CITRATO DE SIMMONS

PRINCIPIO

Determinar si un microorganismo es capaz de utilizar el citrato como única fuente de carbono para
el metabolismo y el crecimiento con alcalinidad resultante

OBJETIVO

El citrato es parte de las pruebas de Indol, Rojo de Metilo, Voges, Proskaeur y citrato (IMViC) para
la identificación de la familia Enterobacteriaceae, de microorganismos gramnegativos relacionados
y de bacterias no fermentadoras.

Ayuda a diferenciar entre géneros, en especial entre los miembros de la familia

Enterobacteriaceae.

BIOQUIMICA

La energía puede ser proporcionada a algunas bacterias en ausencia de fermentación producción

de ácido láctico por la utilización del citrato como única fuente de carbono. En condiciones
normales, el metabolismo del citrato involucra una condensación de acetilo con coenzima y
oxalacetato para ingresar al ciclo de Krebs. El metabolismo del citrato por la mayoría de las
bacterias es rápido por la vía del ácido tricarboxilico. Los microorganismos que poseen un
mecanismo de transporte permiten que el citrato penetre al interior de la célula.

En las bacterias, el desdoblamiento del citrato involucra un sistema enzimático sin la participación
de la coenzima A, la citrasa o el citrato desmolasa. La citratasa requiere un catión divalente para su
actividad, magnesio o manganeso. Antes se consideraba que la degradación inicial del citrato
producía oxalacetato y acetato, ahora conocidos por ser los intermediarios en el metabolismo del
citrato.

Los productos del metabolismo del citrato dependen del pH del medio. A un pH alto, se producen
mas acetato y formato y disminuye la producción de lactato y CO2. A un pH por encima de 7 no
existe producción de lactato y los productos son:
A un pH acido, los principales productos del metabolismo del citrato son acetilmetilcarbinol y
lactato. Sin tener en cuenta los productos finales producidos, el primer paso metabólico en la
fermentación del citrato produce piruvato. La degradación del piruvato depende entonces del pH
del medio.

En el medio para la fermentación del citrato también contiene sales inorgánicas de amonio. Un
microorganismo que puede utilizar el citrato como su única fuente de carbono también utiliza las
sales de amonio como su única fuente de nitrógeno. Las sales de amonio son degradadas a
amoniaco, lo cual aumenta la alcalinidad. Las bacterias extraen el nitrógeno de las sales de amonio
con producción de amoniaco, lo que conduce a la alcalinización del medio y a la conversión de
amoniaco a hidróxido de amonio.

COMPOSICION DEL MEDIO

Sulfato de Magnesio, MgSO4 • 7H2O 0,2g

Fosfato de monoamónico o fosfato 1g
deshidrogenado de amonio NH4H2PO4
Fosfato dipotásico K2HPO4 1g
Citrato de Sodio Na3C6H5O7 • 2H2O 2g
Cloruro de sodio NaCl 5g
Agar 15g-20g
Azul de bromotimol (BTB) 0,08g

pH final de 6,9 ±0,2

Citrato: Única fuente de carbono
Sales de amonio: Única fuente de nitrógeno (Fosfato
monoamónico)
Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano
Azul de bromotimol: Indicador de pH

METODO DE PREPARACION
1. Pesar la cantidad exacta como se indica en la etiqueta del envase
2. Rehidratar con agua destilada o desmineralizada
3. Calentar suavemente la solución
4. Distribuir en tubos alrededor de 4,05 ml – 5,0ml en cada tubo
5. Esterilizar en autoclave a 121ºC, 15 lb por 15 min.
6. Dejar solidificar el medio en posición inclinada
7. Enfriar antes de su uso y conservar en refrigeración (4ºC – 10ºC)
8. Inocular
9. Estriar solo en el pico de la flauta
10. Llevar a incubación con las tapas flojas a 35ºC durante 24 – 48 hrs.

LECTURA

  Una vez completado el período de incubación, observar el desarrollo de colonias en la superficie

del agar y el cambio de pH por alcalinización, de verde a azul.

La prueba positiva está representada por la producción de color azul oscuro en el término de 24 a
48 horas, que indica que el microorganismo en prueba ha sido capaz de utilizar el citrato
contenido en el medio, con formación de productos alcalinos.

Resultado negativo: no se observará desarrollo ni cambios en el pH.

Acido: pH 6,0 color amarillo (no observado)

Alcalino: pH 7,6 color azul de Prusia Oscuro

Medio no inoculado: pH 6,9 color verde