Capitulo

INTRODUCCIÓN A LAS TÉCNICAS ANALÍTICAS APLICADAS A LA

DETERMINACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE COMPUESTOS Y
ELEMENTOS QUÍMICOS PRESENTES EN EL MEDIO AMBIENTE
Dra. Conxita Lao Luqu
Departamento de Ingeniería Minera y Recursos Naturales, Universidad Politécnica de Cataluña.
España. conxita@eupm.upc.edu

Dra. Mónica Iglesias

Departamento de Química Analítica. Facultad de Ciencias. Universidad de Girona. España.
monica.iglesias@udg.es

Dr. Roberto Rodríguez

Departamento de Química Analítica. Facultad de Ciencias. Universidad de Girona. España.
roberto.rodriguez@udg.es

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Capitulo
INTRODUCCIÓN A LAS TÉCNICAS ANALÍTICAS APLICADAS A LA
DETERMINACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE COMPUESTOS Y ELEMENTOS
QUÍMICOS PRESENTES EN EL MEDIO AMBIENTE

1. INTRODUCCIÓN

La mejor forma de poder conocer la presencia y concentración de un compuesto o elemento

químico en el medio ambiente es mediante su determinación cualitativa y cuantitativa. La
revolución científico técnica y el desarrollo tecnológico ha permitido el desarrollo de diferentes
técnicas analíticas. Hay que señalar que hay técnicas que permiten realizar una evaluación
cuantitativa y cualitativa de estos y algunas técnicas solo permiten una determinación cualitativa
y semicuantitativa. Consecuentemente una de las actividades más importante que desarrolla un
profesional en los estudios de contaminación ambiental es conocer las sustancias presentes en el
medio natural y los diferentes componentes de este. Para tal efecto es necesario elegir las
técnicas analíticas e instrumentales adecuadas de acuerdo al problema planteado y el tipo de
contaminante de que se trate. Con tal propósito el objetivo de este capitulo es mostrar las técnicas
analíticas e instrumentales más usadas en la caracterización cualitativa y cuantitativa de los
diferentes tipos de compuestos y elementos químicos existentes en el medio ambiente. Las
descripciones que se presentan aquí de las técnicas analíticas e instrumentales más usadas en la
actualidad y que se encuentran disponibles en el mercado no pretende ser intensiva ni exhaustiva,
sino una guía orientativa para los profesionales de diferentes campos de la ciencia que necesitan
tener un conocimiento elemental de estas en su proceso de formación y especialización
profesional en temas de contaminación y evaluación de impactos medioambientales. En cada
caso se hace referencia a las fuentes bibliográficas donde se puede ampliar la información sobre
cada una de estas técnicas analíticas.

Es de señalar que los elementos contaminantes que se estudian con las técnicas analíticas que se
describen a continuación pueden ser de origen natural o antropogénico. Conocer la concentración
de los elementos químicos y el tipo de compuesto en que se presentan estos en el medio
ambiente permite determinar los posibles niveles de contaminación existente o no en muestras de
sólidos, líquidos y gases que se estén analizando. Es de señalar que la condición para que un
elemento sea contaminante lo determinan las diferentes normativas existentes en función del uso
o aplicación que tenga la muestra que se este analizando. Al ser detectado un determinado tipo
de sustancia o elemento contaminante en el medio se puede hacer un diagnostico de la situación
y en función de los niveles de concentración y el tipo de compuesto o compuestos presentes
establecer el tipo de medida de rehabilitación o técnicas de tratamiento a utilizar en la solución
del problema detectado.

2. METODOS ESPECTROFOTOMÈTRICOS DE ANÁLISIS

Las técnicas espectrofotométricas de análisis se basan en la interacción entre la radiación

electromagnética (luz) y la materia (absorción, emisión, reflexión,..) con intercambio de energía
entre ellas.

La radiación electromagnética (REM) es una forma de energía que se transmite en el espacio a

gran velocidad. La REM puede representarse por una onda harmónica, constituida por un campo
eléctrico alternante perpendicular a la dirección de propagación del haz, asociado a dicho campo
se propaga un campo magnético variable perpendicular al campo eléctrico (figura 1).

2
Figura 1. Radiación electromagnética (http://www.astronomynotes.com/light/s3.htm).

Existen diferentes radiaciones electromagnéticas (visible, ultravioleta, infrarrojas, rayos X, etc.),

(figura 2) Todas estas radiaciones tienen la misma naturaleza, se mueven a la misma velocidad
en el vacío.

Figura 2. Espectro de la radiación electromagnética (http://webvision.med.utah.edu/spanish/fisicaluz.html).

Cada radiación viene caracterizada por una frecuencia, una amplitud y es portadora de una
determinada energía. La longitud de onda y la frecuencia determinan el color de la luz, la
amplitud afecta a su luminosidad.

La relación entre energía (E) y frecuencia de la radiación (ν) es:

E = hν (1)

Donde h es la constante de Planck con el valor de 6,6262 x 10-34 J s.

La relación entre la frecuencia y la longitud de onda es:

c = ν?λ (2)

3
La velocidad de la luz en el vacío (c), es constante (c = 3.00 x 1010 cm s-1), luego la longitud
de onda (λ) y la frecuencia (ν) son inversamente proporcionales. Cuando una se incrementa, la
otra decrece.

La primera cuestión a plantearnos es que le ocurre a la materia cuando es sometida a una

determinada radiación. Tal y como podemos imaginar dicho efecto dependerá de la energía de
dicha radiación. En la tabla 1 se indican los efectos inmediatos sobre la materia, destacando
de mayor a menor energía:

Tabla 1. Algunas radiaciones electromagnéticas y el efecto que producen en la materia.

Radiación Efecto
Rayos X y cósmicos Ionizaciones de las moléculas
UV-Visible Transiciones electrónicas entre los orbítales atómicos o moleculares
Infrarrojo Deformación de los enlaces químicos (transiciones entre estados
vibracionales)
Microondas Rotaciones de los enlaces químicos (transiciones entre estados
rotacionales)
Radiofrecuencias Transiciones de spín electrónico o nuclear en los átomos de la
molécula.
Tabla 2. Métodos de análisis espectroscópicos e información que proporcionan.
Técnica espectroscópica Información obtenida
Rayos X Estructura total de la molécula incluida la estereoquímica de
la misma a partir de las posiciones relativas de los átomos.
Ultravioleta-Visible Existencia de cromóforos y/o conjugación en la molécula a
partir de las absorciones observadas.
Infrarrojo Grupos funcionales a partir de las absorciones observadas.
Espectrometría de masas Formula molecular y subestructuras a partir de los iones
observados.

Cuando la radiación incide sobre una sustancia no toda ella se ve afectada por la misma; al
átomo o conjunto de átomos que absorben radiación se le denomina cromóforo y en cada
técnica espectroscópica será distinto dentro de una misma molécula. En las moléculas existen
también átomos o grupos de átomos que no absorben radiación, pero hacen que se modifique
alguna de las características de la absorción del cromóforo, a estos grupos se les llama
auxocromos.

La segunda cuestión es como podemos utilizar dichos efectos sobre las sustancias para
obtener información sobre la estructura y composición de la materia y como utilizar dicha
información. A estas dos interrogantes daremos respuesta en lo adelante con la descripción de
los métodos que utilizan los espectros de emisión y de adsorción de las sustancias.

4
1.1. ESPECTROS DE EMISIÓN Y ESPECTROS DE ABSORCIÓN

Emisión de REM. Espectros de emisión

Cuando los átomos o moléculas que se encuentran en estado fundamental son excitados térmica
o eléctricamente, sus electrones pueden pasar a un estado de energía superior (Estado excitado).
El estado excitado es inestable y se vuelve al nivel de energía fundamental, emitiendo la energía
en exceso en forma de REM (figura 3)

Figura 3. Absorción y emisión de energía de una sustancia.

Cada átomo o molécula tiene unos estados electrónicos característicos y por tanto emite unas
longitudes de onda determinadas (espectro de emisión), diferentes a la de los otros átomos o
moléculas, lo que permite caracterizarlos.

Emisión de REM

H2

Dispersión de la REM

Excitación eléctrica

Figura 4. Espectro de emisión del átomo de hidrógeno.

Los átomos tienen espectros de emisión (así como de absorción) de líneas y en cambio, las
moléculas tienen espectros de bandas. En una molécula existen distintos niveles vibracionales
y rotacionales dentro de cada nivel electrónico que pueden acomodar al electrón. De esta

5
manera entre dos niveles de energía electrónicos existen muchas transiciones posibles de
energía muy parecida. Este gran número de posibles niveles produce bandas anchas en lugar
de picos de una sola frecuencia. En los átomos, al no haber enlaces, no existen subniveles
vibracionales ni rotacionales, y por tanto entre dos niveles solo hay una transición posible.

Absorción de REM. Espectros de absorción

Cuando una REM pasa a través de una muestra, se produce una disminución de la intensidad
de ciertas longitudes de onda debido a la absorción de éstas por parte de la sustancia que
utiliza la energía para pasar a niveles de energía superiores. Las líneas o bandas que se
absorben son características de cada sustancia (figura 5b).

Coinciden por tanto, las bandas del espectro en las que emite radiación con los huecos o
líneas negras del espectro de absorción de la radiación, como si un espectro fuera el negativo
del otro (figura 5).

Figura 5. Espectro de emisión (a) y de absorción (b) de un mismo elemento. (http://personales.ya.com).

Medición de la radiación

La determinación de las líneas del espectro de emisión/absorción de una sustancia permite

identificarla, mientras que la intensidad de una determinada línea es proporcional a la
concentración y por tanto, permite su cuantificación.

Identificación

La observación de las líneas de determinadas longitudes de onda características de

determinados elementos o compuestos permite identificarlos. En la figura 6 se ilustran
diferentes espectros atómicos. El sodio (Na) emite en el amarillo en las bandas de longitudes
de onda de 5896 A y 5890 A (figura 6a). El calcio emite en la longitud de onda del espectro
visible 6162 A (amarillo-naranja), 4454 A y 4435 (color añil) y 4226 A (violeta) figura 6b).

6
El mercurio (Hg) emite radiación en dos longitudes de onda del visible: 5460 A (color verde)
y 4358 A, (color añil) (figura 6c).

a)

b)

c)

Figura 6. Espectro de emisión de determinados elementos químicos: a) sodio, b) calcio y c) mercurio

(http://personales.ya.com).

La identificación de analitos elementales mediante sus espectros de emisión no siempre es

posible, debido a que los elementos con muchos niveles posibles tienen espectros de emisión
muy complejos con miles de líneas, este es el caso, por ejemplo, de los metales de transición.

Como se ha comentado anteriormente, los espectros moleculares son de bandas. La

interpretación de las bandas de los espectros moleculares, especialmente los de la zona del
infrarrojo, que permiten la identificación de compuestos se describen en el apartado 1 de este
capítulo.

Cuantificación

Técnicas de absorción: ley de Lambert-Beer

La cantidad de luz absorbida depende de la concentración de solutos en la muestra, a más

concentración mayor intensidad de luz se absorbe. Esta relación viene dada por la ley de
Lambert-Beer (Skoog et al., 2005). La cantidad de luz absorbida a una determinada longitud
de onda es proporcional a la concentración de la muestra (Ley de Lambert-Beer).

7
 Io I

Figura 7. La radiación de intensidad Io, incide sobre el material absorbente de grosor b, I es la intensidad de la
radiación transmitida después de atravesar el material.

Io
A= log = = ε b CM (3)
I

donde A es la absorbancia, Io es la intensidad de la luz incidente, I es la intensidad de la luz

transmitida, ε es la constante (absortividad molar) cuyo valor depende de la sustancia
(material absorbente) y de la longitud de onda de trabajo, b es el camino óptico (grueso del
material absorbente) y C es la concentración en mol/L.

La ley de Lambert-Beer es la ecuación fundamental que rige los fenómenos de absorción

electromagnética. Solo se cumple para radiaciones monocromáticas (formadas por una sola
longitud de onda).

Según la ley de Lambert-Beer, existe una relación lineal entre la absorbancia y la concentración.
Si se representan los valores de la absorbancia (A) frente la concentración, se obtiene una recta
que pasa por el origen de pendiente ε (figura 8)

100
ε
50
A

0
0 1 2 3 4 5 6 7
C
Figura 8. Relación lineal entre la absorbancia y la concentración.

Otra unidad que se utiliza como medida de la cantidad de luz absorbida es la tansmitáncia (T),
que es la relación entre la luz transmitida y la luz incidente.

T=
I
; A = Log
1 (4)
Io T

Técnicas de emisión de radiación

La intensidad de luz emitida por el analito, que ha sido excitado, al volver a su estado
fundamental, es proporcional concentración de este según la ecuación:

8
I=kC (5)

Donde I es la intensidad de la línea seleccionada y C es la concentración del analito en la

muestra. k depende de distintos factores, pero para una determinada sustancia y una
determinada longitud de onda es constante.

Métodos de cuantificación en las técnicas instrumentales

a) Recta de calibrado
b) Método del patrón añadido
c) Método del patrón interno

a) Curva de calibrado

• Se preparan soluciones de concentración conocida y creciente de patrones del analito

(Con la matriz lo más parecida a las muestra posible)
• Se prepara un blanco (contiene todo lo que contienen las soluciones patrón y la muestra
excepto el analito)
• Con el blanco se ajusta el cero del aparato ( 0 de absorbancia, 100% T)
• Se analiza cada solución patrón por orden creciente de concentración y se lee la señal
(absorbancia, intensidad de emisión, área, conductividad) dada por el instrumento
utilizado. Finalmente, se introduce la muestra y se lee la respuesta de la muestra (tabla
3).
• Se calcula la recta de regresión: señal frente concentración y en ella se interpola la señal
de la muestra (figura 9). Para calcular la ecuación de la recta normalmente se utiliza el
método de mínimos cuadrados.

Tabla 3. Concentraciones de las soluciones patrón y señales analíticas correspondientes.

Concentración (ppm) Señal analítica
2 0,21
5 0,53
10 1,09
20 0,99
Cx (muestra) 0,87

2,5
y = 0,0987x + 0,0419
2
señal analítica

R2 = 0,9971
1,5

0,5

0
0 5 8,39 10 15 20 25
concentración (ppm )
Figura 9. Curva de calibrado directo y ecuación de la recta de regresión.

Cálculo de la concentración de la muestra:

9
0,87 = 0,0987Cx + 0,0419 => Cx = 8,39 ppm

Ejemplo: determina la concentración de sodio en meq/L de una muestra de agua de 0.1 mL que
diluida hasta 20 mL con agua destilada, dio una lectura en el fotómetro de llama de 64 (Técnica
de emisión atómica). La curva de calibración se hizo con los datos de la siguiente tabla.

Tabla 4. Concentraciones de las soluciones patrón y señales analíticas correspondientes.

µg/mL 5 10 15 20
Lectura fotómetro 20 40 60 80

100
y = 4x
Intensidad emisión

80
R2 = 1
60

40

20

0
0 5 10 15 20 25
concentración (ppm )
Figura 10. Curva de calibrado y ecuación de la recta de regresión.

Sustituyendo la lectura de la muestra en la ecuación de la recta,

64 = 4C => C = 64/4 = 16 µg/mL

Deshacemos la dilución:
16 µg/mL x (20mL/0,1mL)x (1000mL/1L)x (1mg/1000µg) x (1mmol/ 23 mg) x ( 1meq/1mmol)
= 139.13 meq Na/L)

La curva de calibrado directa es el sistema de cuantificación más sencillo y rápido, pero si la

matriz de la muestra es compleja o desconocida y no se puede reproducir en los patrones, puede
dar bastante error. Por ejemplo por la presencia de una sustancia que afecte la capacidad de
emisión del analito, entonces seria necesario preparar los patrones con la misma matriz que la
muestra y esto, normalmente, es muy difícil. En estos casos se puede utilizar el método de la
adición de patrón de patrón o patrón añadido.

b) Método del patrón añadido

• Primero se hace una lectura de la muestra problema para hacer una estimación
aproximada de la intensidad de la señal analítica.
• Se preparan soluciones de concentración creciente de patrón del analito en la propia
muestra y se mide la señal (intensidad de emisión, absorbancia, etc.).
• Se hace una representación de la señal analítica medida frente a la concentración de
patrón añadido.
• La recta que se obtiene extrapolada a concentración cero da la concentración de la
muestra problema (figura 11).

10
Figura 11. Curva de calibrado para el método de la adición de patrón.

Este método permite solucionar el problema del efecto de la matriz de la muestra, ya que los
patrones se preparan con la misma muestra.

Ejemplo: en un análisis de galio por fotometría de lama, se preparan 5 soluciones de galio de 25

mL cada una de concentraciones: 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 y 1 ppm de galio. A cada una de estas
soluciones se añaden 25 mL de la muestra (una solución de un residuo de concentración
desconocida que contiene galio). Les intensidades leídas fueron: 37, 46, 55, 63 i 82
respectivamente. Calculen la concentración de galio en la muestra.

Con las concentraciones de galio añadidadas y las intensidades de emisión (IE) calculamos la
recta de regresión que resulta ser:

IE = 24.5 + 107C

Para calcular la concentración de la muestra extrapolamos a 0 la intensidad de emisión:

0 = 24.5 + 107C => C = 0,229 ppm

0,229 ppm x (50 mL/25mL) = 0.458 ppm

c) Método del patrón interno

• Se preparan una serie de soluciones patrón de concentración conocida y creciente del

analito (CX).
• Se añade a todas estas soluciones y a la muestra una cantidad conocida y constante de
patrón interno (CS) (sustancia no presente en la muestra, pero que tiene un comportamiento
similar al analito).
• Se prepara un blanco en las mismas condiciones.
• Se determinan las señales analíticas de las soluciones patrón a dos longitudes de onda (la
máxima del analito (Señal X) y la máxima del patrón interno (Señal S). Si no se trata de un
método de emisión se miden las señales correspondientes qué da el instrumento (áreas de los
picos, absorbancia, etc.).
• Se determina la recta de regresión de Señal X/Señal S frente CX/CS (figura 12).

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• Se interpolan en la recta los valores de la muestra.

Figura 12. Curva de calibrado para el método del patrón interno.

Ejemplo: para valorar el contenido de potasio por fotometría de llama de una muestra se
aplica el método del patrón interno. Se prepararon una serie de soluciones de potasio, a cada
una de ellas y de la muestra se añade litio hasta una concentración final de 0.6 ppm de litio.
Se determina la intensidad de emisión a la longitud de onda característica del litio (232 nm) y
del potasio (670.8 nm) obteniéndose los siguientes resultados:

Tabla 5. Concentraciones de las soluciones patrón y señales analíticas correspondientes.

K+ (ppm) 3 5 7 9 X
IE λ232 ( Li ) 27.3 27.1 26.9 27.0 27.1
IE λ670.8 ( K ) 18.0 30.1 42.4 56.2 25.8

Calcular la concentración de potasio de la muestra problema.

En primer lugar calculamos los cocientes Concentración de potasio en cada matraz dividido por
concentración de litio (CK/CLi) y intensidad de emisión del potasio dividido por intensidad de
emisión del litio (IEK/IELi).
Tabla 6. Relación de concentraciones de las soluciones patrón y de las señales analíticas.
K+ (ppm) 3 5 7 9 x
IE λ232 ( Li ) 27.3 27.1 26.9 27.0 27.1
IE λ670.8 ( K ) 18.0 30.1 42.4 56.2 25.8
CK/CLi 3/0.6 =5 5/0.6=8.3 7/0.6=11.6 9/0.6=15 x/0.6
IEK/IELi 0.66 1.11 1.57 2.08 0.95

Calculamos la recta de regresión IEK/IELi frente en función de CK/CLi y se obtiene:

IEK/IELi = -0.062 + 0.95 CK/CLi ,

Sustituyendo las intensidades obtenidas con la muestra en la recta, tenemos:
0.95 = -0.062 + 0.95 x => x = 7.13
CK/0.6 = 7.13 => CK = 4.27 ppm

12
2. TÉCNICAS ESPECTROSCÓPICAS ATÓMICAS

En este apartado se revisan las técnicas espectroscópicas para el análisis de los elementos
(átomos) que forman parte de la muestra, independientemente del compuesto del que forman
parte. Por ello en todas las técnicas que se describan a continuación será necesaria una previa
atomización de la muestra. Se dividen en dos grupos en función del fenómeno que se
determina, emisión o absorción de luz.

2.1. Espectroscopia de absorción atómica

En la absorción atómica se mide la luz absorbida por un vapor gaseoso de átomos en estado
fundamental al pasar al estado excitado. La luz que absorbe la muestra procede de una fuente
de radiación electromagnética (lámpara de cátodo hueco) y es proporcional a la
concentración.

Instrumentación
La lámpara emite la luz que llega a los átomos de la muestra. La muestra se introduce en
forma líquida fuente de atomización mediante un nebulizador. Una vez allí la llama las
moléculas se rompen y se forman átomos libres en estado fundamental (atomización). Estos
átomos absorben parte de la luz que proviene de la lámpara. Mediante un monocromador se
selecciona la longitud de onda que nos interesa (normalmente la más adsorbida) y mediante
un detector fotométrico (célula fotoeléctrica, tubo fotomultiplicador, etc,..) se determina la
intensidad de luz (figura 13). El aparato compara la intensidad de luz que le llega en ausencia
de muestra (Io) y con muestra (I))

Lámpara Atomizador Monocromador Detector

Figura 13. Esquema de un espectrofotómetro de absorción atómica.

(http://ull.chemistry.uakron.edu/analytical/Atomic_spec/)

La lámpara de cátodo hueco está formada por el mismo elemento que se quiere analizar, de
manera que al ser excitada emite las mismas longitudes de onda que absorberá el analito. Con
ello se consigue una gran sensibilidad. El problema es que no se puede hacer un análisis
multielemental simultáneamente.
En la absorción atómica es necesario transformar el analito que se presenta en la muestra en
forma sólida, líquida o en disolución en átomos libres, gaseosos y en estado fundamental

13
(atomización). Existen dos sistemas de atomización en las técnicas de absorción atómica: I) la
llama y II) la electrotérmica.
I) Atomizadores de llama. La muestra introduce en la llama en forma de fina niebla formada
por pequeñas gotitas de disolución mediante un nebulizador. La energía térmica que atomiza
la muestra procede de la mezcla de un combustible (acetileno, gas natural o hidrogeno) y un
oxidante (aire, oxígeno u óxido de nitroso). Las llamas más utilizadas son las de acetileno-aire
(2400 oC) y la de acetileno-óxido nitroso (2.800 oC).
II) Atomizadores electrotérmicos: el calentamiento se realiza por resistencias eléctricas en vez
de la llama, se obtiene con ello un importante aumento de la sensibilidad. El más utilizado es
el horno de grafito. La ventaja de los atomizadores electrotérmicos frente a los de llama es
que los primeros permiten analizar directamente muestras sólidas, mientras que los de llama
solo utilizan muestras líquidas o soluciones. Otra ventaja de los atomizadores electrotérmicos
es que se puede realizar un programa de temperaturas adecuado a cada tipo de muestra y
analito que permite una mayor eficiencia en la atomización y por lo tanto una mayor
sensibilidad. Los inconvenientes de este tipo de atomizadores, frente a los de llama, es que la
repetibilidad suele ser peor y el tiempo de análisis mucho mayor.

Aplicaciones
Determinación cuantitativa de átomos en muestras líquidas o soluciones preparadas a partir de
muestras sólidas de acuerdo con los métodos descritos en el apartado anterior.

Ejemplo: en la determinación del cadmio en un suelo contaminado se procede de la siguiente

forma: un gramo de tierra se pulveriza y se ataca con ácido nítrico concentrado. La solución
obtenida se diluye posteriormente a un volumen final de 100 mL. De esta solución se toman 10
mL, se llevan a 50 mL con agua destilada en un matraz aforado y se hace la lectura de la
absorbancia de esta solución.
Para la realización de la curva de calibrado se opera de la siguiente forma: 2.104 gramos de
nitrato de cadmio exactamente pesados es levan a 1 litro con agua destilada. 10 mL de esta
solución se diluyen a 100 ml. De esta segunda solución se toman los siguientes volúmenes: 1
mL, 2 mL, 3 mL, 4 mL, 5 mL y 6 y se llevan a un volumen final de 50 mL. Se realizan las
medidas de absorbancia (A) de estas soluciones, frente a un blanco de agua destilada
obteniéndose los resultados de la tabla 7.

Tabla 7. Volumen de las soluciones patrón y absorbancia correspondiente.

mL 1 2 3 4 5 6
A 0.053 0.104 0.160 0.220 0.268 0.315

Calcular el % de cadmio en el suelo si la absorbancia de la solución de la muestra es de 0.179.

Primero determinaremos la curva de calibrado de este método:

- Concentración de la primera solución patrón

2.104g Cd(NO3)/1L x (1L/1000 mL)x (1000mg/1g) x (112.4 mg Cd/236.4 mg Cd(NO3)) = 1mg

Cd /mL

14
- 10 mL de esta solución se llevan a 100mL, por tanto:

(10 mL x (1mg Cd/mL)) / 100 mL = 0.1 mg/mL

- De esta última solución se toman 1, 2, 3,… mL y se llevan a 50 mL, las concentraciones de

estas soluciones son:

(1 mL/(0.1mg Cd/mL)) / 50 mL x (1000mL /1L) = 2 ppm

(2 mL/(0.1mg Cd/mL)) / 50 mL x (1000mL /1L) = 4 ppm
(3 mL/(0.1mg Cd/mL)) / 50 mL x (1000mL /1L) = 6 ppm
(4 mL/(0.1mg Cd/mL)) / 50 mL x (1000mL /1L) = 8 ppm
(5 mL/(0.1mg Cd/mL)) / 50 mL x (1000mL /1L) = 10 ppm
(6 mL/(0.1mg Cd/mL)) / 50 mL x (1000mL /1L) = 12 ppm

- Determinamos la recta de regresión de absorbancias frente a concentraciones:

Tabla 8. Concentraciones de las soluciones patrón y señales analíticas correspondientes.

ppm Cd 2 4 6 8 10 12
A 0.053 0.104 0.160 0.220 0.268 0.315

A = 4.67x10-4 + 0.027 C

- Ahora sustituimos la absorbancia de la disolución de la muestra en la ecuación de la recta y

obtenemos:

0.179 = 4.67x10-4 + 0.027 C => C = 6.63 ppm Cd

- Deshacemos las diluciones realizadas para determinar la concentración en la muestra inicial:

6.63 ppm Cd = 6.63 mg Cd/ 1L solución x (1 L/1000 mL) x (50 mL/10 ml) x (100 mL) x (1 g/
1000 mg ) /1 g de suelo) 100 = 0.33%

2.2. Espectroscopia de emisión atómica

En las técnicas de espectroscopia de emisión atómica se determina la radiación electromagnética

(REM) característica emitida por átomos libres o iones excitados térmica o eléctricamente al
volver a su estado fundamental. Si la REM emitida por los átomos se dispersa y se registra en
una placa, película fotográfica o mediante un detector fotoeléctrico, se obtiene un espectro de
líneas característico de cada elemento que nos permite identificarlo. Si se selecciona una línea
espectral (normalmente una radiación de resonancia) y se mide su intensidad se obtiene
información de tipo cuantitativo que nos permite determinar la concentración del elemento.

Instrumentación

En la figura 14 se muestra esquemáticamente los principales componentes de un

espectrofotómetro de emisión atómica.

Fuentes de atomización-excitación: la emisión atómica requiere un sistema que transforme el

analito que se encuentra en la muestra en átomos libres gaseosos y que además excite los átomos

15
libres formados. Lossistemas de atomización-excitación más utilizados son: I) las llamas, II) las
fuentes de plasma y III) descargas eléctricas.

Muestra

Figura 14. Esquema básico de un espectrofotómetro de emisión atómica. E: la fuente de atomización-excitación,

M: monocromador (selector de la longitud de onda, λ) y D: detector.

I) Fuentes de llamas: la atomización-excitación se realiza en una llama donde la muestra entra en

forma de finas gotas producidas en un nebulizador (figura 15a). La llama se produce por
combustión de un combustible (acetileno, butano, propano, etc.) y un oxidante (oxigeno, aire
N2O). Se alcanzan temperaturas de 2000-2800oC por lo que solo se pueden analizar elementos
fácilmente excitables. Es una técnica muy adecuada para el análisis de los alcalinos y alcalino-
térreos.

a) b)

Campo
magnético

Tubos de
cuarzo

Argón/muestra

Figura 15. Fuentes de atomización-excitación en emisión atómica: a) Llama y b) Plasma acoplado por inducción
(ICP). (http://ull.chemistry.uakron.edu/analytical/Atomic_spec/).

II) Fuentes de plasma: un plasma es un gas caliente, altamente ionizado y macroscópicamente

neutro. Los plasmas utilizados en emisión atómica están formados por un choro de argón que
forma cationes de argón y electrones. Las elevadas temperaturas del plasma (6000-10000oC) se
alcanzan por el calor de resistencia generado por el movimiento de los iones de argón y los
electrones que forman el plasma. Hay distintos sistemas de generar y mantener un plasma, pero
lo más común es mediante un campo magnético creado por una bobina de inducción (figura
15b). Estas temperaturas tan elevadas permiten una mejor atomización de la muestra y estados
excitados mucho más poblados, lo que proporciona una mayor sensibilidad y que se puedan
analizar prácticamente todos los elementos de la tabla periódica a concentraciones muy bajas y
con gran rapidez.

III) Atomización eléctrica: la atomización se realiza mediante una descarga eléctrica en un arco
eléctrico entre dos electrodos de grafito entre los que se encuentra la muestra. Se alcanzan

16
temperaturas de 4000-5000oC, lo que permite analizar un mayor número de elementos que con la
fotometría de llama. Se pueden analizar muestras líquida mediante un electrodo especial (figura
16b) o sólidas (figura 16a).

a) b)

Sólidos Líquidos

Figura 16. Fuentes de atomización eléctrica a) muestra sólida b) muestra líquida.

(http://ull.chemistry.uakron.edu/analytical/Atomic_spec/).

Aplicaciones

Cualitativas

El espectro de emisión de cada átomo presenta unas líneas características que permiten la
identificación del elemento (ver apartado 1). Las técnicas más apropiadas para la identificación
son las de plasma y las de atomización eléctrica ya que proporcionan espectros atómicos con
mayor número de líneas.

Cuantitativas

Las tres técnicas permiten la determinación cuantitativa los elementos presentes en una muestra
mediante los métodos descritos en el apartado 1. La fotometría de llama es la técnica que trabaja
a temperaturas más bajas, por lo que solo se pueden determinar elementos con bajo potencial de
ionización (alcalinos, alcalino-térreos y alguno térreos). La técnica de plasma permite
determinar más de 70 elementos de la tabla periódica a niveles de concentración muy bajos
(ppb).

3. TECNICAS ESPECTROSCÓPICAS MOLECULARES

Las técnicas que se describen en el presente apartado permiten el análisis de moléculas

basándose en la medida de la absorción o emisión de luz que se produce al interaccionar
determinadas radiaciones electromagnéticas con la muestra. En función del tipo de interacción
vamos a distinguir:

Absorción de REM:

- Ultravioleta –Visible (UV-Vis)

17
 - Infrarrojo (IR)

Emisión de REM

- Fluorescencia

3.1. Espectroscopia de absorción ultravioleta-visible (UV-VIS)

La espectroscopia UV-VIS es una técnica de análisis de compuestos en la que se mide la luz

absorbida por las moléculas al promocionar el electrón de un estado basal (fundamental) a un
estado electrónico excitado. La luz absorbida está dentro de la zona UV-VIS (180-800 nm).
No todas los compuestos se pueden analizar por espectroscopia UV-VIS, ya que solo
determinadas sustancias son capaces de absorber radiación entre (180-800 nm). Para que una
sustancia absorba en esta zona del espectro debe presentar grupos cromóforos en su molécula.
Un grupo cromóforo es un conjunto de átomos que contienen una o varias insaturaciones
(dobles o triples enlaces) que son responsables de las transiciones electrónicas cuya energía se
corresponde a la región ultravioleta y/o visible del espectro electromagnético.

Este tipo de espectroscopia sirve principalmente para el análisis cuantitativo de compuestos

aromáticos, carboxílicos, poliinsaturados e iones complejos.

Instrumentación

Fotómetro

Es el más sencillo de los instrumentos de absorción molecular UV-VIS es el fotómetro de

filtro esquematizado en la figura 17. El fotómetro dispone de una fuente de emisión de luz
visible (lámpara de wolframio). La longitud de onda que interesa se secciona mediante un filtro
de absorción o de interferencias. La radiación seleccionada es absorbida parcialmente por la
muestra que se encuentra en una cubeta. Después la luz transmitida se detecta mediante un
detector fotométrico.

Fuente de Filtro Muestra Detector Procesador

REM de señal

Blanco

Figura 17. Esquema de un fotómetro donde se muestran las partes principales del equipo.

Antes de iniciar el análisis de la muestra se debe calibrar el aparato a la longitud de onda

seleccionada. Se coloca un blanco (en el lugar de la muestra) y se ajusta la absorbancia a cero.
Posteriormente se realizan las lecturas de los patrones y finalmente la muestra. Con este aparato
se debe hacer un calibrado cada vez que se cambia de longitud de onda de trabajo y cambiar el
filtro utilizado, por ello no es posible realizar el espectro de absorción (barrido) completo de una
sustancia.

18
Espectrofotometro

Los instrumentos que utilizan selectores monocromáticos reciben el nombre de

espectrofotómetros (figura 18). El monocromador permite seleccionar cualquier longitud de onda
dentro de un intervalo amplio de longitudes de onda y variar la longitud de onda seleccionada
sucesivamente en el tiempo, lo que permite obtener el espectro de absorción completo de una
sustancia.

Detector

Lampara

Selector λ
Espejo de
sectores

Figura 18. Esquema de un espectrofotómetro de doble haz. http://ull.chemistry.uakron.edu/analytical.

Fuentes de radiación: para la zona visible se utiliza lámpara de wolframio que emite radiaciones
de longitudes comprendidas entre 300-900 nm. Para la zona UV se utilizan tubos de descarga de
gases (deuterio, vapor de mercurio, etc.) gases que al ser excitados mediante una descarga
eléctrica emiten radiación entre 160-400 nm. Los espectrofotómetros, normalmente, disponen de
las dos lámparas y se pueden intercambiar automáticamente en función de la longitud de onda a
la que se pretende trabajar

Detectores: tanto los fotómetros como los espectrofotómetros disponen de detectores

fotoeléctricos que transforman intensidad de REM en intensidad de corriente eléctrica. Los más
utilizados son las células fotoeléctricas, tubos fotomultiplicadores y los fotodiodos de silicio en
línea que permiten la detección simultánea de la intensidad de varias longitudes de onda.

Aplicaciones

Cuantitativas
La determinación de la concentración del analito por absorción ultravioleta o visible es uno de
los métodos cuantitativos más utilizados. Una de las razones es que muchos compuestos
inorgánicos y orgánicos tienen fuertes bandas de absorción en esta zona del espectro
electromagnético. Además, en el caso que los analitos no absorban en esta zona, se pueden hacer
reaccionar con un reactivo dando un producto absorbente. Por ejemplo el Fe3+ se puede hacer
reaccionar con la fenatrolina dando un compuesto coloreado que absorbe a 520 nm. La
aplicación cuantitativa consiste en hacer una curva de calibrado con patrones tal como se ha
explicado anteriormente apartado 1.

Si el método es muy preciso (muy repetitivo) y lineal en un amplio rango de longitudes de onda,
no es necesario realizar la curva de calibrado cada vez que se analiza una muestra. Basta con
analizar un solo patrón y la muestra.

19
Cualitativas

La espectrofotometria UV-VIS no es en si misma una técnica de identificación. Es decir con el

espectro de absorción UV-VIS completo de una sustancia es difícil llegar a identificarla. Sin
embargo, la presencia de determinadas bandas de absorción a determinadas longitudes de onda
nos puede indicar la presencia de determinados grupos funcionales y nos pueden orientar sobre la
posible identidad de la muestra (figura 19).
El estudio del espectro completo del espectro de una sustancia también permite realizar un
control de pureza, ya que debe ser siempre el mismo y no aparecer en él bandas extrañas.

Figura 19. Espectros de absorción UV-Visible de algunos compuestos orgánicos.

3.2. Espectroscopia de absorción infrarroja

La radiación infrarroja es de menor energía que la ultravioleta y que la visible y no es capaz

de producir transiciones electrónicas en las moléculas. Sin embargo, puede provocar cambios
en los estados de vibración de éstas. La espectroscopia infrarroja es una técnica en la que se
mide la longitud de onda e intensidad de la absorción de luz media infrarroja de una muestra.
La longitud de onda de las bandas de absorción infrarroja es característica de determinados
enlaces químicos por ello la principal aplicación de la espectroscopia infrarroja es la
identificación de moléculas orgánicas y complejos órgano-metálicos. La alta selectividad del
método hace posible la estimación de un analito en una matriz compleja. Este método implica

20
el análisis de los movimientos de torsión, rotatorios y de vibración de los átomos en una
molécula.

La espectroscopia infrarroja es una técnica empleada principalmente en la elucidación de

estructuras moleculares, aunque también se emplea con fines cuantitativos.

Instrumentación

Un espectrómetro infrarrojo consta de una fuente de emisión que emite luz infrarroja. Esta luz
pasa través de la muestra, la cuál, en función de los grupos funcionales que presenta, absorbe
determinadas longitudes de onda para hacer vibrar sus enlaces. Mediante un monocromador
se va variando la longitud de onda selecciona y finalmente, mediante un detector se registra la
intensidad de la luz después de haber atravesado la muestra (figura 20). El registro produce un
espectro con el trazado de la cantidad de luz transmitida en el eje vertical comparado con la
longitud de onda de la radiación infrarroja en el eje horizontal (figura 22). En el espectro
infrarrojo los picos de absorción se dirigen hacia abajo porque el eje vertical es la
transmitanca porcentual de la radiación a través de la muestra. La absorción de radiación
disminuye el valor de transmitancia porcentual. Debido a que los enlaces en una molécula
orgánica interactúan con radiación infrarroja, el espectro IR brinda una considerable cantidad
de datos estructurales.

Los instrumentos para medir la absorción infrarroja requieren una fuente de radiación
infrarroja continua y un transductor infrarrojo sensible, o detector.

Detector
Fuente de REM Monocromador

Figura 20. Esquema de un espectrofotómetro IR (MP: muestra problema. R: rendijas, Det: detector, mp:
amplificador, Reg. Registrador).

Fuentes de radiación: las fuentes infrarrojas consisten en un sólido inerte el cual es

eléctricamente calentado a temperaturas entre 1500 y 2200 K. El material calentado emitirá
asír adiación infrarroja.

Emisor de Nernst: el emisor de Nernst está construido con óxidos de tierras raras en forma de
cilindro hueco.

La fuente Globar: un globar es una varilla de carburo de silicona (5 mm de diámetro, 50 mm

de largo) la cual es calentada eléctricamente a 1500 K.

El láser de dióxido de carbono: el láser sintonizable de dióxido de carbono es una fuente

infrarroja para monitorear algunos contaminantes atmosféricos y para determinar las especies
de absorción en soluciones acuosas.

Detectores: estos pueden clasificarse en tres categorías: térmicos, piroeléctricos y

fotoconductores.

21
Detectores térmicos: los detectores térmicos pueden usarse con una variedad de longitudes de
onda y funcionan a temperatura ambiente. Sus principales desventajas son tiempo de
respuesta corto y sensibilidad más baja comparada con otros tipos de detectores. Los más
utilizados son los Termopares y Bolómetro.

Detectores piroeléctricos: los detectores piroeléctricos constan de un material piroeléctrico el

cual es aislante con propiedades térmicas y eléctricas. El material más común para detectores
piroeléctricos es el trisulfato de glicina.

Fotoconductores: los detectores fotoconductivos son los detectores más sensibles. Se basan
en las interacciones entre los fotones y el semiconductor. El detector consiste en una película
delgada de un material semiconductor como sulfuro de plomo, mercurio, telurio de cadmio o
antimoniuro de indium depositado en una superficie de vidrio no conductiva y sellada para
proteger al semiconductor de la atmósfera.

Aplicaciones

Cualitativa
La absorción de luz IR provoca vibraciones de los enlaces de una molécula. Cada enlace vibra
a una frecuencia distinta. Por tanto es posible relacionar la presencia de ciertas bandas de
absorción IR con la presencia de determinados grupos funcionales en una molécula.
Ejemplo:

• 3700 - 2500 cm-1: X-H tensión (X = C, N, O, S)

• 2300 - 2000 cm-1: C X tensión (X = C or N)
• 1900 - 1500 cm-1: C X tensión (X = C, N, O)

En la figura 21 se muestran algunos los grupos funcionales y las bandas de absorción al IR

correspondientes

Figura 21. Algunos grupos funcionales y sus bandas de absorción al IR.

(http://chipo.chem.uic.edu/web1/ocol/spec/IRTable.htm)

Ejemplo: un compuesto de fórmula empírica C5H10O presenta el siguiente espectro de

22
absorción infrarrojo (figura 22). Intentar elucidar que sustancia se trata

Figura 22. Espectro de absorción IR http://chipo.chem.uic.edu/web1/ocol/spec/IRTable.htm)

De acuerdo con la fórmula empírica, se trata de un compuesto que tiene un solo átomo de
oxígeno, por tanto puede ser un alcohol, aldehído, cetona o éter. La interpretación del espectro
revela que:

- La ausencia de una banda ancha a 3400 cm-1, (banda característica de la vibración del enlace
O-H) indica que no se trata de un alcohol
- La ausencia de bandas a aproximadamente 3090-3100 cm-1 indica que no hay insaturaciones
- La banda 1, 2900 cm-1 corresponde a la vibración del enlace C-H de grupos saturados (metil,
metileno)
- La banda 2, 1720 cm-1 es una banda intensa característica del grupo carboxilo ( C=O)

En base a las deducciones anteriores, la fórmula propuesta: CH3-CH2-CO-CH2-CH3 (3-

pentanona o dietilcetona)

Ejemplo: en la figura 23 se muestra el espectro de absorción IR de un compuesto orgánico de

fórmula empírica C7H8O. Trata de elucidar el compuesto.

Figura 23. Espectro de absorción (http://chipo.chem.uic.edu/web1/ocol/spec/IRTable.htm)

De acuerdo con la fórmula empírica, se trata de un compuesto que tiene un solo átomo de
oxígeno, por tanto puede ser un alcohol, aldehído, cetona o éter. La interpretación del espectro

23
revela que:

La banda 1, entre 3400-3200 cm-1, se trata de una banda ancha e intensa correspondiente a la
vibración del enlace OH.
La banda 2 a 3100 cm-1, es una banda delgada y débil que sugiere la vibración del enlace C-
H de una insaturación ((C=C-H).
La banda de 2900 cm-1, poco intensa, correspondiente a la vibración C-H, de un grupo
saturado (metileno o metilo).
Las bandas entre 1450-1500 cm-1, de moderada intensidad, sugieren la presencia de dobles
enlaces carbono –carbono de un grupo aromático.

La estructura propuesta es la que se muestra en la figura 24:

Figura 24. Estructura del alcohol bencílico (http://chipo.chem.uic.edu/web1/ocol/spec/IRTable.htm)

3.3. Fluorimetría

La fluorimetría es una técnica espectroscópica de análisis en la que se mide la radiación

emitida por moléculas que han sido excitadas previamente mediante una radiación
electromagnética. Al incidir radiaciones electromagnéticas de longitud de onda adecuada
sobre algunas moléculas orgánicas se puede producir una transición desde el estado
electrónico fundamental hasta un estado electrónico excitado. Los estados excitados son
inestables; por tanto, existe en las moléculas una tendencia a retornar al estado electrónico
fundamental, emitiendo la energía que tienen en exceso en forma de REM de longitud de
onda más larga que la absorbida (dentro del visible).

Instrumentación

Los distintos componentes de los instrumentos para la medida de la fluorescencia son

similares a los que se encuentran en los fotómetros o espectrofotómetros ultravioleta/ visible.
Se dispone de una fuente de radiación electromagnética que excita la muestra, un
monocromador que selecciona la longitud de onda que interesa. Existe un segundo
monocromador que dispersa y selecciona la luz emitida por la muestra al volver al estado
fundamental. Los espectrofluorímetros disponen de dos detectores uno mide la luz absorbida
y otro la luz emitida (figura 25).

Fuentes de REM: lámparas, láseres

Los factores primarios a considerar cuando se selecciona una fuente de radiación para
instrumentación de fotoluminiscencia son la intensidad de la lámpara, la distribución de
longitudes de onda de la radiación que la fuente emite y su estabilidad. De interés particular
es la dependencia lineal de la señal luminiscente con la potencia de la radiación de excitación.
En consecuencia, la sensibilidad aumenta con la potencia de la fuente. Los
espectrofluorómetros de barrido requieren fuentes de radiación que emitan continuamente
sobre un amplio intervalo espectral. Los fluorómetros de filtro o espectrofluorómetros que se

24
usan específicamente para mediciones analíticas a longitudes de onda fijas pueden usar
fuentes espectrales de líneas atómicas normalmente más intensas.

Figura 25. Esquema de un fluorímetro. http://ull.chemistry.uakron.edu/analytical

Lámparas de arco de alta presión de xenón emite de los 300 a los 1300 nm. Varias líneas de
emisión fuerte se encuentran entre 800 y 1100 nm.

Lámparas de vapor de mercurio de baja presión son más frecuentemente utilizadas en los
fluorómetros de filtro. Las líneas de emisión discontinuas que salen de la lámpara de mercurio
muestran una sensibilidad considerable para un material cuyo espectro de excitación coincide
con una línea de emisión de mercurio, pero la sensibilidad es menor para un compuesto que
sea más fuertemente fluorescente, el cual se excita más eficientemente con otra longitud de
onda de excitación que no se encuentra presente a la salida de la lámpara de mercurio.

Láser sintonizables de colorante que utilizan, como sistema de bombeo, un láser de nitrógeno
pulsante o un láser de Nd: YAG. Las fuentes de láser ofrecen importantes ventajas en
determinados casos: por ejemplo, (1) cuando las muestras son muy pequeñas como en
cromatografía con microcolumnas y en electroforesis capilar donde la cantidad de muestra es
de l µL o menor; (2) en los sensores de control remoto, como en la detección fluorimétrica de
radicales hidroxilo en la atmósfera o de clorofila en seres vivos acuáticos, donde la naturaleza
colimada de los haces de láser es vital; o (3) cuando se requiere una radiación de excitación
altamente monocromática para minimizar los efectos de las interferencias fluorescentes.

Cubetas portamuestras: para medidas de fluorescencia se utilizan tanto cubetas cilíndricas

como rectangulares, fabricadas con vidrio o con sílice.

Detectores

La señal de fluorescencia típica es de baja intensidad, por ello, para su medida se necesitan
ganancias de amplificador elevadas. Los tubos fotomultiplicadores son los detectores más
utilizados en instrumentos de fluorescencia sensibles. También se han propuesto, para los
espectrofluorímetros, los detectores de diodos en serie y de transferencia de carga.

Aplicaciones

25
Análisis cuantitativo de especies químicas fluorescentes. No todas las sustancias químicas son
fluorescentes. Existe una relación entre estructura química y fluorescencia. Normalmente son
fluorescentes las siguientes sustancias:

Moléculas que contienen anillos aromáticos (benceno, tolueno y derivados, fluoreno,

bifenilos,..).

Algunos compuestos carbonílicos.

Compuestos orgánicos con dobles enlaces conjugados.

Compuestos orgánicos con heterociclos( piridina, furano, tiofeno, pirrol,..).

La intensidad de la radiación fluorescente (F) es proporcional a la potencia de la radiación

incidente y a la concentración de la disolución. Si la potencia de la fuente se mantiene
constante, tenemos:

F = KC (6)

dónde K es la constante y C es la concentración de la muestra.

Por tanto existe una relación lineal entre concentración de la muestra y intensidad fluorescente
lo que permite cuantificar la muestra mediante la elaboración de una curva de calibrado con
patrones (ver apartado 1)

Los métodos de fluorescencia son de uno a tres órdenes de magnitud más sensibles que los
métodos basados en absorción (UV-Vis e IR) por tanto permite determinar concentraciones
mucho más bajas.

4. CROMATOGRAFIA

La cromatografía es un método físico de separación en el cual los componentes a separar se

distribuyen entre dos fases, una de las cuales constituye la fase estacionaria, de gran área
superficial, y la otra es un fluido (fase móvil) que pasa a través o a lo largo de la fase
estacionaria.

La muestra se introduce en la fase móvil y sus componentes se distribuyen entre la fase

estacionaria y la móvil. Los componentes de la mezcla a separar invierten un tiempo diferente
en recorrer cada una de las fases la columna en la que se encuentra la fase estacionaria, con lo
que se produce la separación. Si un componente está la mayor parte del tiempo en la fase
móvil el producto se mueve rápidamente, mientras que si se encuentra la mayor parte en la
fase estacionaria, el producto queda retenido y su salida es mucho más lenta (figura 26).

La fase estacionaria puede ser un sólido o un líquido dispuesto sobre un sólido, que actúa
como soporte, de gran área superficial. La fase móvil es un fluido (puede ser gas, líquido o
fluido supercrítico) que se usa como portador de la mezcla.

26
Figura 26. Esquema del proceso de elución cromatográfica.

En función de la naturaleza de la fase estacionaria y de la fase móvil, los métodos

cromatográficos se pueden clasificar en:

Tabla 9. Tipos de cromatrografia

Tipo Fase estacionaria Fase móvil

Líquido-sólido Sólido inerte como gel de sílice o alúmina Disolventes
Intercambio iónico Resina cambiadora Soluciones acuosas
Líquido-líquido Líquido adsorbido en un soporte sólido Líquido
Gas-líquido Película de líquido adsorbida sobre un Gas
soporte sólido

La cromatografía líquida la podemos diferenciar en cuatro grupos:

• Cromatografía de reparto: separa los solutos basándose en la solubilidad relativa en

dos líquidos distintos.
• Cromatografía de adsorción: se basa en la adsorción superficial sobre la fase
estacionaria.
• Cromatografía de exclusión: separa solutos según el peso molecular.
• Cromatografía de intercambio iónico: separa solutos según la carga iónica.

Cromatografía de reparto: la cromatografía de reparto o líquido-líquido, se basa en las

solubilidad de los analitos en dos líquidos uno es la fase móvil y el otro la fase estacionaria
(figura 27). Las sustancias más solubles en la fase estacionaria avanzan más lentamente por la
columna, mientras que los más solubles en la fase móvil lo hacen más rápidamente eluyendo
primero. Normalmente, el líquido que actúa como fase móvil es un líquido polimérico de
elevada viscosidad que esta adherido a un sólido que actúa de soporte inerte. En general los
soportes se preparan con sílice rígida o composiciones donde la sílice es el elemento básico.
Estos sólidos están formados por partículas mecánicamente resistentes, porosas y uniformes.

27
 Fase móvil Fase estacionaria

Líquido 1 Líquido 2

Figura 27. Esquema donde se muestra la cromatografía de reparto.

Cromatografía de adsorción: en la cromatografía de adsorción o líquido-sólido la fase

estacionaria es un sólido que interactúa con los analitos de la mezcla que se pretende separar
por fuerzas de van der Waals (figura 28). Las fases que más se utilizan son la sílice y la
alúmina. Es adecuada para compuestos no polares con masas moleculares inferiores a 5000.
En general la cromatografía Líquido-Sólido es más adecuada para muestras que son solubles
en disolventes no polares y por ello tienen solubilidad limitada en soluciones acuosas. En este
tipo de cromatografía también se pueden separar compuestos con diferentes grupos
funcionales. Una característica particular de este método es su capacidad para diferenciar
compuestos isómeros en mezclas.

Fase móvil Fase estacionaria

Líquido Sólido

Figura 28. Esquema donde se muestra la cromatografía de adsorción.

Cromatografía de exclusión molecular o tamiz molecular: la cromatografía de exclusión,

también llamada de filtración en gel o cromatografía de permeación en gel, se basa en la
diferencia de penetración de las moléculas en los poros de la fase estacionaria en función del
tamaño de la molécula (figura 29). Este tipo de separación por tamaño difiere de las demás
técnicas de cromatografía en que no existen interacciones físicas o químicas entre el analito y
la fase estacionaria. La fase fija está formada por partículas poliméricas o de sílice que
contienen una red uniforme de poros por los que pueden penetrar las moléculas de pequeño
tamaño. Las moléculas de tamaño grande se excluyen totalmente y son eluidas en primer
lugar, mientras que las de pequeño tamaño tienen acceso a todo los caminos del interior de las
partículas de fase estacionaria y son las últimas que se eluyen. Las moléculas se eluyen por su
tamaño decreciente. En resumen los factores que determinan la separación de las moléculas
son el tamaño del poro, el tamaño de la partícula y el flujo de elución.

28
Figura 29. Cromatografía de exclusión molecular (http://www.ub.es/biocel/wbc/images/inmunocitoquimica-
s3/cromatografia3.jpg).

Cromatografía de intercambio iónico: la cromatografía de intercambio iónico está basada en

la atracción entre iones del soluto y puntos cargados que existen en la fase estacionaria (figura
30). En el caso de intercambiadores aniónicos, grupos cargados positivamente en la fase
estacionaria atraen aniones del soluto. Los intercambiadores catiónicos contienen puntos
cargados negativamente que atraen cationes del soluto. Los intercambiadores iónicos se
clasifican en ácidos o básicos, fuertes o débiles. Las resinas ácidas fuertes siguen ionizadas
incluso en disoluciones muy ácidas, en cambio las resinas ácidas débiles se protonan a un pH
próximo a 4 y pierden su capacidad de intercambio catiónico. Los grupos muy básicos de
amonio cuaternario siguen siendo catiónicos a cualquier valor de pH. Los básicos débiles de
amonio terciario se desprotonan en disoluciones moderadamente básicas y pierden entonces
su capacidad.

29
Figura 30. Cromatografía de intercambio iónico (http://www.ub.es/biocel/wbc/images/inmunocitoquimica-
s3/cromatografia3.jpg).

4.1. Cromatografía de gases

Es un tipo de cromatografia en el que la fase estacionaria es un líquido soportado sobre un

sólido inerte y la fase móvil es un gas.

La muestra es transportada por una corriente de gas a través de una columna empacada con un
sólido o tal vez recubierta con una película de un líquido. Debido a su simplicidad,
sensibilidad y efectividad para separar los componentes de mezclas, la cromatografía de gas
es una de las herramientas más importantes en química. Es ampliamente usada para análisis
cuantitativos y cualitativos de mezclas de sustancias orgánicas volátiles y térmicamente
estables.

Instrumentación

En la figura 31 se muestra un esquema de un cromatografo de gases. Los componentes

principales de este instrumento son:

• Bombonas de gas portador

• Inyector
• Columna cromatográfica
• Detector

30
Figura 31. Esquema de un comatógrafo de gases.
(http://www.shu.ac.uk/schools/sci/chem/tutorials/chrom/gaschrm.htm)

Columna: es el lugar donde se produce la separación de los componentes de la muestra. Los

materiales con los cuales generalmente se pueden elaborar las columnas son: cobre, aluminio,
acero inoxidable, vidrio ó teflón.

El relleno puede ser un sólido, ó un líquido recubriendo un sólido. Podemos clasificar las
columnas según el propósito del proceso cromátografico:

• Empacadas
o Analítica
o Preparativas
• Capilares
o W.C.O.T. (Wall Coated Open Tubular)
o S.C.O.T. (Support Coated Open Tubular)

Factores que afectan la eficiencia de una columna cromatrográfica

• Longitud de la Columna
• Diámetro de la Columna (1/4", 1/8", 1/16" de diámetro externo)
• Tamaño de las partículas del relleno
• Naturaleza de las fases
• Cantidad de fase estacionaria
• Temperatura de la columna
• Velocidad del gas portador
• Cantidad de muestra inyectada
• Material del cual está elaborada la columna
• Enrollado de la columna

Fase estacionaria: la fase estacionaria suele ser un líquido polimérico de alta viscosidad y
gran estabilidad térmica (polisiloxanos (apolares), polietilenglicoles (polares). Para realizar
una buena separación cromatográfica es conveniente utilizar una fase estacionaria de
polaridad similar a la de la mezcla que se pretende separar. Es decir, si la mezcla tiene
carácter polar usaremos una columna polar y vice-versa.

Gas portador: el gas portador cumple básicamente dos propósitos: transportar los
componentes de la muestra, y crear una matriz adecuada para el detector.

31
Un gas portador debe reunir ciertas condiciones:

• Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra como con la fase
estacionaria)
• Debe ser capaz de minimizar la difusión gaseosa
• Fácilmente disponible y puro
• Económico
• Adecuado al detector a utilizar

Los más utilizados son el nitrógeno, helio e hidrógeno

Detectores: un detector es un transductor que revela la presencia de las sustancias eluídas a la

salida de la columna cromatográfica transformando alguna propiedad físico-química de éstas
en una señal eléctrica cuya magnitud es proporcional a la concentración de la sustancia. En
cromatografía un detector funciona comparando una propiedad física entre el gas portador
puro y el mismo gas portador llevando cada uno de los componentes que previamente se han
separado en la columna, esta acción se traduce en una señal tipo eléctrica, que posteriormente
se amplificará mediante un registrador gráfico ó integrador permitiendo indicar el momento
que salen de la columna los componentes.

Características de los detectores

• Sensibilidad: medida de la efectividad de un detector para convertir la muestra en una

señal eléctrica medible.
• Linealidad: rango de masa ó concentración de muestra sobre el cual el detector
mantiene una sensibilidad constante sin una desviación arbitraria. El significado práctico de la
linealidad del detector es el que le indica al analista la concentración para la cual el detector es
confiable. Hay dos límites en la curva de linealidad:
o El límite de concentración inferior, que es dado por el límite de detección y,
o El límite superior, definido por un porcentaje de desviación arbitrario de la
curva de linealidad, normalmente se toma un 5% de desvisción.
• Rango dinámico lineal: rango sobre el cual la sensibilidad del detector es constante.
• Ruido: es cuantificado por el promedio de la amplitud pico-pico de la señal. El
significado de conocer el nivel de ruido de un detector es un factor determinante. en la
determinación de la cantidad mínima detectable y el límite inferior del rango lineal.
• Límite de detección: está definido como la mínima cantidad de sustancia que puede
producir una señal que sea el doble del nivel de ruido.
• Corriente de fondo: señal constante de salida generada por el proceso en el que un
detector está operativo sin que alguna sustancia pasa a través de él. Esta señal es muy
importante, ya que permite diagnosticar el buen o mal funcionamiento del detector.

Detectores más usados en cromatografía de gases

• Detector de conductividad térmica (catarómetro). Mide variación de la conductividad

térmica del gas portador ocasionada por la presencia de substancias eluídas. Es universal, es
decir, permite detectar todo tipo de sustancias (orgánicas e inorgánicas), sin embargo, su
sensibilidad es inferior a la del resto de detectores utilizados en CG
• Detector de ionización a la llama (FID). Basado en la medida de las variaciones de la
corriente que provoca la presencia iones. Estos iones se producen a partir de las sustancias

32
que eluyen a la salida de la columna al pasar por una llama de oxígeno-hidrógeno. Permite
determinar todo tipo de sustancias orgánicas.
• Detector de captura electrónica. Basado en la electronegatividad de las substancias
eluídas, y su habilidad para formar iones negativos por captura de electrones. Se trata de un
detector selectivo que solo permite detectar sustancias capaces de captar electrones, pero para
estas sustancias es de una elevada sensibilidad (compuestos clorados, fluorados, quinonas)
• Detector de espectrometría de masas.
• Detector de fotometría a la llama. Basada en la medida de la intensidad de la emisión
molecular de la fluorescencia de heteroátomos en las moléculas orgánicas.
• Detector de fotoionización.
• Detector de nitrogeno-fósforo.

En la tabla 10 se comparan algunas características de estos detectores

Tabla 10. Comparación de algunos detectores de cromatografía de gases.

Detector Selectividad Límite de Rango de

Detección linealidad
Ionización de llama Compuestos orgánicos 100 pg 107
(FID)
Conductividad Universal 1 ng 107
térmica (TCD)
Captura electrónica Haluros, nitratos, nitrilos, peroxidos, anhidridos, 50 fg 105
(ECD) organometálicos, quinonas
Nitrógeno-fósforo Compuestos con nitrógeno o fósforo 10 pg 106
Fotometria de llama sulfuros, fósforo, boro, arsénico, germanio, selenio, cromo 100 pg 103
(FPD)
Fotoionización (PID) Alifaticos, aromaticos, cetones, esteres, aldehidos, aminas, 2 pg 107
heterociclos, organosulfurados, algunos organometálicos

Aplicaciones

L a cromatografía de gases permite separar mezclas e identificar y cuantificar los distintos

componentes separados. A continuación se explican los métodos más utilizados de
identificación y cuantificación. Estos métodos también son válidos para la cromatografía
líquida de alta eficacia (HPLC) que veremos en el apartado siguiente y otros tipos de
cromatografía.

Cromatograma: identificación y cuantificación

Después del proceso cromatográfico y si éste ha sido correcto cada sustancia presente
inicialmente en la muestra sale en forma de pico cromatográfico separada del resto de
sustancias, es decir del resto de picos (figura 32).

33
 TR1

Figura 32. Separación de cationes mono y divalentes por HPLC con columna de intercambio iónico. TR es el
tiempo de retención.

El tiempo al que sale cada pico cromatográfico permite identificar la sustancia, mientras que
el área de cada pico es proporcional a la concentración de sustancia.

Cualitativa

Los procedimientos para identificación de los picos cromatográficos podemos dividirlos en

dos categorías:

a) Por tiempo de retención (TR).

Se compara el tiempo de retención (tiempo transcurrido entre la inyección de la muestra y el

máximo del pico) del pico de la muestra problema con el de un patrón inyectado en las
mismas condiciones (figura 32).

b) Por tiempos de retención relativo (TRRX) a un patrón interno según:

TRRX = TRX/TRPI (6)

Donde, TRX = tiempo de retención del analito (X) y TRPI = tiempo de retención del patrón
interno

c) Por Índices de Retención de Kovats

Los tiempos de retención pueden variar en función de la columna cromatográfica utilizada,

condiciones cromatográficas, etc. Por ello es prácticamente imposible identificar un
compuesto por comparación con tiempos de retención descritos en la bibliografía. Sin
embargo, existen unos índices muy reproducibles que permiten identificar compuestos en
base a su tiempo de retención respecto del tiempo de retención de una serie homóloga de
compuestos obtenidos en las mismas condiciones. Como sustancias de referencia se suelen
utilizar una serie homóloga de olefinas debido a su gran estabilidad, fácil disponibilidad. Se

34
compara el tiempo de retención del analito con el de los dos n-alcanos que eluyen más cerca
de él (de que eluye antes y el que eluye después).

El índice de Kovats para un compuesto “x”se calcula con la siguiente fórmula:

IK = 100n1 + 100 [(LogTRx -logTRn1)/(logTRn2 - logTRn1) (7)

Donde n1 es el alcano que eluye antes del compuesto x y n2 el que eluye después.

El valor del índice de Kovats de un compuesto solo depende de la fase estacionaria utilizada
y no de las condiciones cromatogáfica

d) Por espectrometría de masas

El acoplamiento de un cromatógrafo de gases a un especrometro de masas permite la

identificación de los compuestos (ver apartado 1.6.)

Análisis cualitativo

a) Normalización de Área

Este sistema de cuantificación presupone que el detector presenta la misma respuesta

(sensibilidad) para todos los componentes de la muestra. Esta suposición nunca es cierta del
todo pero se mantiene dentro de un error aceptable cuando se trata de compuestos de
volatilidad y estructura similar. El cálculo de la concentración de un compuesto “X” es:

% X = (área del pico X/suma área todos los picos)x100 (8)

b) Normalización de Área con Factores de Respuesta

Este sistema es como el anterior pero tiene en cuenta el factor de respuesta (FR, ver apartado
d) de cada compuesto

% X = (área del pico X x FRx/Σareai x FRi)x100 (9)

Ejemplo: se quiere determinar por el método de normalización interna la composición másica

de un residuo constituido por cuatro ésteres del ácido butanoico. Una disolución patrón de
estos cuatro ésteres (concentraciones conocidas) nos proporciona los siguientes valores de
respuesta relativos: 0.919, 0.913 y 1.06 para los butanoatos de metilo (BM), etilo (BE) y
propilo (BP) respecto del butanoato de butilo (BB), respectivamente. A partir de los datos
obtenidos de un cromatograma de muestra, determinar la composición de ésta (Tabla11).

% BM = (2340.1 x 0.919)/(2340.1 x 0.919) + (2359.0 x 0.913) + (4077.3 x 1.06) + (4320.7 x

1) x 100 = 16,6%

Operando de la misma forma, % BE = 16,6%, %BP = 33.4% y %BB = 33.4%

35
Tabla 11. Tiempos de retención (TR) y áreas de los analitos.

Numero de pico Tiempo e retención Área de los analitos

1 (BM) 2.54 2340.1
2 (BE) 3.47 2359.0
3 (BP) 5.57 4077.3
4 (BB) 7.34 4320.7

c) Estandarización Externa

Se inyecta una solución de patrones de concentración conocida y se determinan las áreas. Se

compara el área del analito (X) con el área del patrón de X , (P) según:

[X] = (Área X/Área P)[P] (10)

Ejemplo: se investiga la presencia de triclorobenceno en una muestra por cromatografía de

gases. Se prepara una solución patrón de 10 mg de triclorobenceno en 100 mL de
diclorometano. Se inyectan 5 µL de de patrón y 5µL de muestra. Los resultados son:

Área del patrón = 2000 unidades

Área de la muestra = 3830 unidades

[Triclorobenceno] = (3830/2000) x 100 mg/lL = 192.5 mg/L

d) Método del patrón interno

Es el método que proporciona mejores resultados. Se trata de añadir una sustancia (patrón
interno) a una concentración constante en todos los patrones y en las muestras antes del
análisis.

El patrón interno es una sustancia que debe reunir las siguientes condiciones:

- no debe estar originalmente en la muestra

- tener unas características físico-químicas similares al analito (volatilidad, estructura, etc…)

- ha de tener un pico cromatográfico bien resuelto que no interfiera con los picos de los
anlitos de la muestra

El cálculo de la concentración se realiza:

[X] = (Area X/Area PI) x [PI] x FRX (11)

Donde FRX es el factor de respuesta relativo de X respecto del patrón interno. El factor de
respuesta de un compuesto “X” respecto del patrón interno se calcula inyectando en el
cromatógrafo una solución de concentración conocida del analito y del patrón interno y
aplicando la fórmula:

36
FRX = ([X]/areaX)/([PI]/areaPI) (12)

Ejemplo: se analizan algunos compuestos orgánicos volátiles (COV) en agua residual de una
industria por cromatografía gaseosa. Se utilitza 2-metil-5-pentanol como patrón interno, que en
les condiciones cromatográficas utilizadas tiene un tiempos de retención de 39 ± 0.8.

Para identificar los compuestos se inyectan patrones de cada uno de los analitos por separado y
se determinan los tiempos de retención relativos al patrón interno que son los que figuran a la
tabla 12. También se han determinado los factores de respuesta relativos al patrón interno.

Tabla 12. Tiempos de retención relativos (TRR) y factores de respuesta (FRR) de los analitos.

Compuesto TRR FRR

Isobutanol 28 ± 0.5 0.99
1-propanol 22.5 ± 0.6 1.07
Acetato de propilo 11 ± 0.8 1.47
Acetato de etilo 15.5 ± 0.6 1.35
Alcohol isoamílico 49 ± 0.4 1.15
Metanol 13.5 ± 0.7 1.08
Acetaldehido 4.5 ± 0.2 1.18

A 5 mL de agua residual, exactamente medidos, se añaden 50µL de solución de patrón interno de

concentración 5µg/µL. Se inyectan 10 µL de la muestra y se obtiene el cromatograma adjunto
(figura 33). Calculen la concentración de cada sustancia en el agua problema.

Primero debemos identificar el pico correspondiente a cada una de las sustancias analizadas y
del patrón interno, posteriormente miramos las áreas correspondiente a los picos y hacemos
los cálculos correspondientes (Lo haremos con un solo compuesto, los otros se determinan de
la misma forma.

Por ejemplo, el pico de tiempo de retención 22.99 corresponde al propanol (22.5 ± 0.6) y el
pico 39.52 al patrón interno. Las áreas de estos picos son respectivamente 440360 y 1053600.
Así pues:

[1-propanol] = (áreapropanol/área P.I.) x [PI] x FRRpropanol

Debemos determinar la concentración del patrón interno en la muestra:

(50µL(5µg/1µL)) /5 mL = 50µg/mL = 50 ppm

[1-propanol] = (440360/1053600) x 50 x 1.07 = 22.36 ppm

37
Figura 33. Cromatograma correspondiente a la muestra de agua que se utiliza como problema.

4.2. Cromatografia líquida de alta eficacia (HPLC)

La HPLC es una técnica cromatográfica de reparto o adsorción en la que la muestra se

distribuye entre una fase móvil que es líquida y una fase estacionaria (sólido o líquido viscoso
dispuesto sobre un sólido inerte). Utiliza una presión muy elevada para forzar el paso del
disolvente por una columna que contiene partículas muy pequeñas y de elevada superficie
específica, consiguiendo así separaciones de gran resolución. Debido a estas presiones el
equipo para HPLC es robusto y costoso.

Instrumentación

Los componentes básicos de un equipo para HPLC (figura 34) son:

38
• Depósitos para la fase móvil (disolventes)
• Bomba para proporcionar presión a la fase móvil
• Inyector
• Columna cromatográfica
• Detectores

Válvula
mezcladora
Bomba
Registrador
Detector

Depósitos de
fase móvil

Figura 34. Componentes básicos de un sistema para HPLC (Casas et al., 1994).

Fases móviles
Los disolventes más usados en HPLC son agua, disoluciones tampón acuosas y disolventes
orgánicos como el metanol y acetonitrilo. Deben ser espectroscópicamente puros, exentos de
partículas sólidas y desgasificados, esto se lleva a cabo con un gas inerte muy poco soluble
como el helio. Los disolventes se mezclan en las proporciones adecuadas con una válvula
mezcladora. Se puede realizar todo el proceso de elusión con lamisca mezcla (elución
isocrática) o cambiar la composición de ésta (elución con gradiente)

Sistema de bombeo: debido al pequeño tamaño de las partículas de la fase estacionaria que se
encuentra en la columna cromatográfica existe una gran resistencia al paso de la fase móvil a
través de ésta, por ello es necesario el uso de una bomba que permita introducir la fase móvil
o disolvente a través de la columna.

Las bombas empleadas en HPLC son de tres tipos:

Bombas recíprocas o de vaivén: son las más utilizadas. Están formadas por una pequeña
cámara cilíndrica que se llena y luego se vacía por oscilación de un pistón de zafiro. El
bombeo produce un flujo pulsado que después debe amortiguarse. Sus principales ventajas
son que se consiguen presiones elevadas y se suministra un caudal constante, pudiéndose
adaptar a la técnica de elución con gradiente, debido a su pequeño volumen interno.

Bombas neumáticas o de presión constante: hacen uso de la presión de un gas aplicado al

recipiente conteniendo la fase móvil. Son sencillas, no provocan pulsaciones pero están
limitadas a presiones relativamente bajas.

39
Bombas de desplazamiento o tipo jeringa: consisten en una cámara equipada con un
mecanismo de tornillo. Suministran un flujo libre de pulsaciones pero con una capacidad
limitada a unos 250 ml.

Inyector: dispositivo con el que se realiza la inyección del soluto.

El método más simple es la utilización de una jeringa de alta presión con un diafragma
(“septum”) a la entrada de la columna. Está limitado a una presión máxima de operación de
1500 psi.

Las válvulas de inyección con bucles de volumen conocido, es el método más utilizado

Columna: es un cilindro de acero de 15-30 cm de longitud y luz interior 1-7 mm relleno de un

sólido de tamaño de partícula muy pequeña (< de 50 µ), sobre el que esta dispuesto la fase
estacionaria (liquido viscoso, resina de intercambio iónico, tamiz molecular, etc.). La columna
puede encontrarse en un horno que permite trabajar a distintas temperaturas

Detector: el papel del detector es indicar los momentos en los que eluyen los compuestos por
el extremo de la columna y proporcionar indicación cuantitativa y cualitativa de la presencia
de los mismos. El detector utilizado depende de la naturaleza de la muestra y deberá reunir
una serie de características como son, tener una sensibilidad elevada, buena estabilidad y
reproducibilidad. Amplio margen de respuesta lineal, insensible a cambios en la presión y la
temperatura.

- Los detectores basados en una propiedad del soluto que no la suele presentar la fase
móvil. Suelen ser muy selectivos y sensibles:

Detectores de absorbancia ultravioleta, son los más utilizados. Su fundamento es la

espectrofotometría de absorción de luz visible y ultravioleta de un componente a una
determinada longitud de onda (ver apartado 1.5.1). Los más potentes son los que utilizan un
montaje de fotodiodos para registrar el espectro completo de cada soluto que pasa por el
detector. Los datos de absorbancia se representan en función de la longitud de onda y del
tiempo.
Detectores de fluorescencia, son muy sensibles y selectivos, el principio de operación se basa
en la irradiación con la luz UV al componente de interés y la posterior medida de la luz
fluorescente emitida por éste (Apartado 1.5.3)

Detectores electroquímicos, ofrece ventajas debido a su especificidad, sensibilidad y amplia

aplicabilidad, especialmente para compuestos orgánicos. Responde a analitos que puedan
oxidarse o reducirse. Es el ejemplo de fenoles, aminas, peróxidos (pueden detectarse por
oxidación) y cetonas, aldehídos (detectados por reducción). Las técnicas electroquímicas más
utilizadas con esta finalidad son la amperometría, voltamperometría y culombimetría (ver
apartado 3).

- Los detectores basados en una propiedad de la disolución, responden a un conjunto amplio

de solutos, pero suelen ser poco sensibles :

Detectores de índice de refracción, está formado por una celda con dos compartimentos, en

40
uno se introduce el disolvente puro y en el otro la muestra, se hace pasar luz visible paralela.
Cuando entra en la celda soluto de distinto índice de refracción al disolvente el has se desvía y
varía la señal dada por la fotocélula (Harris, 2001). El principal inconveniente es que son muy
sensibles a los cambios de temperatura y no resultan apropiados para trabajar con la
modalidad de elusión con gradiente.

Detectores de conductividad, son los más utilizados cuando los solutos eluidos son iónicos,
como ácidos y bases, así como cationes y aniones inorgánicos después de su separación por
cromatografía de cambio iónico. Tienen elevada sensibilidad, baratos y de larga duración.

Aplicaciones

La cromatografía líquida de alta eficacia permite separar, identificar y cuantificar mezclas de

sustancias termolábiles y/o poco volátiles (pesticidas, fenoles, iones, etc.) que por tanto no se
pueden analizar de forma directa por cromatografía de gases. Sin embargo, la cromatografía
líquida de alta eficacia es una técnica menos sensible que la cromatografía de gases, debido a
que los detectores usados en HPLC no son tan sensibles como los de cromatografía gaseosa.
Los sistemas de identificación y cuantificación son los mismos que los utilizados en la
cromatografía gaseosa (ver apartado 2.2)

5. METODOS ELECTROQUIMICOS DE ANALISIS

Los métodos electroquímicos son un conjunto de técnicas en las que la señal analítica que se
mide es un potencial eléctrico, una corriente ecléctica o la carga en una celda electroquímica.
Dentro de estos métodos se pueden distinguir los que se explican a continuación.

5.1. Métodos potencioméricos

En la potenciometría se mide el potencial de una celda galvánica en condiciones estáticas en

la que uno de los electrodos es sensible a la actividad del analito. Se trata de un método
cuantitativo. Las mediciones potenciométricas se llevan a cabo con un potenciómetro para
determinar la diferencia de potencial entre el electrodo indicador (sensible al analito) y un
electrodo de referencia (de potencial constante y que no sufra cambios entre mediciones).
Debido a la estabilidad del electrodo de referencia, cualquier cambio en el potencial del
sistema se deberá a la contribución del otro electrodo, llamado electrodo indicador o de
trabajo. El potencial es directamente proporcional a la actividad del analito (actividad = γ x
concentración, siendo γ el coeficiente de actividad) del analito de acuerdo con la ecuación de
Nernst (Skoog et al., 2005).

E=Eo-(0.059/n) logQ (13)

donde Q es el cociente de la reacción, n el número de electrones intercambiables en la

reacción y Eo potencial estandar.

Potenciómetro

41
El potenciómetro, en su forma más simple, es una celda galvánica constituida por semiceldas
cada una de ellas con un electrodo sumergido en una disolución de iones, una de ellas es la
disolución del analito (electrodo indicador). Las semiceldas están unidas por un puente salino
(figura 35). El potencial medido viene dado por la siguiente ecuación:

E = (Eindicador - Ereferencia) + Eunión líquida (14)

Figura 35. Celda galvánica (Harvey, D, 2002. Química Analítica Moderna).

Electrodos de referencia

Son aquellos que miden el mismo potencial cualquiera que sea la naturaleza de la disolución
en que se introduzcan y por tanto dan una referencia a la medida del electrodo indicador. Los
electrodos de referencia más usados son:

-Calomelanos: es un electrodo de mercurio sumergido en una disolución saturada de cloruro

mercurioso (Hg2Cl2), llamada también sal de calomelanos y de KCl de concentración
conocida (a saturación). La semireacción te tiene lugar es:

Hg2Cl2(s)+ 2e- ↔ 2Hg0(l) + 2Cl-(aq) (15)

- Electrodo de plata/cloruro de plata: consiste en un electrodo de plata recubierto de cloruro de

plata (AgCl) sumergido en una disolución de cloruro de potasio (3,5M o a saturación)
saturada de AgCl. Semirreacción de reducción:

Ag+(aq) + 1e- ↔ Ago(s) (16)

- Electrodo normal de hidrogeno (ENH) Consiste en un electrodo de negro de platino

sumergido en una solución 1M de H+, por el que se burbujea H2 a 1 atm. Por convenio el
potencial de este electrodo a 25ºC es cero. La reacción redox implicada es:

2H+ + 2e- Æ H2 (g) (17)

42
Electrodos indicadores: un electrodo indicador es aquel que responde de forma rápida y
reproducible a los cambios de concentración del analito. Los electrodos indicadores pueden
ser metálicos o de membrana. A continuación se describen los más usuales:

a) Electrodos metálicos

1. Electrodos de primera especie: disponen de un electrodo metálico sumergido en la

disolución de su catión. El potencial depende de la actividad del catión según la ecuación de
Nernst. La reacción que se produce es:

Xn+(aq) + ne- = Xo(s) (18)

2. Electrodos de segunda especie: los metales no sólo sirven como electrodos indicadores
para sus propios cationes, también responden a la concentración de aniones que forman
precipitados poco solubles o complejos estables con esos cationes. El potencial depende de la
concentración del anión implicado en la sal insoluble o complejos formados. Ejemplos de este
tipo de electrodos son los electrodos de referencia de calomelanos y el de AgCl/Ag+ (Skoog et
al., 2005). En este último caso, el potencial de un electrodo de plata se relaciona de modo
reproducible con la actividad de iones cloruro en una disolución saturada de cloruro de plata.
Aquí la reacción del electrodo puede escribirse de la manera siguiente:

AgCl(s) + e- = Ag (s) + Cl – (ac) (19)

La expresión de Nernst para este proceso a 25oC es:

Eind = EoAgCl/Ag – 0.0592 log aCl- (13)

3. Electrodos de tercera especie: en este tipo de electrodos, el catión que deriva del electrodo
y otro catión forman una sal insoluble o complejo. El potencial de este electrodo depende del
segundo catión. Ej. electrodo de mercurio para la determinación de la concentración de calcio
en presencia de EDTA. (Harvey, 2002).

4. Indicadores metálicos redox: se denomina así a las celdas que consisten en un electrodo
metálico inerte (platino, oro, paladio, ...) que no participa en la reacción redox, sólo
intercambia electrones. El electrodo está sumergido en una disolución que contiene el par
redox que sufre la reacción. Ejemplos: electrodo Ce(IV)/Ce(III), electrodo de quinhidrona
(quinona/hidroquinona). (Skoog et al., 2005).

b) Electrodos de membrana: el elemento sensible del electrodo es una membrana

semipermeable. A ambos lados de la membrana se desarrolla una diferencia de potencial
debido a la asimetría que presentan en la actividad del ión, a la que la membrana
semipermeable es sensible. Dicha diferencia de potencial se evalúa por medio de 2 electrodos
de referencia, uno situado en el interior de la membrana y otro en el electrolito externo.
Conociendo la actividad del ión en la disolución interna, a partir de la diferencia de potencial
puede calcularse la actividad del ión en el medio externo. La ddp (diferencia de potencial) se
debe a que la membrana o bien alguna especie embebida en su matriz, interactúan

43
selectivamente con los iones del analito. Dentro de las celdas sensibles a iones se distinguen
varios tipos según la naturaleza de la membrana:

1. Electrodos de membrana cristalina: la membrana consiste en un cristal único (Ej. La F3

para el análisis del ión fluoruro) o en una membrana policristalina (Ej. Ag2S para el análisis
de S2- y Ag+). (Skoog et al., 2005).

2. Electrodos de membrana no cristalina.

a) Vidrio: ejemplo el electrodo de vidrio para determinación del pH y electrodos de silicato

selectivos para otros cationes. Se han diseñado electrodos de vidrio que permiten la medida
potenciométrica directa de K+, Na+, Rb+, Li+, NH4+, Cs+, Ag+. (Skoog et al., 2005).

b) Membrana líquida: consiste en una membrana líquida inmiscible con las soluciones con
que contacta. Existen electrodos de membrana líquida para la determinación directa de calcio,
magnesio, nitratos, perclorato, potasio,..). (Skoog et al., 2005).

Aplicaciones

a) Medidas potenciométricas directas

Permiten una determinación rápida de la concentración de gran número de cationes y de

aniones. También se pueden adaptar fácilmente al control continuo y automatizado de
diferentes procesos.

El protocolo de una determinación directa sigue el esquema básico de toda técnica analítica
instrumental: se preparan una serie de soluciones de concentración conocida del analito y la
solución de la muestra (ver curva de calibrado, figura 9). Se mide la diferencia de potencial de
cada una y se traza la curva de calibrado de ésta frente al logaritmo de la concentración.

Se pueden determinar de forma rápida y a niveles de algunas décimas de ppm diversos iones
como: nitratos, fluoruros, bromuros, calcio, cloruros, cianuros en suelos, residuos, aguas,
sedimentos, etc.

b) Titulaciones potenciométricas

Se determina el potencial del electrodo indicador en función del volumen de agente valorante
añadido. La determinación del punto de equivalencia se realiza representando la gráfica
potencial versus volumen de reactivo añadido. Se obtiene una curva con forma sigmoidal
cuyo punto de inflexión que se estima visualmente, coincide con el punto de equivalencia
(figura 36). Este punto se observa más claramente si se representa la primera derivada, es
decir, ∆E/∆V frente al volumen añadido. Se obtiene una curva cuyo valor máximo coincide
con el punto de equivalencia. También se puede representar la segunda derivada.

44
 a) b) c)

Figura 36. a) Curva de valoración potenciométrica, b) primera derivada, c) segunda derivada (Skoog et al.,
2005).

5.2. Métodos electrolíticos

A diferencia de la potenciometría que opera a corriente nula, otros métodos electroanalíticos

requieren una fuente de tensión externa. Se engloban dentro de los métodos electroquímicos,
en los que las reacciones que se producen no son espontáneas y por ello se debe aplicar una
energía extra (potencial ó intensidad) para que tenga lugar el proceso redox. De este modo se
pueden analizar todo tipo de iones o compuestos orgánicos que puedan ser electro-
químicamente reducidos u oxidados (Skoog et al., 2005).

Entre los métodos electrolíticos podemos distinguir:

Técnicas voltamperométricas: al sistema se le aplica un potencial extra conocido y la señal

analítica es la intensidad resultante (Harris 2001).

Técnicas galvanostáticas: se aplica al sistema una intensidad determinada, y se mide el

potencial (Harris, 2001).

Técnicas voltamperometricas

Consisten en aplicar una diferencia de potencial variable entre un electrodo de referencia

(Ag/AgCl, KCl (3M)) y un electrodo indicador (electrodo de trabajo), en contacto con el cual
se va a producir una reacción del tipo:

Oxidante + ne- Æ Reductor

En la práctica, y con el fin de que ninguna corriente transite por el electrodo de referencia, se
utiliza un tercer electrodo (electrodo auxiliar de Pt ó Carbono Vitrificado) (figura 37). Se
obtiene una curva intensidad-potencial, I = f(E), o voltamperograma. La curva resultante
permite a la vez identificar la especie química y su concentración.

45
 Electrodo auxiliar Electrodo de trabajo
(gotas de mercurio)

Electrodo de referencia
Gas inerte (N2)

Muestra

Figura 37. Esquema de una célula voltamperométrica (http://ull.chemistry.uakron.edu/analytical/Voltammetry/).

Las distintas técnicas voltamperométricas que se utilizan, se caracterizan por la forma de

aplicar el potencial al electrodo de trabajo y por el material usado en su construcción.

a) Voltamperometría de barrido lineal

Esta técnica consiste en aplicar un barrido lineal de potencial a velocidades bajas < 10 mV/s a
un electrodo de gotas de mercurio, obteniéndose un polarograma característico del sistema
analizado. La representación de i frente al voltaje tiene forma sigmoidal llamada onda
polarográfica. Son características de ella:

• Intensidad límite (Id): que es la intensidad que se alcanza al final de la curva polarográfica,
cuando la velocidad de transporte del reactivo hasta la superficie del electrodo (transporte de
masas) alcanza su valor límite máximo. Al ser directamente proporcional a la concentración
del reactivo, la Id tiene gran valor cuantitativo.
• Potencial de semionda (E1/2): se define como el potencial al cual la intensidad de
corriente es la mitad de la intensidad límite. Este potencial de semionda tiene valor cualitativo
porque depende de la naturaleza de la especie que sufre la reacción redox.

Figura 38. Voltamperograma de barrido lineal (http://www.terra.es/personal/acarva/dc_.htm).

46
Tipos de voltamperiometría de barrido lineal

Para alcanzar rápidamente intensidades límites reproducibles, es necesario que la disolución o

el microelectrodo estén en movimiento continuo reproducible. Se originan así dos tipos de
voltamperometrías ((I) voltamperometría hidrodinámica y (II) polarografía).

I) Voltamperometría hidrodinámica

El reactivo se transporta a la superficie del electrodo por convección (agitación) y difusión

(debida al gradiente de analito entre la capa de líquido en contacto con la superficie del
electrodo y el seno de la disolución) (figura 39).

Figura 39. Barrido lineal de potenciales http://www.terra.es/personal/acarva/dc_.htm).

II) Polarografía

La polarografía utiliza un electrodo de gotas de mercurio como electrodo de trabajo. No hay

agitación, por lo que el mecanismo responsable del transporte de masas al electrodo es la
difusión. Las intensidades límite se suelen denominar intensidades de difusión “Id”

b) Voltamperometría de impulso diferencial

Se aplican señales de excitación en impulsos (Ej. impulsos de 50 mV durante los últimos 50

milisegundos de la vida de la gota de mercurio), realizando dos medidas de intensidad: una, se
efectúa antes del impulso, y otra, después del impulso. La diferencia de intensidad por
impulso (∆i) se registra en función del potencial que aumenta linealmente (figura 40). A
diferencia de la voltamperometría de barrido lineal, se obtiene una curva en forma de pico. La
altura del pico es directamente proporcional a la concentración de sustancia.

47
 Figura 40. Barrido lineal de potenciales (http://www.terra.es/personal/acarva/dc_.htm)

Ventajas

1) Mayor sensibilidad, selectividad y más rápida que la voltamperometría de barrido lineal.

2) Se pueden diferenciar picos individuales de sustancias con potenciales de semionda mucho

menores que en la polarografía clásica que requiere una diferencia de unos 0.2 V para la
resolución de la sondas.

3) Los límites de detección con polarografía de impulsos diferencial son dos o tres órdenes de
magnitud más bajos que los de la polarografía clásica (10-7 a 10-8 M).

Debido a estas ventajas es el procedimiento polarográfico analítico más utilizado.

Aplicaciones de la voltamperiometría

Análisis polarográfico inorgánico: en este caso hay que diferenciar los cationes metálicos de
los aniones inorgánicos.

a) Cationes metálicos: se pueden analizar la mayoría, incluso los alcalinos y alcalinotérreos,

se reducen en el electrodo de gotas de mercurio siempre que el electrólito soporte no
reaccione a los elevados potenciales requeridos (se emplean haluros de tetraalquilamonio
como electrólitos de soporte debido a sus elevados potenciales de reducción).
b) Aniones inorgánicos (Bromato, iodato, dicromato, nitrato, vanadato, selenito, ...). Es
necesario utilizar un tampón para obtener resultados reproducibles, ya que el H+ interviene en
los procesos de óxido-reducción de estas especies.

Análisis polarográfico orgánico: el número de grupos funcionales que se puede oxidar en un

electrodo de gotas de mercurio es limitado ya que, el uso de potenciales anódicos mayores de
+0,4 V oxidan al mercurio. Sin embargo, los grupos funcionales orgánicos oxidables pueden
estudiarse con microelectrodos de platino, oro o carbón. En polarografía orgánica los
problemas de solubilidad obligan a utilizar mezclas acuosas con cantidades variables de
disolventes miscibles (alcoholes, glicoles, formamida, ...).

48
6. ESPECTROMETRIA DE MASAS (EM)

En la EM la muestra es ionizada (y por tanto destruida) usando diversos procedimientos. De

todos ellos el más usual y/o utilizado es la técnica denominada de Impacto Electrónico (EM-
IE) consistente en el bombardeo de la muestra (previamente vaporizada mediante el uso de
alto vacío y una fuente de calor) con una corriente de electrones a alta velocidad (figura 43).

El bombardeo de un compuesto con electrones de elevada energía produce principalmente dos

efectos:

1) La sustancia se ioniza (pierde electrones)

M-N-O-P + 1e- Æ [M-N-O-P]+ + 2 e- (20)

2) La sustancia se rompe en distintos fragmentos, los cuales a su vez tambien se

ionizan

M-N-O-P + 1e- Æ [M-N-O]+ + 2 e- (21)

Æ [M-N]+ + 2 e-
Æ [M]+ + 2 e-
Æ [N]+ + 2 e-

Los iones positivos (moléculas enteras y fragmentos cargados obtenidos en la ecuación 21)
son entonces acelerados mediante un campo eléctrico y desviados en un campo magnético en
función de su relación masa/carga (M/Z) y conducidos a un fotomultiplicador de iones sobre
el que se recogen los impactos de dichos iones en función de la relación carga/masa de los
mismos.

Siempre que una molécula se somete a las mismas condiciones de ionización da lugar a un
espectro de masas característico que permite su identificación (FRAGMENTOGRAMA)
(figura 41). El espectro de masas consiste en un conjunto de líneas de diferentes alturas sobre
una escala de m/e entre las que se pueden distinguir:

Pico base: pico más alto, más abundante. La altura representa la abundancia relativa de cada
fragmento respecto de la del pico base. La altura del pico base se toma como el 100% de
abundancia relativa.

Pico o ión molecular: pico de valor mas elevado de M/Z que corresponde a la molécula ionizada
pero sin fragmentar.

49
 Abundancia
[M-N-O]+

M-N+
[M-N-O-P]+

M+ N+

M/Z

Figura 41. Espectro de masas de una hipotética molécula M-N-O-P

Instrumentación

En la figura 42 se muestra un esquema de un espectrómetro de masas. Este instrumento consta de

una cámara de vaporización donde la muestra, si no es gaseosa, se calienta y se vaporiza. La
muestra gaseosa entra posteriormente en la cámara de ionización. En la cámara de ionización un
haz de electrones procedentes de un filamento incandescente (normalmente de renio) incide
sobre la molécula con energía suficiente para arrancarle un electrón exterior (figura 43). El
exceso de energía produce la fragmentación de este ión molecular en diferentes fragmentos
característicos de la molécula.

Figura 42. Esquema de un espectrómetro de masas.

(http://www.chemguide.co.uk/analysis/masspec/howitworks.html#top)

50
 Filamento de Re

Molécula ionizada

Figura 43 Esquema de la cámara de ionización de un espectrómetro de masas.

(http://ull.chemistry.uakron.edu/analytical).

El ión molecular y los otros iones positivos se aceleran en un campo eléctrico y se desvían en
un campo magnético. En los instrumentos modernos el campo magnético está generado por un
cuadrupolo (figura 44) e inducido por un generador de radiofrecuencias. La intensidad del campo
magnético va variando progresivamente. Para cada intensidad un solo ión, de una determinada
masa y carga, llega al detector mientras que los otros se desvían. Al cambiar la intensidad se
detectará otro ión distinto y así sucesivamente.

Figura 44. Esquema de un cuadrupolo generador de campos magnéticos de intensidad variable

(http://www.ivv.fhg.de/ms/ms-analyzers.html)

Aplicaciones

La espectrometría de masas es una potente técnica de identificación de sustancias orgánicas e

inorgánicas. Los espectros de masas de cada sustancia, obtenido en las mismas condiciones,
son característicos por lo que la interpretación de éstos permite identificarla. En la actualidad
existen bases de datos informatizadas con espectros de masas de millares de compuestos.

51
A continuación, interpretaremos algunos espectros de masas correspondientes a distintas
sustancias.

Ejemplo 1: interpretar los fragmentos observados en el espectro de masas del pentano (figura
45).

Abundancia relativa

Figura 45. Espectro de masas del pentano (http://www.chemguide.co.uk/analysis/masspec/howitworks.html#top)

Fragmento 72: corresponde a la molécula entera ionizada C5H12+

Fragmento 57: corresponde al fragmento C4H9+ que se ha formado cuando la molécula (72)
pierde un grupo metilo (masa 15), según:

22

Fragmento 47: corresponde al fragmento C3H6+ que se ha formado cuando el fragmento de

masa 57 pierde un grupo metileno (masa 14)

23

Fragmento 29: corresponde al ión [CH3CH2]+:

24

Ejemplo 2: interpretar el espectro de masas de la figura 46 correspondiente a la 3-pentanona.

Fragmento 86: corresponde a la molécula entera ionizada [CH3CH2COCH2CH3]+ .

Fragmento 57: corresponde al fragmento [CH3CH2CO]+ que proviene de la molécula entera

menos un fragmento que pesa 29 (86-57 = 29) que es el grupo CH3CH2 (29).

Fragmento 29: corresponde al fragmento [CH3CH2]+.

52
 Abundancia relativa

Figura 46. Espectro de masas de la 3-pentanona

(http://www.chemguide.co.uk/analysis/masspec/howitworks.html#top)

7. MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE BARRIDO Y MICROANÁLISIS POR

RAYOS X

En esta técnica se envía un haz de electrones sobre una muestra y mediante un detector
apropiado se registra el resultado de esta interacción. La incidencia del haz de electrones
primarios sobre la muestra da lugar a las siguientes señales:

Electrones retrodispersados
Electrones secundarios
Electrones Auger
Electrones transmitidos
Electrones absorbidos
Luz visible
Rayos X
Radiación continúa
Conductividad inducida
Calor

Instrumentación y Componentes de un Microscopio Electrónico de Barrido (MEB)

El generador habitual de electrones es un filamento de wolframio, que se calienta al paso de la

corriente. Los electrones emitidos se someten a la acción de un potencial eléctrico acelerador
que se establece entre el filamento, que actúa como cátodo, y un ánodo. Existe un tercer
electrodo con potencial negativo respecto al cátodo, y que actúa como rejilla, llamado
electrodo o cilindro Wehnelt. Al conjunto se le llama cañón de electrones.

El haz producido en el cañón de electrones, a los voltajes de aceleración empleados, no puede

propagarse en el aire, ya que se extinguiría a una distancia de 0,1 cm, por lo que debe estar en
vacío; por otra parte, su incidencia sobre la muestra genera una acumulación de cargas
eléctricas que es preciso eliminar mediante una salida a tierra. Esta es la razón por la que se
suele metalizar las muestras que no presentan conductividad eléctrica.

Para producir un haz fino enfocado sobre la muestra, se emplean lentes magnéticas
convencionales. Estas se basan en la posibilidad de variar la trayectoria de los electrones

53
mediante un campo magnético. En el caso de la microscopía electrónica, el campo se produce
en un carrete cilíndrico, que impone un movimiento helicoidal a la partícula cargada. Los
electrones, que llegan con distintos ángulos al campo de la lente, experimentan distintas
modificaciones en sus trayectorias, pero al ser su velocidad muy parecida (y dependiente del
potencial acelerador), la intensidad del campo se puede ajustar para que todos lleguen a la vez
al mismo punto, lo que produce el enfoque.

Como se muestra en la figura 47, los sistemas de lentes condensadoras y objetivo sirven para
reducir el haz en la zona de paso a un tamaño final sobre la muestra de 5 a 200 nm. El sistema
de lentes condensadoras, que puede constar de una o más lentes, es el responsable de que el
haz de electrones llegue a la lente objetivo y ésta determina el tamaño del haz de electrones
que incide sobre la superficie de la muestra. Una lente particular característica es cilíndrica y
simétrica, con una altura entre 10 y 15 cm.
En un MEB el barrido se lleva a cabo mediante las bobinas localizadas en la lente objetivo.
Una bobina desvía el haz en la dirección X a lo largo de la muestra y el otro lo desvía en la
dirección Y. El barrido se controla mediante la aplicación de una señal eléctrica. De esta
forma la superficie de la muestra puede ser irradiada completamente con el haz de electrones.

Las señales que se utilizan para mover el haz de electrones en las direcciones X e Y también
se utilizan para llevar a cabo los barridos horizontal y vertical de un tubo de rayos catódicos
(TRC), monitor en el que observamos la imagen en directo.

Señales utilizadas para formar la imagen

La mayoría de las micrografías obtenidas en un MEB de uso general corresponden a imágenes

de electrones secundarios o retrodispersados.
La señal de electrones secundarios se forma en una delgada capa superficial, del orden de 50 a
100 Å. Al ser grande el número de electrones emitido se puede establecer un buen contraste.
Asimismo, al ser electrones de baja energía pueden ser desviados fácilmente de su trayectoria
emergente inicial, pudiéndose obtener información de zonas que no están a la vista del
detector. Esta característica hace que un detector de electrones secundarios sea ideal para
realizar un estudio «topográfico» de la muestra.

La principal utilidad de la señal de electrones retrodispersados reside en que su emisión

depende fuertemente del número atómico del sustrato, ya que se debe a choques de tipo
elástico y por tanto con energía del mismo orden que la de los electrones incidentes. Esto
significa que dos zonas de una muestra con distinta composición dan distinta emisión, aunque
no exista diferencia alguna en su topografía. Este detector es capaz de trabajar en condiciones
de bajo vacío (1-270 Pa), con lo que, sin necesidad de metalizar las muestras, se consigue una
magnificación -suficiente para la mayoría de los casos- de hasta 20000 aumentos, según la
naturaleza de la muestra.

La señal de rayos X es la que contiene más información analítica. El fundamento de esta señal
reside en la emisión de rayos X característicos de la muestra al bombardearla con el haz, y su
posterior detección con un espectrómetro de dispersión de energías. El microanálisis de rayos
X es una técnica esencial en el estudio de rocas, minerales y materiales. Tiene un límite de
detección del 0,1 %, por lo que sólo es útil en la práctica para análisis de elementos
mayoritarios (en concentraciones mayores del 1 %) y algunos de los minoritarios (aquellos
cuya concentración esté entre el 0,1 y el 1 %).

54
Figura 47. Esquema de un microscopio electrónico de barrido (MEB) donde se muestran los principales
componentes.

Los resultados obtenidos por esta técnica son resultados semicuantitativos. Aunque hay que
señalar que si se trabaja con patrones se pueden obtener resultados cuantitativos confiables.
Además de dar un valor semicuantitativo de la sustancia o elemento químico que se este
analizando nos permite tener una imagen de la morfología de las partículas sólidas. El obtener
una imagen de la morfología de las partículas sólidas nos permite en muchos casos poder
tener una idea aproximada del tipo de mineral o sutancia de que se trate. Cuandos e dispone
de importantes fuentes de datos y de una determinada experiencia en el estudio de particulas
con esta técnica en muchos casos es posible tener una idea inicial del origen de esa partícula.
Estos datos siempre deben estar contrastados con un buen trabajo de campo y el desarrollo de
un muestreo, almacenamiento y tratamiento de las muestras adecuado.

Ejemplo: aplicación al estudio de la composición de los residuos mineros.

En la figura 48 se muestra una imagen del MEB donde se puede apreciar las características
geométricas de diferentes partículas de un residuo minero. En la figura 48a se aprecia la

55
presencia de partículas de materia orgánica en residuos de la industria cubana del níquel.
Estas partículas son el resultado de la combustión de combustibles fósiles (petróleo y carbón).
Se identifican en el residuo por su gran porosidad, además se conoce que en el proceso
metalúrgico se emplea petróleo y antracita. En la figura 48b se puede observar la morfología
de una partícula de sulfato formada en los residuos metalúrgicos del proceso de flotación
existente en la Sierra Minera de Cartagena, Murcia, España. En la figura 48c se puede
observar la imagen de un microorganismo también en los residuos de la industria el níquel en
Cuba.

Materia orgánica

100 micras
a) b) c)
Figura 48. a) Materia orgánica, b) cristales de sulfato y c) microorganismo. Las imágenes a y b son en los
residuos de la industria cubana del níquel (Rodríguez, 2002) y la c pertenece a los residuos de la industria minera
en la Sierra Minera de Cartagena, Murcia, España.

En la figura 49a, 49b y en la tabla 13 se muestran los resultados de un estudio con un MEB de
la composición de una muestra de de residuos. Los resultados incluyen:

1- La imagen de electrones retrodispersados de la figura 49a, en la que a gran escala se

observa total homogeneidad, que tornaría en contraste composicional si aumentara la
magnificación.

Figura 49a. Imagen de electrones retrodispersados, se aprecia con claridad la porosidad del material.

2 - El espectro de energías dispersivas de rayos X del campo observado, representado en la

figura 49b, en el que cada elemento presente en la muestra (de número atómico 5 en adelante)
presenta unos pocos picos:

56
Figura 49b. Espectro de energías dispersivas de rayos X, donde se señala la composición cualitativa de una
muestra de los sólidos en suspensión de la escorrentía superficial. Se puede apreciar la existencia de diferentes
elementos químicos.

3. Análisis semicuantitativo (sin patrones) con ayuda del método ZAF (Tabla 13), en el que se
establecen correcciones relativas al número atómico (Z), a la absorción (A) y a la
fluorescencia (F). Estos valores han de ser tomados con reserva, ya que la muestra no cumple
el requisito fundamental de ser perfectamente plana, lo que falsea gravemente la
concentración de los elementos ligeros.

Tabla 13. Análisis semicuantitativo de los sólidos en suspensión de escorrentía superficial. La concentración se
cierra al 100 %. P/B es la relación entre el número de pulsos y la radiación continua para Z ≥ 11, ya que para Z <
11 la radiación continua es demasiado.
Elemento Línea P/B B F c ± 2s
O K-serie - 1,00000 1,00000 60,63 ± 9,57
Na K-serie 18,0 1,00666 1,00343 3,21 ± 0,40
Mg K-serie 14,3 1,00928 1,00566 2,18 ± 0,24
Al K-serie 16,3 1,01168 1,00902 2,29 ± 0,25
Si K-serie 28,7 1,01389 1,01235 3,54 ± 0,34
S K-serie 79,4 1,01786 1,01776 8,45 ± 0,74
Cl K-serie 45,4 1,01966 1,01835 4,77 ± 0,45
K K-alpha 5,3 1,02295 1,03920 0,56 ± 0,19
Ca K-alpha 58,2 1,02446 1,02701 6,05 ± 0,60
Mn K-alpha 3,2 1,03105 1,08927 0,38 ± 0,17
Fe K-alpha 42,2 1,03221 1,08169 5,30 ± 0,81
Zn K-alpha 13,9 1,03641 1,14279 2,63 ± 1,10

57
8. DIFRACCIÓN DE RAYOS X

La difracción de rayos X es una técnica analítica versátil que sirve para examinar sólidos
cristalinos, tales como materiales cerámicos, metales, materiales electrónicos, materiales
geológicos, compuestos orgánica y polímeros. Los difractómetros de rayos X de polvo se
utilizan cotidianamente para identificación de fases cristalinas y su análisis cuantitativo, pero
pueden ser configurados para muchas aplicaciones, incluyendo estudios a temperatura y
presión variables bajo atmósferas controladas (oxidantes, reductoras, inertes o a humedad
controlada), análisis de textura y estrés, incidencia rasante y reflectometría.

Principio de funcionamiento

Un sistema básico de difracción de rayos X (DRX) de polvo consiste en una fuente de rayos
X controlada por un generador, un goniómetro de dos círculos, una plataforma portamuestras,
un detector y el ordenador para el control del instrumento y el análisis de los datos.

Los generadores modernos son compactos, están refrigerados con agua y tienen tubos de
rayos X con una salida de 1 a 3 kW.

El goniómetro comprende dos círculos independientes que proporcionan un movimiento

preciso y exacto al tubo y al detector. En la configuración θ/θ la muestra se mantiene en una
posición fija –típicamente horizontal-, que es la deseable durante los estudios a temperatura
variable, cuando examinamos sólidos granurales, o cuando usamos un cambiador automático
de muestras.

Los portamuestras rotatorios giran alrededor de un eje normal a la superficie de la muestra

barriendo el ángulo Φ. La rotación completa en Φ puede hacer que difracten más cristalitos
orientados al azar en una muestra de polvo, mejorando el conteo estadístico de la medida. Los
datos también pueden ser adquiridos a valores fijos de Φ para determinar si la orientación de
la muestra influye en las intensidades difractadas.

En la Figura 50 se observa un difractómetro de geometría Bragg-Brentano, en la que se

encuentra, de izquierda a derecha, una fuente de rayos X, una rendija fija que limita la
divergencia radial del haz incidente, el portamuestras rotatorio, otra rendija fija que limita la
dispersión del haz que sale de la muestra, un monocromador y un detector. En el sistema de
colimadores se hallan las rendijas Soller, que son un conjunto de láminas paralelas e
igualmente espaciadas.

Colimadores
Tubo de
Rayos X

Detector

Monocromador
secundario

Muestra

58
Figura 50. Difractómetro de rayos X

Ley de Bragg

Es la ecuación operativa en DRX, donde n es un número natural que representa el orden de

una reflexión, λ es la longitud de onda, d es la distancia entre planos reticulares paralelos y θ
el ángulo entre el haz incidente y el plano reticular, conocido como el ángulo de Bragg.

θ θ
λ
dhkl

Figura 51. Ley de Bragg: nλ = 2 dhkl sen θ.

Cuando la trayectoria del haz en el cristal, 2d·sen θ, es un múltiplo de la longitud de onda,

ocurre una interferencia constructiva, y se obtiene una intensidad difractada. En general, el
espaciado entre planos, d, es una función de los parámetros reticulares (a, b, c) y (α, β, γ) que
definen la celda unidad, y de los índices de Miller (h,k,l) que se refieren a una reflexión en
partícular. Por ello es la geometría del cristal la que determina la posición de los picos en una
curva de DRX. (Ver Figura 3.2).

Información analítica cualitativa y semicuantitativa

Los límites de detección de una fase cristalina dada dependen de varios factores, incluyendo si
se conoce su presencia en la muestra, la capacidad relativa de difractar de dicha fase, el
solapamiento de picos entre fases diferentes y la estadística del conteo. La precisión
estadística de las medidas del detector se relaciona con la raíz cuadrada del número de cuentas
sobre el fondo en un pico de difracción. En principio, si existe una fase en una mezcla, dado
un tiempo de análisis suficiente, sus picos sobresaldrán del fondo en el difractograma.

El análisis cuantitativo es la relación entre la intensidad difractada por una fase y su

concentración. La intensidad difractada por un espécimen en polvo de una sola fase depende
de muchos factores, incluyendo la multiplicidad de la reflexión, el factor de polarización de
Loretz (geometría), el factor de Debye-Waller (temperatura), el factor de estructura, el factor
de absorción, los efectos de orientación preferencial, la extinción y los efectop instrumentales.
Para resultados precisos, la intensidades utilizadas en análisis cuantitativo deberían ser
intensidades integradas, mejor que las alturas de los picos. Se utiliza una técnica de ajuste de
la curva conocida como perfil de ajuste para obtener áreas precisas, especialmente de picos
solapados. Las aproximaciones comunes al análisis cuantitativo por rayos X incluyen el

59
método de estándar interno, el método Chung y el método Rietveld. En la Figura 52 se
representa un difractogrma de Rx con las diferentes fases minerales identificabls a partir de
los picos de difracción.

Figura 52. Difractograma de una muestra de suelos lateriticos para dos fracciones granulometricas. G = gohetita,
S= serpentinita, Gb = guibsita, M= magemita

9. ANÁLISIS TERMOGRAVIMÉTRICO

La termogravimetría es una técnica que mide cómo cambia la masa de una muestra en función
de la temperatura, o en función del tiempo en un experimento isotermo. Los eventos térmicos
que no implican un cambio en la masa de la muestra, tales como la fusión, la cristalización y
la transición vítrea no pueden ser medidos mediante termogravimetría. Los cambios térmicos
que sí se ven acompañados por cambios de masa, tales como descomposición, sublimación,
reducción, desorción, absorción y vaporización, se pueden registrar con un analizador
termogravimétrico.

Instrumentación y configuración de una termobalanza

Las curvas termogravimétricas se registran usando una termobalanza. Ésta consta de una
microbalanza electrónica, un horno, un sistema de programación de la temperatura, un sistema
de control de los gases y un ordenador que sincroniza y presenta los datos de todos estos
dispositivos (figura 53). Además, los gases desprendidos durante las medidas
termogravimétricas pueden ser analizados mediante acoplamiento del detector
correspondiente a la termobalanza. Los más comunes son el detector de masas, el
espectrómetro infrarrojo por transformada de Fourier y la cromatografía de gases.

60
Figura 53. Componentes de una termobalanza: A, brazo; B, crisol y soporte del crisol; C, contrapeso; D,
lámpara y fotodiodos; E, bobina; F, imán; G, control del amplificador; H, calculador de la tara; I, amplificador; J,
registro.

El intervalo de temperatura para la mayoría de los hornos va desde temperatura ambiente

hasta 1500 ºC, y el horno se suele situar debajo del mecanismo de la balanza.

Los crisoles se utilizan en una gran variedad de tamaños, formas y materiales. El crisol
estándar es de alúmina y tiene forma de platillo.

La termogravimetría se realiza bajo diferentes atmósferas, en condiciones estáticas y

dinámicas. En condiciones estáticas la composición del gas que rodea a la muestra varía
cuando se produce una reacción en que se generan gases. Además, la velocidad de reacción de
la muestra varía de acuerdo con la presión parcial del gas. Se recomiendan condiciones
dinámicas. Los gases más comúnmente utilizados son aire, O2 y N2.

Efecto de las condiciones experimentales

Velocidad de calentamiento. Hay que tomar en cuenta ciertas consideraciones:

a. Influye en la distribución de la temperatura en el interior de la muestra.

b. Cuando hay una reacción química de por medio, como por ejemplo una reacción de
descomposición térmica, las temperaturas inicial y final se desplazan hacia temperaturas más
altas cuando aumenta la velocidad de calentamiento.
c. Cuando la velocidad de calentamiento se incrementa la reacción tiene lugar con más
velocidad en la región de mayor temperatura, por lo que la reacción se produce en un
intervalo de temperatura más estrecho, y la curva derivada se hace más aguda.
d. Cuando aparece una secuencia de reacciones, las reacciones individuales se resuelven más
claramente mediante velocidades de calentamiento menores. Así, cuando se dispone de un
control dinámico de la temperatura en respuesta a la reacción de la muestra, aumenta la
resolución de esta secuencia.

61
Cuando no hay un requerimiento especial, es común elegir una velocidad de calentamiento de
5 ó 10 ºC/min.

Masa y tamaño de partícula de la muestra: Cuando la cantidad de muestra es pequeña decrece

el gradiente de temperatura de la muestra desde fuera hacia adentro.

El tamaño de partícula de la muestra influye en los resultados. En general, la temperatura de

descomposición decrece cuanto menor es el tamaño de partícula de la muestra. La
descomposición de una muestra constituida por partículas grandes es más lenta que si la
muestra tiene una gran área superficial.

Efecto de la atmósfera:

El gas utilizado hace que la temperatura que rodea la muestra sea uniforme, y reduce la
diferencia de temperatura entre la muestra y el crisol, por lo que el barrido de temperatura
efectivo es lineal, a pesar de las irregularidades térmicas causadas por las reacciones
exotérmicas o endotérmicas de la muestra. (Figura 4.2).

Se suelen escoger diferentes gases para confirmar el mecanismo físico-químico de los eventos
térmicos. Para una reacción en atmósfera autogenerada, si los gases no son retirados a tiempo
la reacción sufre un desplazamiento a temperaturas mayores. Por ejemplo, el vapor de agua
inhibe la reacción de deshidratación del CaSO4· 2H2O, y la temperatura de la reacción se
incrementa en comparación con los resultados obtenidos en aire seco. Además, la velocidad
de descomposición térmica es mayor en He que en N2, y en éste mayor que en Ar, de acuerdo
con el orden de conductividad térmica de los gases, superior en el He.

Atmósfera estática o dinámica. Bajo condiciones estáticas, los gases desprendidos no pueden
ser retirados rápidamente del entorno de la muestra, aumentando su presión parcial y, por
ende, desplazando el evento a temperaturas superiores. En condiciones dinámicas sucede lo
contrario.

Tipos de atmósfera. En termogravimetría se suelen emplear gases oxidantes, como O2 y aire,

o gases inertes, como N2 y He.

El caudal del gas utilizado afecta a la temperatura de descomposición de la muestra, a la

precisión en la determinación de la misma y a la estabilidad de la línea de base.

Flotabilidad, corrientes de convección y turbulencia:

La flotabilidad ejercida sobre la muestra decrece con el aumento de la temperatura, a medida

que va decreciendo la densidad del espacio intermedio que rodea el portamuestras. Esto
origina una ganancia aparente de masa.

Una aparente pérdida de masa la origina una corriente de gas en la parte superior del
portamuestras.

Por todo ello es difícil obtener una curva termogravimétrica sin deriva sobre todo el rango de
temperatura del aparato, por lo que hay que restar siempre una curva blanco.

62
Crisoles y gradientes de temperatura:

La elección del tipo de crisol se basa en la temperatura de la muestra y de las condiciones

experimentales a elegir. Un crisol de Al se recomienda utilizar hasta 560 ºC, uno de Pt hasta
1630 ºC. Por otra parte, un crisol de poca altura favorece la difusión de los gases liberados por
la muestra, una rápida transferencia de calor y un calentamiento homogéneo.

Densidad de empaquetado de la muestra:

Los materiales poco empaquetados y de grano grueso contienen gran cantidad de espacios
vacantes que reducen la conductividad térmica. Las partículas pequeñas permiten una mayor
densidad de empaquetado.

Por otra parte, el grado de empaquetamiento afecta al contacto de la muestra con la atmósfera
retrasando, por ejemplo, la temperatura de descomposición.

Un ejemplo de aplicación de esta técnica se muestra en la figura 54 donde se puede obserbar

el termograma de la descomposición del CaC2O4•H2O en atmósfera inerte

Figura 54. Termograma de la descomposición del CaC2O4•H2O en atmósfera inerte.

REFERENCIAS

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