Análisis Instrumental Aplicado

14 de enero del 2022

I. INTRODUCCIÓN
1.1.Concepto de Química Analítica Instrumental
1.2.Términos asociados al análisis químico
1.3.Proceso Global de Análisis
1.4.Clasificación de las técnicas analíticas instrumentales
1.5.Importancia de los métodos analíticos instrumentales

1.1.Química Analítica Instrumental

Definición: Ciencia metrológica que tiene como finalidad obtener información (bio) química de la calidad
tanto parcial (presencia/concentración de especies-analitos) como global (conocimiento amplio de la
naturaleza de la muestra) de una muestra mediante diferentes técnicas instrumentales.

1.2.Términos asociados al análisis químico

Proceso analítico:

Conjunto de operaciones que se inician con la definición de un problema y que se finalizan con la
obtención de unos resultados que satisfagan los requerimientos exigidos.

Técnica analítica:

Principio científico para obtener información sobre la composición de la materia.

Método Analítico:

Aplicación específica de una técnica para resolver el problema analítico

 Procedimiento: Instrucciones escritas para aplicar un método (desde la preparación de la

muestra hasta la forma de analizar o procesar los resultados arrojados por la técnica).
 Protocolo: Descripción más específica de un método (deben seguirse, sin excepción, las
directrices detalladas, si es que los resultados analíticos deben ser aceptados para un propósito
en particular).

1.3. PROCESO GLOBAL DE ANÁLISIS

 21 de enero del 2022

1.4. CLASIFICAIÓN DE LOS MÉTODOS ANÁLITICOS

Tipo de información proporcionada

 Métodos cualitativos: Revela la identidad de las especies atómicas moleculares o de grupos

funcionales de una muestra.
 Métodos cuantitativos: Información numérica de la cantidad relativa de cada sustancia en una
muestra.

Formas de obtener información

 Espectroscopía
Métodos ópticos:
Espectrofotometría de visible y ultravioleta
Espectrometría atómica (emisión y absorción)
Espectrofotometría de infrarrojo
Espectroscopia de rayos X
Espectroscopia de resonancia magnética nuclear.

 Cromatografía
Métodos de separación:
Cromatografía de gases
Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC)

 Electroquímica
Métodos de reacciones químicas en la interfaz de un conductor eléctrico.
Potenciometría (electrodos de pH y selectivos de iones)
Técnicas de conductancia

 Microscopía
Visualización de muestras

1.5. IMPORTANCIA: MÉTODOS ANALÍTICOS INSTRUMENTALES

 Clínica y medicina
o Ayuda a los médicos en su diagnosis
o Estudio de la evolución de tratamientos (determinados compuestos de sangre u orina o
la concentración de ciertos medicamentos).
o Identificación de tóxicos.

Importancia: Del problema social al problema analítico:

 o Doping en los juegos olímpicos (determinación de anfetaminas, hormonas, etc. En
muestras de orina).
o Toxicidad em juguetes (determinación de Cd en pinturas amarillas)

 Protección al consumidor y medio ambiente

o Análisis de aguas y alimentos
o Niveles de sustancias peligrosas
o Contaminantes en vertidos industriales

Importancia del problema social al problema analítico

o Contaminación de un río (identificación y determinación de contaminantes orgánicos e

inorgánicos).

 Agricultura y ganadería
o Análisis de fertilizantes.
o Determinación de tóxicos en suelos, cosechas o en animales.

En México se usan plaguicidas prohibidos a escala mundial. De 20 compuestos restringidos

en el país, 12 han sido prohibidos en diferentes regiones del mundo, como el DDT, el
Lindano, inhabilitados por la EPA y la Unión Europea.

DDT: dichlorodiphenyl trichloroethane: provoca diversos tipos de cáncer, alteraciones al

sistema nervioso, alteraciones del área intelectual de los niños, trastornos del sistema
inmunológico, malformaciones congénitas de todo tipo debido a su genotoxicidad,
trastornos del sistema endocrino y reproductivo, trastornos oculares.

 Arqueología
o Contenido mineralógico de los materiales para determinar el posible origen y rutas de
intercambio. (Rayos X)
o Identificación de pigmentos arpa determinar posibles épocas y culturas. (Rayos X)
o Determinar antigüedad midiendo el carbon-14 remanente (70,00 años de antigüedad)

 Criminología
o Química forense

28 de enero 2022
 Arte
o Conservación de obras de arte
o Datación de firmas
o Estudios
o Restauración
o Originalidad de obras (Rasgos evolutivos de las firmas, en los componentes de las tintas,
así como cualesquiera de los elementos que nos permitan su datación (blanqueantes
 ópticos, carbonato cálcico, marcas de agua, medidas de seguridad, sellos, tampones,
etc.)
II. ESPECTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ULTRAVIOLETA-VISIBLE
II.1.Introducción
II.2.Especies químicas absorbentes que contienen electrones (π, σ, N)-
II.3.Instrumentación en absorción ultravioleta-visible (UV-Vis)
II.3.1. Componentes básicos de un UV-Vis
II.4.Colorimetría (Fundamentos y requisitos que debe reunir un método colorimétrico).
II.5.Análisis cuantitativo (Ley de Beer, curva de calibración, cálculos químicos)
II.6.Determinación de metales y no metales por técnicas espectrofotométricas
(colorimetría).

2.1. INTRODUCCIÓN
Espectro electromagnético: es el rango de todas las radiaciones de energía que se propagan en el
espacio a través de ondas

¿Por qué espectrometría de absorción ultravioleta-visible?

Nota: Para que la radiación electromagnética incidente interaccione con la materia tiene que tener una
λ del mismo tamaño o menor que las dimensiones del cuerpo irradiado. Es por ello que la radiación de la
región del ultravioleta (200-400 nm) nos permite obtener información de las móleculas.
 04 de febrero 2022

Espectro electromagnético: Es el rango de todas las radiaciones de energía que se propongan en el

espacio a través de ondas.

Frecuencia (v): Es el número de ondas por segundo para una onda electromagnética. Su unidad de
medida es el Hertz (1Hz = 1 s-1 , ciclo por segundo, o bien, el número de ondas que pasa por un punto en
un segundo).

Relación entre v y λ:

c
v= λ= Longitud de onda v= frecuencia de onda c= velocidade de la luz (2.997x108 m/S)
λ

Aspectos interesantes de la región UV-Vis

El UVC es la más tóxica, pero la mayor parte es absorbida por la atmosfera.

El UVB daña el ADN y causa daño en los tejidos y quemaduras solares.

EL UVA es el responsable del bronceado y envejecimiento de la piel.

Se conoce como rango germicida dada su alta eficiencia de desinfección provocando la dimerización de
los enlaces del ADN evitando que bacterias y virus se repliquen.
Espectrometría de absorción UV-Vis

Cuando la radiación electromagnética índice sobre la materia puede ocurrir los siguientes procesos:
absorción, transmisión, reflexión, refracción, dispersión.

Fundamento

¿Qué pasa cuando una mólecula absorbe la radiación UV-Vis?

La mólecula absorbe parcialmente esta radiación, excitando los electrones de enlace (σ,π,n) los cuáles
pasan del estado basal o fundamental a un estado excitado (excitación electrónica), provocando una
transición electrónica, el resto de la radiación es transmitida.

Tipos de electrones absorbentes:

La radiación UV-Vis (región de λ entre 180 y 780 nm) es absorbida por las moléculas orgánicas en los
orbitales moleculares por:

I. e- compartidos: Participan directamente en la formación de enlaces entre átomos para la

formación de moléculas
Sigma(σ) y pi (π)
II. e- no enlazables o no compartidos (n). No participan em ningún enlace, no se comparten
con los electrones de otro átomo, como: O, S, N, Cl, etc.
 Tipos de electrones absorbentes:

 Tipos de enlaces

σ a) Todos los enlaces sencillos son enlaces sigma σ (2 e σ).

X Y
❑
σ
X Y b) Un doble enlace se compone de un enlace sigma σ y un enlace pi π
π
π
Xσ Y c) Un triple enlace es un enlace sigma σ y dos enlaces π
π

 Electrones de enlace
σ = electrones de enlace simple
π= electrones de enlace donle
n= eléctrones no enlazantes

 Transiciones electrónicas
Las transiciones electrónicas se deben al salto de un electrón desde uno de los 3 estados
fundamentales (σ, π, n) a uno de los estados excitados (σ* o π*).
Cuando las móleculas absorben fotones de energía adecuada se pueden dar 4 tipos de
transiciones electrónicas

σ → σ∗¿ π → π∗¿
n → σ∗¿
n → π∗¿

Transiciones electrónicas posibles 4 de feb 2022 - pt 2 - 1:08:54

11 de febrero 2022

Transiciones electrónicas

Enlaces sencillos C-C o C-H tienen mas fuerza de unión, por lo tanto, se requiere una energía de
excitación grande.

 Transiciones σ → σ∗¿
Los e- del orbital sigma σ se pueden excitar σ∗¿ solo con energía proveniente de la
región ultravioleta al vacío (menor 150 nm)
 Transiciones n → σ∗¿
UV lejano λ entre 150 y 250 nm
Los compuestos que contienen pares de electrones no compartidos (electrones no enlazantes)
sufren transiciones de intensidad media

λ entre 200 -700 → transiciones π → π∗y n → π∗¿

Requieren grupos funcionales no saturados que aportan electrones π. Los grupos funcionales
orgánicos no saturados que absorben en las regiones ultravioleta o visible se llaman cromóforos.

La mayoría de las aplicaciones de espectroscopia de absorción en compuestos orgánicos se

basan en las transiciones de electrones n y al estado excitado π*.

Transición λ (nm)
σ→ σ* < 200
n → σ* 160 – 260
π→ π* 200 - 500
n → π* 250 – 600

Transiciones electrónicas
La energía asociada a los electrones de enlaces sencillos es lo suficientemente alta.
Los electrones de enlaces dobles y triples se sujetan con menos fuerza y por tanto, se excitan
mediante radiación con más facilidad.

Fundamento
¿Por qué una molécula absorbe unas determinadas frecuencias de todo el rango UV-Vis?
Si la diferencia de energía entre un nivel energético y otro en la molécula corresponde
exactamente a la frecuencia irradiada, está absorbe radiación pasando de un estado basal a un
estado excitado.

Transiciones electrónicas
¿Por qué es un método cualitativo?
Dependiendo de la molécula, se requiere de una energía específica (λ) para que se lleve a cabo
una transición electrónica específica de esa molécula.

Fundamento
La espectroscopia UV-Vis se basa en el análisis de la cantidad de radiación magnética (en el
rango de longitudes de onda ultravioleta y visible) que pueden absorber o transmitir los
electrones de enlace de una molécula en función de la cantidad de la molécula presente,
provocando transiciones electrónicas.
  Las especies absorbentes: moléculas orgánicas y aiones inorgánicos que tienen
electrones:
o En orbitales moleculares σ
o En orbitales moleculares π
o En orbitales moleculares n

 Tipos de transiciones electrónicas: Cuando absorben fotones de E adecuada se pueden

dar 4 tipos de transiciones electrónicas:
o σ→ σ*
o n → σ*
o π→ π*
o n → π*

INSTRUMENTACIÓN

Componentes básicos de un UV-Vis.

1. Fuente de radiación
Irradia luz compuesta o policromática (todas las longitudes de onda visibles)
Características:
o Suministrar un haz de radiación com la suficiente potencia
o Proporcionar energía de intensidad constante
o Estable, continua, y de vida media larga

Fuentes de radiación más comunes:

o Región UV: Lámpara de deuterio o hidrogeno ( < 350 nm)

o Región visible: filamento de wolframio.
 Consiste de un par de electrodos en un tubo de vidrio
con ventanas de cuarzo, y que contiene hidrógeno o
deuterio gaseoso.

Cuando se aplica un alto voltaje a los electrodos, ocurre

una descarga de electrones, lo cual excita las moléculas
de gas y estás pasan a niveles energéticos superiores.

Cuando los electrones de los átomos del gas regresan

a su estado basal emiten radiación,la cual es continua
en el rango de 180 a 350 nm

2. Sistema dispersivo (monocromador)

Su tarea es la de seleccionar un haz de radiación con una longitud de onda específica.
o Descompone la energía radiante policromática de la fuente de la energía.
o Selecciona y permite el paso de luz monocromática adecuada y específica.

Componentes:

o Rejilla de entrada
o Lente colimadora
o Componente dispersante (prisma o rejilla)
o Lente de enfoque
o Rejilla de salida

3. Contenedor de muestras (celdas)

El material debe de ser transparente a la región de la radiación electromagnética de

interés.

La celda de cuarzo o sílice fundida se utiliza para la región UV ( <350 nm)

El vidrio de silicato se utiliza por lo general para la región de 375-1000 nm debido a su

bajo costo en comparación con el cuarzo.

El plástico también se utiliza en la región visible (400-700 nm).

Volumen:

o El más común es de 3.5Ml

 o También 350 uL
o 17.5 mL

Paso óptico o longitud de trayectoria:

o El más común es de 10 mm (1cm)

o También: 2, 5, 50mm, etc

Cuidados:

o Usar guantes preferentemente.

o Limpiar las celdas antes y después de usarlas.
o Una vez limpias, evitar tocar las ventanas de lectura.

**Suciedad, huellas digitales, grasa, etc. Pueden alterar la lectura de las muestras

Accesorio automático 18 cubetas:

- A temperatura ambiente
- Termostatizado mediante baño externo peltier
- Permite medida de 18 cinéticas inatendidas.

Acopladores de fibra óptica:

- Cuantificación sin cubeta

- Cinéticas en médios complejos.
- Mínima perdida de sensibilidade
- Sin mantenimiento
- Amplia gama de fibras disponible
- Máxima productividad.

4. Detector
Tienen la función de convertir la radiación luminosa incidente en señal eléctrica
medible.
Características:
o Deben responder a un amplio rango de longitudes de onda
o Deben dar respuesta rápida
o Sensibilidad a niveles bajos de radiación
o Deben producir señal eléctrica fácilmente amplificable
o La señal deber proporcional a la potencia radiante

Fotomultiplicadores, celdas fotovoltaicas, fotoelécticas (fototubo)

5. Procesador de señal

Diseños instrumentales UV-Vis

 a) Haz sencillo
b) Haz doble

BARRIDO ESPECTRAL

Si hacemos un barrido espectral y representamos gráficamente la intensidad de absorción de radiación,

en función de λ de la radiación →“huella dactilar” (los espectros de absorción de cada elemento son
únicos, presentan máximos de energía a λ características y con distinta intensidad.)

 Análisis cualitativo: estudiando la localización de los máximos de energía en un espectro, se

puede identificar y diferenciar unos elementos de otros.
 Análisis cuantitativo: la intensidad de absorción de cada elemento, a su λ característica, es
mayor cuanto mayor sea su concentración.

¿Por qué es un método cuantitativo?

Absorbancia y transmitancia analizando una u otra podemos relacionar la cantidad de especie activa
presente en la muestra.

Absorbancia: la absorbancia es la cantidad de intensidad de luz que absorbe la muestra. = -log(T)

Transmitancia: la transmitancia óptica se define como la fracción de luz incidente a una longitud
de onda específica, que pasa a través de una muestra. %T= 100 x T

LEY DE LAMBERT-BEER

Expresa la relación entre absorbancia de luz monocromática entre (longitud de onda fija) y
concentración de un cromóforo en solución.

A
=εl=constante
C
Absorbancia=εlc
(ε) Coeficiente de absortividad molar: característico de cada sustancia absorbente a cada λ.
 Esta constante es una propiedad molecular asociada a un solvente dado, presión y temperatura
en particular
ε =L∙ mol−1 ∙ cm−1
(l) Longitud del camino óptico: distancia que atraviesa la luz a través de la muestra.

l=cm
(c) Concentración de la sustancia absorbente en moles.

c=mol L−1
En química analítica resulta muy interesante la medida de la cantidad de luz absorbida por una sustancia
a la determinada λ, puesto que a través de la aplicación de la ley de Lambert- Beer podemos relacionar
dicha absorción de radiación con su concentración.

A λ =ε λ bc

Donde ε=absortividad ( constante )

Permite hallar la concentración de una especie química a partir de la medida de la intensidad de la luz
absorbida.

Limitaciones de la ley de Beer: la proporcionalidad entre absorbancia y concentración cuando l (camino

óptico) es constante, sólo se cumple en un intervalo de concentración del analito. fuera de dicho rango
se observan en las curvas de calibrado desviaciones positivas o negativas de la linealidad.

c <10 mM
Valores de c bajos no cumplen con la linealidad debido a interferencias o escasa sensibilidad.

valores de c altos no cumplen con la linealidad, debido a fenómenos de dispersión de luz, agregación de
moléculas, cambios del medio, procesos de fluorescencia, auto absorción, etcétera.

 Desviaciones químicas: moléculas estables en disolución y sin partículas en suspensión. no se

cumple cuando el analito se asocia, disocia o reacciona con el disolvente para dar lugar a un
producto que presenta un espectro de absorción diferente.
 desviaciones instrumentales: sólo se cumple con radiaciones monocromáticas.

MÉTODO CUANTITATIVO:

¿ Cómo puede conocer la concentración de una muestra problema?

curva de calibración: a través de ella se establece la relación entre la absorbancia y la concentración del
analito, a una longitud de onda dada.
 o Estándares: soluciones que contienen concentraciones conocidas del analito.
o Blanco: solución con la misma composición que el estándar excepto el analito
o Muestra: solución de la sustancia problema con el analito a cuantificar.

COLORIMETÍA

Método que sirve para hallar concentraciones de diferentes muestras coloreadas.

 Consiste en medir la intensidad de luz absorbida (A) o transmitida (T), en el rango visible, por
una solución coloreada de compuestos.
 el fundamento de la fotocolorimetría se debe a la capacidad de las moléculas para absorber
radiaciones.
 la absorción de luz en un compuesto coloreado puede variar debido: la longitud de onda (λ)
concentración del compuesto, longitud de celda que contiene la muestra.

¿ Qué sustancias absorben en el visible?

para que una sustancia/ molécula se activa en el visible debe ser colorida: el que una sustancia tenga
color, es debido a que absorbe ciertas frecuencias o longitudes de onda del espectro visible y transmite
otras más.

LA TÉCNICA ANALÍTICA UV-VISIBLE

1. Amplio campo de aplicación: son muchas las especies que son activas en el visible, y muchas
más que con un tratamiento adecuado son capaces de formar especies coloridas.
2. Selectividad adecuada: aunque no es muy común, si es posible tener interferencias en UV-
Visible. Cuando esto ocurre, es posible aislar el analito de la interferencia, o separar la
interferencia misma.
3. Buena exactitud y precisión: en estas técnicas espectroscópicas es normal tener errores
relativos del 1 al 3%, por lo cual se puede considerar que se tendrán resultados analíticos
con un mínimo de incertidumbre si se procede en la forma correcta.
4. Facilidad y conveniencia: aunque existe el instrumento es altamente sofisticados acoplados
a computadoras y con sistemas ópticos y electrónicos de alta precisión, es posible obtener
resultados muy aceptables para análisis de rutina, con instrumentos o espectrofotómetros
de los más sencillos en el mercado, a un costo muy accesible.