Mtodos analticos para la determinacin de bisfenol A en los alimentos Ana Ballesteros Gmez, Soledad Rubio, Dolores Prez-Bendito Departamento

de qumica analtica, Facultad de Ciencias, Campus de Rabanales, Edificio Anexo Marie Curie, 14171 Crdoba, Espaa

abtracto Alimentos constituyen la ruta principal para la exposicin humana a bisfenol A (BPA), uno de mayor volumen productos qumicos producen en todo el mundo. Las propiedades estrognicas de BPA, su utilizacin amplia dispersin y el reciente extensa literatura que describe los efectos BPA de dosis bajas en animales, han expresado su preocupacin acerca de su posibles efectos adversos sobre la salud humana. Una evaluacin de riesgo de salud confiable de BPA se basa fundamentalmente en su identificacin inequvoca y cuantificacin precisa en los alimentos y el objetivo de la presente revisin esdan una descripcin de los mtodos analticos divulgado hasta ahora para la determinacin de BPA en estas matrices.Se pone nfasis en las estrategias principales para el tratamiento de la muestra, que consiste en generalmente de varios pasos laboriosos y lentos para alcanzar la necesaria sensibilidad y selectividad. Separacin, identificacin y cuantificacin de BPA es hoy confiablemente hecha con masa espectrometra mtodos, es decir, lquido chromatographymass espectrometra (LCMS) y chromatographymass de gas espectrometra (GCMS) y, por tanto, la atencin principal se dedica a estas tcnicas, pero otros mtodos LC juntada a la fluorescencia o deteccin electroqumica, mtodos as como inmunoqumicos son tambin cubierto. Se discuten los desarrollos futuros esperados y recientes 2008 Elsevier B. V. Todos los derechos reservados.

Introduccin Bisfenol A (BPA), propano 2,2-bis(4-hydroxyphenyl), es uno de los qumicos de volumen ms altos en el mundo [1,2]. Demanda global de BPA se prev un crecimiento de 3,9 millones de toneladas en 2006 a sobre 5 millones de toneladas en 2010 [3].Muchos pases en todo el mundo tienen una capacidad de produccin grande de BPA, especialmente Alemania, la Pases Bajos, Estados Unidos y Japn. Capacidad BPA en Europa occidental fue Estimado en 830 millones de toneladas en el ao 2000 [4], grewby 4%/year de 2000-2006 y se ha previsto crecer por 2%/year en el perodo 2006 2010 [3]. El principal mercado de BPA es la produccin de policarbonato con la segunda salida ser resinas epoxi. Otros usos incluyen ignfugos, resinas de polister insaturado y resinas de poliacrilato, polieterimida y polisulfona [5,6]. A gran variedad de alimentos en contacto con materiales destacan entre sus usos, deriva principalmente de policarbonatos (beb biberones, vajilla,

fuentes de horno de microondas, contenedores, agua retornable y tubos de agua y botellas de leche) y resinas (proteccin interna epoxi forro para las latas de alimentos y bebidas, capa en las tapas de metales para frascos de vidrio y botellas y revestimiento de agua potable depsitos y cubas de vinos) [7]. La estructura qumica y algunos propiedades fisicoqumicas de BPA se muestran en la tabla 1. El amplio uso de BPA de polmeros, con ester bonos Sin perjuicio de la hidrlisis y no de monmero pilimizado residuos, Ha llevado a una amplia contaminacin ambiental. BPA concentraciones En el rango 5-320 ng L-1, en las aguas del ro [ 8- 10], 20-700 ng L-1, en las aguas residuales [ 9- 11], 2-208 ngm-3 en el aire [ 12- 14], 0,2 -199 ng g-1 en polvo [ 12- 14] y 0,1 -384 ng g-1, en los productos alimenticios [ 15- 17] han sido reportados. Su presencia en los alimentos es de especial Preocupacin, ya que constituye la principal va de exposicin humana [6,7,14]. El grupo cientfico sobre aditivos alimentarios, aromas, transformacin Sida y materiales en contacto con los alimentos de la Unin Europea (UE) ha informado estimaciones del potencial exposicin en la dieta de 13, 5,3 Y 1,5 g/kg de peso corporal/da en 6 a 12 meses de edad amamantados Los bebs, nios pequeos y adultos, respectivamente [ 7]. La generalizada La exposicin al BPA se ha puesto de relieve por las mediciones En los fluidos y tejidos humanos (revisado en [ 18] ). Las concentraciones En la sangre y la orina fueron en promedio en los 0,3 -4,4 gL-1 y 0.47-9.5 gl 1 oscila con una tasa de deteccin por encima del 90% en la mayora de Los estudios. La actividad antiestrognica de BPA se report por primera vez en 1993 [ 19]. La afinidad de BPA en los receptores de estrgeno es de 10.000 - a 100.000 Veces ms dbil que la de estradiol, por lo que se ha considerado un muy Dbil ambiental estrgenos. Sin embargo, un gran nmero de recientes Los estudios in vitro han demostrado que los efectos de BPA son mediadas por Tanto la genmica y la no-genmico de estrgeno mecanismos de respuesta, Con la interrupcin de la funcin de la clula que ocurren con dosis tan bajas Como 1 pm (0,23 ng L- 1) (revisado en [ 20] ). Los informes recientes tambin indican El potencial de BPA para trastornar hormona tiroidea accin [ 21], a Provocan la proliferacin de las clulas del cncer de la prstata humana [ 22] y para bloquear Sntesis de la testosterona [ 23] a muy baja parte por billn de dosis. Este Una amplia literatura sobre nuevos efectos a bajas dosis de BPA ha Dado lugar a una controversia acerca de la BPA los valores lmite establecidos por la reglamentacin Los organismos de proteccin de la salud de los consumidores y un nuevo riesgo Evaluacin ha sido muy recomendable [ 20]. Actualmente, el Ingesta diaria tolerable (IDT) establecido por la Comisin de la UE [ 7] y el Dosis de referencia (RfD) establecido por la EPA [ 24] BPA es de 0,05 mg/kg Peso corporal/da. Este valor se obtuvo aplicando un 100 veces Factor de incertidumbre a la que se acepta en general Versin -

Fija determinando (NOAEL) de 5mg/kg. Por otro lado, un Lmite de migracin especfica (LME) de BPA de plstico contacto con alimentos Materiales de 600 ng g de 1 fue establecido por la Comisin de la UE en 2004 [ 25]. Debido al alto volumen, amplia dispersin utilice y endocrino Interrumpiendo y propiedades txicas de BPA, es un claro candidato a ser Incluido en la lista de sustancias que estn sujetas a autorizacin en el Nueva poltica de productos qumicos autorizados por la Unin Europea, REACH (Registro, Evaluacin, Autorizacin y Restriccin de Sustancias Qumicas, que figura en el Anexo XIV) [ 26]. Por lo tanto, hay necesidad de investigacin(newmethods) y de la revisin 2. Fuentes y la eliminacin de contaminacin de fondo BPA es inherentemente ubicuo en el medio ambiente. Fondo contaminacin de BPA se produce a niveles de L1 ng y surge principalmente de solventes, columnas SPE, cristalera, artculos de plstico y otros reactivos y herramientas de laboratorio. En general, tratados trmicamente cristalera (4 h en 400 C) y se utilizan materiales de lavado con solvente como una precaucin medida para evitar la contaminacin de fondo [28]. Se han encontrado concentraciones de BPA en 0.02gL1 en Agua Milli-Q usando mtodos altamente sensibles (cuantificacin instrumental lmite de 5 pg) [29]. La contaminacin se present desde el plsticos usados en el sistema de purificacin y fue quitado por filtrado el agua a travs de una membrana hidrofbica (disco Empore). Otros autores, sin embargo, no encontr contaminacin BPA cuando se analizados calidad ultra-alta diferente aguas, como agua Pestanal de Riedel de Han o los obtenidos de un Elgastast y un sistema de Millipore Milli-Q, aunque en estos experimentos los lmite de cuantificacin instrumental fue de alrededor de 10 ng [32]. Cartuchos SPE (e.g. Oasis HLB de aguas y Bond Elut certificar de Varian) se ha sabido para causar contaminacin de BPA en concentraciones de alrededor de 0.04gL1 *31+. La contaminacin fue efectivamente removido por prelavado los cartuchos que por lo menos 15mL de metanol y probablemente se deriva no de la absorbente material, sino al proceso de fabricacin. Carga de la muestra SPE puede introducir la fuerte contaminacin de BPA cuando jeringas de vidrio se utilizan, causada principalmente por el adhesivo utilizado para fijar la aguja [30,32]. Utilizando una bomba peristltica con tubos de vinilo, la contaminacin de BPA lleg a ser insignificante aunque la contaminacin fue importante para los dos derivados BPA (es decir, 4-terc-butylbenzoic cido, BBA y 4-tert-butilfenol, t-BP). Contaminacin de la muestra de la SPE carga puede eliminarse casi totalmente mediante la sustitucin de la tubos de vinilo con Viton de DuPont [32]. 3. Tratamiento de muestra Hay una amplia variedad de alimentos que contienen BPA incluyendo fresco y conservas muestras slidas y lquidas (Fig. 1). Determinacin de

BPA en estas matrices a menudo requiere la preparacin de la muestra amplia antes del anlisis instrumental. Los pasos habituales en alimentos preparacin de la muestra incluyen pretratamiento, extraccin, clean-up, concentracin y a veces derivatizacin y constituyen el cuello de botella en el actual anlisis de alimentos (Fig. 1). Las muestras slidas son generalmente primero homogeneizada mientras que los lquidos que se filtran o centrifugado. Tratamientos especiales pueden ser requeridos dependiendo de sobre la composicin de la matriz; por ejemplo las bebidas carbonatadas son desgasificada [16,33], muestras con alto contenido en protenas pueden requerir su eliminacin por los tejidos de peces y precipitacin son triturados y liofilizado antes de homogeneizacin. Conservas que contienen ambos porciones de lquidos y slidas son generalmente filtradas y tratadas por separado. Extraccin por solventes y SPE son las tcnicas ms usadas para el aislamiento de BPA de slidos y lquidos muestras, respectivamente, principalmente debido a su simplicidad y amplia aplicabilidad. Otros tcnicas (p. ej., MAE, PLE, MSPDE, SPME, SBSE, CF. Fig. 1), aunque apenas usados hasta ahora, puede mejorar la extraccin de BPA en trminos de tamaos de muestra, automatizacin y consumo de disolventes. Los extractos que contienen BPA suelen ser sometidos a extensa clean-up y en Esta extraccin lquido-lquido de respeto y SPE son preferidas. Concentracin de BPA por evaporacin del solvente del extracto final es un paso inevitable debido a su baja concentracin en alimentos (cf. Tabla 2). En general, suele ser la combinacin de diferentes tcnicas inevitable y mtodos se convierten en dependientes de frequentlymatrix. Slo los mtodos para estudiar la migracin de BPA de unusedcommercial latas por extraccin con simulacin de alimentos lquidos son ms simples [37]. Cuadro 3 da algunos ejemplos representativos de los procedimientos de tratamiento de muestra para el anlisis de que contienen BPA alimentos. A continuacin, las principales tcnicas utilizadas para la extraccin y limpieza se discuten detalladamente. generalmente preferido para la extraccin de alimentos slidos [16,17,39,40,42,44,46] Aunque otros como acetona [41], [39,47] de metanol y etanol [43] tambin puede extraer BPAefficiently. Alimentos lquidos son extrados con acetato de etilo [45], [48] de cloroformo o diclorometano [33]. Como un la regla general, extracciones repetidas son generalmente necesarias para el aislamiento total de BPA. Tpico consumo de disolventes en general, incluyendo extracciones repetidas y lavado, es entre 40 y 300mL. Extraccin veces oscilan de 10min a 120min utilizando agitacin o sonicacin para favorecer la particin de equilibrio. Sodio anhidro sulfato con frecuencia se agrega a la muestra antes de [40,41] o despus de la extraccin [16,17] para separar trazas de agua en la capa orgnica. La importancia de controlar la enzimtica degradacin de BPA durante la extraccin de muestras como fruta fresca y verduras se ha destacado puesto que conduce a las recuperaciones pobres

[41]. Degradacin puede prevenirse mediante la adicin de 0.1N cido clorhdrico para el solvente de extraccin solvente [41]. Debido a la selectividad limitada de extracciones de base solvente hay una necesidad de limpiar extensa antes de anlisis instrumental. Eliminacin de lpidos del extracto es esencial para las muestras de origen animal (pescado, carne, etc.) dado que pueden reducir significativamente el rendimiento analtico de LC y GC. Afecta material lipdico la superficie activa de la inmvil fase en LC y degrada el poder de resolucin de la columna. En GC/MS, los lpidos se acumulan en el fuente de puerto, la columna y el ion de inyeccin. Eliminacin de grasa se hace principalmente por extraccin lquido-lquido con n-heptano [16], 2,2,4-trimetilpentano [17] y [39,40,46] n-hexano o congelando los lpidos en el extracto en 24 C durante 40 minutos, seguido de filtracin [38]. El uso de SPE para Clean-up de los extractos que contienen BPA es inevitable en la mayora procedimientos de tratamiento de ofsample [38, 4044, 46].Despus de eso, la evaporacin de elutes, reconstitucin con disolvente orgnico y filtracin (0.200.5 m) completa el tratamiento de la muestra. Aunque general las recuperaciones de estos procedimientos son generalmente muy por encima de 75%, bajo recuperaciones ((<50%)debido a interactionswere de matrixanalyte registrado por Thomson et para una variedad de alimentos [17]. Kuo et al tambin obtuvo bajas recuperaciones (18%) y alta desviacin estndar relativa (RSD) (24%) en un tipo especfico de polvos de frmulas infantiles, es decir, hipoalergnicos marca, este hecho se relaciona con la presencia de hidrolizado enzymesinfluencing el SPE [49]. Table3compares solvente varios mtodos de extraccin en trminos de consumo de disolventes en general, factores de concentracin y recuperaciones, entre otras caractersticas.

3.1.2. Extraccin asistida por microondas (MAE) Aplicacin de basedonthe de MAEis de energa de microondas para la muestra durante la extraccin, que en consecuencia se agit y se calienta rpidamente. Constituye una buena alternativa a la extraccin por solventes de muestras de alimentos slidos y semislidos porque las eficiencias de extraccin buena puede lograrse utilizando menos veces extraccin solvente y ms cortos. La aplicacin de MAE a la extraccin de alimentos que contienen BPA ha sido un pez bastante limitado y restringido a [50,51]. Muestra baja tamaos (normalmente entre 0,2 y 1 g de tejido descongelado y triturado) fueron tema toMAEwith 20mLof dichloromethane:methanol (2:1, v/v) [50] o 10 mL (20% de humedad) de Tetrametilamonio hidrxido (TMOH) y 1mL n-Nonano [51] durante 15-20 minutos SPE (SepPak NH2) [49] y Oasis-HLB [50] fueron utilizados para la limpieza de la extractos con la consiguiente evaporacin de disolventes y reconstitucin antes de la LC/MS [50] o GC/MS [51]. Recuperaciones promedio fueron en los mrgenes de

4749% y 7879% para el tejido del hgado o msculo con picos de trucha arco iris (RSD 4.14.7% [50]) y el 92111% (RSD 3 a 8 % [51]) para una variedad de pescados y mariscos como gambas, cangrejos, conchas, blanco almejas, calamares y peces. 3.1.3. A presin extraccin lquida (PLE) PLE, tambin produccin acelerada de extraccin por solvente (ASE), implica el uso de disolventes lquidos a temperaturas elevadas (40200 C) y presiones (10002500 psi). En estas condiciones, los solventes tienen mayor poder de solvatacin y han aumentado las tasas de extraccin. La aplicacin de PLE en anlisis de alimentos ha sido recientemente revisada [52,53]. Aunque apenas se utiliza para la extraccin de contener BPA alimentos, la conveniencia de PLE para la extraccin de muestras de animales [28,54] y origen vegetal [32] antes de LC/MS ha sido demostrado. Los solventes utilizados han sido formeat de diclorometano (carne de cerdo, carne, conejo, pato y pollo) [28], acetonen-hexano (1:1, v/v) de hgado de pescado [54] y metanol para cereales [32]. Sulfato de sodio [54] y diatomeas [32] de la tierra se han utilizado como agentes dispersantes. La optimizacin de la extraccin de las condiciones de PLE incluye el estudio de la tipo solvente, temperatura, presin, tiempo de extraccin y nmero de ciclos y esto puede realizarse mediante estadstica experimental procedimientos de diseo para minimizar el nmero de experimentos [32]. Frommeat de eliminacin de lpidos se lleva a cabo mediante la mezcla de las muestras con Celite y poner activaron almina neutra en la parte inferior de la Clulas PLE [28], mientras que su eliminacin fromfish hgado ismade por extraccin con n-hexano despus PLE [54]. Para limpiar de extractos de PLE por SPE (Oasis HLB [32], Florisil 60 [54] y aminopropil sorbentes [28]) siempre es necesaria para lograr selectividad. Las recuperaciones obtenidas en el applicationswere anterior del 81% al 104% (RSD 9%) de los cereales [32], 53% (RSD 20%) de hgado de pescado [54] y del 91% al 100% para carne [28]. 3.2. Extraccin en fase slida (SPE) Son en gran medida la tcnica ms utilizada para la extraccin de ambos de alimentos lquidos que contienen BPA y la limpieza de los extractos crudos despus de la extraccin solvente. La base de SPE [55] y su aplicacin en anlisis de alimentos [5658] han sido revisados exhaustivamente. La seleccin de un adecuado absorbente para BPA principalmente se regir por sus propiedades (carcter moderado polar y presencia de grupos de donantes/aceptador de hidrgeno, vase tabla 1) y el tipo de matriz de alimentos. Sorbentes tanto, no selectivos y selectivos han demostrado excelente rendimiento para aislamiento y limpiar de BPA fromfood (vase tabla 3). 3.2.1. No selectivo sorbentes El copolmero de divinilbenceno/N-vinilpirrolidona (OASIS HLB fromWaters, 30200mg) ha sido el ms utilizado absorbente hasta la fecha.

El polmero hidroflico de N-vinilpirrolidona ofrece buena mojabilidad de los sorbentes y acta como un aceptor de hidrgeno, mientras que el polmero hidrofbico divinilbenceno proporciona fase inversa retencin de BPA. Ofrece ventajas sobre la clsica silicona Sorbentes, es decir, alta rea especfica (800m 2/g), la posibilidad de secar durante el procedimiento de extraccin sin reducir su capacidad para retener el BPA y como otras resinas polimricas, estabilidad en el rango de pH todo [59]. Entre otros alimentos lquidos, OASIS HLB se ha aplicado para el aislamiento de BPA de la porcin acuosa de conservas de frutas y verduras [40], el lixiviado es originario el tratamiento de vaco alimentos para mascotas latas con agua destilada a 121 C por 30 min [44], el agua potable y bebidas de soda [60], [61] el calostro humano y altamente viscoso muestras, como la miel [62]. La extraccin de protenas y lpidos fue necesaria para las muestras de calostro humano antes de SPE. Para ello, las muestras se diluyeron con agua destilada, tratada con acetonitrilo o 2-propanol, centrifugado y filtrado [61]. El tamao de las muestras fue en las gamas 150mL [40,44,61] y 10 g [62] Aunque el volumen de la brecha aument hasta 2 L para beber agua [60]. Por otra parte, como OASIS HLB elimina eficientemente hidroflico y lipoflicos interferencias [63] y se ha aplicado a la Clean-up de una variedad de alimentos despus de la extraccin solvente, es decir, pescado (para eliminar los lpidos polares co-extracted) [38], frutas y hortalizas (porcin total de contenido o slido) [40,41] y una variedad de Conservas [46]. Un segundo paso de limpiar con una fase normal SPE absorbente (Florisil, un silicato de magnesio sinttico) era necesario en algunas aplicaciones, es decir, en el tratamiento de pescado, fruta y muestras vegetales [38,40,41]. Retencin de Florisil ocurre principalmente a travs de la adsorcin, y limpieza debe ser realizada de muestra extractos previamente se evaporaron y se redisuelve en un no-polar disolventes orgnicos como el n-hexano. Recuperaciones generales en todo el citado aplicaciones eran superiores al 80%. Se ha propuesto qumicamente servidumbre de fase inversa de slice (C18) como una absorbente para el aislamiento de BPA de mineral de la SPE agua y vinos [64] y lata de leche condensada y en polvo [65]. Las muestras de leche se diluyeron con watermethanol (8:1, v/v) con el fin de obtener extractos tan limpio como sea posible. La adicin de agua reduce la viscosidad de la muestra, lo que resulta en un mejor caudal durante SPE, mientras que la adicin de metanol encaminadas la desestabilizacin de la emulsin de la leche. Se argument que eso si leche las membranas del glbulo de grasa no se interrumpen, BPA podra no ser eficaz y reproducible extrado. Muestras de leche con un contenido de grasa por encima del 3,5% previamente diluido con agua. Recuperaciones de la SPE para BPA oscilado entre 57 y 85% y el estndar interno [2H 16]

bisfenol A, BPA-d16 fue utilizado para la cuantificacin [65]. El uso de poliestireno-divinilbenceno (PS-DVB, Isolute y PSDVB hidroxilado, Sorbentes Isolute ENV) en esta aplicacin no mejor las recuperaciones a pesar de ofrecen hidrofbico y interacciones para retencin de BPA. Por el contrario, fueron superiores al 85% de las recuperaciones obtenidos por el PS-DVB adsorbentes para el aislamiento de BPA deagua miel diluida y acidificado [62], diluido, centrifugado y filtrado de agua infantil frmula y conservado vegetales y zumos de fruta [15,66] y bebidas enlatadas no tratadas [67]. Recuperaciones siempre fueron ms altas del 85%.

Por ltimo, multimodo fases (Isolute multimodos cartuchos) tambin se han propuesto para el aislamiento de BPA de caf instantneo [68].Phaseswere multimodo para explotar de modo mltiple interacciones andwere originalmente diseado para la deteccin de drogas y metabolitos [69,70]. Adems de explotar las interacciones mltiples para conservar las mezclas de analitos con diferentes propiedades, Estos sorbentes han utilizado ltimamente para obtener extractos limpios para un compuesto que puede ser retenido por mltiples interacciones. Isolute cartuchos multimodos combinan catinicos, aninicos y no polar funcionalidades. Recuperaciones en caf entre 85% y 89% (RSD: 4-7%). En general, el uso de SPE para aislamiento de BPA de lquido alimentos ofrece dos ventajas en comparacin con LLE, es decir, mayor selectividad y menor consumo de disolventes. Por otra parte, las concentraciones factores, enhancedby evaporacin de disolventes, son similares para SPE y LLE. El SPE de alimentos lquidos generalmente requiere ms limpieza y debe tener mucho cuidado con respecto a las pequeas partculas presentes en los extractos de muestra que pueden producir lowrecoveries y irreproducible por adsorcin de analitos o estorbar. Un detallado comparacin entre diferente SPE y mtodos de extraccin por solvente se da en la tabla 3. 3.2.2. Selectivo sorbentes Una variedad de materiales absorbentes de SPE altamente selectivos han sido desarrollados que son especialmente adecuados para la determinacin de trazas contaminantes en tales muestras complejas como alimentos, por lo tanto realizar extraccin y limpiar en un solo paso. Por otro lado, la desarrollo de estos smartmaterials es largo, complejo y caro, como es el caso de immunosorbents y molecularmente polmeros impresos. Su aplicacin en el anlisis de alimentos y especficamente a la determinacin de BPA, est surgiendo pero un bien escaso

hasta el momento. 3.2.2.1. Acceso materiales (RAMs). El trmino "restringido acceder a materiales"(RAMs) fue introducido por Desilets et en 1991 [71]. Estos sorbentes fueron desarrollados especialmente para el on-line Clean-up/extraccin de muestras biolgicas (como plasma y suero) con el fin de realizar un anlisis de alto rendimiento. Cosechadora de carneros tamao de la exclusin de las protenas y otras macromolculas con la simultneo enriquecimiento de analitos de masivos moleculares bajos en el superficie interior del poro, que son retenidos por conventionalmechanisms (hidrofbico, inico o interacciones de afinidad) [72]. La exclusin de tamao es alcanzada por una barrera de difusin fsica (dimetro de poro) o por un barrera qumica creada por un polmero en la superficie externa de la partculas. Se ha utilizado un RAM (LiChrosphere RP-18 anuncios de Merck) para el anlisis simultneo de la SPE-LCMS/MS on-line de BPA, otros compuestos fenlicos y triclocarban en la leche materna [73]. La memoria RAM consta de una fase inversa servidumbre cubriendo el poro interno (C4, C8 o C18) y una superficie modifiedwith grupos hidroflicos (glycerylpropyl, es decir, diol moieties), que acta como una barrera fsica (tamao de los poros 6 nm) que excluye las macromolculas. El mtodo consiste en la Adems del estndar interno (100 L, 13 C 12-BPA) a la muestra, la hidrlisis enzimtica de la BPA conjugado, protena y extraccin de lpidos mediante la adicin de 2-propanol y centrifugacin a Extraiga el sobrenadante limpio (200L), que est sujeta a on-line SPE-LCMS/MS. Tambin puede ser usado medida la libre de BPA omitiendo el tratamiento enzimtico. Recuperaciones de BPA fueron entre 94 y 106% y la precisin del mtodo en el rango 519%. 3.2.2.2. Immunosorbents (ISs). Columnas de inmunoafinidad (IAC) o los immunosorbents supuestos (ISs) son hechos por unin covalente anticuerpos en un soporte adecuado. Ofrecen nica selectividad sobre la base de reconocimiento molecular, que es particularmente adecuado a las matrices de alimentos complejos. ISs pueden disearse para apuntar un nico analito o explotando reactividad cruzada a Extracto de toda una clase de compuestos estructuralmente relacionados. Aunque mayora de las aplicaciones es para muestras biolgicas y ambientales (revisado en [74]), ISs tambin han sido explotados para la extraccin de alimentos y son comercialmente disponible para el anlisis de natural toxinas [75,76]. Los principales inconvenientes de esta tcnica es el costo de producen los anticuerpos y la corta vida de columnas. Se han reportado varios mtodos que utilizan solgel cromatografa de inmunoafinidad para limpiar alimentos lquidos o extractos crudos previo a la determinacin de BPAby LCfluorescence deteccin. Precolumns de solgel que contiene el anticuerpo no estaban en lnea junto con las columnas de inmunoafinidad para prevenir

desde la obstruccin causada por las pequeas partculas presentes en Extracto de la muestra. El enfoque es aplicable a una variedad de Conservas de alimentos incluyendo bebidas, frutas, verduras [77.78], fatcontaining los productos alimenticios (por ejemplo sopa de patata de atn, crema,) [78] y vino [79]. El ISs producida por la inmovilizacin de los anticuerpos en los poros de una matriz de slice generado solgel son ms simples, ms barato y ms verstil que los preparados por el acoplamiento covalente de anticuerpos policlonales de CNBr activado Sepharose 4B [80]. El capacidad mxima de las columnas IAC de encuadernado para BPA era 280 ng y bien reproducibilitywas lotes encontrados, siendo reutilizable por lo menos 15 veces. Sustancias que muestran alta reactividad cruzada (> 1%) no afect la determinacin de BPA desde eficientemente fueron separados por el sistema LC. En general, las muestras de alimentos deben tratarse en cierta medida con el fin de hacerlos compatibles con cromatografa de inmunoafinidad. Withwater de dilucin es esencial desde solventes orgnicos Fig.2. Cromatogramas obtenidos para solucin a BPA (10 ngmL1), (b) vino muestra sujeta a limpiar por extraccin en fase slida (C18 cartucho) y (c) la misma muestra de vino limpiado-para arriba por cromatografa de inmunoafinidad [79]. causar desnaturalizacin irreversible de anticuerpos. Alimentos lquidos como bebidas y vinos son desgasificados y diluyeron 1:1 con phosphatebuffered salino (PBS) (pH 7) para permitir la Unin de BPA immunosorbent. Alimentos slidos como frutas, verduras, estofado, sopa y pescado se extrae con acetonitrilo, extraido hacia atrs con n-hexano para eliminar los lpidos en matrices grasos, filtrado y diluido (1:10) withwater antes de limpiar con ISs.Compared C18-basado SPE, IAC fue superior en la eliminacin de interferencias de matriz de alimentos que se muestra en la figura 2 para muestras de vino limpiado-para arriba con C18 y IAC. Recuperaciones de BPA con IAC fuertemente dependen de la matriz alimentaria. As, algunos de los valores obtainedwere: 53% en guisantes, 75% en duraznos [77], 27% en goulash, 103% en un refresco de limn [78] y de 74%

al 81% en vinos [79]. Valores RSD para estas muestras fueron entre 1 y el 21%. Las recuperaciones de variables y bajas obtenidas para IAC fueron explic sobre la base de la naturaleza dependiente de la matriz de la anterior disolventes de extraccin de BPA y la influencia de coextraen componentes de la matriz de las interacciones BPAantibody. 3.2.2.3. Molecularmente impresos polmeros (MIPs). Molecularmente polmeros impresos (MIPs) son polmeros sintticos que molecular

capacidad de reconocimiento para un parmetro de destino [81]. MIPs ofrecen algunos ventajas sobre la ISs como estabilidad frente a los solventes orgnicos, cidos fuertes y bases y calefaccin. Adems, permiten mayores volmenes de muestra y reutilizacin y su sntesis es ms fcil puesto que no son dependientes en la produccin de anticuerpos. En la actualidad un nmero de enfoques se han utilizado para preparar BPA impreso polmeros, que han sido aplicados a la determinacin [8285] y eliminacin [86] de BPA y otros contaminantes de estrgeno fenlicos en aguas ambientales. Nuevas arquitecturas para desarrollar BPA-MIPs, como hbrido molecularmente impresos membranas [86], molecularmente impreso de microesferas Politersulfona (PES) [87] o un hbrido RAM-MIP [88] se han descrito en la literatura. En menor medida se han propuesto aplicaciones alimentarias de MIPs (revisado en [89]) aunque es una zona emergente con prometedor desarrollos. A lo mejor de nuestro conocimiento, slo una aplicacin ha sido desarrollado para la extraccin basadas en MIP de BPA de alimentos [90]. Un acercamiento combinatorio fue utilizado para simplificar la optimizacin procedimiento. cido metacrlico (MAA) y 4-vinylpyridine (4-VP) fueron evaluados como monmeros funcionales, glicol de etileno Dimetacrilato (EDMA) y trimethylolpropane trimethacrylate (TRIM) como cross-linkers y metanol, acetonitrilo y tolueno como solventes. El iniciador utilizado fue 2,2-azobis methylbutyronitrile (AIMN) y la plantilla era de BPA. Istopos estables etiquetados compuestos como el BPA-d16 [88] y anlogos de la estructura como p-tertbutylphenol [84], tambin han sido utilizados como plantillas en otro enfoques para evitar indeseables plantilla salida fromMIP y la consiguiente llevar sobre efectos. Los componentes ptimos seleccionados fueron 4-VP (4 mmol) y recorte (12 mmol), que proporcionan una mayor grado de reticulacin, AIMN (0.88 mmol) y tolueno (150 mL), que proporciona menor fijacin no especfica. La limpieza basadas en MIP / mtodo de extraccin/concentracin permitida la determinacin de BPA (recuperacin del 78%; RSD 10%, n = 3), libre de co-extractives, en el fase acuosa filtrada de conservas.

3.3. Menos comunes tcnicas de extraccin Tcnicas de extraccin por sorcin sobre miniaturizada como fase slida Microextraccin en (SPME) y revuelva la barra extraccin por sorcin sobre (SBSE) han la capacidad de mejorar el aislamiento y la limpieza de contaminantes de los alimentos en trminos de consumo de disolventes, automatizacin y muestra manejo reduccin, sin embargo su aplicacin a la extraccin de BPA fromfood es todava limitada hasta la fecha. Asimismo, la matriz dispersin de la fase slida (MSPD), que tiene el potencial de simplificar la extraccin de muestras slidas, se ha aplicado tambin apenas para la extraccin de BPA de alimentos. A continuacin, estas aplicaciones son

coment destacando sus principales ventajas e inconvenientes. 3.3.1. Microextraccin en fase slida (SPME) El dispositivo SPME consiste en una fibra de slice fundido recubierta con un fase estacionaria apropiada conectada a una microjeringa modificado. La extraccin puede realizarse mediante la suspensin de la fibra en la la fase de vapor sobre la muestra lquida (headspace (HS)-SPME) o por dirigir la inmersin en la muestra, (DI)-SPME, siendo la desorcin llevado a cabo trmicamente, exponiendo la fibra en el puerto de inyeccin de un cromatgrafo de gases, o qumicamente, cuando acompaada de LC [91]. HS-SPME seguido por GCMS es ideal para la extraccin de compuestos voltiles de los alimentos (revisados en [92]) desde el analito las determinaciones son prcticamente libres de interferencias, pero ninguna aplicacin relaciona con BPA en los alimentos se han desarrollado hasta ahora. DI-SPME seguido por GCMS se ha aplicado a la determinacin de BPA en simulantes de alimentos acuosa [93] y agua de los envases plsticos y vajilla [94]. DI-SPME tambin se ha propuesto antes LCFL para la investigacin rpida de BPA en conservas, slo analizar la fase acuosa de la can [95]. Diferentes fases estacionarias con la capacidad para soportar temperaturas altas del inyector (polidimetilsiloxano, PDMS; carboxen/PDMS; PDMS/divinilbenceno, DVB; Carbowax CW/DVB y polyacrylate, PA) evaluaron la la extraccin de BPA por DI-SPMEGC [93,94]. La capa PA dio las mejores recuperaciones en base a su polaridad similar al BPA. Entre los materiales de revestimiento probados para extraccin de BPA por DI-SPMELC, las fibras ms polares dieron los mejores resultados. Recuperaciones fueron 6% para PDMS-DVB, 7% para PA, 58% de PDMS y 90% para CW, as que el ltimo fue seleccionado como ptima. El efecto de la fuerza inica en Las recuperaciones BPA fue significativa y los tres mtodos incluyen el adicin de sal, es decir, 7,5% (w/w) [93,95] y 15,4% (w/w) [94]. Absorcin mxima se produjo en pH neutro [93,95] y la absorcin proceso se llev a cabo a temperatura ambiente [95] o en SSP.schintzii C [93,94]. Los tres mtodos fueron lo suficientemente sensibles para la deteccin o evaluacin de la migracin de BPA (lmites de cuantificacin fueron 3.8mgL1 [95] y 0.010.02mgL1 *93,94+), pero tambin presentaron graves inconvenientes. As, la automatizacin de SPME con LCFL a travs de la interfaz de Supelcowas no da resultado, siendo el off-line modo ms eficiente que el uno automatizado en trminos de sensibilidad y resolucin de pico [95]. Este hecho fue explicado sobre la base el mayor factor de concentracin en el modo off-line (67) y la introduccin ms lenta de los analitos en el sistema de la LC en el modo dinmico, resultando en picos ms amplios [95]. De hecho, Eisert y Pawliszyn [96] ms tarde desarroll la tcnica SPME en tubo, que utiliza un capilar revestido de la pared interna como la extractionmedium

y es ms conveniente para la automatizacin de la LC. Tubo SPE ha sido con xito aplicado a la extraccin de BPA y otros estrgenos de aguas ambientales [97,98], pero no en alimentos muestras todava. Otros el punto dbil del mtodo SPMELCFL fue la reproducibilidad (RSD fue 22% para 100mgL1 de BPA). Con respecto a la determinacin de BPA por SPMEGCMS, la variabilidad fue alta entre serie (promedio RSD1013%) y en consecuencia una calibracin para cada uno serie de anlisis se recomienda [93,94]. Por otro lado a pesar de slo simulantes acuosos o agua potable fueron analizados, las recuperaciones bajas resultante del efecto de los componentes de la matriz (765%) [94,95], hizo aconsejable el uso de la adicin estndar mtodo para la cuantificacin de BPA. Se relacionaron con las recuperaciones bajas competitividad entre BPAand el matrixcomponents para el enlace a la limitada cantidad de fase estacionaria, que condujo al analito desplazamiento [94]. A nuestro conocimiento ningn estudio relacionado con el uso de SPME para extraccin de BPA de matrices ms complejas de alimentos ha se ha divulgado hasta ahora. De hecho, el uso de DI-SPME en matrices de alimentos Si necesita limpiar exhaustiva para garantizar la reproducibilidad y la robustez de las fibras, que pueden ser afectados por adsorcin de protenas u obstruida por las partculas, del mismo modo que puede ocurrir en el Anlisis de BPA en otras matrices complejas como plasma humano

3.3.2. Extraccin absorbentes (SBSE) barra agitadora SBSE utiliza una barra de agitacin en un tubo de vidrio sellado que est cubierto con polidimetilsiloxano (PDMS) para extraer solutos [100]. En comparacin para SPME, una mayor cantidad de fase estacionaria (50250 veces superior) es usadas y por lo tanto mejores recuperaciones, sensibilidades andsample capacidad se consiguen. Como en SPME, puede estar inmerso la barra agitadora en el lquido de la muestra o puede realizarse en el espacio anterior el lquido o el slido muestra para determinar voltiles y semi-volatiles (extraccin por sorcin sobre headspace, HSSE). Extraccin de los analitos de la barra se logra mediante desorcin trmica de GC o elucin con una Solvente de la LC. La tcnica se desarroll inicialmente para la extraccin de compuestos orgnicos de muestras acuosas, pero hoy una variedad de aplicaciones en el medio ambiente, alimentacin y reas biomdicas han se ha divulgado (ha comentado el en [101]). PDMS es disponible en el mercado nico de la capa, la aplicacin de SBSE para compuestos polares y semipolar requiere Derivatizacin. Por lo tanto, la extraccin de BPA de agua [102104] se ha llevado a por derivatizacin de BPA con anhdrido actico, inmersin de la barra en la desorcin de solucin y termalAnlisis GCMS. De esta manera, las LODs para BPA fueron en la gama 0.62 ng L1. A pesar de SBSE nuevo recubrimientos son necesarios para ampliar el alcance de SBSE, slo unos cuantos se han divulgado

hasta el momento. Cabe destacar los twisters de la doble fase (corto Tubos PDMS cerrados en ambos extremos con imanes, con un interior cavidad que est repleto de adsorbente de carbn activado), que se propusieron mejorar las recuperaciones de compuestos polares [105] y dos materiales selectivos, es decir, un polmero molecularmente impreso (MIP) para la extraccin de monocrotofos [106] y una restringida acceso a medios (RAM) para la extraccin de cafena y relacionadas con metabolitos [107]. En este sentido, basada en una novela capa SBSE en polidimetilsiloxano ha sido /-ciclodextrina (PDMS /-CD) recientemente desarrollado y aplicado a la extraccin de BPA (y otros compuestos estrognicos) de agua ambiental, agua potable y lixiviados de vajilla de una sola vez, antes de la determinacin por LCFL [108]. La capa de PDMS/CD fue preparada por un solgel tcnica, whichprovideddirect qumico de la papelera fase al substrato de cristal y dio lugar a una mayor estabilidad en comparacin con a la tcnica de deposicin fsica empleada con frecuencia para capa. La introduccin de la ciclodextrina permiti aumentar la recuperacin de compuestos polares debido al alto nmero de funcional grupos hidroxilo de la molcula -CD y la selectividad proporcionados por su capacidad de reconocimiento molecular. La extraccin fue realizado por inmersin de la barra de agitacin en la muestra (5 mL) 40 min (condiciones de no equilibrio) a temperatura ambiente. Desorcin de BPA se realiz con 100 litros de metanol durante 2 min bajo agitacin ultrasnica (cociente del volumen de la muestra sobre el volumen del extracto de 50). PDMS /-CD revestido revolver bar proporcionada mejor selectividad y sensibilidad para compuestos polares que una barra de agitacin recubiertas de PDMS y un CD de PDMS recubierto de fibra. El menor rendimiento de mtodo para SPME fue atribuida al menor volumen de fase estacionaria y la introduccin de una etapa tercero competitiva en la agitacin paso, es decir, el tefln recubierto barra magntica. El LDD de BPA fue 8ngL1, con recuperaciones entre 86 y 116% y RSD en la gama 0.710.7%. 3.3.3. Dispersin de fase slida matriz (MSPD) MSPDwas reportada por primera vez en 1989 [109] y iswell adecuado para el extraccin de alimentos slidas, semislidas o altamente viscosos y biolgicas matrices (revisados en [110.111]). La muestra se mezcla con un absorbente como C18 enlazada slice, sulfato de sodio o diatomeas tierra, seguida de lavado con un pequeo volumen de disolvente o embalaje el dispersante material absorbente en una mini-column SPE antes de elucin. MSPD es simple y verstil y ofrece la posibilidad de de realizar la extraccin y la limpieza en un solo paso [112.113] esta dando como resultado un acortamiento drstico de tiempos de anlisis y solvente consumo. MSDP se ha divulgado recientemente para la extraccin simultnea

de BPA, nonilfenol y Octilfenol de huevos y la leche [114] antes de la determinacin de la LC/MS/MS. Se mezclaron las muestras (1 g) con 1 g de polvo de C18 slo durante 5 minutos, embalado y eluido con 10mL de etanol. Este agente dispersante dio mejores recuperaciones de BPA que el negro de carbn grafito (GCB) debido a la fuerte adsorcin de BPA GCB. El eluyente se evapor a sequedad y la residuewas se redisuelve en diclorometano/hexano y sujeto a

Tabla 4 Anlisis basado en la LC para la determinacin de BPA en los alimentos

mues tra

Otros analitos que BPA

ls

prepara cin de la muestr a (pasos principa les) PLE SPE

Columna de LC

LC parmetr os

Detector parmetr os gama lineal,

mtodo LOD o LOQ recupera ciones (R)

Refere ncia

Cerea les

4-nNonylph enol

XTerra MS C18, 100 mm 2. 1mm, 3,5 m (Sistema de aguas).

Fase mvil: Amonio de 0,0025 M tampn de formiato (pH 3.1, ajustado con frmico cido) / metanol con gradiente elucin, 0.2mLmi n1, Inj: 50 L

(-) De ESI-MS: capilar Voltaje: 3.0 kV, cono Voltaje: 40 V, fuente temperat ura: 120 C, desolvati on temperat ura: 250 C, desolvati on de gas (N2): 410Lh1, gas de cono (N2): 50 L h1

LR: 0.08 0.8gg1 (adicin estndar ), LOD: 43 ng g1; R: 81 104% (PLE recupera ciones)

Carabi asMartn ez et al [32]

4-tertbutilfenol

adems postcolu mna de una base fuerte [1, 8 -

2, 4Diclorofe nol 2,4,5 Triclorof enol Pentaclo rofenol cido 4tercButylben zoic

Diazabici clo (5,4,0) undec-7es], 10Lmin 1

Fruta sy verdu ras

SE SPE

Cons ervas para masc otas

ESPE (total conteni do)

Cons ervas de grasa, acuos a de medio s cido s.

Seal

SPE (lixiviaci n de latas vacas) SE SPE

simetra escudo RP18, 150 mm 4. 6mm I.D., 3,5 m con un protector columna, 10 mm 2. 1mm Identifica cin, 3,5 m (Millipore ) Simetra escudo RP18 150 mm 4. 6mm I.D., 3,5 m (Millipore Corporac in, Milford, MA, ESTADO S UNIDOS) . Nucleosi l C18, 250 mm x 4 mm de dimetro interior, 5m (Hichrom Limited,

Fase mvil: agua/ace tonitrilo (60: 40, v/v); 1.2mLmi n1; INJ: 50L.

FL: 275/300 nm

LR: 10 1000 ngmL1; LOD: 1.3ngg1 ; R: 82101 %

Kang et al [41]

Fase mvil: agua/ace tonitrilo (60: 40, v/v), 40 C, 1mLmin 1, Inj: 50L.

FL: 275/300 nm

LR: 50 1000 ngmL1; LOD: 2ngmL1 (agua), 3 ng g1 (pet alimento s); R: 95 %

Kang y Kondo

Fase mvil: agua/ace tonitrilo con gradiente elucin, 25 C, 0.4mLmi n1, Inj:

FL: 235/317n m

LR: 200 2000 ngmL1; LOD: 4.57.9 ng g1; R: 87 105% (alimento

Sol et al [46]

BADGE-H2O BADGE2H2O BADGE-H2OHCl BADGE-HCl BADGE-2HCl

Berkshire , Reino Unido).

10 L.

s simulado r)

Agua miner al

pButylphe nol

LLE

Inertsil ODS-2, 150 mm 4. 6mm I.D., 5m (GL Ciencias, Tokio).

Fase mvil: agua/ace tonitrilo (40: 60) que contiene 0.2 % H3PO4; 40C; 1mLmin 1; INJ: 10 L.

ED, culombio mtrico detecci n con una doble clula analtica de electrodo

LOD: 5.7gL1; R(Mean): 63 %

Toko'o ya et al.

p-tertbutilfenol pHexylph enol p-tertOctilfeno l pNonylph enol pHeptylph enol Nonilfen ol 4-TercOctilfeno l

E1: 400mV (vs Pd) E2: 650mV (vs Pd)

protector celular: 700mV (vs PD))

Pesca do

BPAd16

MAESPE

150Mm 2,1 mm D. I.

Fase mvil: agua/met anol con gradiente elucin, 0.4mLmi n1, Inj: no especific ado.

APCI (-)MS: capilar voltaje 3 kV, corona corriente: 40A, voltaje de fragment or: 100V, secado de flujo de gas 5Lmin1, nebulizac in 60 psi, presin

ORY 20.7 10044 ngmL1, LOD: 0.1 ngmL1 (agua), 50 ng g1 (pez); R: 4979 % (recuper acin absoluta, pescado)

Peder sen y Lindho lst [50]

Carne

Octilfeno l

4-nNonylp henol

PLESPE

C18 de simetra, 150 mm 2. 1mm de dimetro interno 3, 5. m

Agua y soda bebid as

Nonilfen ol Octilfeno l

4-nNonylp henol

SPE

simetra C18, 150 mm 2. 1mm de dimetro interno 3, 5 m.

Nonilfen ol

Fase mvil: agua (0.1 % amonac o) / metanol con gradiente elucin, 0.2mLmi n1, Inj: 10 L. Fase mvil: agua (0.1 % amonac o) / metanol con gradiente elucin, 40 C, 0.2mLmi n1, Inj: 10 L. (-) De ESI-MS: capilar Voltaje: 3.5 kV; voltaje de fragment or: 140V, 220 V;

de gas vapourisi ng temperat ura 280 C -) De ESIMS/MS: capilar Voltaje: 3.5 kV, cono Voltaje: 70 V, fuente temperat ura: 100 C (-) De ESIMS/MS capilar Voltaje: 3.5 kV; desolvati on temperat ura: 350 C

LR: 1 500 ngmL1; LOD: 0.3 ng g1; R: 9297 %

Shao et al [28]

LR: 1 500 ngmL1; LOD: 0,01 ng L1 (agua potable), 0,6 ng L1 (soda bebida); R: 8297 % LR: 25 500; LOD: 2ngg1; R: 93.9 116.4 %

Shao et al [60]

Miel

Bisfeno Fl

cuantifi cacin de SPE: CAPCE LL PAK C18, 150 mm 4.6 dimetr o interno 5 m) (Tokio Shiseid o Co., Japn).

Fase mvil: agua/ace tonitrilo (70: 30, v/v); 1.2mLmi n1; INJ: 10L. FL: 275/300 nm LR: 25500; LOD: 2ngg1; R: 93.9 116.4 % Inoue et al [62] Confirma cin: CAPCEL L PAK MG C18

FL: 275/300 nm

noue et al [62]

Leche

BPAd16

SPE

(250 mm 2 m m, 5m (Shiseido Co. Tokio, Japn) Fase mvil: agua (0.01 actico cido) / acetonitril o con gradiente elucin; 0.3mLmi n1; INJ: 5L. SPE LiChrosp her 100 RP-18, 250 mm x 4 mm de dimetro interior, 5m

Fase mvil: agua/met anol (30: 70, v/v) 0.9mLmi n1, Inj: 10 L

(-) De ESI-MS: capilar Voltaje: 3.5 kV, cono Voltaje: 70 V, fuente temperat ura: 500 C

LR: 5 700 ngmL1; LOD: 0,7 ngmL1; R: 52% (absoluta recupera cin), 101% (recuper acin relativa)

Marag ou et al [65]

Porci n acuos a de conse rvas alime ntos Abreviaturas: PLE, extraccin con lquido a presin; SPE, extraccin en fase slida; Inyeccin, volumen de inyeccin, ESI, extraccin por solvente SE, de ionizacin electrospray; FL, deteccin de fluorescencia; DIVISA, bisfenol A diglicidil ter; LLE, extraccin lquido-lquido; ED, deteccin electroqumica; MAE, extraccin asistida por microondas; APCI, presin atmosfrica ionizacin qumica; BFDGE, bisfenol F diglicidil ter; SPME, solid-phase microextraccin en, RAM, materia de acceso restringido

Inicio
SPE con aminopropil para eliminar la fraccin lipdica de las muestras. Significa recuperaciones de BPA se extendieron de 82% a 91% y el RSD media los valores de los huevos y la leche fueron 6% y 4%, respectivamente. 4. Separacin y deteccin La determinacin de BPA en los productos alimenticios exige el uso de alta

tcnicas sensibles y selectivas debido a los niveles de seguimiento en el cual es frecuentemente encontrado (vase tabla 2) y la complejidad de matrices de alimentos. Aunque el SML establecidas por la Comisin Europea es relativamente alta (600ngg1), los efectos informados de dosis bajas de BPA ha dado lugar para el desarrollo de mtodos analticos con LODs bajo bastante para evaluar la exposicin humana a estos niveles. La determinacin de BPA en los alimentos es principalmente realizado por LC/FL, LC/MS y GC/MS. Cromatografa lquida ofrece la ventaja de la simplicidad sobre GC para que derivatizacin paso es necesario, mientras que proporciona el ltimo resolucin mxima ms alta. Otras tcnicas como LCelectrochemical deteccin (LCED) e inmunoensayos han sido utilizados en menor medida. Informacin detallada sobre cromatografa y deteccin condiciones para la determinacin de BPA se resume en los cuadros 4 y 5. 4.1. Liquid chromatography LC de BPA se realiza generalmente en columnas de fase inversa C18. Fases mviles varan segn el detector juntado a LC.Agua y acetonitrilo son los solventes ms comunes del binarios cuando fluorescencia la deteccin es whilewater usado y metanol se prefieren para ESI-MS y APCI-Sra. elucin condiciones dependen altamente de los analitos determinar junto con matrices de BPA y de alimentos. Por lo tanto, es frecuentes para determinar BPA con otros fenoles, disruptores endocrinos y empaquetado de fromfood de los migrantes (vase tabla 4) y en este caso gradiente elucin se realiza siempre. Tiempos de funcionamiento oscilan entre 15 (por ejemplo [32]) y 40 minutos (e.g. [60]) dependiendo del nmero de determinado de contaminantes y la composicin de la matriz. Suele ser LC realizado a temperatura ambiente pero temperaturas hasta 40 C son a veces se recomienda [por ejemplo, 32 y 60] para reducir el tiempo de anlisis y aumentar la reproducibilidad. 4.1.1. Deteccin de fluorescencia BPA muestra fluorescencia nativa con emisin y excitacin longitudes de onda en 275 y 305 nm, respectivamente, que mantener constante en los solventes utilizados con ms frecuencia en fases mviles de LC, es decir, agua, acetonitrilo y metanol. La intensidad de fluorescencia de BPA es, sin embargo, mucho mayor en los medios orgnicos (vase Fig. 3) y as la sensibilidad en LC ser dependiente de la fase mvil composicin. Lmites de cuantificacin instrumental tpica para BPA por Deteccin de LCFluorescence estn en la gama 550 ngmL1. La tcnica es adecuada para la determinacin de BPA en matrices de muy diferentes alimentos como bebidas, vinos, alimentos para mascotas, miel, frutas, verduras, goulash y pescado. Preparacin de muestras normalmente incluye limpiar usando SPE basadas en solvente no selectivo [41,44,46,62], columnas de inmunoafinidad [7779] o extraccin de SPME [95] seguido de evaporacin de solvente. Lmites de deteccin tpico de BPA en los alimentos usando la deteccin de fluorescencia estn en la gama 0.12 g1 ng ngmL1 y 1-5. La identificacin de BPA en la muestra se basa slo en retencin veces, as que la posibilidad de interferencias de otros fluorescentes migrantes de alimentos de recubrimientos puede, por ejemplo bisfenol A diglicidil ter (Insignia), bisfenol F diglicidil ter (BFDGE) o novolacs Glicidil teres (NOGE) [115.116], se debe considerar siempre puesto que puede producir falsos positivos. De hecho, la confirmacin mediante LC/MS despus de

a veces ha sido la cuantificacin por la deteccin de LCfluorescence empleado [62].

Figura 3. Espectros de fluorescencia (nm de longitud de onda 275 de excitacin, paso de banda espectral de Raja 20 nm) de bisfenol A (1) agua, acetonitrilo (2) y metanol (3). Concentraciones de BPA: (1) 25mgL1 y (2 y 3) (1mgL1). 4.1.2. Deteccin electroqumica Deteccin electroqumica (ED) de BPA se basa en el pozo conocido electroactivity de los grupos fenlicos presentes en el molcula (vase tabla 1). LCED se ha utilizado para la determinacin de BPA en fluidos biolgicos [31, 116119] y agua [29, 45]. Inoue et al [31] en comparacin con los lmites de deteccin instrumental obtenidos para BPA con LC acoplados a electroqumicos, FL, detectores de UV [31]. El detector electroqumico (Coul matriz modelo 6210, ESA, USA) consisti en cuatro clulas, trabajando en los siguientes potenciales; 350, 430, 570 y 650mV y proporciona un mtodo LOD de 0,5 pg, quefue 3000 y 200 veces ms bajos que los obtenidos withUV y detectores de FL utilizando el mismo volumen de inyeccin (50L). Similares sensibilidad de masa (por ejemplo LOD de 57 g para un volumen de muestra inyectado de 10 L [45]) ha sido obtenido por diferentes autores [29,30]. El pH y contenido de electrolito de la fase mvil influyen en la electrontransfer constantes de velocidad, por lo que deben optimizarse para sensibilidad getMaximum. Elucin isocrtica recomienda [31,45], de lo contrario veces equilibrio bastante grande ser requeridos para las mediciones, Esto es una desventaja principal de la disfuncin erctil. LCed tambin se ha utilizado para el anlisis de BPA en los alimentos simuladores (agua, agua acidulada y agua: etanol) usando un detector electroqumico caseros [36]. Un qumicamente modificado electrodo (CME) fue preparado por un electrodo de carbn vidrioso de la capa con una pelcula de ster dimetlico Ni protoporfirina IX segn la procedurepreviously describedby thesameauthors [120]. TheCME fue diseado especialmente para evitar el aumento en el fondo corriente causada por el alto potencial requerido para la oxidacin

de los compuestos fenlicos en carbn vidrioso, que en el caso de BPA conduce a una sensibilidad disminuida. La fase mvil consisti en de metanol: agua (60: 40) que contiene 10 KNO3 y 0,25 mM H2SO4 como electrolitos y el mtodo LOD era pg 4 despus de un paso de la concentracin. A pesar de la probada idoneidad de ED para la determinacin de BPA en agua potable y alimentos a base de agua simuladores, LCED no ha sido aplicado a los alimentos comunes de complejo matrices todava. 4.1.3. LCMS El uso de espectrometra de masas puede reducir el tratamiento de la muestra y incluso puede permitir la "extraccin" de un analito en la deteccin etapa de un mtodo de seleccin de iones especficos o transiciones. Sin embargo, preparacin de la muestra buena sigue siendo necesario en los mtodos de LCMS (vase el cuadro 4) puesto que determina la presencia de componentes de la matriz
Tabla 5 Anlisis de GC para la determinacin de BPA en los alimentos

Muestra

Otros analitos que BPA

I.S.

Verduras frutas, pescado sopas y salsas, Conservas de carnes, espagueti y al horno habas, alimentos infantiles, bebidas pescado

---

BP Ad14

Prepa racin de la muest ra (paso s princi pales) SE o LLE

Derivatiza tion

Columna GC

tempe ratura progra ma y inyecci n

Destina dos a 120 C 2min, rampa en 10 C minuto 1a 280 C. INJ: splitless Destina dos a 100 C 1min, rampa en C 3 minuto 1 a 200 C, durante 1 minuto, rampa en Cmin 1 20 a 280 C, destina dos a 5 minutos

Parmet ros de MS

Rango lineal, LOD o LOQ, recuperaci ones (R)

Referen cia

Anhdrido actico

DB-5MS, 30m0.25m m

BPA diacetyl: m/z 228, m/z 213.

LOQ: 10 ng g1 (muestras 1% de materia grasa); R: 42112%.

Thomson et al. [17

4tercbutilf enol 4-nbutilfenol 4Pentylph enol 4-nhexilfeno l 4-tercoctilfenol 4-nheptilfen ol nonilfeno l 4octilfenol

BP Ad16

SESPE

MTBSTFA, 100 L a el eluyente SPE seco (75 C, 30min)

I.D., 0.25_m (J&W, Folsom, CA, USA). DB-5MS, 30m0.25m m I.D., 0.25_m (J&W, Folsom, CA, USA)

I.S.: m/z 224 TBDMS derivate BPA: m/z 441, m/z 470 I.S.: m/z 452, m/z 470

LR: 0.550 ng g1; LOD: 0.41 ng g1; R: 105120%.

Gyong et al. [38]

bebidas

--

BP Ad14

LLE

cido trifluoroacti co anhdrido, 200L aadido a la SPE eluyente (30 min, a temperatura ambiente) (60 C, 5 minutos quitar Derivatizaci n reactivo en exceso)

HP-5 Trace Analysis, 25m0.2mm I.D., 0.33um

Infant formula

Daidzein Genistei n La genisten a

Cri se no d1

SESPE

BSTFA:TM CS: DTE (1000:10:2, v/v/w), 100L ha aadido a la eluyente SPE seco (80 C, 30min)

DB-5MS, 30m0.25m m

Agua de mar y mariscos

4-tercbutilfenol 4-nButylphe no 4Pentylph enol 4-nhexilfeno l 4-tercoctilfenol 4-n-

BP Ad14

LLE SPE (agua de mar)

MAESPE (marisc os)

BSTFA, 100L, a SPE evaporada efluente (60 C, 30 min)

I.D., 0.25_m (J&W, Folsom, CA, USA) DB-5MS, 30m0.25m m I.D., 0.5_m (J&W, Folsom, CA, USA)

Inj: Divisin relacin 1:10 Destina dos a 100 C 1min, rampa en 25 C minuto 1a 150 C, rampa en 5 C minuto 1 a 210 C, rampa en 25 C minuto 1a 280 C, destina dos a mn. 2,5 Inj: splitless Destina dos a 100 C 2min, rampa en 10 C minuto 1a C 250, se apresur a 5 C minuto 1 a 300 C, Manten ga pulsado durante 5 minutos Inj: 1L, splitless Inyecci n: 1L

(O-BIS trifluoro acetyl) derivado s de BPA: m/z 405, m/z 420

LR: 0.01 50_gmL1; LOD: 1ngg1; R: 1897%

Varelis and Balafas [33]

I.S.: m/z 416, m/z 434

LR: 0.0150_g mL1; LOD: 1ngg1; R: 1897%

Kuo and Ding [43]

Obis(Trim ethylsilyl ) derivado s de BPA: m/z 372 y m/z 357

I.S.: m/z 284 and m/z 269 Obis(Trim ethylsilyl) derivado s de BPA: m/z 357

R: 7497% (sweater), 92111% (seafood) LOD: 6.30 ng L1 (water), 1.35 ng g1 (seafood)

Basheer et al. [51]

heptilfen ol 4nonilfeno l 2,4diclorofe nol pentaclor ofenol

I.S.: m/z 416

Simulador de alimentos

BADGE

--

SPME

--

HP-5 MS, 30m0.25m m, 0.25_m

200 C held for 2min, ramped at 10

Cmin1 to

BPA: m/z 213, m/z 228

270 C, hold 15 min

LR: 0.01 8gg1 (agua destilada), 0.02 10gg1 (agua con el 3 % cido actico), 0.02 3GG1 (agua con 10% de etanol) LOD: 0.1 ng g1 (agua destilada), 1ngg1 (agua con cido actico al 3%), 2ngg1 (agua con 10% de etanol) R

Salafranca et al. [93]

DB-5MS, 80 C held OLR: Chang et al. BSTFA:TM 30m0.25m for 2 min, bis(trimeth 0.001 [94] CS (99:1, m ramped at ylsilyl) 100_gL1 v/v), 7 L 20 derivate of LOD:0.4 ng (usando el I.D., 0.5 _ m Cmin1 to BPA: m / z L1 vapor de la (J&W, 280 C, 372, m/z R: 13.8% Derivatizaci Folsom, CA, hold 1 min 357 n reactivos en USA) el espacio libre en el fibra) (65 C, 30 s) Abreviaturas: SE, extraccin por solventes; LLE, extraccin lquido-lquido; MTBSTFA, N, N-methyl-(tertbutyldimethylsilyl) Bistrimetilsililtrifluoroacetamida; TBDMS, tert-Butildimetilsililo; BSTFA, N-O-bis(trimethylsilyl) Bistrimetilsililtrifluoroacetamida; TMCS, trimetilclorosilano, DTE, 1, 4-dithioerythritol; MAE, extraccin asistida por microondas; SPME; Microextraccin en fase slida; INSIGNIA, bisfenol A diglicidil ter.

Simulador de alimentos

---

--

SPME

que afectan la eficiencia de ionizacin y el ruido de fondo y en consecuencia lmites de deteccin y cuantificacin. Adems, limpio extractos son las preferidas para extender la vida de la columna y pasar menos tiempo en el mantenimiento del instrumento. De todos modos, LCMS BPA mtodos basados en ofrecer mayor confianza en la identificacin de LCFL y LCEC. En comparacin con GCMS, el paso de derivatizacin desperdiciadora de tiempo de

BPA no es necesaria. El anlisis LCMS de BPA se realiza exclusivamente mediante presin atmosfrica ionizacin interfaces, es decir, electrospray ionizacin (ESI) y presin atmosfrica ionizacin qumica (APCI), ambos en negativo modo. ESI es ms frecuente que APCI porque generalmente proporciona mayor sensibilidad (vase cuadro 4). As, los lmites de cuantificacin instrumental para BPA de 5 [65] y ngmL1 20.7 [53] se han divulgado con ESI(-) y APCI(-), respectivamente. En ambos estudios, un tetrapolar del masa analyzerwas usado y el volumen de muestra inyectado fue 10 L. usando ESI(-) y un triple cuadrupolo analizador de masa que disminuy el LOQ instrumental hasta 1ngmL1 (inyeccin de volumen de muestra: 10 L) [28,60,73]. A nuestro conocimiento, instrumentos de trampa de iones no han sido utilizados para el anlisis de BPA en alimentos muestras sin embargo, aunque el anlisis de BPA en muestras ambientales utilizando MS de trampa de iones ESI(-) tena por lo menos seis timesmore sensible que APCI [121], desde la fragmentacin de la molcula deprotonated (ion de cuantificacin) por prdida de CH3 se produjo en APCI incluso bajo condiciones de temperatura suave. La respuesta en ESI-MS para BPA es fuertemente dependiente de la composicin de la fase mvil [60,65]. As, se ha compuesto por fases mviles de methanolwater dio mayor respuesta para soluciones estndar de BPA que consisten en acetonitrilewater debido a la baja punto de ebullicin de los primeros, que favorecieron la desolvation de las gotitas de electrospray [65]. La respuesta en acetonitrile water aument en 3-4 bajo la adicin de modificadores como 0.5% [122] y 0.01% de amonaco o 0.01% cido actico [65]. Contrario a estos estudios, la presencia de aditivos inmethanolwater fases mviles se ha sabido para disminuir la respuesta de BPA. As, aditivos bsicos, que fueron agregadas para promover deprotonation de BPA, dio lugar a la supresin de la fuerte ionizacin [121.123], y la adicin de amonaco (0,01% en agua) o cido actico (0,01% en agua) disminuy la seal por 1.5 - y tres veces para soluciones de BPAstandard y con leche, respectivamente [65].Sin embargo, en algunos casos la efecto contrario se ha divulgado, por ejemplo la adicin de amonaco 0.1% metanol: agua aumentaron la respuesta para BPA [60].

http://www.spanishdict.com/
Mayora de MS los mtodos para BPA incluye la adicin de un interno estndar (I.S.) para superar las prdidas de preparacin de muestra y matriz efectos (supresin o mejora de la seal), que conducen a recuperaciones absoluta del mtodo baja. Las normas internas ms usadas han sido 4-nonylphenol (cuando tambin se determinaron los alquilfenoles), BPA-d16 deuterados e istopo etiquetados 13C 12-BPA. El se destac la importancia de utilizar un I.S. por Maragou et al [65], que super las prdidas ocasionadas por la supresin de la seal (alrededor de 20%) y los generados durante la preparacin de la muestra (Estimado que sera alrededor del 28%), usando el estndar interno BPA-d16. En esto cierto, la recuperacin relativa media del mtodo fue 101% (media recuperacin absoluta del 52%) [65]. Independientemente del tipo de fuente de ionizacin y analizador, el

in ms abundante en el BPA espectro de masas y por lo tanto utiliza para efectos de cuantificacin, era [MH] m/z 227. El espectro de masas obtenidos con instrumentos de cuadrupolo tambin contenidos el fragmento ionsm/z 211 y 212, formado por la prdida adicional de oxgeno, [MHO] y amethyl radical, [MHCH3] , respectivamente. Con fases mviles de acetonitrile0.01%NH3 en elagua, un in con m/z 113was detectado en el espectro de BPAmass, quefue relacionadas a la prdida de dos protones cidos [M2H] 2. El [MHCH3] m/z 212 fue el ms prominente ion de producto obtenido por LCMS/MS, as que fue utilizada para la confirmacin y/o cuantificacin de BPA en todas los mtodos citados (vase el cuadro 4). Otros fragmentos de relativa menor espectro de trampa de iones de reportedintheMS2 de abundancewere, a saber, la Ion [MHC6H5OH] m/z 133, resultante de la ruptura de la Grupo hydroxybenzyl y el ion [MHC9H10O] m/z 93, formado por la prdida de hidroxifenil propilo. Por otra parte, los iones ms abundantes en el espectro de masas del estndar interno ms comunes, BPA-d16 (244 masa molecular), fue [(MD2 H2) H] m/z 241 en vez de [MD] m/z 242, debido el intercambio de hidrgeno deuterio en el hidroxilo grupos cuando BPA-d16 fue disuelta en un medio protiques, que condujo a su inmediata transformacin en BPA-d14 (peso molecular 242) [124]. El Espectro MS/MS de BPA-d16 demostr como base mxima el ion del fragmento ATM/z 223, quefue atribuida a la prdida de la radical CD3 y un segundo fragmento atm/z 142 relacionados con la prdida de un grupo fenol-d4 junto con un tomo de deuterio derivado de un grupo de CD3 [125]. Aplicaciones de LCESI (-)-MS a la determinacin de BPA incluyen cereales [32] y leche [65], mientras que ha sido LC MS/MS utilizados para el anlisis de agua y bebidas de soda [60], [28] de la carne y leche y huevos [114], despus de la extraccin con PLE [32,28], SPE [60] y MSDP [114]. Lmites de deteccin del mtodo fueron en las gamas 0.743 ng g1 y 0.0010.3 ng g1 para la deteccin de MS y MS/MS, respectivamente. Por otra parte, tienen dos mtodos usando APCI(-) ha desarrollado para la determinacin de BPA. La primera de ellas utiliza MAE para extraccin de BPA de pescado, seguido por el anlisis LC MS [50]. El segundo determina BPA en la leche materna basada en un sistema on-line de tandem MS SPE (RAM) [73]. LODswere en la gama 0.150 ng g1. 4.2. GCMS GCMS proporciona mayor resolucin y deteccin inferior lmites que LCMS para la determinacin de BPA en los alimentos, aunque la la necesidad de un paso de derivatizacin hace el trabajo de GC-basedmethods intensivo e introduce nuevas fuentes de errores, principalmente debido a la contaminacin. Por otro lado, ya que la presencia de lpidos puede reducir considerablemente el rendimiento analtico de GC [126.127] clean-up extenso es necesario para los alimentos grasos, como los peces [39]. Como Mtodos de la LC/MS, el uso de un patrn interno es comn, siendo deuterados BPA-d16 y BPA-d14 los sustitutos ms usadas. GCMS con ionizacin del electrn impacto (IE) ha sido ampliamente utilizado para la confirmacin de BPA en anlisis de alimentos [15,36,39,66,128]. No derivatizacin de BPA se requiere para esta aplicacin. La IE espectro de masas y la va normal de la fragmentacin de BPA

representado en las figuras 4a y 5. El pico de la base de este espectro corresponde a la prdida de un grupo metilo ([C14H13O2], m/z 213) de el in molecular ([C15H16O2] , m/z 228). Esto puede ser racionalizado en cuanto a la estabilizacin de la resonancia de la resultante tert-benclica Carbocatin (cf. fragmento 3, Fig. 5). Una alternativa menor fragmentacin va implica la prdida de uno de los grupos de aril de la in molecular para dar un Carbocatin tert-benclica ([C9H8O], m/z 135, fragmento 4, Fig. 5) y la consiguiente prdida de metano para dar un ion de fragmento en m/z 119 (fragmento 5, Fig. 5). Cuantificacin de BPA por GCMS requiere la derivatizacin de analito con el fin de mejorar su separacin y deteccin. El insercin de un paso de derivatizacin conduce a picos ms agudos para BPA en consecuencia, mejor separacin de otros analitos y coextracted componentes de la matriz, adems de una mayor sensibilidad (sub nivel de g1 ng) [37]. Silanizacin y acetilacin han sido en gran medid a la procedimientos ms utilizados de derivatizacin, que generalmente se llevan a cabo agregando 100200L del reactivo correspondiente al secado Extracto y permitiendo la mezcla reposar durante 30 a 60 minutos con el temperatura ambiente o en 6580 C. Silanizacin de los hidrgenos activos de BPA se realiza principalmente mediante N-O-bis(trimethylsilyl) bistrimetilsililtrifluoroacetamida (BSTFA) containing1% de trimetilclorosilano (TMCS) [37,43,51,94]. La adicin de TMCS favorece la formacin de un derivado de la nica, puesto que la reaccin

A. Ballesteros Gmez et al. / J. Chromatogr. UN 1216 (2009) 449469

Fig.4. Espectromtricos de impacto electrnico (a) bisfenol A, derivado de O-bis(trifluoroacetyl) (b) BPA, derivado de O-bis(trimethylsilyl) (c) BPA [33] y [47].

de BSTFA con analitos contar con grupos hidroxilo diferentes, tales como BPA, puede generar varios derivados, reduciendo as la sensibilidad y selectividad del anlisis [43,128,129]. El espectro de masas de IE y el patrn de fragmentacin del derivado BPA formado [(Obis) trimetilsilil)] fue similar a los de BPA (cf. Fig. 4C). La base Pico correspondi a la prdida de un grupo metilo ([C20H29Si2O2], 357 m/z) de in molecular ([C21H32Si2O2], m/z 372), que tambin estuvo presente en el espectro [43,94]. Cuantificacin de BPA es

figura 5

Fig.5. Vas de fragmentacin de impacto electrnico de bisfenol A y sus derivados Obis(trimethylsilyl) y O-bis(trifluoroacetyl) [33]

habitualmente se lleva a cabo en uno (m/z 357) [94] o dos (m/z 357 y 372) [43] las masas de este derivado. Silanizacin de BPA tambin se lleva a cabo utilizando N, N-methyl (trimetilsilil) bistrimetilsililtrifluoroacetamida (MSTFA) y N, N-methyl (tert-Butildimetilsililo) bistrimetilsililtrifluoroacetamida (MTBSTFA) [38]. Ambos Reactivos suministrados derivados BPA con iones de diagnsticos para el Caracterizacin de sus identidades en los espectros de masas. La caracterstica iones para el trimetilsilil (TMS) y tert-Butildimetilsililo (BDMS) Derivados BPA fueron [M15], en m/z 357 y 441, respectivamente. Estos iones, whichappearedas base picos en los espectros de masas, puede utilizarse como iones de cuantificacin de BPA en el modo de GC MS SIM. Los iones moleculares para TMS (m/z 372) y derivados BDMS (m/z 456) se utilizaron para la confirmacin de BPA. Ninguna diferencia en la reaccin rendimientos y respuestas se encontr entre ellos, pero dio TBDMS mayor estabilidad de almacenamiento (era estable despus de 8 das mientras el TMS derivado redujo a 60% debido a la hidrlisis en este momento). Adems fue ms largo que el tiempo de retencin para derivado TBDMS para TMS (min 41 y 37, respectivamente, bajo las condiciones experimentales se refiere en [38]), que dio lugar a la mejor separacin de el anterior eluidos interferencias. Acetilacin de los grupos hidroxilo de BPA con anhdrido actico [16,17] o anhdrido de cido trifluoroactico [33] es otro procedimiento frecuente para obtener derivados BPA para GCMS. Fig. 4b incluye el espectro de masas el derivado de la O-bis(trifluoroacetyl) y la fragmentacin patrn. Como de costumbre, el pico de base en el espectro correspondi a el ion del fragmento [M15] (m/z 405) formado por el ion molecular (m/z 420) por la prdida de un grupo metilo. Se comprob que el O-bis(trifluoroacetyl) derivado del BPAwas ms sensible que la derivado de trimetilsilil correspondiente, que era una consecuencia

de la masa molecular mayor de la antigua y la monoisotopic naturaleza del flor [33]. La mayor masa molecular condujo a ms favorable relacin seal a ruido y la naturaleza de monoisotopic de flor impidi la reduccin en la intensidad del ion que resulta de la distribucin de la corriente entre los iones de isotopomeric, como l se produce para el silicio. Derivatizacin del estndar interno (p. ej. BPA-d14) ha sido encontrado esencial para mantener su pureza isotpico durante cromatogrfico separacin en una columna capilar de Slice fundida [33], puesto que se degrada debido al intercambio de deuteronproton (2HH) en el porcin aromtica de la molcula. Este fenmeno ocurre tambin en otros fenoles monodeuterated [130] y se ha atribuido el intercambio electrfila aromtica de tomos de deuterio con tomos de hidrgeno activo situado en la superficie interna de la columna [131]. En este sentido, aunque el derivado TMS de BPAdeuterated derivados reduce la prdida de pureza isotpica, el uso de O-bis(trifluoroacetyl) derivado es preferido para evitar 2HH intercambio en la columna, ya que su estabilidad es mayor [33] y en Adems, como se ha citado para BPA, su masa molecular superior y la naturaleza monoisotopic de flor hace este derivado ms sensible. GCMS es la tcnica ms sensible para la determinacin de BPA en los alimentos. Stuart et al [132] en comparacin con los instrumentales LODs para BPA obtenidos por diferentes tcnicas, los valores que 0.8 ng para GCMS sin derivatizacin, 0,004 ng para GCMS con metil derivados (0.5Mmethanolic solucin de phenyltrimethylammonium hidrxido), 1.6 ng para LCUV (275 nm) y 1.0 ng para LC/ESI (-)-MS. Un menor LOD instrumental (0.51 pg) ha divulgado mediante el uso de un acetilo derivados [133]. Por otra parte, lmites de deteccin del mtodo estaban generalmente en la gamas 0.42 ng g1 y 0.46.3 ng L1. 4.3. Inmunoqumicos mtodos Mtodos inmunoqumicos han sido ampliamente utilizados en los alimentos Anlisis para la deteccin y cuantificacin de protenas, enzimas, vitaminas y otras sustancias que ocurren naturalmente (revisados en

134]). Se han utilizado para la determinacin de contaminantes de los alimentos como microorganismos, toxinas bacterianas, micotoxinas, pesticidas, hormonas anablicas y medicamentos veterinarios (revisados en [134.135]). Inmunoensayos son fciles de realizar, dar buena sensibilidad y especificidad y requieren ni personal calificado ni equipo costoso. La aplicacin de tcnicas inmunoqumicas para la determinacin de BPA en los alimentos es bastante reciente [136140]. Hasta ahora, la las determinaciones se han centrado en el anlisis de alimentos lquidos, principalmente simuladores de leche, agua y alimentos, utilizando policlonal mamferos [136] y los anticuerpos [137] pollo en enzima ligado del inmunosorbente ensayos (ELISA). Los lmites de deteccin oscilan entre 0,05 ngmL1 a 500ngmL1, principalmente segn el inmungeno y el tipo de anticuerpos producen. Como una pequea molcula, BPA no es capaz de iniciar una respuesta inmune, s mismo y debe ser conjugado con un

protena para formar un antgeno completo. En consecuencia, la produccin de anticuerpos para BPA ha involucrado el accesorio de la protena albmina srica bovina (BSA) para el analito derivatizado o a un anlogo estructural (por ejemplo [cido valerinico de 4, 4-bis(4-hydroxyphenyl), BHPVA]) con el fin de evitar la prdida de parte de las caractersticas estructurales de BPA [138.139]. Kuruto et al. propuso el uso de un kit de ELISA disponible comercialmente (kit EcoAssay BPA suministrado por Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd., Tokio, Japn) para la determinacin de BPA en el calostro humano [140]. Este kit fue capaz de detectar Conjugado glucurnido BPA, as como libre de BPA. La preparacin de la muestra (1 mL) implic la incorporacin de acetonitrilo (3 mL) y la centrifugacin posterior para el retiro de la protena. El sobrenadante se evapor a sequedad, reconstituido con 1mL de fosfato y sujeto a SPE (Oasis HLB). La recuperacin media de muestras inoculadas fue 10219.0% y el lmite de deteccin del mtodo ngmL1 0,3. Se aplic la misma metodologa para la determinacin de BPA en suero materno y lquido amnitico [141].

5. Conclusiones La determinacin de BPA en los alimentos es un requisito para apoyar cumplimiento de la legislacin y evaluar el riesgo de exposicin humana a dosis bajas BPA. En la actualidad, la deteccin de LCfluorescence es an con frecuencia utiliza y da resultados cuantitativos satisfactorios, pero LCMS y GCMS son cada vez ms atractivo porque ofrecen ms selectivo y, por tanto, mtodos ms confiables. Identificacin adecuada de BPA es hecho generalmente por GCMS o LC-triple instrumentos de cuadrupolo. Preparacin de la muestra todava constituye el llave de paso para la determinacin de BPA en los alimentos y es el origen de los principales inconvenientes en las metodologas disponibles, independientemente de su aplicabilidad al BPA como nico analito o a una gran cantidad de contaminantes (p. ej. BPA junto con otros fenoles, endocrinos o migrantes de acondicionamiento de los alimentos). Extraccin por solventes y SPE son por ahora la mayora utiliza tcnicas de extraccin para ambos aislamiento de BPA y la limpieza de los componentes de la matriz. Tcnicas como la SPME y SBSE, que ofrece ventajas en trminos de consumo de disolventes, tamao de la muestra y la facilidad de automatizacin tienen que superar algunos graves inconvenientes antes de ser adecuado para la determinacin de BPA en los alimentos. Otras alternativas como MSPD, excelente en especfico aspectos, no han alcanzado la utilizacin extensa todava. Hay dos aspectos fundamentales en los procedimientos de preparacin de la muestra desarrollado, que son ms bien general en contaminantes de los alimentos Anlisis, a saber, la baja selectividad de disolventes y la exhaustiva purificacin necesaria para aislar el analito de componentes de la matriz. Como regla general, se requiere que repetidas extracciones de solventes aislar completamente BPAfromfood matrices que involucra el uso de grandes volmenes de disolvente orgnico que posteriormente tiene que ser evaporada para la concentracin ms tratamiento o analito. Por ello los tratamientos respectivos muestra laboriosos y lentos. En este sentido, las estrategias alternativas que proporcionan alta extraccin eficiencia para BPA debe simplificar el tratamiento de la muestra.

Purificacin de las muestras se torna esencial porque componentes de la matriz constituyen la principal fuente de errores en la determinacin de BPA en los alimentos. Los efectos observados son dependientes de la muestra y reducir considerablemente la precisin de la cuantificacin en todas las tcnicas. Por otro lado, la purificacin de las muestras tambin se requiere para satisfactoria systemperformance de termchromatographic de largo durante el Anlisis de una serie de muestras. Son en gran medida la tcnica ms utilizada para la purificacin de las muestras, aunque las protenas y los lpidos deben ser previamente eliminar para evitar la obstruccin de la absorbente. El uso de selectiva Sorbentes como carneros, immunosorbents y MIPs deben aumentar rendimiento de muestra y precisin ya que tienen el potencial de hacer aislamiento de analito y limpiar en un solo paso y para proporcionar limpiador extractos, pero su uso es un bien escaso y emergentes todava. En nuestra opinin, fluorimtrico y mtodos de espectrometra de masa seguir desempeando un papel predominante en el futuro para el anlisis de BPA en los alimentos, aunque ms adecuado tratamiento de la muestra estrategias debe ser desarrollado tomake estas metodologas ms confiable y ampliamente aplicables. La investigacin debe centrarse tambin en barato y los mtodos de cribado rpido que son consistentes y robustos. En esto respeto, mtodos de ELISA, aunque todava un rea emergente en BPAcontaining Anlisis de alimentos, debe ser un enfoque conveniente. Tabla 5

Mues Otros analitos tra que BPA

I.S.

Prepa racin de la muest ra (pasos princi pales)

Derivati zation

Column a GC

tempe ratura progra ma y inyecci n

Parmetr os de MS

Rango lineal, LOD o LOQ, recuper aciones (R)

Refer encia

Verd --uras fruta s, pesc ado sopa sy salsa s, Cons ervas de carne s, espa

BPA SE o -d14 LLE

Anhdri do actico

DB5MS, 30m0. 25mm

Destin ados a 120 C 2min, rampa en 10 C minut o1 a 280 C. INJ: splitles s

BPA diacetyl: m/ z 228, m/z 213.

LOQ: 10 ng g1 (muestr as 1% de materia grasa); R: 42 112%.

Thom son et al. [17

gueti y al horn o haba s, alime ntos infan tiles, bebi das pesc ado 4tercbutil fenol 4-nbutilfen ol 4Pentylp henol 4-nhexilfen ol 4-tercoctilfen ol 4-nheptilfe nol nonilfen ol 4octilfen ol BPA SE -d16 SPE MTBSTF A, 100 L a el eluyent e SPE seco (75 C, 30min) I.D., 0.25_m (J&W, Folsom, CA, USA). DB5MS, 30m0. 25mm I.D., 0.25_m (J&W, Folsom, CA, USA) Destin ados a 100 C 1min, rampa en C 3 minut o1 a 200 C, durant e1 minut o, rampa en Cmin 1 20 a 280 C, destin ados a 5 minut os Inj: Divisi n relaci n 1:10 I.S.: m/z 224 TBDMS derivate BPA: m/z 441, m/z 470 I.S.: m/z 452, m/z 470 LR: 0.5 50 ng g1; LOD: 0.41 ng g1; R: 105 120%. Gyon g et al. [38]

bebi das

--

BPA LLE -d14

cido trifluoro actico anhdrid o, 200L aadido a la SPE eluyent e (30 min, a temper atura ambient e) (60 C, 5 minutos quitar Derivati zacin reactivo en exceso)

HP-5 Trace Analysi s, 25m0. 2mm I.D., 0.33um

Destin ados a 100 C 1min, rampa en 25 C minut o1 a 150 C, rampa en 5 C minut o1 a 210 C, rampa en 25 C minut o1 a 280 C, destin ados a mn. 2,5 Inj: splitles s Destin ados a 100 C 2min, rampa en 10 C minut o1 a C 250, se apresu

(O-BIS trifluoroa cetyl) derivado s de BPA: m/z 405, m/z 420

LR: 0.01 50_gmL 1; LOD: 1ngg1; R: 1897%

Vareli s and Balaf as [33]

Infan t form ula

Daidzein Genistei n La geniste na

Cris eno -d1

SE SPE

BSTFA:T MCS: DTE (1000:1 0:2, v/v/w), 100L ha aadido a la eluyent e SPE seco (80 C,

DB5MS, 30m0. 25mm

I.S.: m/z 416, m/z 434 Obis(Trime thylsilyl) derivado s de BPA: m/z 372 y m/z 357

LR: 0.01 50_g mL1; LOD: 1ngg1; R: 18 97%

Kuo and Ding [43]

30min)

r a 5 C minut o1 a 300 C, Mante nga pulsad o durant e5 minut os Inj: 1L, splitles s I.D., 0.25_m (J&W, Folsom, CA, USA) DB5MS, 30m0. 25mm I.D., 0.5_m (J&W, Folsom, CA, USA) Inyecci n: 1L I.S.: m/z 284 and m/ z 269 Obis(Trime thylsilyl) derivado s de BPA: m/z 357 I.S.: m/z 416 R: 74 97% (sweate r), 92 111% (seafoo d) LOD: 6.30 ng L 1 (water), 1.35 ng g1 (seafoo d) Bash eer et al. [51]

Agua de mar y maris cos

4-tercbutilfen ol 4-nButylph eno 4Pentylp henol 4-nhexilfen ol 4-tercoctilfen ol 4-nheptilfe nol 4nonilfen ol 2,4diclorof

BPA LLE -d14 SPE (agua de mar) MAESPE (maris cos)

BSTFA, 100L, a SPE evapora da efluente (60 C, 30 min)

enol pentaclo rofenol Simul ador de alime ntos BADGE -SPME -HP-5 MS, 30m0. 25mm, 0.25_m 200 C held for 2min, rampe d at 10 Cmin 1 to 270 C, hold 15 min BPA: m/z 213, m/z 228 LR: 0.01 8gg1 (agua destilad a), 0.02 10gg1 (agua con el 3 % cido actico) , 0.02 3GG1 (agua con 10% de etanol) LOD: 0.1 ng g1 (agua destilad a), 1ngg1 (agua con cido actico al 3%), 2ngg1 (agua con 10% de etanol) R Salafr anca et al. [93]

Simul ador de alime ntos

---

--

SPME

BSTFA:T MCS (99:1, v/v), 7 L (usando el vapor de la Derivati zacin reactivo s en el espacio libre en el fibra) (65 C, 30 s)

DB5MS, 30m0. 25mm

80 C held for 2 min, rampe d at

Obis(trime thylsilyl) derivate of BPA: m/ z 372, m/z 357

LR: 0.001 100_gL 1 LOD:0.4 ng L1 R: 13.8%

Chan g et al. [94]

I.D., 0.5_m (J&W, Folsom, CA, USA)

20 Cmin 1 to 280 C, hold 1 min

muest ra

Otros analitos que BPA

l s

prepara Columna cin de de LC la muestr a (pasos princip ales)

LC parmetro s

Detector parmetro s gama lineal,

mtodo LOD o LOQ recuperaci ones (R)

Refere ncia

Cereal es

4-nNonylphe nol

PLE SPE

XTerra MS C18, 100 mm 2. 1mm, 3,5 m (Sistema de aguas).

Fase mvil: Amonio de 0,0025 M tampn de formiato (pH 3.1, ajustado con frmico cido) / metanol

(-) De ESIMS: capilar Voltaje: 3.0 kV, cono Voltaje: 40 V, fuente temperatu ra: 120 C, desolvatio n temperatu

LR: 0.08 0.8gg1 (adicin estndar), LOD: 43 ng g1; R: 81104% (PLE recuperaci ones)

Carabi asMartn ez et al [32]

con gradiente elucin, 0.2mLmin 1, Inj: 50 L

ra: 250 C, desolvatio n de gas (N2): 410Lh1, gas de cono (N2): 50 L h1

4-tertbutilfenol

adems postcolum na de una base fuerte [1, 8 Diazabicicl o(5,4,0) undec-7es], 10Lmin1

2, 4Diclorofen ol 2,4,5 Triclorofe nol Pentaclor ofenol cido 4tercButylbenz oic Frutas y verdur SESPE simetra escudo RP18, Fase mvil: FL: agua/aceto 275/300 nitrilo nm LR: 10 1000 ngmL1; Kang et al [41]

as

150 mm 4. 6mm I.D., 3,5 m con un protecto r columna, 10 mm 2. 1mm Identific acin, 3,5 m (Millipor e) ESPE (total conteni do) Simetra escudo RP18 150 mm 4. 6mm I.D., 3,5 m (Millipor e Corporac in, Milford, MA, ESTADOS UNIDOS) . Nucleosi l C18, 250 mm x 4 mm de dimetro interior, 5m (Hichrom Limited,

(60: 40, v/v); 1.2mLmin 1; INJ: 50L.

LOD: 1.3ngg1; R: 82101 %

Conse rvas para masco tas

Fase mvil: FL: agua/aceto 275/300 nitrilo nm (60: 40, v/v), 40 C, 1mLmin1, Inj: 50L.

LR: 50 1000 ngmL1; LOD: 2ngmL1 (agua), 3 ng g1 (pet alimentos ); R: 95 %

Kang y Kondo

Conse rvas de grasa, acuos a de medio s cidos .

Seal

SPE (lixiviac in de latas vacas) SESPE

Fase mvil: FL: agua/aceto 235/317n nitrilo con m gradiente elucin, 25 C, 0.4mLmin 1, Inj: 10 L.

LR: 200 2000 ngmL1; LOD: 4.5 7.9 ng g1; R: 87105% (alimento s simulador

Sol et al [46]

Berkshir e, Reino Unido).

BADGEH2O BADGE2H2O BADGEH2O-HCl BADGEHCl BADGE2HCl Agua miner al pButylphen ol LLE Inertsil ODS-2, 150 mm 4. 6mm I.D., 5m (GL Ciencias, Tokio). Fase mvil: agua/aceto nitrilo (40: 60) que contiene 0.2 % H3PO4; 40C; 1mLmin1; INJ: 10 L. ED, culombio mtrico deteccin con una doble clula analtica de electrodo LOD: 5.7gL1; R(Mean): 63 % Toko'o ya et al.

p-tertbutilfenol pHexylphe nol

E1: 400mV (vs Pd)

p-tertOctilfenol p-

E2: 650mV (vs Pd) protector

Nonylphe nol pHeptylphe nol Nonilfenol

celular: 700mV (vs PD))