 0,93 mg/mL (intervalo 0,72 mg/mL -1,15 mg/mL).

Actividad antioxidante
Determinacin de la capacidad reductora de hierro frrico (FRAP)
Ambos extractos tienen una importante actividad reductora pero el extracto acuoso total mostr una actividad superior al extracto etanlico total. La correlacin concentracin vs. actividad reductora para el extracto acuoso fue de r= 0,999, a una concentracin del extracto acuoso de 1 mg/mL le corresponde una actividad reductora equivalente a 177 M de cido ascrbico. Por otra parte, la correlacin concentracin vs. actividad reductora para el extracto etanlico fue de r= 0,995, a una concentracin del extracto etanlico de 1 mg/mL le corresponde una actividad reductora equivalente a 78 M de cido ascrbico.

Conclusiones
Los extractos acuoso y etanlico de Allophylus cominia (L) sw fueron clasificados como no txicos. Ambos originan una reduccin de los niveles de glucosa sangunea, siendo esta disminucin mayor en el grupo tratado con el extracto etanlico, adems poseen una potente actividad reductora ms marcada en el extracto acuoso.

Determinacin de la capacidad secuestradora de DPPH

La actividad capturadora de radicales DPPH fue elevada para ambos extractos, en el caso del extracto acuoso se encontr una correlacin entre la concentracin y el porcentaje de decoloracin del DPPH de r= 0,994. En este caso, la concentracin que provoc una decoloracin del 50 % del DPPH fue 39,26 g/mL (intervalo 31,34g/mL - 47,17g/mL).

Bibliografa
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