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ANIMACIÓN: Polimerización de nucleótidos por la DNA polimerasa
FIGURA 4-30 Hebra conductora y hebra retardada en la
síntesis del DNA. Los nucleótidos se añaden por la DNA poli-
merasa a cada hebra hija creciente en dirección 5’ → 3’ (indicado
por el sentido de las flechas). La hebra conductora se sintetiza en
forma continua a partir de un cebador de RNA único (en rojo) en
su extremo 5’ terminal. La hebra retardada se sintetiza de manera
discontinua a partir de múltiples cebadores de RNA que se forman
Dúplex parental del DNA
periódicamente a medida que cada nueva región del dúplex
3؅
parental se desenrolla. La elongación de estos cebadores produce
5؅
inicialmente fragmentos de Okazaki. A medida que cada fragmento
creciente se aproxima al cebador previo, el cebador se elimina y
estos fragmentos se unen. La repetición de este proceso finalmente
resulta en la síntesis de la hebra retardada completa.
se la Fig. 4-30). El cebador de RNA de cada fragmento de Okazaki se
elimina y se reemplaza por la cadena de DNA creciente del fragmento
de Okazaki vecino; finalmente, una enzima llamada DNA ligasa une los
fragmentos adyacentes.
Varias proteínas participan en la replicación
del DNA
La comprensión detallada de las proteínas eucariontes que participan
en la replicación del DNA provino inicialmente de estudios con DNA
virales pequeños, en particular el DNA del SV40, el genoma circular
de un virus pequeño que infecta a los monos. Las células infectadas
por los virus replican grandes números del genoma simple de los vi-
rus en un período breve, haciéndolos sistemas modelo ideales para el
estudio de aspectos básicos de la replicación del DNA. Dado que los
virus simples como SV40 dependen en gran medida de la maquina-
ria de replicación de sus células huésped (en este caso las células de
mono), ofrecen una oportunidad única para estudiar la replicación
de múltiples moléculas de DNA pequeñas idénticas por proteínas ce-
lulares. La Figura 4-31 muestra las múltiples proteínas que coordinan
el copiado del DNA del SV40 en una horquilla de replicación. Las
proteínas ensambladas en una horquilla de replicación ilustran ade-
más el concepto de máquinas moleculares presentado en el Capítulo
3. Estos complejos de múltiples componentes permiten que la célula
lleve a cabo una secuencia ordenada de eventos que desempeña fun-
ciones celulares esenciales.
La máquina molecular que replica el DNA de SV40 contiene solo
una proteína del virus. Todas las demás proteínas implicadas en la re-
plicación del DNA del SV40 son proporcionadas por la célula hués-
ped. Esta proteína viral, el antígeno T grande, forma una helicasa de
replicación hexamérica, una proteína que emplea la energía provenien-
te de la hidrólisis del ATP para desenrollar las hebras parentales en la
horquilla de replicación. Los cebadores para las hebras hijas conduc-
tora y retardada del DNA son sintetizadas por un complejo de una
b335.indb 147
5؅
3؅
Punto de unión
ja
hi
Hebra retardada
x
le
úp
D
Fragmento de Okazaki
RNA corto cebador
Dirección del movimiento Hebra conductora
de la horquilla
5؅
3؅
primasa, que sintetiza un cebador de RNA corto de ≈ 10 nucleótidos,
y una DNA polimerasa α (Pol α), que extiende el cebador de RNA con
desoxinucleótidos en otros ≈ 20 nucleótidos, formando un cebador
mixto RNA-DNA.
El cebador se extiende en la hebra hija de DNA por acción de la
DNA polimerasa δ (Pol δ) y la DNA polimerasa ε (Pol ε), que es menos
probable que cometan errores durante el copiado de la hebra molde
que la Pol α por su mecanismo de verificación de lectura (véase la
Sección 4.7). Estudios recientes indican que durante la replicación del
DNA celular la Pol δ sintetiza la hebra retardada del DNA, mientras
que la Pol ε sintetiza la mayor parte de la longitud de la hebra con-
ductora. La Pol δ y la Pol ε forman cada una un complejo con el Rfc
(factor de replicación C, en inglés replication factor C) y un PCNA
(antígeno nuclear de proliferación celular, en inglés proliferating cell
nuclear antigen) que desplaza al complejo primasa-Pol α después de
la síntesis del cebador. Como se ilustró en la Figura 4-31b, el PCNA es
una proteína homotrimérica que tiene un agujero central a través del
cual pasa el ADN dúplex hijo, lo cual evita que los complejos PCNA-
Rfc-Pol δ y PCNA-Rfc-Pol ε se disocien del molde. Como tal, el PCNA
se conoce como una pinza deslizante que permite que la Pol δ y la Pol
ε se asocien de manera estable con una única hebra molde durante
miles de nucleótidos. El Rfc funciona abriendo el anillo de PCNA de
modo tal que pueda rodear a la región corta de DNA de doble cadena
sintetizado por la Pol α. En consecuencia, el Rfc se llama a menudo el
cargador de la pinza.
Después de que el DNA parental se ha separado en moldes de
hebras sencillas en la horquilla de replicación, se une con múltiples
copias de RPA (proteína de replicación A, en inglés replication pro-
tein A), una proteína heterotrimérica (Fig. 4-31c). La unión de la RPA
mantiene al molde en una conformación uniforme óptima para que
el DNA sea copiado por polimerasas. Las proteínas RPA unidas se
descargan de las hebras parentales por acción de las Pol α, Pol δ y Pol
ε a medida que estas sintetizan las hebras complementarias apareadas
por sus bases con las hebras parentales.
4.5 Replicación del DNA 147
6/2/15 1:21 PM