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Facultad de Ingeniería
Ingeniería química
Laboratorio de química orgánica 2, sección 05
Catedrático: Ing. Christian Ortega
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Introducción
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FUNDAMENTO TEÓRICO
Cromatografía
La cromatografía es un método de separación mediante procedimientos físicos
que es utilizado para la caracterización de mezclas complejas. En total, es un
conjunto de mezclas basadas en el principio de retención selectiva en base a
propiedades físicas. Sin embargo, también es utilizado para pedir la proporción de
los componentes en la mezcla con el beneficio de utilizar pocos reactivos,
haciendo que el costo de realizarla sea una de las ventajas principales de esta.
(IJPR, 2010)
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Ambas capas deben ser escogidas en base al compuesto que se desee identificar,
ya que, de ser polar o apolar, algunos eluyentes y adsorbentes funcionarán mejor
que otros.
Desarrollos de la cromatografía:
Los diferentes desarrollos cromatográficos se refieren a las diferentes
técnicas que existen para realizar la cromatografía sin importar su
naturaleza, sino que al uso de leyes físicas o fenómenos como la
capilaridad para obtener un mejor resultado.
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Ascendiente: El solvente se coloca en el fondo de la cámara
cromatográfica y la placa se suspende desde la parte superior a
manera de que el solvente toque únicamente la parte de sembrado.
En este método, la fase móvil asciende por la placa por efecto de
capilaridad.
Descendiente: En el desarrollo descendente se invierten los papeles,
teniendo el solvente en la parte superior y la placa colgando con la
parte de sembrado tocando el solvente. En este método, la fase móvil
desciende por efecto de capilaridad y gravedad.
Bidimensional: La forma bidimensional se utiliza para mezclas más
complejas con un factor de retención (Rf) con menor variación. En
este método se realiza una primera corrida de manera ascendente y
se deja secar la placa para lograr un punto fijo. Posteriormente se
gira la placa y se realiza de manera descendente. Ya que, por más
parecidos que sean los compuestos en su factor de retención, nunca
será el mismo, logrando así ampliar la distancia entre los compuestos
y obteniendo resultados más certeros.
Circular: La forma circular se utiliza para separar componentes de
extractos vegetales mediante una placa circular. En esta se efectúan
manchas circulares en el centro de la placa dos o tres veces mientras
se evapora el solvente en medio de cada corrida. Posteriormente se
coloca el filtro sobre un vidrio de reloj, se atraviesa el centro de la
placa con hilo de coser y se vierte más disolvente para dejar que este
fluya por efecto de capilaridad hacia el centro de la mancha para
posteriormente dispersar los componentes de forma circular por el
papel filtro, obteniendo así una cromatografía circular.
(U.N.S.E, 2019)
Placas cromatográficas:
Siembra de las muestras: La siembra o aplicación de muestras y
solventes requieren ciertas especificaciones tales como no diluir
mucho el solvente para no tener la necesidad de utilizar un mayor
volumen de muestras, lo cual a su vez aumentaría el diámetro de la
mancha, complicando la obtención de buenos resultados (U.N.S.E,
2019)
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almacenar en ambientes secos, como desecadores, hasta el
momento de su uso. Como ejemplo, las placas de gel de sílice y
alúmina se activan calentándose, siendo estas las más utilizadas
para cromatografía. (U.N.S.E, 2019)
Visualización cromatográfica:
Los métodos de revelación o visualización cromatográficos son aquellos
métodos utilizados para poder visualizar el avance de los compuestos en la
placa, tomando en cuenta que la mayoría de los compuestos son incoloros.
Esto hace que se desarrollen técnicas de visualización en base a los
compuestos analizados, obteniendo así una gran variedad de métodos de
revelación basados en diferentes características fijas.
La capilaridad solo ocurre cuando las fuerzas adhesivas son más fuerzas que las
cohesivas, logrando así una mejor tensión superficial en el líquido. Esto significa
también que aquellos compuestos con una composición más pesada p/p tendrán
un menor ascenso en una cromatografía ascendiente, mas tendrán un mayor
descenso en una cromatografía descendente por efecto de gravedad.
También influye el material del que esté hecho la fase estacionaria, ya que, a
mayor porosidad, mayor efecto de capilaridad podrá presentar. (A. Peiris, 2020)
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ningún compuesto en específico que se busque obtener. Por ejemplo, al momento
de utilizar gel de sílice como fase estacionaria, la cual cuenta con un buen nivel de
porosidad y, por lo tanto, un buen efecto capilar; se podría utilizar acetronitrilo o
etanoato de etilo para maximizar las fuerzas eluotrópicas presentes.
Como regla general se podría decir que, a mayor polaridad de la fase móvil, mayor
fuerza eluotrópica, mas esto no siempre se cumple o es recomendable, ya que
habría que tomar en cuenta la polaridad del compuesto que se busque separar, la
fase estacionaria disponible y el efecto capilar que puede llegar a tener la fase
móvil sobre esta. (Łukasz Komsta, 2018)
En base a esto, a mayor Rf, mayor distancia avanzada por el punto de muestra.
Estos se utilizan para comparar con otras muestras. Sin embargo, el Rf no tiene
un uso útil si no se logra obtener una diferencia de Rf considerable entre las
sustancias analizadas, y esto es logrado al tener en cuenta la polaridad de la fase
móvil, estacionaria y los compuestos a analizar. Por lo tanto, si se quiere obtener
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un Rf útil, es necesario tomar en cuenta la capilaridad y fuerza eluotrópica que
presenta el sistema, ya que estos podrían influir incluso en qué desarrollo
cromatográfico se utiliza, ya que no habría necesidad de tener una cromatografía
bidimensional si se logran “manipular” estos factores para obtener un ▲Rf
considerable. (Harper Collage, 2019)
Aplicaciones
La cromatografía ha sido utilizada a lo largo de los años para lograr un análisis
más exacto. Este es utilizado para la determinación de aminoácidos, identificación
y purificación de drogas en farmacología, separación de componentes de
medicinas y derivados para realizar retrosíntesis, cosméticos y análisis de
pesticidas y fungicidas en alimentos, etc. Esta técnica es preferida debido a la
rapidez que esta posee para separar compuestos y su alto nivel de fiabilidad al
momento de determinar compuestos. (IJPSR, 2011)
Preguntas de prelaboratorio
1. Definir cromatografía de capa fina de forma enciclopédica:
a. ¿Qué es? // Método de análisis que permite la separación de gases o
líquidos de una mezcla por adsorción selectiva, produciendo manchas
diferentemente coloreadas en el medio adsorbente; está basado en la
diferente velocidad con la que se mueve cada fluido a través de una
sustancia porosa. (Oxford Languages, 2022)
b. ¿Para qué sirve? // Separación de gases o líquidos por adsorción
selectiva para determinar los componentes químicos en mezclas
complejas. (Gob. Argentina, 2022)
c. ¿Qué partes tiene? //
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(A. Herrera, 2019)
d. ¿Cómo funciona? // Se prepara la cámara cromatográfica y se aplica la
muestra en la placa recubierta. Se sumerge el extremo inferior en la fase
móvil, la cual asciende por capilaridad y se produce una separación de
los componentes. Se marca el avance obtenido y se seca la placa para
posteriormente revelar los componentes ya separados. (A. Herrera,
2019)
e. Dé un ejemplo de aplicación. // La cromatografía es utilizada
principalmente en análisis de sustancias o mezclas. En específico, la
cromatografía de gases es utilizado para la metilación de ácidos grasos
en el análisis de aceite, ayudando a salvar varias vidas con su uso
correcto. (I. Smith y J. Feinberg, 2020)
2. Explicar cómo influyen los siguientes parámetros en la separación por
cromatografía en capa fina:
a. Fase estacionaria // En esta se retienen los componentes de la muestra
y los patrones con los que se compararán los resultados.
b. Fase móvil // La fase móvil fluye a través de la estacionaria, arrastrando
con ella a los compuestos de la mezcla que se analizarán. Esta ayuda a
“filtrar” los componentes al “discriminar” los componentes a lo largo de la
placa
c. Saturación de la cámara // La saturación de la cámara ayuda a que los
componentes puedan avanzar sin mayor dificultad y velocidad al saturar
la concentración del diluyente dentro de la cámara. (L. Molina, 2012)
d. Humedad relativa // Es el contenido de vapor de agua del aire en
relación con su saturación. Esto afecta al experimento debido a que las
moléculas de agua son polares, y esto disminuye la superficie del
sorbente. (INSST, 2019)
3. ¿A qué se le llama activación de la placa y cómo se activa? // La activación
de placa es el proceso mediante el cual se busca disminuir la humedad
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presente en la placa y el sistema con el fin de evitar que moleculares
polares (agua) afecten en el experimento. Esto se puede realizar de varias
formas, más suele realizarse aplicando las muestras y posteriormente
calentar la placa antes de iniciar la cromatografía. (E. Connan, 1969)
4. Explicar 4 métodos de desarrollo de activación de la placa cromatográfica //
Activación ascendente: El solvente es colocado en el fondo de la
cámara y el papel se suspende por su parte superior de forma que el
borde inferior toque el solvente, cuidando que la línea de sembrado
no quede sumergida. El solvente sube por capilaridad hasta ser
contrarrestado por la gravedad.
Activación descendente: El solvente se coloca en un depósito en la
parte superior de la cámara y fluye hacia abajo por efecto de
gravedad y capilaridad. La placa es ubicada en la parte superior y en
el fondo se añade solvente para asegurar la saturación del ambiente.
Activación bidimensional: Es utilizada para mezclas complejas. Se
siembra en papel con ángulo y se realiza la primera prueba de forma
ascendente de forma paralela a uno de los bordes del papel con un
solvente. Posteriormente se seca para eliminar el primer disolvente y
se gira en noventa grados y se efectúa la segunda prueba con otros
solventes. Esto aumenta la separación entre compuestos con
coeficientes Rf muy parecidos.
Activación circular: Esta se utiliza para separar componentes de
extractos vegetales. Se efectúa una aplicación circular en el centro
de una placa para posteriormente evaporar el solvente y realizar este
proceso 4 veces (mínimo). De esta forma se obtienen manchas
concentradas en pequeñas concentraciones. De último se atraviesa
el centro con un hilo o rollo de papel absorbente y se vierte
disolvente para que fluya con capilaridad hacia en centro de la
mancha, dispersando los resultados a través del radio de la placa.
(U.N.S.E, 2019)
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6. Indicar 3 ejemplos de métodos de visualización o revelación de placas
cromatográficas, describiendo fundamentos de cada uno. //
Luz UV: Estas se adicionan a un colorante fluorescente al
adsorbente, por lo que toda la placa brillará, con excepción a
las partes que contengan manchas orgánicas
Vapores de yodo: Este método utiliza cristales de yodo que
son introducidos a la cámara para posteriormente calentar el
sistema y evaporar los cristales que reaccionan con los
compuestos orgánicos en las placas cromatográficas para
formar marcas amarillas que marcan el avance de estas.
Colorantes químicos: Mediante reacciones específicas se
puede dar color a los compuestos orgánicos.
(UB, 2022)
7. ¿Cuáles métodos de visualización o revelación de placas cromatográficas
se emplearán en la práctica? // Método UV y vapores de yodo (UB, 2022)
8. Dibujar las estructuras de los distintos componentes activos de los
medicamentos que se emplearán en la práctica. Identificar y nombrar los
grupos funcionales presentes en cada uno de los analgésicos a analizar. //
Acetaminofén - paracetamol:
Alcohol
Amida
Ácido
Carboxílico
Éster
Ibuprofeno – Ibuprofeno
Ácido
Carboxílico
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Café – cafeína
Carbonilo Amina
Amida
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Objetivos
General
Específicos
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Metodología
Reactivos:
Etanol
Cloroformo
Cristales de iodo
Ácido acético glacial
Acetato de etilo
Acetaminofén
Aspirina
Cardio-aspirina
Ibuprofeno
Café instantáneo
Materiales:
Equipo Soxhlet de 500ml
Equipo de destilación
Baño maría
Manta de calentamiento
Mangueras
Dedal de papel filtro
3 Beakers
Vidrio de reloj y balanza
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Diagrama de flujo de bloques 02: Aplicación de las muestras control
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Diagrama de flujo de bloques 04: Visualización
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DIAGRAMAS Y CONSIDERACIONES DE SISTEMAS
Tabla #1. Sistema de cromatografía con papel filtro y placa cromatográfica
CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
Figura #001
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DATOS DE SEGURIDAD DE MATERIALES
Tabla No. 01 Propiedades Fisicoquímicas de los reactivos de la práctica.
Punto
Masa Punto de
Densidad de
Sustancia Estructura Formula molar Apariencia ebullición Solubilidad
(g/ml) fusión
(g/mol) (°C)
(°C)
Líquido
transparente Soluble en
Etanol C2H5OH 46.07 0.79 -144 78.29
incoloro con agua
olor ácido
Líquido Miscible en
incoloro etanol,
Cloroformo CHCl3 119.39 1.498 -63.5 61.26
con olor benceno,
dulce éter.
Sólido
Cristales de cristalino 113- Soluble en
I - I I2 253.8 4.93 184.4
iodo violeta con 114 agua <0.5g/l
olor picante
Líquido
Ácido Soluble en
incoloro
acético C2H4O2 60.05 1.04 16.64 117.9 agua 602.9
con olor
glacial g/l
acre
Líquido
Acetato de incoloro Soluble en
C2H8O2 88.11 900.3 -83.6 77.1
etilo con olor agua 80mg/l
afrutado
Sólido
158-
AAS C7H6O 138.1 blanco e 1.44 256 2g/l
160
inodoro
Polvo
236- No
Cafeína C8H10N4O2 194.2 blanco 1.23 20g/l
239 determinado
cristalino
Polvo
Paracetamo 168- No
C8H9NO2 151.16 blanco 1.29 14g/l
l 172 determinado
cristalino
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(Carl Roth, 202
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Ingestión: Ingestión: Sustancia reactiva
Perforaciones Abundante agua. con riesgo de
internas Contactar médico ignición y mezclas
explosivas
Inhalación: Tos, Inhalación: Aire
ahogo y dolor fresco Eliminar como
Ácido acético
residuo
glacial -
Contacto con ojos: Contacto con ojos: peligroso y
Exposición a Quemaduras y Abundante agua. restricciones
rata y conejo ceguera Contactar médico nacionales.
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Ingestión: Náuseas y Ingestión: Peligro de
vómitos Abundante agua. explosión de polvo
Contactar médico si se acumula
Inhalación: Tos y Inhalación: Aire
ahogo fresco
Eliminar como
Cafeína - residuo
Contacto con ojos: Contacto con ojos:
Exposición a peligroso y
no irritante grave Abundante agua.
rata y conejo Contactar médico restricciones
nacionales.
Contacto con piel: Contacto con piel:
No irritante Abundante agua.
Consultar médico
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REFERENCIAS
Bibliográficas
Burns, R. A. (1996). Fundamentos de química (2.a ed.). Prentice Hall, Pg
212
Electrónicas
Corzo, A., & Ledesma, N. (2022, mayo). Cromatografía. Técnicas de
didacticas/SD-44-Cromatografia-CORZO.pdf
Chromatography.
https://www.sciencedirect.com/topics/engineering/adsorption-
chromatography
http://dept.harpercollege.edu/chemistry/chm/100/dgodambe/thedisk/chrom/
wback3.htm
Educ. https://pubs.acs.org/doi/pdf/10.1021/acs.jchemed.8b00144
https://doi.org/10.1556/1006.2018.31.5.1
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Libretexts, & Peiris, A. (2020, 15 agosto). Capillary Action. Chemistry
LibreTexts.
https://chem.libretexts.org/Bookshelves/Physical_and_Theoretical_Chemistr
y_Textbook_Maps/
Supplemental_Modules_(Physical_and_Theoretical_Chemistry)/
Physical_Properties_of_Matter/States_of_Matter/Properties_of_Liquids/
Capillary_Action
https://riunet.upv.es/handle/10251/16990
fina. http://www.qfa.uam.es/qb/practicas/P6-guion.pdf.
http://www.qfa.uam.es/qb/practicas/P6-guion.pdf
columna. Cromatografía.
https://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_tipus.html
http://www2.ulpgc.es/hege/almacen/download/39/39360/separaciones_por_
cromatografia_1.pdf
https://revistas.pucp.edu.pe/index.php/quimica/article/view/23788/22933
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