UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Perú, Decana de América)

FACULTAD DE QUÍMICA E INGENIERÍA QUÍMICA
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE INGENIERÍA QUÍMICA

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA ANALÍTICA E INSTRUMENTAL

GUÍA DE LABORATORIO DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL

ELABORADO POR:

Mg. Ing. ANAYA MELÉNDEZ, Fernando

Quím. LENGUA CALLE, Rosa Laura

PROFESORES DE LABORATORIO:

Mg. Holger Maldonado garcia

Quím. Claudia Sofia Nuñez Peñalva
Quím. María Angélica Rodríguez Best
Q. F Oscar Pedro Santisteban Rojas

I SEMESTRE - 2020

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 SUMILLA

En el presente laboratorio se desarrollarán prácticas en las diferentes

técnicas del Análisis Instrumental: electrométricas, ópticas y
cromatográficas, explicando en cada caso su utilidad y fundamento.

I. OBJETIVOS
Generales:
Conocer en detalle los alcances de las técnicas Instrumentales a utilizar en el
análisis, poniendo énfasis en su fundamento, descripción del instrumento y
aplicación.
Específicos:
Lograr que el estudiante aprenda los principios sobre los cuales se basan los
métodos del análisis instrumental.
Mostrar el diseño y los componentes de los instrumentos usados.

II. PROGRAMA DEL CURSO

1ª Semana – 15/06/20 Introducción a los métodos ópticos.

Explicación de la práctica visible

2ª Semana – 22/06/20 Espectrofotometría - Visible

Determinación espectrofotométrica de manganeso
en acero.

3a Semana –29/06/20 Espectrofotometría ultravioleta

01/07/20 Explicación de la práctica

4a Semana – 06/07/20 Espectrofotometría - Ultravioleta

Análisis de nitratos en agua

5a Semana – 13/08/20 Espectrometría Infrarroja (FTIR).

Interpretación de espectros.

6a Semana – 20/08/20 Espectrofotometría de Absorción Atómica.

Determinación de hierro en jarabe antianèmico

7a Semana – 03/08/20 Espectroscopia de Emisión Atómica.

Determinación de Potasio en agua.

8a Semana – 10/08/20 Cromatografía de Gases (CG)

Determinación de metanol en bebidas alcohólicas.

9a Semana – 17/08/20 Cromatografía Líquida (HPLC)

Determinación de cafeína en bebida.

10a Semana – 24/08/20 Introducción a métodos electrométricos

Medida de pH (electrodo indicador ion selectivo).
a) Calibración del instrumento empleado en la experiencia

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 b) Estandarización de solución de NaOH con biftalato de potasio
c) Titulación potenciométrica de ácido débil con base fuerte
(Determinación acidez en vino)

11aSemana 31/08-02/09/20 Análisis potenciométrico (electrodo indicador

inerte)
a) Estandarización potenciométrica de soluciones de K2Cr2O7

12 a Semana –07/09/20 b) Determinación potenciométrica de hierro en jarabe,

por Dicromatometría.

13a Semana - 14/09/20 Sustentación del trabajo

14a Semana – 21/09/20 Entrega de notas

III. METODOLOGIA
El curso se realizará mediante exposiciones dirigidas por el profesor, de
los fundamentos teóricos, previo conocimiento del instrumento a utilizar,
antes del trabajo experimental. Posteriormente el alumno preparará el
informe correspondiente.

IV. SISTEMA DE EVALUACIÓN

Los alumnos entregarán reportes de cada experimento de aplicación del

método instrumental estudiado.

Los informes deberán contener lo siguiente:

1. Fundamento del método de análisis.
2. Descripción de la técnica empleada.
3. Reacciones químicas importantes.
4. Descripción detallada de los instrumentos o aparatos usados.
5. Cálculos detallados. Tabla de Resultados y tratamiento estadístico.
6. Gráficos de los experimentos
7. Discusión del método empleado.
8. Discusión de resultados obtenidos.
9. Conclusiones.
10. Recomendaciones.
11. Bibliografía (Autor, titulo, edición, editorial, año).
12. Anexos (Información adicional necesaria).

Nota Laboratorio=Prom.reportes+ Prom.cuestionarios+SustentaciónTrabajo

3

La asistencia a las prácticas es obligatoria.

Nota: Los alumnos que:

1) Aprobaron el Laboratorio, en semestres anteriores, solicitar la
convalidación de su nota en la coordinación. Los desaprobados solicitar
las notas de informes y de sustentación de trabajo a quien fue su profesor
de laboratorio.

3
III. BIBLIOGRAFÍA
1. Harris Daniel, Quantitative Chemical Analysis, 9ª Edición, Ed. Reviews,
2015.
2. Harris Daniel, Solution Manual for Quantitative Chemical Analysis, 9ª
Edición, Ed. Reviews 2015.
3. Palo, Fundamentos de Cromatografía, 1ª Edición. Ed. Dextra, España. 2015.
4. Harris Daniel C., Análisis Químico Cuantitativo, 3ª Edición, Ed. Reverté,
2007.
5. Skoog D., West D.M. y Crouch S.R. Fundamentos de Química Analítica, 8ª
Edición, Ed. Thomson, Madrid, 2004.
6. Owen Tony, Fundamentos de la Espectroscopia UV-Visible Moderna,
Copyright Agilent. 2000.
7. Skoog D., Douglas A. Cengage Learning, Principios de Análisis
Instrumental. cop. 2008 / McGraw-Hill, D.L. 2000.
8. Skoog D. Holler. Nieman T. Principios de Análisis Instrumental. 5ª Ed. Mc.
Graw Hill. España 2001
9. Rubinson J.F. y Rubinson K.A., Química Analítica Contemporánea, 1ª
Edición, Ed. Pearson Education, Méjico, 2000.
10. Valcarcel M. Principios de Química Analítica, 1ª Edición, Ed. Springer,
1999.
11. Williard H., Merrit J. Métodos Instrumental de Análisis. Editorial
interamericano, Méjico D.F., 1991.
12. Skoog D. Leray J. Análisis Instrumental. Ed.Mc. Graw Hill, México 1994
13. Skoog D. West D. Analisis Instrumental Edit. Mc. Graw Hill México 1992.
14. Alpizar J. Albertus F., Fundamentos de los Métodos Electroquímicos de
Análisis Edit. Enpes. La Habana 1980.
15. Vogel A. Química Analítica Cuantitativa Vol. II Edit., Kapeluz Buenos Aires
1960.
16. Ayres G. Análisis Químico Cuantitativo Editorial Iberoamericana, México
1992.
17. Harris D. Análisis Químico Cuantitativo. Ed. Iberoamericana. México 1992.
18. Sandell E. Colorimetric Determination of traces of metals. Interscience
Publisher. USA 1965.
19. AOAC. Official Methods of Analysis 15th Fed. USA. 1990.
20. ASTM American Standards of Testing Materials, 1999.

4
 FUNDAMENTO TEÓRICO DE LAS PRÁCTICA N° 1 Y N° 2
ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCIÓN MOLECULAR
ULTRAVIOLETA – VISIBLE

Fundamento

La espectrofotometría de absorción molecular ultravioleta visible, comúnmente

llamada espectrofotometría UV-VIS, tiene una larga y continua historia en el
campo de la química analítica. Esta técnica está basada en la medición de
absorción de radiación U.V. o visible por determinadas moléculas.

La radiación correspondiente a estas regiones del espectro electromagnético

provoca transiciones electrónicas a longitudes de ondas características de la
estructura molecular de un compuesto.

RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA (R.E.M.)

La radiación electromagnética es un tipo de energía que se transmite por el

espacio a enormes velocidades. Muchas de las propiedades de la R.E. se explican
convenientemente mediante la teoría ondulatoria clásica con parámetros como
velocidad, frecuencia, longitud de onda y amplitud. En contraste con otros
fenómenos ondulatorios, como el sonido, la R.E. no requiere un medio de
transporte para su transmisión, por lo tanto se transmite fácilmente en el vacío.

La teoría ondulatoria para la R.E. no explica completamente los fenómenos

asociados con la absorción o la emisión de energía radiante, para estos procesos
es necesario considerar la energía radiante como un flujo de partículas discretas
de energía llamados fotones o cuantos.

Estos dos conceptos se complementan muy bien (dualidad, onda partícula) y se

aplican tanto al flujo de electrones como al de otras partículas elementales.

h.c
E  h. 


ABSORCIÓN DE LA RADIACIÓN

Al pasar R.E.M. por una capa transparente de un sólido, líquido o gas, pueden
eliminarse selectivamente ciertas frecuencias como consecuencia del proceso
llamado absorción. En este caso la E.R. se transfiere a los átomos o moléculas
que constituyen la muestra, como resultado de ello estas partículas pasan del
estado de menor energía a estados de mayor energía o estados excitados.

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ABSORCIÓN MOLECULAR

La absorción por moléculas poliatómicas, es un proceso considerablemente más

complejo que la absorción atómica, ya que el número de estados de energía está
muy aumentado. Aquí la energía total de una molécula está dada por:

E = E electrónica + E vibracional + E rotacional

Para cada estado de energía electrónica de la molécula hay normalmente varios
estados vibratorios posibles y a su vez, para cada uno de éstos existen
numerosos estados rotatorios. Como consecuencia el número de posibles
niveles de energía de una molécula es mucho mayor que el de una partícula
atómica. Es por ello que los espectros de absorción aparecen como anchas
bandas.

Espectro de absorción

Tanto las moléculas como los átomos tienen un número limitado de niveles o
estados energéticos cuantizados.

Para que se produzca absorción de radiación, la energía del fotón excitante

(incidente) debe igualar a la diferencia de energía entre el estado fundamental y
uno de los estados excitados de la especie absorbente. Estas diferencias de
energía (ΔE) son únicas, por lo tanto permiten caracterizar los constituyentes de
una muestra.

Para este objeto se obtiene experimentalmente una representación gráfica de la

variación de la absorbancia en función de la longitud de onda.

Espectros de absorción molecular característicos

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Medidas cuantitativas de la radiación - Ley de Beer

La siguiente figura esquematiza el fenómeno de absorción, aquí un haz de

radiación monocromático, pasa a través de una capa de solución de b cm de
espesor y que contiene una especie molecular absorbente de concentración c.

Fenómeno de absorción

Como consecuencia de las interacciones entre los fotones y las partículas

absorbentes, la potencia del haz disminuye de Po a P. Por lo tanto la
Transmitancia T de la solución es la fracción de radiación incidente transmitido
(o no absorbida) por la solución según:

Según la Ley de Beer, entonces, la absorción A estará determinada por:

A = abC ó A = ε bC´

Donde: A = Absorbancia
a = Absortividad ε = Absortividad molar
b = Espesor de la celda o paso de luz (cm)
C = Concentración (g/L)
C´= Concentración (moles/ litro)

La Ley de Beer se cumple igualmente en soluciones que contienen más de una

especie absorbente, siempre que no haya interacción entre dichas especies. Por
tanto, para un sistema multicomponente la relación será:

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 AT = A1+A2+………+An
AT = ξ1bc1 + ξ2bc2 +………+ ξnbcn

Espectros de absorción mezcla componentes

Limitaciones a la aplicabilidad de la Ley de Beer

Se observan frecuentemente desviaciones de la proporcionalidad entre A y c

(cuando b es constante). Algunas de estas desviaciones son importantes y
representan limitaciones reales de la ley. Estas son de tipo:

 químico;
 instrumental.

La Ley de Beer es sólo aplicable a soluciones en las que las interacciones

dependientes de la concentración de las moléculas o iones son mínimas.
Concentraciones “altas” alteran las absortividades molares y por lo tanto
conducen a una relación no lineal entre A y c.

a) Desviaciones químicas

Cuando las especies absorbentes experimentan asociación, disociación o

reacción con el solvente originan productos con características absorbentes
distintas de las del analito.

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Un ejemplo típico se observa con soluciones de dicromato potásico no
amortiguadas, en las que existen los siguientes equilibrios:

Cr2O7-2 + H2O ↔ 2HCrO4 ↔ 2H+ + 2CrO4-2

A casi todas las longitudes de onda los valores de ξ del ion dicromato y las dos
especies de cromato son muy diferentes.

b) Desviaciones instrumentales
El requisito básico para el cumplimiento de la Ley de Beer es
que la radiación incidente sea monocromática. Dependiendo de
Radiación las características tecnológicas del sistema óptico del
policromática: instrumento será más o menos accesible poder utilizar en
forma práctica una radiación limitada a una sola longitud de
onda.
La radiación dispersa suele diferir considerablemente en
Radiación longitud de onda con respecto a la radiación principal; además
dispersa: puede alcanzar el detector sin haber pasado a través de la
muestra.

ABSORCIÓN DE RADIACIÓN ULTRAVIOLETA Y VISIBLE

La absorción de radiación ultravioleta y visible por una especie M, puede

considerarse como un proceso en dos etapas, la primera de las cuales
corresponde a la excitación según:

M + h.ν → M*

Donde M* representa la partícula atómica o molecular en su estado electrónico

excitado que se produce como resultado de la absorción del fotón h v. Este
estado excitado tiene un breve tiempo de existencia (10-8 a 10-9 s) y desaparece a
través de algunos de los diferentes procesos de relajación (calor).

M* => M + calor

La absorción de la radiación ultravioleta o visible, se produce por lo general como

consecuencia de la excitación de los electrones de enlace; debido a esto, la
longitud de onda de los picos de absorción se puede correlacionar con los tipos
de enlace existentes en la especie que se estudia.

Aplicación analítica

 Identificación proximal de los grupos funcionales en una molécula.

 Método bastante selectivo para el análisis cuantitativo de compuestos
cuyos enlaces producen absorción.

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Especies absorbentes

Conviene considerar tres tipos de transiciones electrónicas que permiten

explicar por qué algunas especies pueden absorber energía radiante.

Estos tres tipos son:

 Los electrones π, σ y η.
 Los electrones d y f.
 Los electrones de transferencia de carga.

a) Especies químicas absorbentes que contienen electrones π, σ y η

La absorción de radiación ultravioleta y visible (200–800nm) se restringe a un

número limitado de grupos funcionales, llamados cromóforos, que contienen
electrones de valencia con energías de excitación relativamente bajos. (Ver tabla)

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 Transiciones electrónicas entre orbitales σ, π, y η.

Transición λ (nm) ξ (L mol4cm-1) Ejemplo

σ → σ* <200 - Hidrocarburos saturados
π → π* 200–500 104 Alquenos, alquinos aromáticos
η → σ* 160–260 102 – 103 H2O, CH3OH, CH3Cl
η → π* 250–600 10 – 103 Carbonilos, nitro, nitrato, carbonilo.
Características de transiciones electrónicas entre orbitales σ, π y η

λmáx (nm) para los ligandos indicados

Aumento de fuerza del campo de unión
Ion central 6CI 6H2O 6NH3 3en(1) 6CN-
Cr (III) 736 573 462 456 380
Co (III) - 538 435 428 294
Co (II) - 1345 980 909 -
Ni (II) 1370 1279 925 863 -
Cu (II) - 794 663 610 -

Efecto de los ligandos sobre los máximos de absorción asociados con

transiciones d-d

(1) en = etilendiamina, un ligando bidentado.

b) Absorción en la que participan los electrones d y f

 Iones de los metales de transición

 Serie de los lantánidos y actínidos

Los iones y complejos de los 18 elementos de las dos primeras series de

transición son coloreados en uno de sus estados de oxidación o en todos ellos.
Dependiendo las características colorimétricas del complejo; del tipo de ligando
(agente complejante) y del estado de oxidación.

c) Absorción por transferencia de carga

Para fines analíticos es el tipo más importante de absorción por especies

inorgánicas, debido a que las absortividades molares de los picos son muy
grandes (ξ < 105). Esta es una particular característica de los complejos
inorgánicos denominados también, complejos de transferencia de carga.
Ejemplos:

 Hierro III- ion Tiocianato, Hierro II - (o-Fenantrolina), Ion triyoduro I3-

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 REGIONES ESPECTRALES:
 Ultravioleta lejano : 10 – 200 nm
 Ultravioleta cercano : 200 – 400 nm
 Visible : 400 – 750 nm

 Los espectros en el Ultravioleta y en el Visible son espectros electrónicos

y se emplean para la detección y la determinación de elementos y ciertos
tipos de compuestos químicos; notablemente de compuestos metálicos de
coordinación y compuestos orgánicos no saturados, con dobles enlaces
conjugados.
 En el análisis químico se hace uso tanto de la emisión como de la absorción
de radiación, pero los métodos de absorción suelen encontrar mayor
aplicación.

 TÉRMINOS EMPLEADOS EN LA ESPECTROFOTOMETRIA

ULTRAVIOLETA - VISIBLE
 Cromóforo: Absorción electrónica por grupos insaturados covalentes
(C=O, NO2).
 Auxócromo: Corresponde a grupos saturados con electrones no
enlazantes y unidos a grupos cromóforos que alteran la longitud de
onda y la intensidad de la absorción (OH, NH2, Cl).
 Desplazamiento batocrómico: Cuando se desplaza el máximo de
absorción a mayores longitudes de onda debido al efecto del
sustituyente o por efecto del solvente.
 Desplazamiento Hipsocrómico: Cuando se desplaza el máximo de
absorción a menores longitudes de onda debido al efecto del
sustituyente o por efecto del solvente.
 Efecto hipercrómico: Existe un incremento en la intensidad de la
absorción.
 Efecto hipocrómico: Existe una disminución en la intensidad de la
absorción.
INSTRUMENTACIÓN

Los instrumentos que miden la absorción selectiva de la radiación en las

soluciones se conocen con los nombres de: colorímetros, fotómetros y
espectrofotómetros.

Hoy en día es pertinente diferenciar los instrumentos según su sistema de

detección: detectores simples (convencional) o detectores multicanal (arreglo
de diodo).

Algunos de los diseños básicos de los instrumentos usados en la medición de

la absorción de Energía Radiante se ilustran en el siguiente esquema.
Diagrama de bloques de diferentes tipos de instrumentos de medición de la
absorción molecular

12
 Diagrama de bloques de diferentes tipos de instrumentos de medición de
la absorción molecular

ANÁLISIS CUALITATIVO Y CUANTITATIVO

Análisis cualitativo

Las aplicaciones cualitativas no ofrecen una herramienta muy útil, ya que con
estos espectros existe un número relativamente escaso de máximos y mínimos.
Sin embargo el análisis cualitativo es una excelente herramienta cuando va
precedido de algún método de separación.

Análisis cuantitativo

a) Aplicación:

Compuestos
Aldehídos y cetonas
orgánicos:
Aromáticos
Medicamentos y Drogas
Vitaminas, etc…
Compuestos
(especies absorbentes)
inorgánicos:
Compuestos no absorbentes → Derivatización

(Por ejemplo: formación de complejos coloreados).

13
b) Principales características:

 Alta sensibilidad.
 Absortividades molares ξ ≈ 105
 Intervalos de concentración 10-4 a 10-6M.
 Selectividad: selección de la longitud de onda en la que el único
componente absorbente de una muestra sea la sustancia que se determina.
 Precisión y exactitud: dependiendo del nivel de concentración es posible
lograr valores menores que 1% de error relativo.

Procedimiento para realizar el análisis cuantitativo

a) Recopilación de antecedentes:

 Referencias bibliográficas.
 Métodos normalizados.

b) Preparación y/o tratamiento de la muestra:

 Separación del compuesto de interés (precipitación, extracción por

solvente, cromatografía, etc…).
 Derivatización, si es necesaria.

c) Selección de la longitud de onda de trabajo (λ máx.):

Obtención del espectro de absorción:
 En el espectro de un solo haz, se va alternando la medida de la
absorbancia entre el disolvente (blanco) y la solución que contiene la
muestra en la medida que se va variando gradualmente la longitud de onda.
 En el espectro de doble haz, la operación descrita anteriormente es posible
hacerla automática y simultáneamente.

Para ello los instrumentos disponen de sistemas con microprocesador que

permiten una fácil y expedita obtención de la información. Mediante estos
instrumentos es posible hacer barrido de longitudes de ondas en determinadas
zonas del espectro y a diferentes velocidades.
La excepción a esto último la proporcionan los espectrofotómetros de Arreglo de
Diodos ya que dada su configuración es posible obtener el espectro de absorción
en un amplio rango de longitudes de onda (200–800 nm) en fracción de segundos.

Una vez establecida la longitud de λ máx. (Máxima sensibilidad) se prepara la

curva de calibración.

d) Selección del método de estandarización adecuado.

CURVA DE CALIBRACIÓN

Preparar un set de soluciones de concentraciones crecientes del analito, en un

rango tal que se cumple la Ley de Beer.

« No es conveniente suponer que para una determinada concentración se cumple

la Ley de Beer y por ello utilizar un patrón único como referencia ».

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Una vez obtenidos los distintos puntos (o niveles de calibración) se debe
determinar la ecuación de la recta mediante análisis de regresión lineal (o ajuste
de la curva por mínimos cuadrados). Los instrumentos automatizados traen estas
funciones ya incorporadas en su sistema de cálculo, lo cual permite obtener el
resultado final directamente. La ecuación que relaciona la Absorbancia con la
concentración más común es del tipo:

Y = Ax + B

donde: A = pendiente (ξ)

B = intercepto

r es un parámetro estadístico que da cuenta de la “calidad” de la curva de

calibración y se denomina coeficiente de regresión. En análisis cuantitativo se
considera buena una curva cuando su valor de r es mayor que 0,99.

Para efectuar un análisis cuantitativo en el Laboratorio se sigue los siguientes

pasos:
a) Obtención λ máx. A partir de la gráfica de Absorbancia vs. Longitud
de onda (nm).
b) Obtención del rango óptimo de concentración (Curva de RINGBOM).
Para ello preparamos una serie de soluciones de concentraciones
conocidas del analito, desde una muy diluida hasta una muy
concentrada. Luego se grafica 100 - %T vs Logaritmo de la
concentración. Si se incluye un rango conveniente resulta siempre una
curva con forma de S; conocida como gráfica o curva de RINGBOM. La
curva generalmente tiene una región considerable en donde es casi
recta. La extensión de esta porción recta indica directamente el rango
óptimo de concentración para un análisis fotométrico particular.
c) Obtención de la curva de trabajo o curva patrón.
Se prepara una serie de concentraciones de estándar correspondiente
al analito, los cuales deben estar dentro del rango óptimo de
concentración. Finalmente graficar la Absorbancia vs. la Concentración.
El BLANCO, deberá contener todos los reactivos usados en la
preparación de la muestra, sin la muestra. Sirve para llevar la lectura del
instrumento al 100% T ó 0 (cero) A.
Preparar la solución muestra, determinar su Absorbancia y calcular su
concentración usando el gráfico de patrones.

RANGO ÓPTIMO DEL EQUIPO

La curva de Lotho-Twyan relaciona el % de error contra el % de Transmitancia
de lectura.
De 0-20 %T y de 80 –100% se tiene la misma posibilidad de error en la lectura,
obteniéndose lecturas óptimas entre 20 – 80% T.
La exactitud máxima, se obtiene para una lectura de Transmitancia del 36,8%.

15
 PRÁCTICA N° 1

ANÁLISIS POR ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE

DETERMINACIÓN DE MANGANESO EN ACERO
Método del Peryodato

EQUIPOS Y MATERIALES

01 Balanza Analítica Digital

01 Espectrofotómetro visible GENESYS.
06 Celdas de vidrio o de plástico
05 Fiolas de 100 mL
01 Fiolas de 250 mL
01 Fiola de 25 mL
01 Pipeta volumétrica de 10 mL.
01 Pipeta volumétrica de 5 mL.
01 Pipeta volumétrica de 2 mL.
01 Pipeta volumétrica de 1mL.
06 Luna de reloj.
01 Espátula.
06 Vasos de 250 mL.
01 Probeta de 10 mL
01 Bagueta
05 Pizeta
01 Gradilla plastificada para celdas
05 Propipetas
01 Pinza para vasos
01 Portapipetas
Papel tisu

Reactivos

1) CoCl2. 6H2O.- 2,2000 g/ 100 mL en HCl 1%)

2) Ácido clorhídrico conc. P.a.
3) Mezcla de ácidos: Mezclar en partes iguales ácido nítrico (reactivo
controlado), ácido fosfórico y agua (40 mL de cada uno).
4) Sal de Mohr (Fe(NH4)2(SO4)2.7H2O Q.P.
5) Peryodato de potasio (KIO4) Q.P.
6) MnSO4. H2O Q. P. ó MnSO4. 2H2O Q. P

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 Nombre Pictograma Riesgo Primeros auxilios

Inhalación e Inhalación:
Ingestión: Ventilación,
(re HCl Irritación al suministrar
y tracto oxígeno.
y y respiratorio o Ingestión: Lavar la
HNO3 digestivo, daño boca con
(reactivos corrosivo con abundante agua, no
quemaduras. inducir al vómito.
controlados) Puede producir.
CORROSIVOS edema
pulmonar.

HNO3 Contacto con Contacto con ojos

piel y y piel: Lavar con
ojos:Severas abundante agua,
CORROSIVO y
irritaciones con por 20 a30’, o
COMBURENTE ducharse, no
quemaduras que
pueden derivar aplicar ningún tipo
en ceguera de sustancia.
Atención médica

A.-INSTRUCCIONES PARA EL MANEJO DEL ESPECTROFÓTÓMETRO GENESYS.

a) Encender el estabilizador, luego el equipo.

b) Esperar 2 minutos que el equipo verifique el programa.
c) Dejar que se estabilice el equipo por 30 minutos, antes de usarlo.
d) Oprimir el botón A/T/C, para seleccionar el modo: Absorbancia, %
Transmitancia o Concentración.
e) Pulsar nm▲ o nm▼ para seleccionar la longitud de onda.
f) Limpiar la celda que contiene el blanco con papel tisú, Insertarlo en el
portacelda, cerrar la puerta del compartimiento, ubicar la celda de forma que

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 la luz (indicada por la flecha en el equipo) pase a través de las paredes
claras. Oprimir 0Abs/100%T para configurar el blanco a 0 de A o 100 % T.
g) Retirar el blanco, limpiar la celda que contiene la muestra con papel tisú e
insertar en el portaceldas, ubicarla como se indica en (f). La medición de la
muestra aparece en la pantalla.
h) Retirar la muestra, seleccionar la nueva λ a trabajar, insertar el blanco en el
portaceldas, repetir (g) y (h).

Trazar la gráfica de A o % T, en función de la λ .

B.- VERIFICACIÓN DE LA CALIBRACIÓN DE ESPECTROFOTÓMETRO CON CoCl2

EN HCl Al 1%

Procedimiento

Colocar la solución de CoCl2 .6H2O preparado en HCl al 1% en una celda y la

solución de HCl al 1% en la celda de referencia como BLANCO, secar las celdas
con papel tisú y realizar lecturas de % T de la solución de CoCl2.6H2O, en el
rango de λ entre 450 y 700 nm, variar la λ cada 10 nm de intervalo.

Regresar las soluciones empleadas a sus frascos originales.

Con estas lecturas trazar el gráfico en papel milimetrado de % T vs. λ (Longitud
de onda) y el de Absorbancia vs. λ.
Determinar λ max del CoCl2.6H2O, el valor obtenido y la curva se comparan
con el catálogo del fabricante.

C. DETERMINACIÓN DEL λ MÁXIMO DEL KMnO4

Procedimiento

Obtener la curva de absorción máxima con la solución estándar 2 , usando el

Blanco para ajustar a 0 A. Efectuar las lecturas en el rango de 480 a 550 nm de
longitud de onda, variando la λ cada 10 nm de intervalo. Trazar la gráfica de
Absorbancia o % T en función de la longitud de onda. Determinar la λ max del
KMnO4 y mantener el equipo con esta λ max .

D. DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE MANGANESO EN ACERO

Procedimiento
a) MUESTRA PROBLEMA.- Pesar 0,1200 g de la muestra de acero, pasarlo a
un vaso de 250 mL.
b) PREPARACIÓN DE PATRONES.- Pesar por cuadruplicado, 0,2000 gramos de
sal de Mohr y llevar cada uno de ellos a vasos de 250 mL.

18
c) SOLUCIÓN PATRÓN DE MANGANESO.- 200 ppm Mn (0,2 mg de manganeso
por mL).

Se disuelve 0,1540 g de MnSO4. H2O Q.P ó 0,1696 g MnSO4. 2H2O Q. P y se lleva

a enrase en fiola de 250 mL; homogenizar la solución por inversión.
Seguidamente, a la muestra problema y a los patrones:
Agregar 20 mL de la mezcla de ácidos a cada vaso. Tapar con las lunas de reloj
y colocar sobre la plancha eléctrica. Llevar a ebullición y retirar cuando todos
los óxidos de nitrógeno hayan sido expulsados.

Para Ia muestra problema:

Retirarla de la plancha, dejar enfriar por unos minutos, lavar las lunas de reloj
con chorro de agua destilada y diluir hasta unos 50 mL, cuidadosamente agregar
0,1000 gramos de KIO4. Hervir por unos 3 minutos para oxidar el manganeso.
Enfriar la solución y luego llevar a fiola de 100 mL hasta el enrase, homogenizar
la solución por inversión.
Para Ios patrones: Retirarlos de la plancha y dejarlos enfriar por unos minutos,
lavar las lunas de reloj con un chorro de agua destilada, desde una pizeta,
dejándolo escurrir dentro de los vasos, agregar enseguida a tres de los cuatro
vasos con una pipeta volumétrica 2, 5, 10 mL respectivamente, de la solución
patrón de Manganeso. Al que no se le agrega la solución patrón de manganeso,
será el BLANCO. Seguidamente diluir hasta cerca de 50 mL con agua destilada
y cuidadosamente agregar 0,1000 gramos de KIO4 en los cuatro vasos.
Hervir por unos 3 minutos, para oxidar el manganeso. Enfriar y llevar a fiola
de 100 mL, homogenizar la solución por inversión.
Colocar en el Instrumento la Longitud de onda máxima hallada en la
EXPERIENCIA C.
En una gradilla llevar las celdas que deben contener las soluciones preparadas,
en el siguiente orden: Blanco, Patrón 1, Patrón 2, Patrón 3, Muestra.
Previamente, enjuagar las celdas con las soluciones respectivas antes de
proceder a las lecturas de las mismas.
Seguidamente proceder a la lectura, calibrando a 0 el aparato y enseguida llevar
a 100 % T con el Blanco. Luego continuar las lecturas de los patrones y después
con las muestras.
Graficar la Curva de calibración con los datos de Absorbancia vs. Concentración
(mg Mn/L).
Con las absorbancias de las muestras y la curva de calibración calcular el
contenido de Mn en el acero en % y ppm.

19
 PRACTICA N°2
ANÁLISIS POR ESPECTROFOTOMETRÍA ULTRAVIOLETA
ANÁLISIS DE NITRATOS EN AGUAS

1. SELECCIÓN DE MÉTODO
La determinación de nitrato (NO3-) es difícil debido a los procedimientos
relativamente complejos que se precisan, la elevada probabilidad de que
se hallen sustancias interferentes y los rangos limitados de concentración
de las diferentes técnicas.
Una técnica con luz ultravioleta (UV) que mide la absorbancia de NO3- a 220
nm es adecuada para el estudio de aguas no contaminadas (con bajo
contenido en materias orgánicas).

2. ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS

Si se debe almacenar, consérvese a 4ºC hasta 24 horas; para períodos más

largos, añádase 2 mL de H2SO4 concentrado/ L y manténgase a 4ºC.
NOTA: Cuando se conserva una muestra con ácido, no se puede
determinar NO3- y NO2- individualmente.

MÉTODO ESPECTROMÉTRICO ULTRAVIOLETA SELECTIVO (NO3-)

Fundamento

a) Principio: Utilizar esta técnica solamente para seleccionar muestras con

bajo contenido en materia orgánica, es decir, aguas naturales no
contaminadas y suministros de agua potable. La curva de calibrado de
NO3- verifica la ley de Beer hasta los 11 mg N/L.
La medida de la absorción UV a 220 nm hace posible la determinación
rápida de NO3-. Dado que la materia orgánica disuelta puede absorber
también a 220 nm y NO3- no lo hace a 275 nm, se puede utilizar una
segunda medida a 275 nm para corregir el valor de NO 3-. Esta corrección
empírica dependerá de la naturaleza y concentración de la materia
orgánica y puede variar de unas aguas a otras. En consecuencia, este
método no es recomendable cuando se precise una corrección importante
para la absorbancia de la materia orgánica, aunque puede ser útil para
controlar los niveles de NO3- en un sistema de aguas con un tipo
constante de materia orgánica. Los factores de corrección para la
absorbancia de materia orgánica se pueden establecer por el método de
adiciones en combinación con el análisis del contenido original de NO 3-
por otro método. La filtración de la muestra tiene por objeto eliminar
posibles interferencias de partículas suspendidas. La acidificación con
HCl 1N sirve para impedir interferencias por concentraciones de hidróxido
o carbonato de hasta 1.000 mg de CaCO3/L. El cloruro no afecta a la
determinación.

20
 b) Interferencia: Interfieren la materia orgánica disuelta, los surfactantes,
NO2- y Cr6+. Pueden interferir varios iones inorgánicos, que no se
encuentran normalmente en el agua natural, como clorito y clorato. Las
sustancias inorgánicas se pueden compensar con un análisis
independiente de sus concentraciones y la preparación de curvas de
corrección individuales.
EQUIPOS Y MATERIALES
1. Espectrofotómetro UV - Visible, Shimadzu 1700.
2. Celdas de cuarzo.
3. Balanza analítica.
4. Desecador de vidrio, con agente deshidratante.
5. Pipetas volumétricas de 1, 2, 3, 5, 10, 15, 20 y 25 mL.
6. Fiolas de 50, 100, 500, 1000 mL.

REACTIVOS
Todos los reactivos deben ser de grado analítico.
1) Agua exenta de nitrato.
2) KNO3 p.a.
3) Cloroformo, CHCl3. (reactivo controlado), para mantener la solución patrón
de KNO3 por 6 meses.
4) HCl. (reactivo controlado)

Nombre Pictograma Riesgo Primeros auxilios

CHCl3 Inhalación: Tos, Inhalación:

(reactivo vértigo, Ventilación,
controlado) somnolencia, suministrar oxígeno.
náuseas, pérdida Ingestión: Lavar la
de conocimiento. boca con abundante
Ingestión: Vómito, agua, no inducir al
dolor abdominal. vómito.
Contacto con piel y Contacto con ojos y
ojos: dolor, piel: Lavar con
enrojecimiento. abundante agua, por
varios minutos.
Atención médica.

Soluciones
1. Solución patrón primario de nitrato (100 ppm NO3-—N): Colocar en un crisol
de porcelana aproximadamente 0,3 g de KNO3 y secar en estufa a 105ºC
durante 24 horas. Retirar y enfriar en el desecador.
Pesar 0,1805 g de KNO3 disolver en agua, agregar 2 mL de CHCl3 y diluir
a 250 mL en fiola, enrazar y homogenizar la solución por inversión; 1,00 mL
= 100 μg NO3--N. Esta solución es estable durante 6 meses.

2. Solución patrón intermedia de nitrato (5 ppm NO3-_N): Diluir 5 mL de

solución patrón primario de nitrato (1) con agua destilada, llevar a fiola de
100 mL, enrazar y homogenizar la solución por inversión.
21
 3. Soluciones para la curva de calibración: Preparar soluciones de
calibración en el rango de 0,1- 0,2- 0,3- 0,4- 0,5 ppm de NO3-—N,
diluyendo las alícuotas de solución patrón 5 ppm NO3-—N, antes de
enrazar a 50 mL, añadir 1 mL de HCl 1N, homogenizar la solución por
inversión.

4. Solución de ácido clorhídrico, HCl 1N: Diluir 8,3 mL de HCl conc. en

agua destilada y enrazar en fiola de 100 mL, homogenizar la solución
por inversión.

5. Blanco: En una fiola de 50 mL colocar aproximadamente 45 mL de

agua redestilada, añadir 1 mL de solución de HCl 1N y luego completar
el volumen hasta el enrase, homogenizar la solución por inversión.

TRATAMIENTO DE LA MUESTRA
Procedimiento
En una fiola de 50 mL, añadir 1 mL ó 2 mL ó 5 mL ó 10 mL, según sea el
contenido de nitrato de la muestra transparente, filtrada si fuera preciso y
antes de enrazar, añadir 1 mL de la solución de HCl 1N, mezclar bien y
completar a 50 mL con agua destilada, homogenizar la solución por inversión.

Medida espectrofotométrica: Leer la absorbancia o Transmitancia frente al

blanco reactivo en agua redestilada, ajustada a absorbancia cero.

INSTRUCCIONES PARA EL MANEJO DEL ESPECTROFOTÓMETRO UV_

VISIBLE SHIMATZU 1700.

1) Retirar la bolsa de sílice, del compartimiento de portaceldas del

espectrofotómetro UV. visible.
2) Encender el supresor de picos, el estabilizador, el espectrofotómetro
(botón lado izquierdo), levantar la pantalla del espectrofotómetro UV.
Visible, se completa la verificación del instrumento (Inicio y Mode).
3) Encender la PC, el monitor. Presionar en el espectrofotómetro PC
CONTROL (F4) y cerrar la pantalla.
4) Ingresar al software UV PROBE, luego al modo SPECTRUM y presionar
CONNECT.
5) Ir a EDIT e introducir datos solicitados:
Wavelengh rang: Start: 350, End: 190. Scan: fast. Single: simple.
Parametros instruments: Absorbancia.
No modificar: Path lenght: 10 nm. Slit wicht:1.0 mm fixed.
Light source: 340,8
S/R Exchange.
Click en ACEPTAR.

6) Seleccionar BASELINE (rango: 190-350nm), aparece SLEWING

(esperar) y STOP (botón rojo), NO manipular el equipo hasta que
22
 aparezca en pantalla inferior izquierda: λ max 0,00 Abs, al activarse
los íconos, presionar START, para iniciar corrida de la línea base sobre
la escala de cero.
7) En cada compartimiento: muestra y referencia, colocar las celdas con
el Blanco (parte opaca de la celda, frente al operador) presionar
AUTOZERO, parpadea este ícono y aparece λ max - 0,00 Abs.
8) DETERMINACIÓN DE λ max NO3-: colocar en compartimiento de
muestra (adelante), la celda con patrón intermedio. Si desea cambiar
límites, llevar el cursor al gráfico, click derecho, CUSTOMIZE, LIMITS:
introducir datos necesarios, ACEPTAR. Presionar START y se inicia el
barrido del espectro, se activa STOP (rojo), no manipular el equipo,
hasta que culmine gráfico de la curva. En NEW DATA SET completar
los datos y presionar OK.
9) DETERMINAR la λ max EN LA CURVA: Presionar OPERATION, PEACK
PICK, aparece tabla, click en celda de DESCRIPTION a la altura de λ max
apropiado, anotar este valor, ir a celda de λ max apropiado, click
derecho, click en Propiedades, en PEAKS, activar Description y Down,
Cerrar.
10) Ir a FILE, SAVE AS, introducir datos solicitados y Guardar.
11) GRÁFICA DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN: Seleccionar modo
PHOTOMETRIC. Crear método presionando M. En nueva ventana,
seleccionar parámetros del método.
Utilícese λ max obtenida en (9), luego CLOSE, FILE, SAVE AS,
completar datos y guardar.
12) Colocar en compartimiento de muestra (adelante), la celda con el
Blanco. En STANDAR TABLE (Active) registrar los valores de las
disoluciones preparadas. Ejemplo: Bk, std, 0,00, en las celdas SAMPLE;
TYPE CONC. Respectivamente, y así con cada patrón a analizar.
En SAMPLE TABLE ACTIVE, registrar datos de la(s) muestra(s), clic en
celda BK, luego en READ STD y YES ante la pregunta ¿Quiere
continuar?
13) Colocar en compartimiento de muestra (adelante), la celda con el patrón
1, clic en celda correspondiente a P1, READ STD, continuar igual con
cada patrón. Luego colocar la celda con la(s) muestra(s) en el
compartimiento correspondiente y marcar READ UNK para realizar la
lectura.
14) Ir a GRAPH, introducir parámetros estadísticos, FILE, SAVE AS,
guardar.
15) Presionar DISCONECT, si desea, guarde información en un USB
nuevo.
16) Retirar celdas, presionar MODE (espectrofotómetro), apagar equipo,
estabilizador, monitor, supresor de picos y colocar la sílice.

5. CÁLCULOS

Graficar la Curva de calibración con los datos de Absorbancia vs.

Concentración NO3--N (nitrato expresado como N) del patrón. Con las
absorbancias de las muestras y la curva de calibración calcular el contenido de
NO3- en la muestra en ppm.

23
PRÁCTICA N°3

24
25
26
27
28
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30
31
32
 PRÁCTICA N° 4

ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA

FUNDAMENTO

El método de análisis por absorción atómica o espectrofotometría de

absorción atómica, es un método de análisis cuantitativo que permite la
determinación de la mayoría de los elementos que pueden estar presentes en
una muestra en solución.
La Absorción Atómica se debe a las transiciones electrónicas en los orbitales
atómicos más externos de los átomos o iones en fase gaseosa. Estas
transiciones están cuantizadas y corresponden a la región UV visible.

Esta espectroscopia no nos permite determinar estructuras porque rompe las

estructuras e ioniza el átomo.

El análisis cuantitativo no depende del estado de oxidación, en los átomos no

existen transiciones rotacionales ni vibracionales, por tanto se obtienen
espectros de líneas (líneas más finas) a una determinada longitud de onda
característica de cada elemento, debido a esto es válido para análisis
cualitativo. También se puede utilizar para cuantitativo, porque la intensidad
de la radiación está relacionada linealmente con la concentración por la ley de
Lambert – Beer.

En estos espectros aparece una radiación continua o fondo doble debido a los
sólidos incandescentes.

Tiene gran sensibilidad y fácil manejo, se puede utilizar para gran cantidad de
muestras lo que hace que sea una de las principales herramientas analíticas
utilizada en la industria Química.

Especialmente tienen importancia porque hace posible las determinaciones a

muy bajas concentraciones, particularmente en el rango de las trazas; por
ejemplo, el análisis de trazas de metales en diversos materiales incluyendo los
de alta pureza. Se pueden analizar concentraciones de ppm incluso de ppb.

Este método está basado en la propiedad de los átomos, conocida desde los
primeros tiempos de la espectroscopia y que dice “el átomo al estado libre o
atómico solo absorbe radiación electromagnética que es capaz de emitir”. Esta
radiación emitida, formada de diversas longitudes de onda constituye lo que
se llama la radiación característica y da lugar al espectro característico de los
átomos o espectro atómico del elemento en cuestión.
En la aplicación analítica, los átomos de un metal en solución, son vaporizados
para llevarlos al estado libre o atómico, situación en la que absorben
fuertemente la radiación característica emitida por el mismo metal colocado en
una fuente apropiada de excitación. Esta absorción produce una disminución
de la intensidad de radiación emitida, la cual medida convenientemente
permite determinar la concentración del metal que se analiza.

33
 a. En la fuente de emisión el átomo excitado emite radiación. El
electrón cae a su nivel del átomo emitiendo radiación.
b. La radiación emitida de cierta intensidad va a la fuente de
vaporización.
c. En la fuente de vaporización, el átomo al estado normal absorbe
la radiación emitida según su concentración.
d. La radiación no absorbida va hacia el detector.

Esto significa que para realizar el análisis de algún elemento se requiere de una
lámpara de emisión por cada elemento a analizarse, así por ejemplo, si se va a
determinar sodio, se necesita una lámpara de sodio para la emisión de la
radiación que será absorbida por los átomos de sodio de la solución problema;
si se va a determinar potasio en la misma muestra será necesario cambiar la
lámpara de sodio por una de potasio y así sucesivamente.

INSTRUMENTACIÓN
COMPONENTES DE UN ESPECTROFOTÓMETRO DE ABSORCIÓN ATÓMICA

 Fuente de luz.
 Óptica en la Unidad de Atomización.
 Unidad de Atomización.
 Monocromador.
 Detector.
 Unidad Convertidor de Respuesta.
 Pantalla de presentación de datos.

En la práctica todo instrumento por absorción atómica requiere:

1) Una fuente apropiada que emite las longitudes de onda (radiación
característica) del elemento que se quiere determinar y del cual se selecciona
una sola longitud de onda, generalmente es una lámpara de descarga
especial que recibe el nombre de “lámpara de cátodo hueco” (HCL) y en otros
casos lámpara de descarga sin electrodos.

2) Una fuente adecuada para la vaporización de la solución problema que

permite poner los átomos del metal que se quiere determinar en forma de
vapor atómico y generalmente es un sistema de pulverización acoplado a una
llama. La llama común es la de acetileno- aire aunque hay otras de
temperatura más alta que en algunos casos son necesarias.

3) Un sistema óptico, para la dispersión de la radiación emitida y separación de

la longitud elegida. Esta dispersión se realiza ya sea por prisma o por red de
difracción.
4) Un sistema para la medida de la intensidad absorbida, el que se realiza por
un fotomultiplicador y el circuito electrónico correspondiente acoplado con
él.
5) Sistema de presentación de los resultados, en la cual la intensidad
medida se expresa en términos de absorción. Esta absorción por medio
de un gráfico se relaciona con concentraciones conocidas, el que permite
determinar la concentración del desconocido.

34
 ESQUEMA DEL EQUIPO DE ESPECTROFOTÓMETRO
DE ABSORCIÓN ATÓMICA

APLICACIONES

La técnica de Absorción Atómica, es sencilla pero permite obtener resultados

de alta precisión. Debido a su gran sensibilidad tiene mucha importancia en la
determinación de trazas de elementos metálicos. Actualmente es posible la
determinación de trazas en concentración de menos de 1ppb y se aplica a más
de 50 elementos en diferentes tipos de muestra que hace que este método sea
útil en los diversos campos de la ciencia como: Agricultura, Minería, Textiles,
Alimentos, Petróleos, etc.

TÉCNICA DEL ANÁLISIS

Para las determinaciones cuantitativas se usan dos técnicas:
1) La técnica de la Curva de calibración, es la más común y
2) La técnica de Adición de patrón.

TÉCNICA DE CURVA DE CALIBRACIÓN

Se prepara una serie de soluciones (por lo menos 3) de concentraciones
conocidas del elemento que se va a determinar, en las mismas condiciones
que se ha preparado la muestra y por lo menos con el mismo tipo de solvente.
Con las lecturas obtenidas en el instrumento se traza un gráfico de
Absorbancia vs. Concentración.
Se miden las muestras y las lecturas en valores de absorbancia se llevan al
gráfico para hallar la concentración.

35
 A

2.0

1.60
A

1.20

0.8

0.4

0
0.4 0.8 1.20 1.60 2.0

TÉCNICA DE CURVA DE CALIBRACIÓN

TÉCNICA DE ADICIÓN DE PATRÓN

Se usa cuando no es posible reproducir en los patrones las condiciones en

que se encuentra la muestra. En este caso se prepara 4 soluciones que tenga
la misma cantidad de muestra y a tres de ellas se le agrega cantidades
conocidas pero diferentes del metal que se va a determinar, de manera que las
soluciones resultarán: x ppm, x+ 1 ppm, x + 2 ppm, x + 3 ppm, por ejemplo.
Se miden y se traza el gráfico de Abs. vs. conc., por extrapolación sobre el eje
de las x se encuentra la concentración.

2.0

1.50
A

1.0

0.5

- 0.1 - 0.05 0 0.05 0.1 0.15 0.2

TÉCNICA DE ADICIÓN DE PATRÓN

36
 DETERMINACIÓN DE HIERRO EN JARABE ANTIANÉMICO

EQUIPOS Y MATERIALES

1. Espectrofotómetro de Absorción Atómica Analyst 200, Perkin Elmer.

2. Lámpara de cátodo hueco de hierro.
3. Balanza analítica.
4. Pipetas volumétricas de 1, 3, 5 y 10 mL.
5. Fiolas de 25, 50, 100, 500 mL.

REACTIVOS
Todos los reactivos deben ser de grado analítico.

1) Solución Stock Madre : 1000 ppm Fe

2) Agua destilada.
3) HNO3 (reactivo controlado)

SOLUCIONES

1. Solución Stock Madre: 1000 ppm Fe.

2. Solución patrón intermedia de 100 ppm de Fe.- Diluir 10 mL de solución
stock Madre de 1000 ppm Fe, con agua destilada y enrazar en fiola de 100
mL, homogenizar la solución por inversión.
3. Soluciones para la curva de calibración: Preparar soluciones de
calibración en el rango de 2, 4, 6, 8, 10 ppm de Fe, diluir las alícuotas de
solución patrón intermedia de 100 ppm de Fe, antes de enrazar en fiola de
50 mL, añadir 1 mL de HNO3 concentrado, homogenizar la solución por
inversión.
4. Blanco: En una fiola de 50 mL colocar aproximadamente 45 mL de agua
destilada, añadir 1 mL de HNO3 concentrado y luego completar el volumen
hasta el enrase, homogenizar la solución por inversión.

Procedimiento

TRATAMIENTO DE LA MUESTRA

Tomar con pipeta volumétrica 5 mL de la muestra, llevar a fiola de 100 mL,

añadir 2 mL de HNO3 concentrado, enrazar con agua destilada, homogenizar
la disolución por inversión.
Tomar con pipeta volumétrica 2 mL de la disolución muestra anterior, llevar a
fiola de 50 mL, añadir 1 mL de HNO3 concentrado, enrazar con agua destilada,
homogenizar la disolución por inversión.
37
INSTRUCCIONES PARA EL MANEJO del ESPECTROFOTÓMETRO DE
ABSORCIÓN ATÓMICA ANALYST 200, PERKIN ELMER

1. Levantar la llave general, encender la compresora de aire, el balón de

acetileno, la campana extractora y el estabilizador.
2. Introducir en el equipo la lámpara de cátodo hueco apropiada.
3. Encender el espectrofotómetro: POWER (inferior, izquierda), escuchar
señal de conformidad, al ingresar “Permitir Win Lab 32 control”,
aceptar.
4. Encender monitor, CPU, Presionar “NO enviar” y Cancelar ante Per
Antivirus.
5. Ingresar a software WIN LAB 32, equipo chequea parámetros y luego
ir a WIN LAB 32 AA FLAME.
6. Ir a WORK SPACE, abrir MANUAL FILM Y ANALYST CONTROL.
7. Ir a METHOD, OPEN METHOD y en NEW METHOD indicar elemento a
analizar.
8. Ir a SPECTROMET seleccionar datos y en SIGNAL TYPE utilizar “AA-
BG” (Absorción Atómica- Background)
9. Clic en SETING, READ PARAMETROS luego en SAMPLE y en ambos
corroborar datos.
10. En CALIBRATION, colocar en EQUATION: No forzar por Cero (no
lineal), clic en STD CONCENTRATION, completar con datos
solicitados y cerrar.
11. Guardar los datos del método, presionando FILE, SAVE AS, anotar los
datos de método en METHOD y OK.
12. Ir a SAMPLE INFO, verificar parámetros completar con datos
solicitados y cerrar.
13. Guardar los datos de la muestra con FILE, SAVE AS, anotar datos y
guardar.
14. Ir a LAMP, en nueva ventana verificar/seleccionar el elemento a
analizar, clic en ON /OFF, MEDIA ESCALA y en BACK GROUND y
cerrar.
15. Presionar CONTINNUOS GRAPHICS, esperar aparezca señal de la
lámpara, luego de algunos minutos presionar AUTOZERO. Si se desea
cambiar límites, clic en APPLY y cerrar la ventana.
16. Colocar vaso con agua destilada en el capilar, prender la llama en ON,
colocar Blanco en el capilar, esperar drenar dos veces y clic en
ANALYZE BLANK, en pantalla inferior aparece resultado.
17. Colocar agua en capilar, drenar, luego colocar std 1, drenar y clic en
ANALYZED STD 1, esperar resultado. Repetir esta operación con cada
estándar.
18. Colocar agua en capilar, drenar, luego colocar muestra, drenar y clic
en ANALYZED SAMPLE, esperar resultado.
19. Con el capilar agua destilada, dejar drenar por 15’.
20. Ir a LAMP, apagar en OFF, apagar BACKGROUND, cerrar.
21. Después de 15’ apagar llama en OFF y cerrar. Aparece SHUTDOWN,
Puede guardar información en USB nuevo.
22. Apagar monitor, equipo, estabilizador. Dejar por 30’ encendido la
campana extractora, luego cerrar llave del acetileno, la compresora,
bajar llave general.

38
NOTA

1) La preparación de las muestras y patrones requieren la consulta del

libro de referencias “Métodos de Análisis”, en este libro se encuentra la
información para las condiciones eléctricas de la lámpara de cátodo
hueco que se va a usar, las cuales se deben seguir rigurosamente.

Estas deberán ser anotadas en el cuaderno de prácticas y se refieren a

la longitud de onda que se selecciona para el elemento que se va a
determinar, la corriente que deberá tener el cátodo hueco, etc.

2) También se obtiene la información como se prepara la muestra y los

patrones. Los patrones y las muestras deberán estar completamente
listas al momento de operar el instrumento.

BIBLIOGRAFÍA

1. Métodos Instrumentales de Análisis.- Por H.H. Williard L.L. Merrit J.A. Dean
Nueva edición revisada corregida y aumentada.

2. Traducción de la cuarta edición inglés. Cía. Editorial Continental S.S.

México - España.

3. Atomic-Absorción Spectrofotometry, por W.T. Edwekk J.A.F. Gidley.

Pergamon Press, New York, 1961.

39
 PRÁCTICA N° 5

ESPECTROFOTOMETRÍA DE EMISIÓN DE LLAMA

ANÁLISIS DE POTASIO EN AGUAS

FUNDAMENTO

a) Principio:
Se pueden determinar cantidades traza de potasio por espectrofotometría
de emisión de llama a una longitud de onda de 766,5 nm .Se pulveriza la
muestra en una llama de gas y la excitación se realiza en condiciones
controladas y reproducibles. La línea espectral se selecciona a 766,5 nm y
es aproximadamente proporcional a la concentración del elemento. La curva
de calibración puede ser lineal, pero muestra una tendencia a la
horizontalidad en concentraciones superiores.

b) Interferencia:
No hay interferentes significativos.

2.- INSTRUMENTAL
a) Espectrofotómetro de absorción atómica en la modalidad de emisión de
llama.
b) Material de vidrio: Enjuáguese todo el material de vidrio con HNO3 (1+15)
y a continuación con varias porciones de agua destilada y desionizada.

3.- REACTIVOS
Con objeto de hacer mínima la adsorción de potasio, conviene almacenar
todas las soluciones en botellas de plástico. Utilizar recipientes pequeños
para reducir la cantidad de elemento seco que puede quedar en las paredes
de la botella cuando se vierta la solución.

1) Agua Destilada desionizada: Utilizar agua destilada desionizada para

preparar todos los reactivos y patrones de calibración, así como para
disoluciones.
2) Solución madre de potasio, 100 ppm K: Disolver 0,1908g de KCl
secados a 140ºC y diluir con agua hasta 1000 mL, homogenizar la
solución por inversión; 1 mL=1 mg K
3) Solución de potasio intermedia. 5 ppm K.- Diluir 5 mL de solución
madre de potasio hasta 100 mL empleando agua destilada
desionizada, homogenizar la solución por inversión; 1 mL=1 μg K.

40
 PROCEDIMIENTO

I.- Técnica de Curva de Calibración

1) Muestra: Tomar con pipeta volumétrica 5 mL de la muestra de agua sin

gas, llevar a fiola de 100 mL y enrazar con agua destilada desionizada.

2) Patrones para la curva de calibración: En seis fiolas de 50 mL,

adicionar a cada una, con pipeta volumétrica, 1, 2, 3, 4, 5, 10 mL de la
solución intermedia de 5 ppm K, y enrazar. Las soluciones así
preparadas tendrán una concentración de 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 1,0 ppm
K respectivamente, ésta última servirá para fijar el límite superior de
las lecturas.

3) Para el Blanco, enrazar con agua destila desionizada una fiola de 50

mL.
Seguidamente proceder a las lecturas, iniciando con el blanco, luego
los patrones y la(s) muestra (s).

Con la gráfica de curva de patrones, calcular las ppm de K en la

muestra.

II.-Técnica de Adición de Patrones

1) Patrones para la curva de adición de patrón: En cuatro fiolas de 50 mL,

adicionar a cada una, con pipeta volumétrica 10 mL de la muestra de
agua preparada en I (a), luego medir con pipeta volumétrica de la
solución intermedia de 5 ppm K, volúmenes de 0,0 ; 1,0 ; 2,0 ; 3,0 mL,
agregar respectivamente a cada fiola, enrazar, homogenizar la
solución por inversión. Las soluciones así preparadas tendrán una
concentración de 0; 0,1; 0,2; 0,3 ppm K respectivamente.
2) Seguidamente proceder a las lecturas, iniciando con el de
concentración más baja hasta la de mayor concentración.
Con la gráfica de adición de patrones, calcular las ppm de K en la
muestra.

INSTRUCCIONES PARA EL MANEJO del ESPECTROFOTÓMETRO DE

ABSORCIÓN ATÓMICA ANALYST 200, PERKIN ELMER

1. Prender la llave general, compresora de aire, balón de acetileno,

campana extractora y estabilizador.
2. Encender el espectrofotómetro: POWER (inferior, izquierda), escuchar
señal de conformidad, aparece en la pantalla del equipo: “Permitir Win
Lab 32 control”.
3. Encender monitor, CPU, Ingresar a software WIN LAB 32, el equipo
chequea parámetros.

41
TÈCNICA: CURVA DE CALIBRACIÒN:

4. Ir a WORK SPACE, abrir MANUAL FILM.

5. Ir a METHOD, en NEW METHOD indicar elemento a analizar.
6. Ir a SPECTROMET seleccionar datos y en SIGNAL TYPE utilizar
“Emisión.”
7. Clic en SETING, READ PARAMETROS luego en SAMPLE y en ambos
corroborar datos.
8. En CALIBRATION, colocar en EQUATION: lineal con intercepto
calculado.
9. Clic en STD CONCENTRATION, completar los datos solicitados en la
columna ID (blanco, st. 1,…., no colocar estándar de más alta
concentración) indicar concentración de cada uno y cerrar.
10. FILE, SAVE AS, anotar el METHODO y OK.
11. Ir a SAMPLE INFO, verificar parámetros, completar los datos
solicitados en la columna ID, y cerrar.
12. FILE, SAVE AS, anotar datos en SAMPLE INFO y guardar.
13. Llenar 2(*) vasos con agua destilada, 1 y 2. Colocar el capilar, en el
primero, encender la llama en ON, luego el segundo, y a continuación
el Blanco en el capilar, esperar drenar dos veces, en cada caso.
14. Presionar CONTINNUOS GRAPHICS, el equipo solicita el standard de
más alta concentración. Aspirar esta solución, drenar 2 veces y clic
en OK. Esperar que aparezca la señal de emisión de radiación. Cuando
llega la curva al eje Y, colocar el vaso 1 con agua destilada, el vaso 2
y el blanco; esperar drenar dos veces en cada caso. Presionar
AUTOZERO. Si se desea cambiar límites, clic en APPLY. Cerrar.
15. Aspirar el blanco y hacer clic en ANALYZE BLANK, esperar drenar dos
veces, en pantalla inferior aparece resultado.
16. Colocar std 1, drenar 2 veces y clic en ANALYZED STD 1, esperar
resultado. Repetir esta operación con cada estándar (Excepto el
estándar de más alta concentración). Guardar los resultados.
17. Colocar vaso 1 con agua en capilar, enseguida el vaso 2, drenar, luego
colocar muestra, drenar 2 veces en cada caso y hacer clic en
ANALYZE SAMPLE, esperar resultado. Continuar con el resto de
muestras, por el método de curva de calibración.
18. Colocar el capilar en el agua destilada, dejar drenar por 10’. Apagar
llama, ir a File, presionar Exit. Esperar el anuncio de SHUT DOWN y su
desactivación.
19. Ingresar a WIN LAB 32.

TÈCNICA DE ADICIÒN DE PATRONES

20. Ir a WORK SPACE, abrir MANUAL FILM.

21. Ir a METHOD, en NEW METHOD indicar elemento y técnica a analizar.
22. Ir a SPECTROMET seleccionar datos y en SIGNAL TYPE utilizar
“Emisión.”
23. Clic en SETING, READ PARAMETROS luego en SAMPLE y en ambos
corroborar datos.
24. En CALIBRATION, colocar en EQUATION: Método de adición.
Intercepto calculado.

42
 25. Clic en STD CONCENTRATION, completar los datos solicitados (solo
indicar estándares con sus concentraciones, ejemplo ap1 - 0 ppm) y
cerrar.
26. FILE, SAVE AS, en METHOD y CLICK EN OK.
27. Llenar 2(*) vasos con agua destilada, 1 y 2. Colocar el capilar, en el
primero, encender la llama en ON, luego el segundo, y a continuación
el Blanco en el capilar, esperar drenar dos veces, en cada caso.
28. Presionar CONTINNUOS GRAPHICS, el equipo solicita el standard de
más alta concentración. Aspirar esta solución, drenar 2 veces y clic
en OK. Esperar que aparezca la señal de emisión de radiación. Cuando
llega la curva al eje Y, colocar el vaso 1 con agua destilada el vaso 2 y
el blanco; esperar drenar dos veces en cada caso. Presionar
AUTOZERO. Si se desea cambiar límites, clic en APPLY. Cerrar.

29. Colocar std 1 (Adición de patrones), drenar 2 veces y clic en

ANALYZED STD 1, esperar resultado. Repetir esta operación con cada
estándar de adición de patrón. Guardar los resultados.

30. Colocar el capilar en el agua destilada, dejar drenar por 15’.

31. Apagar llama en OFF y cerrar. Aparece SHUTDOWN, esperar su
desactivación.

32. Apagar monitor, equipo, estabilizador, desconectar. Dejar por 30’

encendido la campana extractora, luego cerrar llave del acetileno, la
compresora, bajar llave general.

Nota (*): Se recomienda usar 2 vasos con agua destilada, para prevenir la
contaminación del agua de lavados por el contenido de patrones y muestras
adherido a la parte externa del capilar.

El agua del vaso 1 sirve para lavar el capilar y la del vaso 2 se conserva limpia
y se usa a continuación para asegurar la limpieza del sistema antes de pasar
la siguiente solución.

6.-BIBLIOGRAFÍA

1. Gilbert, P.T.R.C. Hawes & A.O.Beckman 1950, Beckman flame

spectrophotometer, Anal Chem. 22:272.

2. West, P.W.Folse & D.Monngidmfry 1950 Application of flame

spectrophotometry in water analyses, Anal Chem.
22:267.

3. Collins C.G. & Polkinhorne 1952 .An investigation of anionic

interference in the determination of small quantities of potassium
and sodium with a new flame photometer. Anal Chem. 77:430

43
44
 PRÁCTICA N° 6
CROMATOGRAFÍA DE GASES

1.- Introducción.

En cromatografía de gases se incluyen todos los métodos cromatográficos en los

que la fase móvil es un gas (gas portador), y la fase estacionaria un líquido (CGL)
o un sólido (CGS). Se desarrolla en una columna cerrada en la que se encuentra
retenida la fase estacionaria y por la que se hace pasar el gas portador, la técnica
de separación se realiza por elución.
Iniciado el proceso cromatográfico los componentes de la mezcla se distribuyen
entre la fase estacionaria y la fase móvil; la elución tiene lugar mediante el paso
de un gas inerte a través de la columna. La fase móvil no interacciona con el
analito y su única misión es la de transportar la muestra.
La cromatografía gas-sólido, tiene una fase estacionaria sólida en la cual se
produce la retención de los analitos debido a la adsorción física sobre la
superficie del sólido. Esta técnica ha tenido una aplicación limitada debido a la
tendencia de los picos de elución a formar colas y a la retención semipermanente
de gases activos sobre la fase estacionaria.
La cromatografía gas-líquido, se basa en la distribución del analito entre una fase
móvil gaseosa y una fase estacionaria líquida inmovilizada sobre la superficie de
un sólido inerte (soporte) o en las paredes interiores de la columna, si ésta es
capilar.
La técnica ha sido ampliamente desarrollada en los últimos años en el análisis de
compuestos volátiles (punto de ebullición inferior a 400oC). La limitación se debe
a que las muestras se deben de introducir como gas en la entrada de la columna;
cuando son líquidas se volatilizan instantáneamente en el puerto de inyección del
Cromatógrafo.
Martin y Synge, en 1941, definieron la técnica y en 1955 aparece en el mercado el
primer cromatógrafo.

2.- Esquema de un cromatógrafo de gases

Las partes esenciales de un equipo cromatográfico son:
• Fuente de gas portador (botella a presión)
• Sistema de regulación de caudales (válvula reguladora y manómetro)
• Puerto termostatizado de inyección de las muestras.
• Columna termostatizada, conteniendo la fase estacionaria, dentro de un
Horno.
• Detector termostatizado, con amplificador de señal y registro gráfico.
• Caudalímetro de precisión.

45
 Diagrama de un cromatógrafo de gases.

El gas portador es un gas inerte, generalmente helio, nitrógeno o argón, de

elevado grado de pureza. El caudal del mismo que pasa por la columna, ha de ser
conocido y controlado.
El puerto de inyección, para introducir los solutos en la corriente de gas portador
y vaporizar las muestras cuando éstas no son gaseosas. Así, la temperatura del
puerto de inyección debe de ser superior a la del punto de ebullición del
componente de la mezcla menos volátil.
Las columnas pueden ser con relleno, en las que la fase estacionaria líquida está
retenida sobre un sólido inerte (soporte) y capilares o semicapilares, en las que
la fase estacionaria se fija sobre las paredes interiores del capilar. La temperatura
de la columna depende de los puntos de ebullición de los componentes de la
mezcla.
El detector tiene por objeto medir la variación de alguna propiedad física del gas
portador originada por la elución de los compuestos. La temperatura del detector
ha de ser mayor o igual que la de columna para evitar la condensación de algún
compuesto eluido
Registrador gráfico o digital de la medición del detector.
La separación de los compuestos de una mezcla se realiza en las siguientes
etapas,
1.- Una vez elegida la columna y fase estacionaria, se ajustan las temperaturas
de la cámara de inyección, columna y detector, así como el caudal de gas

46
 portador. Cuando la señal del detector es constante (sin ruidos la línea base)
se hace la inyección de la muestra.
2.- Las muestras se inyectan en cantidades inferiores a 1 μl cuando son
líquidas y sobre 1 ml si son gaseosas; se introducen en la cámara de
inyección, donde se vaporizan, y son arrastradas hasta la cabeza de la
columna.
3.- Los componentes se fijan en una pequeña zona de la columna; por
equilibrios sucesivos entre la fase móvil y la estacionaria, cada componente
se desplaza por la columna a velocidades diferentes.
4.- Finalmente, los solutos que salen de la columna, pasan al detector y se
obtiene el cromatograma.
Los parámetros que definen una separación cromatográfica gas-líquido son, tipo
de gas portador y caudal del mismo; columna y dimensiones de la misma; fase
estacionaria; tipo de detector; temperatura del puerto de inyección, de la columna
y del detector.

3.-Fase móvil

Ha de ser un gas inerte, que no interaccione con la fase estacionaria ni con el

analito, como el helio, el argón, el nitrógeno y el hidrógeno. La elección del gas
portador se hace, frecuentemente, en función del detector. El nitrógeno, helio y
hidrógeno suele utilizarse con los detectores de ionización de llama (FID). El
argón con el detector de captura electrónica (ECD). El helio e hidrógeno con el
detector de conductividad térmica (TCD), por su elevada conductividad; si bien
el hidrógeno es un fuerte reductor, lo que puede limitar su uso.
La velocidad de flujo se controla por medio de reguladores de presión,
manómetros y medidores de flujo. El rango de presiones varía entre de 0,7 a 3,5
kg/cm2 por encima de la presión ambiental, lo que proporciona una velocidad de
flujo desde 25 a 50 ml/min en las columnas de relleno y de 1 a 25 ml/min en las
columnas capilares. El caudal de gas portado se mide al final de la columna,
mediante un medidor de pompas de jabón.

4.-Sistema de inyección

La eficacia de la columna obliga a que la muestra sea de un tamaño adecuado y

que se aplique instantáneamente; inyecciones lentas o muestras de volumen
excesivo producen ensanchamientos de las bandas y disminuye la eficacia.
La muestra se introduce en el bloque de inyección con una microjeringa a través
de una membrana de caucho o silicona (septum). La cámara de inyección es de
acero inoxidable o níquel con un sistema de calefacción eléctrico y un

47
aislamiento térmico que permita mantener una temperatura constante, 50 °C por
encima del punto de ebullición del analito.

INYECTOR PARA CAPILARES

En las columnas de relleno, la cantidad de muestra líquida máxima es de 10 µL;

en columnas capilares se utilizan muestras mucho más pequeñas, del orden de
10-3 µL. El inyector para columnas capilares suele disponer de un sistema de
división de flujo (split/splitless) para que a la columna solamente pase una
pequeña fracción de la muestra, desechando el resto. Las muestras gaseosas se
inyectan mediante una válvula automática y en mayor cantidad.
Los requisitos que debe cumplir un sistema de inyección son producir bandas
iniciales lo más estrechas posibles y no alterar la composición de la mezcla que
llega a la columna.

5.-Tipos de columnas
Existen dos tipos de columnas, principalmente, de relleno y capilares o
semicapilares. Contiene la fase estacionaria y en ella tiene lugar la separación
cromatográfica.

48
Las columnas de relleno suelen ser de cobre, acero inoxidable, aluminio, vidrio y
teflón; con un diámetro interior entre 2 y 4 mm y una longitud entre 2 y 3 m. La
eficacia está en torno a 1.000-2.000 (platos teóricos/m). Suelen emplearse para
muestras poco complejas, máximo 10 componentes.
La columna está rellena de un material sólido (soporte), finamente dividido y
homogéneo; recubierto, por una capa de 0,05-1 µm de espesor, de fase
estacionaria líquida. Está configurada en forma helicoidal, con un diámetro de
unos 15 cm, para poder ser instalada en el horno termostatizado.
Las columnas capilares tienen un diámetro interior inferior a 1 mm (320-250 µm)
y una longitud de 5 a 50 m. Suelen construirse con sílice fundida que le dan gran
resistencia física y flexibilidad. Alcanzan una eficacia hasta de 4.000 (platos
teóricos/m) y se usan para muestras complejas. La fase estacionaria se
depositada sobre las paredes interiores del tubo capilar.
Otro tipo de columnas capilares son con soporte recubierto, en la que la
superficie interna del capilar está recubierta de una capa de material de soporte
(tierras de diatomeas) de 30 µm, lo que permiten una mayor cantidad de fase
estacionaria y por tanto de muestra.
Las columnas semicapilares tienen un diámetro interior de 530 µm que admiten
cantidades de muestra similares a las columnas de relleno, y proporcionan mayor
eficacia que éstas.
Una de las variables importantes en el desarrollo cromatográfico, como se indicó
con anterioridad, es la temperatura de la columna; temperatura óptima es función
de los puntos de ebullición de los componentes de la muestra y del grado de
separación deseado.
En muestras de parecidos puntos de ebullición la temperatura óptima es
ligeramente superior al punto de ebullición medio de los componentes de la
muestra. En el caso de muestras complejas, en la que los puntos de ebullición de
los distintos componentes son muy diferentes, se recomienda emplear una
programación de temperatura, aumentando ésta continuamente a medida que
avanza la separación. El aumento de la temperatura reduce los tiempos de
retención.

6.-Fase estacionaria. Soporte sólido

La fase estacionaria de una columna cromatográfica ha de reunir una serie de

requisitos como,

* Baja volatilidad, su punto de ebullición debe de ser por lo menos 100oC

Superior a la temperatura máxima de operación de la columna.
* Estabilidad térmica.
* Inercia química.
* Los valores del factor de capacidad (k´) y del factor de selectividad (α) de los
analitos deben estar dentro de los intervalos aconsejados.

49
La separación en cromatografía gas-líquido se debe a los diferentes coeficientes
de reparto del analito entre la fase móvil y la fase estacionaria y tiene que haber
un cierto grado de solubilidad de los compuestos con la fase estacionaria. Por
ello, una característica muy importante de la fase estacionaria es la polaridad.
Siguiendo el principio de «semejantes disuelven a semejantes» los solutos se
retienen más en las fases líquidas de polaridad parecida, lo que permiten obtener
mejores separaciones.
Las fases estacionarias compuestas de hidrocarburos y de dialquilsiloxanos son
poco polares, las compuestas por poliéster son muy polares. En cuanto a
posibles compuestos objeto de separación, los alcoholes, ácidos y aminas son
polares; los ésteres cetonas y aldehídos tienen polaridades intermedia; y son de
baja polaridad los hidrocarburos saturados.
Otro factor a tener en cuenta son los límites de temperatura que puede soportar
la fase estacionaria, el límite inferior será el punto de fusión o temperatura a la
que la viscosidad de la fase líquida es muy elevada, lo que haría disminuir la
eficacia. El límite superior es la temperatura a la que la presión de vapor de esta
fase sea 0,1 mm Hg (250oC inferior al punto de ebullición) por encima de esta
temperatura se produce arrastre de la fase líquida, lo que lleva consigo efectos
en el detector (ruido, suciedad), interferencias con los solutos y en suma, deterioro
de la columna.
En una fase líquida cualquiera, una serie homóloga se eluye según orden
creciente de número de átomos de carbono. Si la fase es no polar, los solutos no
polares eluyen según orden creciente de punto de ebullición. En una fase polar
se retendrán más los solutos polares que los no polares a igualdad de puntos de
ebullición.
Otro aspecto a desarrollar, relacionado con la fase estacionaria, es el soporte
sólido empleado en las columnas de relleno; el objetivo es el de proporcionar una
superficie elevada donde depositar la fase líquida en forma de película muy fina
para proporcionar una mayor superficie de contacto entre fase móvil y fase
estacionaria.
Las características de los soportes sólidos son, una elevada superficie específica
(1m2/g); una superficie homogénea; estabilidad térmica; geometría adecuada;
baja dispersión de tamaño de las partículas, en torno a 150-250 µm; dureza
mecánica; inercia química y naturaleza porosa.
Los soporte, más generalizados, son los de sílice como las tierras de diatomeas
o sintéticos; de vidrio y de polifluorocarbonados (teflón). Los soportes de
diatomeas están constituidos por residuos de algas unicelulares diatomáceas
que se unen formando filamentos.
Hay unas 10.000 especies de diatomeas con esqueletos diferentes, pero parecida
estructura. Tienen una superficie específica de 1 m2/g. El constituyente
mayoritario es de anhídrido silícico SiO2 (90%), tratado con un fundente alcalino
a 1.600oC , se obtiene el producto comercial conocido como Chromosorb W de
una superficie poco adsorbente por lo que es muy útil para separar compuestos
polares. Otro soporte es el de polvo de ladrillo refractario conocido como

50
 Chromosorb P, C-22 y Sterchomel, tiene mayor resistencia mecánica y superficie
específica que el anterior, pero es muy activo y no se puede utilizar con
compuestos polares.

Los soportes de silicatos en columnas de relleno y en las paredes interiores de

sílice fundida, en las columnas capilares, provocan adsorciones no deseadas de
analitos polares, lo que da como resultado picos cromatográficos distorsionados.
Se ha demostrado que este fenómeno se debe a los grupos silanol (-SiOH) que
se forman en la superficie de los silicatos debido a la humedad. El silanol tiene
gran afinidad por las moléculas orgánicas polares. Este proceso puede
desactivarse por sililación con dimetilclorosilano, Cl2Si(CH3)2, que elimina el H
del silanol formando ClH.

7.- Detectores

Un detector es todo dispositivo capaz de medir una propiedad física del gas
portador, la cual varía con la presencia de pequeñas cantidades de analito; debe
reunir una serie de características,

• Alta sensibilidad (relación entre la respuesta del detector y la magnitud física

de la muestra detectada)
• Buena estabilidad
• Respuesta continua y reproducible a los cambios de concentración del
compuesto
• Respuestas adecuadas al mayor número posible de muestras
• Tiempo de respuesta corto
• Reactividad nula.

El detector más común es:

a) Detector de ionización de llama, es uno de los más usados en cromatografía

de gases; el gas portador procedente de la columna se mezcla con hidrógeno
que sale por una tobera. En el extremo de ésta, se aporta aire y forma una llama
que quema e ioniza los compuestos separados en la columna.
En la parte superior se encuentran dos electrodos entre los que se establece
una diferencia de potencial; el analito ionizado en la llama y ocasiona un paso
de corriente entre los electrodos. Los gases portadores que se utilizan son el
helio, nitrógeno e hidrógeno.
Este detector es insensible a grupos funcionales como carbonilo, alcohol,
halógenos y amina que originan en la llama pocos iones; lo mismo ocurre con
el He, Ar, Kr, Ne, Xe, O2, N2, CS2, H2S, SO2, NO, N2O, NH3, CO, CO2, H2O, CH4,

51
 SiHCl3, SiF4. Por otra parte, posee una elevada sensibilidad (10-13 g soluto/ml)
y es destructivo

Detector de ionización por llama de hidrógeno.

8.-Aplicaciones analíticas
La aportación analítica de la cromatografia de gases al análisis químico tiene dos
vertientes, la primera es su capacidad en la separación de compuestos
(orgánicos, inorgánicos, bioquímicos, etc.). La segunda es emplear los tiempos
o volúmenes de retención para la identificación cualitativa, mientras que el área
de los picos proporciona información cuantitativa.

A. ANÁLISIS CUALITATIVO
El análisis cualitativo se efectúa comparando los tiempos de retención o
volúmenes de retención de la nuestra problema, con los tiempos o volúmenes
de retención de un patrón.
Los tiempos de retención se miden desde el punto de inyección de la muestra,
hasta la altura máxima de los picos.
Como parámetro cualitativo se encuentra el tiempo de retención (tR) o el
volumen de retención (VR); sin embargo, su dependencia de variables tales
como temperatura de la columna, velocidad de flujo y composición de la fase

52
 estacionaria, le hace poco fiable. Pese a ello, si se observan tiempos de
retención muy parecidos para un patrón (sustancia conocida) y una muestra
problema cuando cambian las condiciones de operación, las probabilidades
de que ambas sean la misma sustancia aumentan.
Otro parámetro cualitativo es la «retención relativa» que requiere un patrón
interno B que permite obtener un valor de á que sirve como índice para
identificar un compuesto A.

A = ((tr)B - tM ) / ((tr)A – tM)

B. ANÁLISIS CUANTITATIVO
En el análisis cuantitativo se mide el área de los picos. Para determinar el área
de los picos se debe hacer uso de la aproximación triangular de la curva
gaussiana, midiendo la altura y dividiendo entre la mitad del ancho de la base.
Para los picos más amplios debe determinarse el área bajo la curva. Cuando
los picos son precisos y angostos, el error al medir solamente la altura, es
mínimo. En el análisis cuantitativo existen varios factores importantes:
Introducción de cantidad exacta de la muestra, exactitud al medir el área de los
picos, factores de sensibilidad de cada compuesto, linealidad de los detectores
y columnas que dan picos bien resueltos.
MÉTODOS DE CALIBRACIÓN.- Existen varios métodos de calibración
citaremos algunos de ellos:
A. Área de Normalización.- Este método es realmente un cálculo del porcentaje
de área, asumiendo que es igual al porcentaje del peso conocido.

A X  x 100
 A 1 
% ÁREA X 

Donde AX = es el área de X y el denominador es la suma de todas las áreas,

siendo x el analito.
B. Estándar externo.- Este método es usado preferentemente cuando se
conoce las cantidades del analito, se cromatografían, se miden las áreas y
se plotea la curva de calibración Área vs. Concentración.
C. Estándar interno.- Este método y el de adición de estándar son
particularmente usados para técnicas que no son tan reproducibles. El
método de estándar interno no requiere la medida de volúmenes exactos. El
estándar elegido para este método no debe ser un componente de la muestra
y se agrega a cada muestra una cantidad conocida de este estándar.

53
D. Método de adición de estándar.- El estándar también se añade a la muestra.
El principio del método es que el incremento adicional producido por la
adición del estándar es proporcional a la cantidad de estándar añadido, y
este proporcionalmente puede ser usado en determinar concentración del
analito en la muestra original. El estándar debe contener al analito.

Procedimiento
A. ANÁLISIS CUALITATIVO:
Reactivos:1) Etanol absoluto. 2) n-butanol. 3) Metanol. 4) Agua bidestilada.

Nombre Pictograma Riesgo Primeros Auxilios

Inhalación: Irrita Inhalación:

vías Ventilación,
respiratorias suministrar
vértigo, oxígeno.
somnolencia, Ingestión: Lavar la
náuseas, boca con
pérdida de abundante agua,
Conocimiento. no inducir al
n- butanol Ingestión: vómito, ni
C4H9OH Vómito, administrar nada
Dolor por la boca a la
abdominal. persona
Contacto con inconsciente.
piel Contacto con ojos
y ojos: riesgo y piel: Lavar con
ocular abundante agua o
Grave, dolor. ducharse por
varios minutos.
Atención médica.

Inhalación: Irrita Inhalación:

vías Ventilación,
respiratorias suministrar
vértigo, oxígeno.
metanol somnolencia, Ingestión: Lavar la
CH3OH náuseas, boca con
pérdida de abundante agua,
Conocimiento. no inducir al
Ingestión: vómito, ni
Vómito, administrar nada
Dolor por la boca a la
abdominal. persona
Contacto con inconsciente.
piel Contacto con ojos
y ojos: riesgo y piel: Lavar con
ocular abundante agua o
Grave, dolor. ducharse por
varios minutos.
Atención médica.

54
 EQUIPO: Instrumento: Cromatógrafo de Gases AutoSystems XL – Perkin
Elmer
Columna Capilar: SPB - 608

Longitud: 30 m x 0,53 nm DI x 0,5 μm

Fase móvil: N2
Detector: FID
Temperatura del Horno: 100º C
Temperatura del Detector: 200ºC
Temperatura del Inyector: 150ºC
Volumen de inyección: 0,1 μL

1. Preparación de soluciones:

Medir con pipeta 2 mL de etanol, butanol y acetona, colocar en una fiola

de 10 mL y enrasar con agua bidestilada.

2. Datos obtenidos:

Identificar los picos obtenidos al inyectar la mezcla de alcoholes.

Cromatograma Tiempo de retención Solvente

(Tr)
Pico 1

Pico 2
Pico 3

ANÁLISIS CUANTITATIVO

DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE METANOL EN BEBIDAS

ALCOHÓLICAS (PISCO) POR EL MÉTODO DEL PATRÓN INTERNO

Procedimiento
Método: Adición de estándar Interno (n-butanol)
Reactivos:
1. Etanol grado cromatográfico ( ρ = 0,7893)
2. Estándar interno: 386uL de n-butanol, llevar a fiola de 25 mL y
enrasar con etanol al 40%, homogenizar la solución por
inversión.
3. Solución stock: 127uL (127mL) de metanol, llevar a fiola de 100
mL y enrasar con etanol al 40% homogenizar la solución por
inversión.
55
 Preparación de estándares:

Estándar 1:
Medir 5 mL de la solución stock y llevar a fiola de 50mL; antes de enrasar
añadir 800 μL de solución estándar interno, enrasar la fiola con etanol al
40% V/V, homogenizar la solución por inversión.
Esta solución tendrá 100 ppm de MeOH.

Estándar 2:
Medir 5 mL de la solución stock y llevar a fiola de 25mL; antes de enrasar
añadir 400 μL de solución estándar interno; enrasar la fiola con etanol al
40%, homogenizar la solución por inversión.
Esta solución tendrá aproximadamente 200 ppm de MeOH.

Estándar 3:
Medir 10 mL de solución stock en fiola de 25 mL; antes de enrasar añadir
400 μL de solución estándar interno; enrasar la fiola con etanol al 40%
homogenizar la solución por inversión.
Esta solución tendrá aproximadamente 400 ppm de MEOH.

Preparación de la muestra:

En una fiola de 25 mL adicionar 20 mL de pisco, y en otra fiola 10 mL de

pisco, luego añadir 400 μL de solución estándar interno (n-butanol) a cada
fiola y enrasar con agua bidestilada homogenizar la solución por inversión.

Preparación de soluciones:

Sol.
Solución Stock STD Volumen % MeOH MeOH
(MeOH) Interno (n- final (mL) (v/v) (mg/L)
butanol)

Std1

Std2

Std3

Muestra

56
1. Parámetros Cromatográficos:

Equipo: Cromatógrafo de Gases

Marca : Perkin-Elmer
Modelo: AutoSystem XL
Columna:
Gas Carrier:
Horno:
Temp. del Inyector:
Detector:
Volumen de inyección:

2. Datos obtenidos:

Solución A MeOH A n-butanol A MeOH/ Conc.

( V.s) ( V.s) A n-BuOH MeOH
(mg/L)

Std1

Std2

Std3
Muestra

- Graficar A MeOH/A n-butanol vs. Conc. MeOH con los datos obtenidos
para los estándares.

- Realizar la regresión lineal para los mismos datos y obtener el

coeficiente de correlación.

- Determinar el contenido de Metanol en mg/L y en %V/V MeOH

57
 CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA (HPLC)

Fundamento
La cromatografía liquida, es un método físico de separación, basado en la
distribución de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una
fija o estacionaria y otra móvil.

La cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC), o high performance liquid

chromatography, denominada también cromatografía líquida de alta presión, se
utiliza para separar, identificar y cuantificar compuestos de una mezcla,
utilizando alta presión.

La fase móvil es un líquido que fluye a través de una columna que contiene la
fase fija. El líquido (fase móvil) circula en contacto con un sólido u otro líquido
inmiscible (fase estacionaria), a una gran presión, al inyectar una mezcla de
sustancias (analitos) en la fase móvil, cada analito avanzará con una velocidad
diferente, el cual dependerá de su afinidad por cada una de las fases, al terminar
el recorrido de la muestra por la columna, cada una de las sustancias
introducidas en el sistema eluirán, es decir se separarán los componentes de la
muestra, en tiempos diferentes.

HPLC es particularmente útil para la separación de materiales con grandes pesos

moleculares que presentan una volatilidad muy baja y no pueden separarse
mediante cromatografía de gases. Se puede determinar, aminoácidos, proteínas,
esteroides, drogas, plaguicidas, antibióticos Se usa principalmente en la
biotecnología, en ciencias y la industria farmacéutica.

Si una cantidad excesiva de gas permanece disuelta en la fase móvil líquida a la

presión de la columna, el gas puede salir del detector y provocar grandes picos
no deseados. Estos pueden eliminarse mediante el burbujeo de helio de gran
pureza a través del líquido cuando el sistema HPLC no disponga de un
desgasificador integrado. El helio debe presentar unos niveles bajos de
hidrocarburos, ya que estos pueden disolverse en el disolvente y generar ruido
de línea base.

Cromatografía De Fase Normal

Este método usa, una fase estacionaria polar (agua, soluciones amortiguadoras
de pH, acetonitrilo, metanol) y una fase móvil no polar (hexano, tetracloruro de
carbono, benceno), que se usa cuando el analito es polar, éste es retenido por la
fase estacionaria, que es polar. La partición aumenta con la polaridad del analito
y la interacción entre analito y fase estacionaria polar (en comparación a la fase
móvil) aumenta el tiempo de retención.

La utilización de disolventes más polares en la fase móvil disminuye el tiempo

de retención de los compuestos mientras que los disolventes más hidrofóbicos
tienden a aumentar el tiempo de retención.
Debido a la falta de reproductibilidad de los tiempos de retención, puesto que los
disolventes próticos cambiaban el estado de hidratación de la silica o alúmina de
la cromatografía, este método fue reemplazado por el HPLC de fase reversa

58
Cromatografía De Fase Reversa (inversa)

Se basa en el principio de las interacciones hidrofóbicas que resultan de las

fuerzas de repulsión entre un disolvente relativamente polar (agua, soluciones
amortiguadoras de pH, acetonitrilo, metanol) y una fase estacionaria apolar
(generalmente sílica unida con cadenas de grupos orgánicos de 8 y de 18 átomos
de carbón (C8 y C18)).

El efecto hidrofóbico disminuye con la adición de disolvente apolar la fase móvil,

esto modifica el coeficiente de partición de forma que el compuesto se mueve por
la columna y eluye.

Una de las fases estacionarias más comunes de este tipo de cromatografía es la

silica tratada con RMe2SiCl, donde la R es una cadena alquil tal como C18H37 o
C8H17. El tiempo de retención es mayor para las moléculas de naturaleza apolar,
mientras que las moléculas de carácter polar eluyen más rápidamente .
La cromatografía de fase reversa es tan utilizada que a menudo se lo denomina
HPLC sin ninguna especificación adicional. Más del 90% de las aplicaciones
HPLC de compuestos de bajo peso molecular se hacen en cromatografía de
partición en fase reversa.

El pH puede cambiar la hidrofobicidad del compuesto. Por este motivo, la mayoría

de métodos utilizan un tampón como el fosfato de sodio para controlar el valor
del pH, pero también neutralizan la carga a cualquiera resto de silica de la fase
estacionaria que haya quedado expuesta y actúan como contraiones que
neutralizan la carga del compuesto. El efecto de los tampones sobre la
cromatografía puede variar, pero en general mejoran la separación
cromatográfica.
Muchas columnas de fase reversa están formadas por silica modificada con
cadenas alquil y no se deben utilizar con bases en medio acuoso puesto que
dañarían el esqueleto de silica subyacente. Las columnas se pueden utilizar en
ácidos en medio acuoso pero no deberían estar expuestas demasiado tiempo al
ácido porque puede corroer las partes metálicas del aparato de HPLC.

Las partes esenciales de un equipo HPLC:

59
1. Reservorio:

- Contiene la fase móvil.

- Frasco cerrado de vidrio o de algún polímero resistente al disolvente con
paredes homogéneas, contiene un filtro poroso que ayuda a retener partículas
de tamaño mayor a 10 µm. Previo al bombeo del disolvente hacia el sistema
HPLC, se debe desgasificar por ultrasonicación o burbujeo con gas inerte
(helio).

El disolvente debe ser de alta pureza (grado HPLC), de baja viscosidad, no debe
reaccionar con el empaque de la columna, debe ser volátil, de polaridad adecuada
para el tipo de análisis.

2. Bomba:

- Suministra un caudal constante y libre de pulsos de la fase móvil a través de

la columna. El caudal debe ser constante a lo largo del tiempo, ya que de él
depende la reproducibilidad de los tiempos de retención.
- Genera presiones hasta 6000 psi (lb/in2).
- Flujo libre de pulsaciones, lo que evita variación de presión dentro del
sistema. Las pulsaciones pueden contribuir al ruido de fondo del detector.
- Intervalo caudal de 10µL/min hasta 10 mL/min.
60
 - Construido con materiales químicamente inertes frente a la fase móvil.

Tipos de Bombas:

- Binarias, impulsa un solo disolvente hacia el sistema.

- Secundarias, impulsa dos disolventes hacia el sistema.
- Terciaria, impulsa tres disolventes hacia el sistema.
- Cuaternaria, impulsa cuatro disolventes hacia el sistema.

Bomba Cuaternaria

La bomba cuaternaria está compuesta por una cabina de disolventes, un

desgasificador de vacío y una bomba de gradiente de cuatro canales. Esta última
comprende una válvula de partición de alta velocidad y un dispositivo de bomba.
Proporciona la generación de un gradiente por mezcla a baja presión.
La desgasificación del disolvente es imprescindible en un sistema de gradiente
a baja presión por lo que el desgasificador de vacío forma parte del sistema de la
bomba cuaternaria. La cabina de disolventes tiene espacio suficiente para cuatro
botellas de un litro. Puede disponerse de un lavado activo de sellos (opcional)
cuando la bomba cuaternaria se utiliza con soluciones tampones concentrados.

Sistema de Bombeo
1. Elución Isocrática
La composición de la fase móvil no se modifica, durante la elución.

2. Elución en Gradiente
La composición de la fase móvil se modifica durante el análisis para ir
aumentando su poder de elución. Este tipo de elución se utiliza cuando se tiene
una mezcla compleja de componentes con polaridad diferente.

Un gradiente normal en una cromatografía de fase reversa puede empezar a un

5% de acetonitrilo y progresar de forma lineal hasta un 50% en 25 minutos. El
gradiente utilizado varía en función de la hidrofobicidad del compuesto. El
gradiente separa los componentes de la muestra como una función de la afinidad
del compuesto por la fase móvil utilizada respecto a la afinidad por la fase

61
estacionaria. Por ejemplo, un gradiente agua/acetonitrilo los compuestos más
hidrofílicos eluirán a mayor concentración de agua, mientras que los compuestos
más hidrofóbicos eluirán a concentraciones elevadas de acetonitrilo. A menudo,
hace falta realizar una serie de pruebas previas con tal de optimizar el gradiente
de forma que permita una buena separación de los compuestos.

La elución en gradiente también es útil para reducir el tiempo total de análisis y

eliminar las colas de los picos.

3. Inyector (automuestrador o manual)

La introducción de la muestra es importante, un mal sistema de inyección puede

dar lugar a un ensanchamiento de la banda cromatográfica, lo mismo sucedería
si no se emplean volúmenes muy pequeños, de unas pocas décimas de
microlitro.

62
 4. Columna

Son tubos rectos de acero inoxidable, la longitud de la columna, varía entre 10 a

30 cm y de diámetro interno entre 4 a 10 mm. Es el elemento fundamental de un
cromatógrafo de líquidos, ya que en ella tiene lugar la separación, por lo que se
debe elegir la columna adecuada y así obtener buenos resultados.

La elección del diámetro interno de la columna, se realiza en función de la

cantidad de muestra a separar, por ejemplo para separaciones a escala analítica
(algunos µg de muestra por inyección), se suelen usar columnas de pequeños
diámetros (1 a 6 mm), el inconveniente en columnas de gran diámetro es el
elevado consumo de disolvente, necesitándose flujos elevados para obtener la
misma velocidad lineal de eluyente que en las de pequeño diámetro.

En HPLC, se emplean dos tipos de relleno para la columna:

- Relleno pelicular, se utilizan bolitas de vidrio o polímero no porosas esféricas de
diámetro entre 30-40 µm. Sobre su superficie está una capa delgada de
partículas pequeñas (2-5 µm) gel de sílice, alúmina o un cambiador iónico que
actúan como fase estacionaria. Si la fase estacionaria es líquida se coloca una
fina película de líquido sobre las esferas no porosas.
- Partículas porosas, se trata de micropartículas porosas entre 3-10 µm de sílice,
alúmina o cambiadores iónicos, que actúan como fase estacionaria.

Medida de las partículas

La mayoría de HPLC, cuentan con una fase estacionaria unida al exterior de

partículas esféricas de sílica. Estas partículas pueden tener diferentes medidas,
63
siendo las de 5µm de diámetro las más utilizadas. Partículas más pequeñas
ofrecen una mayor superficie y una mejor separación, pero la presión que se
requiere por obtener una velocidad lineal óptima aumenta de forma inversamente
proporcional al cubo del diámetro de la partícula. Esto significa que disminuir la
medida de las partículas a la mitad, aumentaría la resolución de la columna, pero
a la vez, aumentaría la presión necesaria en un factor de ocho.

Tamaño del poro

Muchas fases estacionarias son porosas para proporcionar una mayor superficie.
Los poros pequeños proporcionan una mayor superficie mientras que los poros
de mayor medida proporcionan una cinética mejor, especialmente para los
compuestos de tamaño más grande; por ejemplo, una proteína que sea
ligeramente más pequeña que el tamaño de los poros puede entrar, pero
difícilmente saldrá con facilidad.

La precolumna

Para alargar la vida de la columna se utilizan las precolumnas con el objeto de

retener el posible ingreso de partículas contaminantes, el relleno de la
precolumna debe contener la misma fase estacionaria que el de la columna, pero
con mayor tamaño de partícula.

Elección de la columna y la fase móvil

Debe realizase en función de la naturaleza de las sustancias a separar, según

tamaño, carga, polaridad, lo que va a permitir orientar sobre el mecanismo de
separación y así elegir la fase estacionaria apropiada.

64
 Selección del sistema cromatográfico en función del tipo de muestra

5. Detector

Tiene como función registrar el paso de los componentes de una muestra en el

orden en que eluyen. El detector debe ser sensible a pequeñas concentraciones
de analito, dar respuesta lineal amplia, tener poco ruido de fondo y ser estable en
el tiempo que dura el cromatograma, si se emplea gradiente, debe ser insensible
a los cambios de composición de la fase móvil. Debe tener un volumen interno
mínimo a fin de reducir el ensanchamiento de la banda. La mayoría de los
detectores responden a alguna propiedad de los compuestos a analizar.

Detectores más usados:

- Espectrofotométricos, funciona únicamente para compuestos que absorban en

UV/V. Se encarga de transducir la energía emitida de un compuesto. Puede
utilizarse en gradiente de elución. Es altamente selectivo en compuestos que
poseen doble enlace.
- De Fluorescencia, mide la emisión fluorescente por parte de los analitos,
detector muy sensible, pero aplicable a compuestos fluorescentes.
- Electroquímicos, basados en métodos Electroanalíticos como la amperometría,
coulombimetría, voltamperometría, detectan compuestos electroactivos, es
decir susceptibles de sufrir reacciones de óxido-reducción.
- Refractométricos, basado en los cambios de refracción de la fase móvil por la
presencia de un soluto

Colector de fracciones
Sirve para recibir o contener por separado los componentes que ya eluyeron por
si se requiere un análisis posterior de alguno de ellos.

65
6. Sistema de registro (Computadora).
Sistema de almacenamiento.

Filtración de muestras y disolventes

Eliminación de partículas insolubles a través de su paso por una membrana. Las

partículas pueden dañar el equipo, dañar la columna, influir en los resultados, por
lo que se recomienda utilizar los filtros de membrana adecuados: muestras
acuosas - Acetato de celulosa; muestras orgánicas - Nylon, PTFE, PVDF. No
utilizar filtros de acetato de celulosa con acetonitrilo.

Si una cantidad excesiva de gas permanece disuelta en la fase móvil líquida a la

presión de la columna, el gas puede salir del detector y provocar grandes picos.
Estos pueden eliminarse mediante el burbujeo de helio de gran pureza a través
del líquido cuando el sistema HPLC no disponga de un desgasificador integrado.
El helio debe presentar unos niveles bajos de hidrocarburos, ya que estos pueden
disolverse en el disolvente y generar ruido.

Cromatograma

Es una representación gráfica o de otro tipo de la respuesta del detector, de la

concentración del o los analitos en el efluente u otra cantidad usada como una
medida de concentración en el efluente en función del volumen de este o del
tiempo. Una separación cromatográfica típica de dos sustancias, 1 y 2. tR1 y tR2
son los tiempos de retención respectivos; y h es la altura, h/2 la mitad de la altura
y Wh/2 el ancho del pico a la mitad de la altura. W1 y W2 son los anchos de los
picos 1 y 2, respectivamente, en la línea base. Los picos de aire son una
característica de los cromatogramas de gases y corresponden al frente de la fase
móvil en la cromatografía de líquidos. El tiempo de retención de estos picos de
aire o componentes no retenidos se denomina tm.

66
 CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA (HPLC)
ANÁLISIS DE CAFEÍNA EN BEBIDA ENERGIZANTE

Fundamento

La cromatografía de líquidos, es la técnica de separación más ampliamente

empleada, gracias a su fácil adaptación a las determinaciones cuantitativas, en
muchos campos de la ciencia y para la sociedad en general. En la cromatografía
líquida los componentes de una mezcla son llevados a través de una fase
estacionaria, fijada dentro de una columna mediante el flujo de una fase móvil
líquida. Las separaciones están basadas en las diferencias de la velocidad de
migración entre los componentes de la muestra, que vienen condicionadas por
la naturaleza de los analitos y su interacción con las fases.

Este método permite determinar el contenido de cafeína en bebidas energéticas.

La disolución que contiene la cafeína es sometida al HPLC. La cafeína contenida
es cuantificada por comparación con una solución estándar tratada similarmente.

Instrumento: Cromatógrafo HPLC, marca Agilent 1100.

Con las siguientes características:

Bomba: Capacidad para gradiente Cuaternaria
Flujo de solvente: De 1 a 10000 µL/min
Horno de columna: Circulación de aire, 06 columnas
Temperatura: a 85°C
Columnas: Diferentes tamaños (Máximo 30 cm)
Colector Fracciones: en forma opcional
Volumen de inyección: desde 0,1 a 100 µL
Detector: Uv-V.
Desgasificador : en línea

Estándares: De cafeína y de Ácido Benzoico.

Reactivos: Äcido fosfórico al 85% G.R.

Solventes: Metanol grado HPLC. Agua grado HPLC.

Materiales de vidrio:

01 Pipeta volumétrica de 5 mL.

01Probeta de 250 mL.
05 Pipetas volumétricas de 5 mL
05 Pipetas volumétricas de 10 mL01 Fiola de 25 mL
02 Fiolas de 50 mL
04 Fiolas de 100 mL
01 Fiola de 500 mL

Material complementario: 02 filtros de jeringa de 0,45 µm, viales de de 1,5 ó de 2

mL .

67
Preparación de soluciones

Fase móvil: vierta 200 mL de metanol grado HPLC en fiola de 500 mL.
Agregar 2,5 mL de ácido fosfórico al 85%, mezclar, si la solución se calienta dejar
enfriar, enrasar con agua grado HPLC, dejar enfriar.
Esta solución tien la concentración: 0,5% H3PO4,, 40 % metanol y 59,5%agua.

Solución stock 1000 ppm cafeína: Pesar lo más exacto 0,0500 g de cafeína y
disolverlo con agua grado HPLC en fiola de 50 mL, tapar y homogenizar por
inversión.

Solución stock 1000 ppm de acido benzoico: Pesar lo más exacto 0,0500 g de
ácido benzoico y disolverlo con agua grado HPLC en fiola de 50 mL, tapar y
homogenizar por inversión.

Estándar 50 ppm cafeína: Tomar 5 mL de la solución 1000 ppm de cafeína y

pasarlo a fiola de 100 mL, enrazar con agua grado HPLC, tapar y homogenizar por
inversión.

Estándar 50 ppm ácido benzoico: Tomar 5 mL de la solución 1000 ppm de ácido

benzoico y trasvasarlo a un frasco volumétrico de 100 mL, enrazar con agua
grado HPLC, tapar y homogenizar por inversión.

Estándar mixto 50 ppm cafeína/ácido benzoico: Tomar 5 mL de la solución 1000

ppm de cafeína y pasarlo a fiola de 100 mL, agregar 5 mL de la solución 1000 ppm
de ácido benzoico, enrazar con agua grado HPLC, tapar y homogenizar por
inversión.

Estándar mixto 100 ppm cafeína/ácido benzoico: Tomar 10 mL de la solución 1000

ppm de cafeína y pasarlo a fiola de 100 mL, agregar 10 mL de la solución 1000
ppm de ácido benzoico, enrazar con agua grado HPLC, tapar y homogenizar por
inversión.

Preparación de la muestra: Destapar la bebida, que se encuentra a temperatura

abiente. Si es gasificada, desgasificarla por agitación o ultrasonido o usando un
vortex mixer.

Tomar 5mL de la solución y verterlo rápidamente en fiola de 25 mL, enrazar con

la fase móvil, tapar y homogenizar por inversión. Tomar una determinada
cantidad de la solución y filtrar usando un filtro de jeringa de 0,45 µm, verter la
solución en un vial de 1,5 ó de 2 mL, inyectar 20 ó 25 µL de la solución en el
equipo HPLC.

Condiciones experimentales

Detector: UV
Temperatura: 25°C
Longitud de onda: 254 nm
Columna: RP18 (150 mm x 4,6 mm ID x 5 µm
Volumen de inyección: 10-25 µL
Flujo: 1mL/min
Tiempo de corrida: 15 minutos.

68
Análisis (curva de calibración y lectura de muestra)

Identificar el tiempo de retención de los componentes.

Inyectar 20 µL, de cada uno de los componentes por separado. Identificar el
tiempo de retención de cada uno de los componentes.

Curva de calibración

a) Coloque las soluciones estándares mixtas de cafeína y ácido benzoico (50 y

100ppm), en viales de 1,5 ó 2 mL, para su inyección. Si fuese una inyección
manual, solo pase al punto b).
b) Inyecte el blanco (fase móvil) en un volumen de 20 µL (estándar cero-opcional)
c) Inyectar el primer estándar mixto (50 ppm de cafeína y ácido benzoico), registre
el área de los estándares.
d) Inyectar el segundo estándar mixto (100ppm de cafeína y ácido benzoico),
registre el área de los estándares.
e) Realizar la curva de calibración a patir de las áreas de los estándares
inyectados.

Lectura de la muestra

Inyectar en el equipo HPLC, 20 µL, de la muestra preparada con anterioridad.

Empleando las curvas dr calibración llevar a cabo la cuantificación de la muestra,

teniendo en cuenta los valores de dilución que se llevaron a cabo para las
lecturas.

69
 PRÁCTICA N° 7
TÉCNICAS ELECTROMÉTRICAS

ANÁLISIS POTENCIOMÉTRICO CON ELECTRODO INDICADOR DE Pt

(INERTE)

Fundamento

El método de titulación potenciométrica está basado en el cambio gradual del

potencial establecido entre dos electrodos sumergidos en una solución, a la que
adiciona un titulante de concentración conocida, que al reaccionar con la primera
va reduciendo la concentración de ésta y sufre una brusca variación en presencia
de una ligero exceso de la solución titulante, permitiendo por medio de esta
rápida variación de potencial, determinar el punto de equivalencia.
Se usa un electrodo de potencial conocido y constante que es el de referencia
(Ag/AgCl.) y otro electrodo indicador Inerte (Pt), cuyo potencial varía durante la
titulación. Este electrodo debe ser capaz de alcanzar un rápido equilibrio de su
potencial conforme se adicionan cantidades diferentes de titulante.
Cualquier cambio de la diferencia de potencial (EInd.- ERef.) entre los electrodos
se registra en un sistema de medida llamado potenciómetro, se debe
exclusivamente al cambio en el electrodo indicador cuyo potencial E Ind. varía en
función de la concentración del ion en la solución, en completo acuerdo con la
ecuación de Nernst, a medida que progresa la titulación.

Al final, se hace un gráfico considerando el potencial de la solución ( EInd. - ERef.)

Contra el volumen de titulante.
El punto de la máxima variación de la curva corresponde prácticamente al punto
de equivalencia.

VENTAJAS DEL MÉTODO

Es aplicable el método, con ventaja, sobre el método volumétrico clásico en:

1. Identificación de impurezas en la muestra por titulación volumétrica.

2. Normalización de:
a. Soluciones coloreadas.
b. Soluciones que no admiten la aplicación de indicadores de coloración.
c. Soluciones no acuosas.
3. Tiene mayor precisión y sensibilidad.
4. Admite la posibilidad de titular varias sustancias sucesivamente de las
contenidas en la misma solución.
70
AMPLITUD DE APLICACIÓN

Es aplicable a titulaciones de neutralización, oxidación - reducción (REDOX),

precipitación y formación de complejos.
Los electrodos, tanto de referencia como indicador varían para cada caso (ver
referencias bibliográficas).
Se aplicará el análisis potenciométrico en:
a) Normalización de soluciones
b) Análisis de hierro en diferentes muestras.

Tratamiento de los datos Obtenidos

Los datos se obtienen por lecturas del instrumento, en voltios o milivoltios (o en

unidades de PH), después de cada adición sucesiva de titulante y las lecturas que
se obtienen se grafican contra el volumen de titulante, para dar una curva de
titulación como se muestra:

Curva de valoración potenciométrica de E vs Volumen del titulante

Se debe determinar el punto de inflexión de la curva, con algún tipo de

inspección. Existe cierta inexactitud en este procedimiento.
La siguiente gráfica muestra la pendiente de una curva de titulación, es decir el
cambio de potencial con el cambio de volumen (ΔE/ΔV) contra el volumen del
titulante. La curva que resulta tiene un máximo en el punto de equivalencia. El
volumen en el punto de equivalencia se determina trazando una línea vertical
desde este pico hasta el eje del volumen.

71
 Curva de valoración potenciométrica de ΔE/ΔV vs Volumen del titulante

En la gráfica siguiente se muestra la segunda deriva del potencial respecto al

cambio de volumen vs el volumen del titulante Δ2 E/Δ V2, el punto final se localiza
trazando una línea vertical desde el punto en el cual Δ 2 E/ΔV2 es cero, hasta el
eje del volumen.

Curva de valoración potenciométrica de Δ 2 E/Δ V2 vs Volumen del titulante

72
 VmL
E mV E/V V mL 2 E/V2 V mL
titulante
0 E1
E2  E1 03
A  VA
30 2
3 E2
B -A
M VA  VB
E3  E2 36 VB  VA  VM
B  VB 2
6-3 2
6 E3
VB  VC
E4  E3 69 C-B
N  VN
C  VC 2
96 2 VC - VB
9 E4

Ejemplo de lecturas de potencial del titulante

A.- ESTANDARIZACIÓN DE K2Cr2O7 0,1 N CON SAL DE MOHR

INSTRUMENTO:
Potenciómetro Beckman 300.
Electrodo Mixto de Pt, Ag/AgCl.

Reactivos
1. Solución de K2Cr2O7 0,1N.
2. . H2SO4 2N.- Verter el ácido sobre el agua, enfriando el recipiente con
chorro de agua

Nombre Pictograma Riesgo Primeros auxilios

Inhalación: Inhalación: Ventilación,
lesión grave de suministrar oxígeno,
vías atención médica inmediata.
respiratorias. Ingestión: beber abundante
H2SO4 Ingestión: agua, no inducir al vómito,
concent. dolor no proceder a pruebas de
(reactivo abdominal, neutralización, atención
vómito, peligro médica inmediata.
controlado) de perforación. Contacto con piel: retirar
Contacto con inmediatamente ropa
Comburente y piel: severas contaminada, lavar con
corrosivo quemaduras abundante agua o ducharse
con por varios minutos,
malformacione impregnar algodón con
s Contacto con polietilenglicol 400.
ojos: riesgo Atención médica inmediata.
ocular grave, Contacto con ojos: Lavar
dolor, lesión de con abundante agua.
córnea. Atención oftalmológica
inmediata.

3. Sal de Mohr Fe(NH4)2(SO4)2. 6H2O.

4. Indicador difenilamina al 1%.

73
 Procedimiento
1) Verificar el funcionamiento adecuado del instrumento (ver manual).

2) Colocar en un beaker de 400 mL, 0,2500 g de sal de Mohr, disolver con 25

mL de H2SO4 2 N y llevar a volumen aproximado de 200 mL con agua
destilada. Calcular el volumen teórico.
3) Colocar el vaso con la disolución sobre el agitador magnético y regular la
velocidad de rotación del magneto.
4) Introducir el electrodo en la solución a titular, teniendo cuidado de no tocar
el magneto que está rotando, porque podría romper el electrodo que es muy
delicado (cuidado).

5) Realizar la lectura del potencial ( E ) en mV inicial de la solución.

6) Iniciar la adición de la solución de K2Cr2O7 0,1 N desde una bureta

enrasada, al principio, el agregado puede hacerse de 2 mL cada vez,
realizando la lectura de potencial en cada adición, cerca al volumen teórico,
en unos 2 mL antes y después del punto de equivalencia, el agregado debe
hacerse en porciones de 0,2 mL cada vez, realizando sus respectivas
lecturas de potencial.
A partir de este volumen, la adición de K2Cr2O7, puede ser de 2 mL o más
hasta llegar a potencial constante.

7) Realizar las titulaciones por triplicado.

8) Graficar las tres titulaciones en papel milimetrado.

E (ordenada) vs Volumen de K2Cr2O7 0,1N (abscisa).
Δ E/ Δ V (ordenada) vs Volumen K2Cr2O7 0,1N (abscisa).
Δ 2 E/ Δ 2 (ordenada) vs Volumen K2Cr2O7 0,1N (abscisa).

9) Determinar el volumen en el punto de equivalencia.

10) Determinar el E en el punto de equivalencia.
11) Determinar el volumen promedio con las lecturas calculadas por c/u de las
gráficas.
12) Calcular la concentración del K2Cr2O7.
B. DETERMINACIÓN POTENCIOMÉTRICA DE HIERRO EN JARABE DE FeSO 4 POR
TITULACIÓN CON K2Cr2O7 0,1N

Muestra: Jarabe de FeSO4

Procedimiento

1. Pipetear 10 mL de jarabe y transferirlo a un Beaker de 400 mL agregar 25 mL

de H2SO4 2 N y llevar a volumen aproximado de 200 mL con agua destilada.

2. Continuar igual que en el procedimiento anterior a partir de (3) hasta (9).

3. Calcular el contenido de Fe en el jarabe en mg Fe/ 5 mL jarabe.

74
 PRÁCTICA N° 8
ANÁLISIS POTENCIOMÉTRICO CON ELECTRODO SELECTIVO DE
IONES
1. Introducción
Método potenciométrico de análisis es la medida de un potencial con el fin de
conocer la actividad (concentración) de una sustancia en disolución. El objetivo
de una medición potenciométrica es obtener información acerca de la
composición de una disolución mediante el potencial que aparece entre dos
electrodos. La medición del potencial se determina bajo condiciones reversibles,
en forma termodinámica, y esto implica que se debe dejar pasar el tiempo
suficiente para llegar al equilibrio, extrayendo la mínima cantidad de intensidad,
para no influir sobre el equilibrio que se establece entre la membrana y la
disolución muestra.

2. Principios básicos
La técnica conocida con el nombre de potenciometría directa, consiste en la
medida de la actividad (o concentración) de una especie química, midiendo
directamente el potencial con el que está directamente relacionada, mediante una
conocida función logarítmica conocida como ecuación de Nernst.
E = E0 + 2,3 (RT/nF) log ai

E = Potencial medido (mV) E0 = Potencial de referencia (mV)

R = constante de los gases T = temperatura absoluta (K)

n = número de electrones transferidos F = constante de Faraday
ai = actividad iónica

La actividad iónica está relacionada con la concentración por el factor de

actividad. ai = fi * ci

A temperatura constante, la ecuación de Nernst puede escribirse:

E = E0 + S ai; donde S es la pendiente del electrodo.

De la ecuación de Nernst se deduce que efectuando mediciones de potencial

respecto a un electrodo de referencia, puede conocerse la actividad y, por tanto,
la concentración del ion en cuestión. La aplicación más conocida de las potencio-
metrías directas es la utilización de lo que se conoce con el nombre de Electrodos
Selectivos de Iones (ISE).

75
Para obtener mediciones analíticas válidas en potenciometría, uno de los
electrodos deberá ser de potencial constante y que no sufra cambios entre uno y
otro experimento. El electrodo que cumple esta condición se conoce como
electrodo de referencia. Debido a la estabilidad del electrodo de referencia,
cualquier cambio en el potencial del sistema se deberá a la contribución del otro
electrodo, llamado electrodo indicador o de trabajo.
El potencial registrado es en realidad la suma de todos los potenciales
individuales, con su signo correspondiente, producidos por los electrodos,
indicadores y referencia. La modificación del transporte de materia debido a la
presencia de la membrana puede dar lugar a diferencias de potencial
electrostático; estos potenciales de membrana son función de la composición de
las disoluciones y pueden por tanto relacionarse con las actividades de los iones
de las mismas.
Una de las principales ventajas de este tipo de electrodos es que pueden
construirse, en principio, para cualquier especie iónica, aunque las dificultades
de la obtención de un electrodo específico provienen de las técnicas que se
necesiten para su preparación. Constituyen una herramienta importante para la
determinación de iones, debido a la capacidad que tienen para obtener selectiva
y de forma continua la actividad de un ion en disolución.

3. Instrumentación
Los componentes que integran el sistema de medición son:
• El electrodo selectivo de iones.
• El electrodo de referencia.
• El equipo medidor, potenciómetro.

3.1. El electrodo de referencia

Son aquellos que miden el mismo potencial cualquiera que sea la naturaleza
de la disolución en que se introduzcan y por tanto dan una referencia a la
medida del electrodo indicador. Están constituidos por un conductor metálico
en contacto con una sal poco soluble de su metal, y una disolución de
composición constante y alta concentración llamado electrolito de referencia.
Su función es completar el circuito de medición proporcionando un paso de
conductividad desde el electrodo sensible, a través de la solución problema
hasta el dispositivo de lectura, de modo que las cuatro partes formen un
circuito eléctrico.
El electrolito de referencia contacta con la disolución a analizar a través del
diafragma, que es una pared porosa que permite una unión líquida. La unión
líquida permite un pequeño y constante flujo del electrolito de referencia a la
muestra. Donde se encuentran este electrolito y la disolución de análisis,
aparece un potencial de unión líquida que debe su origen a las diferentes
movilidades de los aniones y cationes.

76
Si los aniones y cationes del electrolito de referencia tienen distintas
movilidades, se difunden a diferentes velocidades a través del diafragma. Esto
produce una separación de carga local en el diafragma y por tanto una
diferencia de potencial.

Electrodo de referencia de Ag/AgCl

Este potencial depende del tipo, concentración y temperatura del electrolito de

referencia.
Los electrodos de referencia más utilizados son el de calomelanos (SCE) que
contiene Hg/Hg2Cl2/KCl saturado y el de Ag/AgCl.

El electrodo de referencia puede ser un electrodo individual o estar

incorporado al electrodo indicador (electrodo combinado).

3.2 El electrodo selectivo de iones.

Podemos decir que un electrodo selectivo de iones, consiste en una membrana

que responde más o menos selectivamente a un ion determinado, y que está
en contacto, por una parte, con la disolución del ion a determinar, y por otra,
generalmente, con una disolución del mismo ion a una actividad fija, la cual
está a su vez en contacto con un electrodo de referencia apropiado.

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Un electrodo selectivo es un dispositivo que responde a ciertas sustancias
(iones o gas disuelto) en solución. Puede emplearse para medir el nivel de
sustancias de interés en presencia de otras sustancias disueltas. El primer
electrodo selectivo que se hizo fue el de pH, sensible a los iones de hidrógeno
y que se usa para medir los niveles de hidrógeno e hidróxido en solución
acuosa.

3.2.1 Tipos de electrodos selectivos de iones

Los electrodos selectivos de iones, se pueden clasificar de acuerdo con el
estado físico de la sustancia (compuesto electroactivo) que forma la membrana
del electrodo- La tabla 10.3 presenta una clasificación de los tipos de
electrodos de membrana selectivos de iones (membrana sólida y líquida) y la
tabla 10.4 algunos ejemplos de electrodos de membrana sólida.

A. ELECTRODOS DE MEMBRANA CRISTALINA

1. Cristal único
Ejemplo: LaF3 para F-

2. Policristalina o mezcla de cristales

Ejemplo: Ag2S para S2- y Ag+

B. ELECTRODOS DE MEMBRANA NO CRISTALINA

1. Vidrio.

Ejemplos: vidrios de silicato para Na+ y H+

2. Líquido
2+
Ejemplos: líquidos intercambiadores de iones para Ca y transportadores
+
neutros para K

3. Líquido inmovilizado en un polímero rígido

2+
Ejemplos: matriz de cloruro de polivinilo para Ca y NO-3

78
3.2.2. Electrodo selectivo de vidrio
Se emplean para determinar pH y Na. Es un tipo de electrodo de membrana
sólida no cristalina, pero se suele considerar como un tipo particular. Es el
primer tipo de electrodo selectivo que se desarrolló. Consiste en un electrodo
de vidrio que al sumergirse en una disolución, absorbe agua, de modo que se
forma una capa de hidratación sobre su superficie. La superficie del electrodo
está construida a base de silicatos con modificadores iónicos. Existen dos
grandes tipos:
Na2O-CaO-SiO2 (22:6:72) %

Li2O-Cs2O2-BaO-La2O3-SiO2 (28:2:4:3:63) %

La superficie interna de la membrana de vidrio, en contacto con la disolución

interna de llenado, también se recubre de una capa de hidratación. En la
interfase, los cationes monovalentes situados sobre el vidrio, normalmente
Na+ y Li+, entran en equilibrio de intercambio iónico con los iones de la
muestra a determinar. Los iones a determinar tienden a difundirse a través de
la capa hidratada hacia el vidrio seco, así mismo se produce un flujo de
cationes desde el vidrio seco para reponer aquellos que se disolvieron en la
parte externa hidratada.

Electrodo de pH

Ejemplo: Electrodo de pH Tiene un electrodo de referencia interna (Ag/AgCl)

sumergido en un tampón con sales de Cl- (pH=7) con una membrana de vidrio.
Al introducir el electrodo en una disolución a analizar, hay un intercambio de
iones H+ y Na+. Dentro y fuera de la membrana tenemos diferentes
concentraciones de H+ y por tanto distinto intercambio, y esto origina la
diferencia de potencial referida al electrodo de referencia interno. Se mide el
potencial a i = 0 con un voltímetro de alta impedancia (pH-metro).

79
3. Variables que afectan a la medida

4.1. Temperatura
De la ecuación de Nernst se deduce que el potencial desarrollado por el
sistema es directamente proporcional a la temperatura. Si se representan
distintas rectas de calibrado a distintas temperaturas, se observa que todas
éstas se cruzan en un mismo punto, el punto isopotencial. Una de las normas
del análisis con electrodos selectivos es que todos los patrones y muestras
han de analizarse a la misma temperatura.

4.2. Contaminación
Hay sustancias que pueden formar depósitos insolubles en la superficie de la
membrana del electrodo, el cual evita el contacto entre ésta y la muestra,
reduciendo la sensibilidad del electrodo. Las películas de aceite, los depósitos
de grasa y las proteínas son un ejemplo, y la solución es limpiar el electrodo
con HCl, o HNO3 durante media hora.

4.3. Envejecimiento
A medida que se va usando el electrodo, aumenta la resistencia de la
membrana y va perdiendo sensibilidad. Las causas son la pérdida de iones de
la membrana, y la disminución progresiva de la entropía, ambos efectos
acumulativos.

4.4. Potencial del electrodo de referencia

La función de éste es proporcional un potencial constante (E0) contra el que
poder medir los cambios en el electrodo sensible. Es muy importante la
elección correcta del electrolito interno.

4.5. Fuerza iónica

La ecuación de Nernst se cumple para disoluciones diluidas, en las que el
factor de actividad tiende a 1. El coeficiente de actividad depende de un número
de parámetros tales como la cantidad, tamaño, carga y número de hidratación
de los iones presentes, la temperatura y el disolvente. La fuerza iónica I se
define como:

I = ½ Σ ci zi2

80
 Donde ci es la concentración del ion y zi su carga.

Las soluciones con igual fuerza iónica, idéntica composición de los iones
mayoritarios, la misma temperatura y disolvente tienen igual coeficiente de
actividad. Para la realización de las medidas, interesa obtener coeficientes de
actividad similares en patrones y muestras, lo que se consigue añadiendo una
sal concentrada no interferente, que es el tampón de ajuste de la fuerza iónica,
al que se denomina ISA (Ionic strength adjustor).

4.6. pH de la muestra

Los iones H+ y los iones OH- pueden reaccionar con las especies de la muestra
y disminuir la cantidad de iones libres medidos por el electrodo, originando
errores en las medidas.

4.7. Interferencias
Una interferencia de electrodo es cualquier sustancia en una solución
problema que pueda alterar el potencial medido por un electrodo selectivo de
iones (Ver tablas 10.5 y 10.6).

5. Aplicaciones analíticas y ventajas

5.1. Aplicaciones

Los electrodos selectivos tienen aplicaciones en diversos campos:

* Medio ambiente: tierras, lodos, sedimentos, aguas.
* Biotecnología: piscifactorías, cultivos marinos, cultivos hidropónicos.
* Alimentos y bebidas: lácteos, salsas, bebidas, carnes, conservas...
* Farmacia/cosmética: geles y champús, desodorantes, cremas...
* Petroquímica y química general.

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ANÁLISIS POTENCIOMÉTRICO CON ELECTRODO INDICADOR ION SELECTIVO
(ELECTRODO DE VIDRIO)

Fundamento
El concepto de pH fue introducido al estudio de la Química Analítica por Sorensen
(1,909) y se definió como el logaritmo de la inversa de la concentración de los
iones hidrógeno en la solución.

pH = -log (H3 O+) = log 1/(H3 O+)

APLICACIÓN

A. ESTANDARIZACIÓN DE NaOH 0,1N CON BIFTALATO DE POTASIO

INSTRUMENTO: pH - METRO
INSTRUMENTO:
Potenciómetro Beckman 300.
Electrodo Mixto de Vidrio, Ag/AgCl.

Reactivos

1. Solución de NaOH 0,1 N.

2. Sal de Biftalato de Potasio.
3. Indicador Fenolftaleína 0,1%.

Procedimiento

1) Verificar la calibración del pH- metro.

2) Colocar en un vaso de 400 mL 0,2500 g de biftalato de potasio con cantidad

suficiente de agua para valorar la solución. Calcular el volumen teórico.

3) Agregar agua destilada a volumen aproximado de 200 mL. Agregar el

magneto en el vaso. Colocarlo sobre el agitador magnético y regular la
velocidad de rotación del magneto hasta disolución.

4) Introducir el electrodo en la solución a titular, teniendo cuidado de no tocar

el magneto que está rotando, porque podría romper el electrodo que es muy
delicado (cuidado).

5) Realizar la lectura del pH inicial de la solución.

6) Iniciar la adición de la solución de NaOH 0,1 N desde una bureta enrasada,

al principio, el agregado puede hacerse de 2 mL cada vez, realizando la
lectura de pH en cada adición.

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 Cercano al volumen teórico en unos 2 mL el agregado debe hacerse en
porciones de 0,2 mL cada vez, realizando sus respectivas lecturas de pH,
hasta después de 3 mL de haber pasado el volumen teórico.

A partir de este volumen la adición de NaOH se puede hacer de 2 mL o más

hasta pH constante.

7) Realizar las titulaciones por triplicado.

8) Graficar las tres titulaciones en papel milimetrado:

pH (ordenada) vs Volumen de NaOH 0,1N (abscisa)

ΔpH/ΔV (ordenada) vs Volumen de NaOH 0,1N (abscisa)
Δ2pH/ΔV2 (ordenada) vs Volumen de NaOH 0,1N (abscisa)

9) Determinar el volumen en el punto de equivalencia.

10) Determinar el pH en el punto de equivalencia.

11) Determinar el volumen promedio.

12) Calcular la concentración del NaOH

B. TITULACIONES DE ÁCIDO DÉBIL CON BASE FUERTE.

DETERMINACIÓN DE LA ACIDEZ DE UN VINO COMERCIAL

(% ÁCIDO TARTÁRICO).

Muestra: Vino tinto

Ácido Tartárico: H2C4H4O6, tiene un peso fórmula igual a 150,09 g/mol y

reacciona con el NaOH:

C2H4O2(COOH)2 + 2NaOH ⇄ C2H4O2(COONa)2 + 2H2O

Sus constantes ácidas:

K1 = 9,2 x10-4
K2 = 4,3 x10-5

Procedimiento

Pesar una alícuota de 25 mL de la muestra, medida con pipeta volumétrica, en

un beaker de 50 mL.

1) Transferir a un vaso de 400 mL y efectuar el mismo procedimiento que en la

experiencia A, desde punto 3) hasta 9).
2) Calcular el % de ácido tartárico en la muestra de vino.

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84