Profesora: Laura Martínez Pérez

Sección: miércoles 10-12 y jueves

11-12

Reporte práctica 12

“Pruebas bioquímicas”

Cosme Benito Cortes

Claudia Ivonne de la Cruz Amador
Aarón de Jesús García Camarillo
Ian Asaf Muños Granados
 PRÁCTICA 12 “Pruebas bioquímicas”

Introducción
Las pruebas bioquímicas permiten determinar las características metabólicas de las bacterias
de objeto de identificación. Algunas son rápidas, ya que evalúan la presencia de una enzima
preformada y su lectura varía entre unos segundos hasta unas pocas horas. Otras pruebas
requieren para su lectura el crecimiento del microorganismo con una incubación previa de
18 a 48 horas.

PRUEBAS CON LECTURA INMEDIATA

· Catalasa
La catalasa es una enzima presente en la mayoría de los microorganismos que poseen
citocromos. Las bacterias que sintetizan la catalasa hidrolizan el Hidrogeno en agua y el
oxígeno gaseoso que se libera produce burbujas.
· Oxidasa
Sirve para determinar la presencia se enzimas oxidantes. La reacción de la oxidasa se debe a
la presencia de un sistema citromooxidasa que activa la oxidación del citocromo el cual es
reducido por el oxígeno molecular produciendo agua o peróxido de hidrogeno según la
especie Moraxella Helicobacter y Brucella.
· Indol
Mediante esta prueba se detecta la liberación de Indol en un cultivo bacteriano. Dicha
liberación se debe a la degradación del aminoácido triptófano mediante la enzima
triptófanosa.
PRUEBAS LENTAS CON LECTURA DE 18 A 48 HRS
· Óxido-fermentación
Mediante esta prueba se va a determinar si la utilización de los hidratos de Carbono pro-parte
de un microorganismo se realiza vía oxidativa o por vía fermentativa78.
· Reducción de nitratos
Sirve para determinar la capacidad de un organismo de reducir nitratos en nitritos. Se utiliza
para asignar bacterias a la familia Enterobacteriaceae.
· Rojo de metilo
Es un indicador de pH. Actúa entre un pH 4,2 y 6,3 variando desde rojo hasta amarillo
respectivamente. Mediante esta prueba se comprueba la capacidad de un microorganismo de
producir y mantener estables los productos terminales ácidos de la fermentación ácido-mixta.
Se utiliza como parte de la identificación a nivel especie de los bacilos entéricos Gram
negativos.
· Voges-Proskauer
Permite observar si el microorganismo fermenta la glucosa por la vía butanodiólica. Se usa
en la identificación de bacilos entéricos Gram negativos.
· Agar de Hierro Kligler
Mediante esta prueba se puede determinar la capacidad de un microorganismo de metabolizar
un hidrato de carbono específico incorporado en un medio de crecimiento básico; la
producción o no de gases CO2 e H2 como productos finales del metabolismo de los hidratos
de carbono. Y la producción de ácido sulfhídrico.

Objetivos
 Conocer el fundamento de las pruebas metabólicas.

Hipótesis
Con base en los resultados de las pruebas bioquímicas que arrojen los tubos sembrados con la cepa
y basándonos en la literatura identificar a la bacteria sembrada.

Diagrama
Seleccionar cepa a Con el asa Para la prueba
Para MIO se
trabajar y los tubos bacteriológica OF se deposita
deposita por
con los medios de estéril en punta en picadura y a
picadura
cultivo para las tomar una uno de los
pruebas bioquímicas colonia y tubos se le
(OF, LIA, MIO, TSI, depositarla en agrega aceite
Rotular e Para TSI se Para LIA se
Para Urea y
incubar a 35 °C hace una hace doble
Citrato se
por 24 h. picadura y picadura y se
realizan
una estría realiza una
estrías
estría
Para el caso de la
Leer e Determinar de
prueba MIO
interpretar las qué bacteria
agregar reactivo de
pruebas se trata
Kovac’s para
bioquímicas
observar indol
positivo o negativo
 Resultados

Cepa 41
OF
Prueba TSI LIA MIO Citrato Urea
𝑂2 𝑂2
Sin sembrar

Sembrado

A/A Descarboxilación
Descarboxilación Anaerobio facultativo,
Producción (-) Citrato Urea
Interpretación de Producción de
(-)
(+) (-)
fermenta glucosa,
Movilidad (-) oxidante/fermentador.
𝐻2 𝑆 y gas. 𝐻2 𝑆 y gas.

Discusión de resultados

Cuestionario
1. Menciona el mecanismo de las bacterias para utilizar a la lactosa.
Por cada molécula de glucosa que se oxida mediante glucólisis dos moléculas
de NAD son reducidas a NADH, y se obtienen dos piruvatos y dos moléculas
de ATP. Dada la imposibilidad de utilizar el poder reductor generado en forma
de NADH en la cadena transportadora de electrones, se recurre a la reducción
de un sustrato endógeno (esto es, un producto del propio metabolismo), como
forma de reciclar el NADH en NAD para permitir que la glucólisis continúe y
se siga generando ATP.En la fermentación láctica, el sustrato endógeno
utilizado es el propio piruvato producto de la glucólisis, que se reduce a ácido
láctico.
Hay tres enzimas que participan en la utilización de la lactosa (ß-galactosidasa,
galactósido permeasa y galactósido transacetilasa), las cuales tienen un
promotor único.

2. Indica la reacción de la descarboxilación de la lisina

3. Menciona a las enterobacterias H2S positivas, móviles y que

desaminan la lisina.
 Citrobacter koseri, C. diversus
 Proteus mirabilis
 Proteus rettegeri

4. ¿Qué otro medio de cultivo, diferente al MIO, se puede utilizar para

determinar la movilidad?
 El medio SIM, ya que se utiliza para la diferenciación de
microorganismos sobre la base de la producción de sulfuro de
hidrógeno, la producción de indol y la motilidad en un entorno de
laboratorio.

5. ¿Cuál es la reacción entre el indol y el reactivo de Kovac’s?

Esta reacción se usa para indicar la presencia de la enzima triptofanasa

que reacciona con el triptófano para producir indol. El indol producido
reacciona en medio ácido con el p-dimetilaminobenzaldehído del
reactivo de la prueba de indol (reactivo de Kovacs [alcohol isoamilo,
p-dimetilaminobenzaldehído y ácido clorhídrico concentrado]) para
formar un compuesto quinoidal de color rojo violeta.

Conclusión
Gracias a la correcta interpretación de los resultados de las pruebas bioquímicas
debido a que conocíamos en fundamento de todas las pruebas, fuimos capaces
de encontrar la bacteria de la cepa 41. Las pruebas bioquímicas son de gran
ayuda para la identificación de cepas microbianas.

Bibliografía
Madigan, M. (2009). Brock. Biología de los microorganismos. México:
Pearson educación.
pruebas bioquímicas para la identificación de enterobacterias - Academia.edu
https://www.academia.edu/29203075/PRUEBAS_BIOQU%25C3%258DMIC
AS_PARA_LA_IDENTIFICACI%25C3%2593N_DE_ENTEROBACTERIA
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