PRACTICA N°2 DESCAPSULACIÓN DE LOS CISTES DE ARTEMIA SP.
1. Introducción
Los cistes no eclosionados y las cáscaras
vacías, causan, a menudo, efectos
perniciosos cuando son ingeridos por el
predador; ya que al no ser digeridos pueden
causar la obstrucción del tubo digestivo
(Sorgeloos et al., 1986). Por otra parte como
las cáscaras de los cistes están cargadas de
bacterias pueden ocurrir infecciones en los
cultivos de peces y crustáceos, tras la adición
de una mezcla de cistes (ó cáscaras) y
nauplios. La dura capa externa de color
marrón oscuro de los cistes (el corion; Figura
23) se puede eliminar sin afectar la viabilidad
del embrión por medio de una exposición, de
corta duración, de los cistes hidratados a una
solución de hipoclorito, un proceso que se ha
denominado decapsulación de los cistes
(Sorgeloos et al., 1986).
2. Metodología
El método de decapsulación conlleva los
siguientes pasos: hidratación de los cistes;
tratamiento con la solución decapsulante;
lavado y desactivación de los restos de cloro
activo; uso inmediato o deshidratación para su
almacenamiento.
2.1. Hidratación de los cistes
Una eliminación completa del corion se puede
lograr únicamente cuando los cistes son
esféricos; en la mayoría de las cepas la
hidratación completa se logra tras 2 horas de
incubación en agua dulce o salada a 25°C (el
tiempo de hidratación se incrementa cuando
disminuye la temperatura y aumenta la
salinidad). Se recomienda la utilización de los
mismos recipientes, con fondo en forma de
embudo usados para la eclosión con el fín de
conseguir un hinchamiento homogéneo de los
cistes por medio de un burbujeo de aire desde
el fondo del tanque.
Tan pronto como todos los cistes estén
hidratados, transferirlos a la solución de
hipoclorito, ej. recoger los cistes sobre un
tamiz de 125 micras, lavar eventualmente
para eliminar las impurezas y escurrir el
exceso de agua. Una hidratación
excesivamente prolongada antes de someter
los cistes al tratamiento de hipoclorito parece
afectar drásticamente la tasa y la eficiencia de
eclosión de los cistes decapsulados. Los
cistes hidratados que no puedan ser tratados
inmediatamente podrían ser conservados
durante algunas horas en el frigorifico (0–
4°C).
2.2. Tratamiento con la solución
decapsuladora
Dos tipos de hipoclorito pueden ser utilizados,
lejía (NaOCl) o polvo blanqueador (Ca(OCl)2).
La actividad de este último producto suele
venir indicada en su etiqueta comercial
(generalmente, el 70% de actividad en peso).
La actividad de las soluciones de NaOCl se
pueden determinar por varios métodos, ej.
Titulación. El método más sencillo es la
determinación del indice de refracción, a
condición que la solución sea reciente o que
haya sido conservada adecuadamente, por ej.
con un refractómetro. En el Apéndice 5 se
recoge una tabla de conversión para diversas
unidades de medida.
El peso de producto activo en el volumen de
la solución decapsuladora por gramos de
cistes secos a tratar es idéntico en ambos
hipocloritos, (0.5 g de producto activo por
gramo de cistes y 14 ml de solución
decapsuladora por gramo de cistes).
El producto alcalino usado en ambos
tratamientos (para subir el pH de la solución
decapsuladora hasta 10) es diferente: en el
caso de NaOCl se añaden 0.15 g de NaOH
industrial (= 0.33 ml de una solución al 40%)
por gramo de cistes, mientras que en el caso
de Ca(OCl)2 se añaden 0.67 g de Na2CO3 ó
0.4 g de CaO.
Las soluciones decapsuladoras se deberán
preparar con agua de mar y tendrán que ser
enfriadas (eventualmente con la adición de
hielo) hasta obtener temperaturas de trabajo
de 15 a 20°C.
Para la solución decapsuladora a base de
Ca(OCl)2 es esencial disolver primero el polvo
blanqueador antes de añadir el CaO o el
Na2CO3. Tras mezclar durante 10 minutos, ej.
por medio de una aireación fuerte, se dejará
sedimentar la solución, utilizando solo el
sobrenadante.
El filtrado y los cistes hidratados son
transferidos a la solución decapsuladora, y
manteniéndolos en continua suspensión, ej.
con un agitador manual o por burbujeo de aire
desde el fondo cónico del tanque. Comienza
una reacción exotérmica, formándose espuma
y observándose cambios de color a medida
que el corion se va disolviendo, pasando de
marrón oscuro hasta gris cuando se usa el
hipoclorito de calcio, o desde gris hasta
naranja en el caso del hipoclorito de sodio Se
controlará regularmente la temperatura de la
suspensión, añadiéndose eventualmente
hielo para prevenir que se alcance la
temperatura de 40°C letal para los cistes. La
decapsulación terminará en un plazo de
tiempo comprendido entre 5 y 15 minutos.
2.3. Lavado y tratamiento de desactivación
Tan pronto como el corion haya sido
completamente disuelto (lo que se controlará
por medio de un microscopio o cuando no se
observen más cambios de color o de
temperatura) se filtrarán los cistes
decapsulados y se lavarán copiosamente con
agua dulce (o salada) hasta que el olor a cloro
haya desaparecido.
Los residuos de hipoclorito absorbidos sobre
los cistes decapsulados serán desactivados
en un baño de ácido clorhídrico o acético o
incluso más eficientemente con tiosulfato; ej.
los cistes serán sumergidos varias veces en
una solución 0.1 N de HCl ó HAc; ó bien en
una solución al 0.1% de Na2S2O3. Esta
desactivación tomará menos de un minuto,
tras este tratamiento se lavarán otra vez los
cistes con agua dulce o salada. Los residuos
de hipoclorito pueden ser detectados
poniendo algunos cistes decapsulados en una
pequeña cantidad del reactivo almidón-yodo
diluido (= almidón, yoduro potásico, ácido
sulfúrico y agua). Cuando el reactivo se vuelve
azul, el lavado y la desactivación deben
continuar. A causa de la eliminación del
corion, que contenía cámaras de aire, los
cistes decapsulados precipitarán una vez
transferidos a agua dulce o salada.
2.4. Uso directo de los cistes hidratados y
decapsulados
Los cistes hidratados y decapsulados pueden
ser tanto eclosionados inmediatamente, como
ser hidratados y conservados o bien ser
ofrecidos directamente como fuente
alimenticia a las larvas de los predadores. En
caso necesario, pueden ser conservados
durante algunos días en el frigorífico a 0–4° C.
Como ya se ha mencionado anteriormente es
fundamental asegurar una circulación
suficiente en el tanque de cultivo a fin de
mantener esos cistes en suspensión. Dado
que los cistes decapsulados son
considerablemente más pequeños que los
nauplios rocíen eclosionados, es por 10 que
esos cistes pueden ser empleados en la
alimentación de algunos estados larvales
previos de ciertos predadores: ej. los cistes
decapsulados de la cepa San Francisco Bay
(CA-USA) tienen un diámetro medio de solo
210 micras mientras que los nauplios tienen
una talla de 428 decapsulados es
aproximadamente 50% más pequeño que el
de los nauplios.
Los cistes decapsulados e hidratados pueden
ser incubados bajo condiciones óptimas de
eclosión para la producción de nauplios. En
este tipo de eclosión, la separación de las
cáscaras ya no es necesaria; con lo que los
nauplios son filtrados, lavados y ofrecidos a
las larvas de los predadores.
Los cistes deshidratados pueden ser
conservados durante aproximadamente, una
semana entre 0–4 C sin disminución de la
eficiencia de eclosión. Con ello es posible
decapsular la cantidad de cistes necesaria
para una semana y dividirla en porciones que
se conservarán en el frigorífico entre 0–4 C.
2.5. Deshidratación y conservación
Como terminación de las técnicas de
desactivación y lavado, los cistes
decapsulados, que van a ser conservados
durante más de una semana, deben ser
deshidratados, para ello los cistes son
recogidos sobre una malla de 120 micras y
posteriormente son transferidos a una
solución de salmuera saturada a una densidad
de 1 g de cistes (secos)/10 ml. Dado que con
su puesta en salmuera los cistes hidratados
liberan agua, la salmuera deberá ser renovada
tras una o dos horas, o bien se deberá añadir
más sal a la solución.
La preparación de la salmuera se puede hacer
automáticamente con el uso de una variante
modificada del “Brinomat Sterling” como la
descrita esquemáticamente en el Apéndice 6.
Con este simple aparato se produce continua
y automáticamente salmuera saturada, y al
mismo tiempo filtrada, por medio de un flujo de
agua dulce por gravedad a través de varias
capas compactas de sal bruta.
Durante una noche de deshidratación (o
durante un mínimo de 3 horas a la
temperatura ambiente de la sal) los cistes
habrán liberado el 80% de su contenido
acuoso celular y al suspender la aireación los
cistes decapsulados, con su forma actual de
granos de café, sedimentarán. Los cistes
serán recogidos sobre una malla de 120
 micras y colocados, en recipientes de plástico,
llenos de salmuera reciente para su
conservación en frigoríficos o congeladores.
Ya que el contenido hidrico de los cistes
conservados en salmuera de NaCl saturada
(aproximadamente 330 g de NaCl/1) es del
16–20%; la eclosión máxima de estos cistes
está garantizada únicamente durante un
período de algunos meses. Para una
conservación de larga duración, el contenido
de agua en los cistes debe ser inferior al 10%
lo que se logra con una salmuera de MgCl2
(1670 g MgCl2. 6H2O/1 agua dulce).
Antes de usarse, bien como alimento o para
su eclosión, los cistes deshidratados y
decapsulados serán filtrados sobre una malla
de 120 micras y lavados con agua dulce para
eliminar la salmuera.
Dado que la capacidad de eclosión de los
cistes disminuye cuando son expuestos a
radiaciones UV, es aconsejable realizar la
decapsulación y conservar los cistes
decapsulados, alejados de la luz solar directa.
3. Ventajas de la decapsulación
La utilización de cistes decapsulados no solo
elimina los problemas de separación de los
nauplios, sino que existe otra serie de ventajas
que recomiendan la aplicación de la técnica de
decapsulación:
MORFOLOGÍA Y METABOLISMO DE LOS CISTES DE ARTEMIA
1. MORFOLOGÍA DE LOS CISTES SECOS
La cáscara del ciste está formada de tres estructuras:
a. El corion: Capa dura formada de lipoproteinas
impregnadas de quitina y hematina (= producto
de descomposición de la hemoglobina; la
concentración de hematina determina el color de
la cáscara, variando de un marrón pálido a un
marrón oscuro). La principal función del corion es
la de proporcionar una protección adecuada al
embrión contra rupturas mecánicas y radiaciones
(ej. las radiaciones ultravioletas de los rayos
solares). Esta capa puede ser completamente
eliminada (disuelta) por un tratamiento oxidativo
a base de hipoclorito (= decapsulación del ciste).
c. La cutícula embrionaria: Una capa transparente
b. La membrana cuticular externa: Protege al
embrión de la penetración de moléculas mayores
que la molécula del CO2 (= membrana
compuesta de varias capas y con una función de
filtro muy especial, actuando como barrera de
permeabilidad).
 Desinfección de los cistes con el
tratamiento de hipoclorito.
 Ingestión y digestión de los cistes
decapsulados por las larvas de peces
y crustáceos aunque no hayan
eclosionado.
Los cistes decapsulados parecen ser una
buena fuente alimenticia para algunas
especies de peces marinos y de agua dulce
así como de crustáceos . Uno de los mayores
obstáculos para esta última aplicación es que
con la eliminación del corion, que le da
flotabilidad, los cistes decapsulados tienen
tendencia a sedimentar; ello obliga a necesitar
una aireación suplementaria, por ej. con “air-
water-lifts”, para mantener en suspensión el
alimento en la columna de agua.
Para la mayoría de las cepas, tanto el
porcentaje de eclosión como el peso seco
individual de los nauplios aumenta
significativamente cuando los cistes han sido
decapsulados. En función de la cepa de
Artemia empleada, la utilización de la técnica
de decapsulación puede llevar a un ahorro
sustancial de la cantidad de cistes necesarios
para los cultivos.
Figura 1. Desarrollo del ciste de Artemia desde la
incubación) hasta la liberación del nauplio.
y altamente elástica que queda separada del
embrión por la membrana cuticular interna (que
se transforma en membrana de eclosión durante
el proceso de incubación).
 Prof. Jessie Vargas C.-
El embrión es una fase indiferenciada de gástrula
que se encuentra en un estado completamente a
metabólico con niveles de agua inferiores al 10%; por
lo que su metabolismo se haya en una fase de parada
reversible. La viabilidad del embrión se ve afectada
cuando los niveles de agua exceden del 10%
(comenzando la actividad metabólica), y cuando los
cistes son expuestos al oxígeno (por ej. poniendolos
al aire); en presencia de radiaciones cósmicas de
oxígeno se produce la formación de radicales libres
que destruyen los sistemas enzimáticos específicos
de los cistes ametabólicos de Artemia.
2. OBSERVACIONES EXTERNAS DE LOS CISTES EN
DESARROLLO.
En la Figura 1 está representado un esquema del
desarrollo de un ciste de Artemia, desde la incubación
en el medio de eclosión hasta la liberación del
nauplio.
Cuando se incuban en agua de mar, los cistes
bicóncavos se hinchan adoptando una forma esférica
en el plazo de 1 a 2 horas. Una vez completamente
hidratados, el diámetro del ciste ya no varía.
Transcurridas de 15 a 20 horas desde la hidratación,
la cáscara del ciste, (incluyendo la membrana
cuticular externa) estalla (=breaking o estado E-1)
con lo que se hace visible el prenauplio rodeado de
la membrana de eclosión. El embrión deja
definitivamente la cáscara (estado E-2) y cuelga
hacia abajo de la cáscara vacía (la membrana de
eclosión puede estar aún unida a la cáscara). A
través de la transparencia de la membrana de
eclosión se puede seguir la diferenciación del
prenauplio hasta el estado I de larva de nauplio, el
cual comienza a mover los apéndices. Poco tiempo
después, la membrana de eclosión se romperá
(“hatching”) liberando la larva nadadora de Artemia
(comenzando por la cabeza).
3. METABOLISMO DE LOS CISTES DE ARTEMIA EN
DESARROLLO
Los cistes secos son altamente higroscópicos,
incorporando agua a gran velocidad, por ejemplo en
las primeras horas el volumen del embrión hidratado
Prof.Principal-Dpto. de Acuicultura e Ind. Pesqueras
aumenta más de un 100%. Una vez completamente
hidratado (asimilación del 140% de agua) se puede
iniciar el metabolismo activo a condición de que los
cistes estén suficientemente iluminados. El efecto
activador de la luz es esencial para que comience el
metabolismo de la mayoría de los cistes. A
intensidades de luz demasiado bajas, la tasa de
eclosión se retrasa o simplemente no se produce.
El metabolismo aeróbico en el embrión enquistado
asegura la conversión de la trealosa, como
carbohidrato de reserva, en glicógeno (como fuente
de energía) y glicerol que son acumulados por el
embrión en la membrana cuticular externa. El
incremento en la concentración de un producto
altamente higroscópico como es el glicerol, ocasiona
un mayor aumento en la asimilación de agua por el
embrión a través de la membrana cuticular externa.
Como consecuencia de este fenómeno se produce
un aumento de la presión osmótica en el interior de la
membrana cuticular externa hasta que se alcanza un
punto crítico, momento en el cual se produce la
ruptura de esta membrana y de la cáscara del ciste
(conocida como “breaking”). La ruptura de la cáscara
va acompañada de la liberación de todo el glicerol al
medio de cultivo.
Bibliografía
FAO - Organización de las Naciones Unidas para la
Agricultura y la Alimentación, IT (1996). Manual on the
production and use of live food for aquaculture (en línea).
(eds.) Lavens, P. and Sorgeloos, P. Fisheries Technical
Paper. No. 361. Rome, 295p.. Consultado el 5 marzo 2022.
disponible en
http://aquacultura.org/upload/files/pdf/library/fao/Manual
%20on%20the%20Production%20and%20Use%20of%20
Live%20Food%20for%20Aquaculture.pdf
 Prof. Jessie Vargas C.- Prof.Principal-Dpto. de Acuicultura e Ind. Pesqueras

Práctica N° 2

DESCAPSULACIÓN DE CISTES DE ARTEMIA

I. Introducción

Dentro de la producción larval, el tipo de alimento que se pueda ofrecer a las larvas es
determinante para el éxito de esta empresa. Uno de los alimentos ampliamente utilizados para
estas fases de desarrollo son los nauplius de artemia recién eclosionados, los cuales pueden
variar su composición nutricional, en función a su procedencia por un lado y por los gastos
energéticos al momento de la ruptura del corion. La descapsulación es una metodología
utilizada con estos fines, con las ventajas adicionales que conlleva el colocarlos en
soluciones químicas desinfectantes que ayudara a eliminar bacterias que pudiesen estar en la
cubierta de los huevos.

II. Objetivo
 Desarrollar el protocolo en pequeña escala la descapsulación de cistes de artemia para
la obtención de nauplios utilizando hipoclorito de sodio.
 Identificar los diferentes estadíos de desarrollo de los cistes desde su eclosión hasta
la liberación del nauplio.

III. Materiales y Equipos

 2 g de cistes de Artemia,
 Beakers, pipetas y recipientes graduados,
 Botellas de plástico de 2 litros
 Placas petri,
 Hipoclorito de sodio, (lejía comercial),
 Hidróxido de sodio al 20 %,
 Equipos de iluminación luorescente,
 Filtros de Malla de 60um,
 Estereoscopio,
 Pizetas, vagueta, espátula,
 Aireadores y manguerillas de aireación,
 Agua salobre (16%.),
 Cámara de sedgwick rafter,
 Lugol
 Prof. Jessie Vargas C.- Prof.Principal-Dpto. de Acuicultura e Ind. Pesqueras

IV. Metodología

A. DESCAPSULACIÓN

1. Hidratación de los cistes

(2g/L) en agua a 16%o con aireación constante por 1 hora.

Figura No. 1: Esquema de hidratación de los cistes

2. Preparación de la solución descapsuladora

Requerimientos:
Lejía (ml) : 0.5 gr. de Cl activo/ cada gr. de cistes
NaOH - 20% : 0,33 ml de sol. por cada 5 gr. de cites
Volumen total : 14 ml de sol. descapsuladora por cada gr. de cistes

a. En un recipiente agregar adicionar los productos en orden siguiente:

 Cistes de Artemia
 Hidróxido de Sodio (NaOH)
 Hipoclorito de Sodio (NaOCl)

b. Disolver y colocar aireación por 10'.

c. Verificar la temperatura, la descapsulación es una reacción exotérmica: para
garantizar la viabilidad del embrión la temperatura del medio de descapsulación debe
ser siempre menos de 40 °C; con temperaturas críticas se debe adicionar hielo.
d. Verificar microscópicamente cada 30 segundos el progreso de la descapsulación (la
disolución de la cáscara). El cambio del color de los cistes varía: café  gris 
naranja (color del embrión). Cuando la proporción de los naranjas sea mayor al de
blancos se traspasa a la malla y se lava profundamente con agua dulce hasta que
desaparezca el olor a lejía. Si la reación persiste se desactiva con HCl por 5'
e. Al final del proceso cosechar los embriones rápidamente, se los enjuaga con agua de
mar o de caño, abundantemente sobre una malla, hasta desaparecer olor a lejìa.

B. INCUBACIÓN
 Colocar los cistes descapsulados a incubar, en un volumen de agua conocido
(1L.)a 16%o de salinidad y constante aireación.
 Prof. Jessie Vargas C.- Prof.Principal-Dpto. de Acuicultura e Ind. Pesqueras

 Colocar una fuente de luz a 20 cm (30 Watts, fluorescente).

 Esperar la eclosión en las próximas 18 a 24h.

C. OBSERVACIÓN DE LOS ESTADÍOS DE DESARROLLO

Transcurridas el tiempo de incubación, la membrana cuticular externa estalla (breaking o

estado E-1) con lo que se hace visible el prenauplio rodeado de la membrana de eclosión.
El embrión deja definitivamente la cáscara (estado E-2) y cuelga hacia abajo de la cáscara
vacía (la membrana de eclosión puede estar aún unida a la cáscara).
A través de la transparencia de la membrana de eclosión se puede seguir la diferenciación
del prenauplio hasta el estado I de larva de nauplio, el cual comienza a mover los
apéndices. Poco tiempo después, la membrana de eclosión se romperá (“hatching”)
liberando la larva nadadora de Artemia (comenzando por la cabeza).

IV . RESULTADOS

 Hacer los dibujos y esquemas correspondientes

V. LECTURAS OBLIGATORIAS

DECAPSULACIÓN DE LOS CISTES DE ARTEMIA SP