05 – Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias

La identificación bioquímica se basa en la evaluación de la capacidad enzimática de un 
microorganismo frente a un sustrato específico, la cual puede evidenciarse por los cambios de 
color de los indicadores de pH, el estado de la materia, por los cambios de los polímeros y/o 
producción de gases. Dichas pruebas entonces permiten la caracterización e identificación de 
cepas microbianas al entender su metabolismo, en otras palabras, comprender los procesos de 
degradación, transformación, cómo es su estructura, los factores ambientales que favorecen 
su crecimiento, entre otros. 

Para la realización de la evaluación bioquímica es necesario haber realizado un proceso de 
aislamiento y purificación del microorganismo de interés y comprobar mediante la técnica de 
tinción de Gram su pureza. 

MATERIALES 

Cultivo puro en agar nutritivo 

Colorantes y reactivos de la tinción de Gram 

Bandeja de coloración 

Agua destilada 

Mechero 

Laminas portaobjetos 

Pinza 

Portaobjetos 

Microscopio 

Aceite de inmersión 

Set de pruebas bioquímicas 

Asa bacteriológica recta 

Asa bacteriológica redonda 

Recipiente con fenol al 3% 

Hipoclorito de sodio 

Toallas de papel 

Guantes de látex 
ACTIVIDAD DE PREPARACIÓN 

Para la práctica debe realizar el siguiente cuadro resumen: 

Técnica de  Reactivo para 
Prueba  Resultados e 
Fundamento  Siembra o  interpretación 
bioquímica  interpretación 
evaluación  de resultados 
Comprobar la  Método del  Peróxido de  Prueba positiva: 
presencia de la  portaobjeto:  hidrógeno al  formación 
enzima catalasa  Con el asa  30%.  inmediata de 
presente en  bacteriológica  burbujas bien 
bacterias  redonda tomar  visibles 
aerobias y  del centro de  (formación de 
anaerobias  una colonia y  oxígeno). 
facultativas que  colocar en el  Prueba negativa: 
contienen  centro de una  no hay 
citocromo.  lámina  formación de 
Reacción: 2  portaobjetos  burbujas (no se 
moléculas de  limpia la  produce 
peróxido de  biomasa  oxígeno). 
Catalasa 
hidrógeno por  bacteriana. 
acción de la  Agregar una 
catalasa son  gota de H2O2 al 
transformadas  30%. Observar si 
en dos  hay la formación 
moléculas de  inmediata de 
agua y oxígeno  burbujas. 
que se libera  Registrar 
como gas.  resultados y 
desechar en 
guardián la 
lámina 
portaobjetos. 
Citrato         
Triple azúcar         
hierro (TSI) 
Sulfuro Indol         
Motilidad (SIM) 
Licuefacción de         
la gelatina 
Rojo de metilo         
Voges‐        
Proskauer 
Prueba O‐F en         
dos tubos 
Reducción del         
nitrato 
Urea         
 

 
PROCEDIMIENTO 

1. Realizar una tinción de Gram de una UFC del cultivo bacteriano de interés y 
determinar su pureza en el objetivo de 100X del microscopio óptico.  
2. Sí el cultivo está puro proceder a la siembra del set de pruebas bioquímicas, iniciando 
con la prueba de citrato. 
3. Llevar a incubar a 37°C el set de bioquímicas. 
4. Terminado el tiempo de incubación realizar la lectura correspondiente de cada prueba 
y anotar los resultados. 
5. Realizar la identificación del microorganismo de estudio empleado las tablas de 
identificación que encuentra en los libros: Bergey´s Manual y The Prokaryotes.  

RESULTADOS 

Coloración de Gram para determinar pureza. 

              

                                                                    Vo.Bo. PROFESOR: ______________ 

Resultados del set de bioquímicas 

Características del 
Características después 
Prueba bioquímica  medio antes de  Resultado 
de sembrar 
sembrar 
Catalasa       
Citrato       
Triple azúcar hierro       
(TSI) 
Sulfuro Indol       
Motilidad (SIM) 
Licuefacción de la       
gelatina 
Rojo de metilo       
Voges‐Proskauer       
Prueba O‐F en dos       
tubos 
Reducción del nitrato       
Urea       
Identificación del microorganismo evaluado 

Posible(s) microorganismo(s) identificado(s): 

_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________ 

ANEXO 

Tabla de identificación bioquímica que evidencia el ejercicio de evaluación.