ESTRUCTURA Y MORFOLOGÍA CELULAR DE HONGOS Y BACTERIAS
Lina Fernanda Hernández 1, Angie Daniela Alarcón Montaña 1, Ingrid Gisela Salcedo
Herrera 1, William Fernando Reyes Peña 1
RESUMEN
Introducción. Las células tienen formas
muy distintas. En organismos
unicelulares encontramos desde la
variable forma amiboidea de las amebas,
hasta la esférica, ovoide, cilíndrica,
filamentosa, espiralada, estrellada,
discoidal, etc. de los protozoarios,
bacterias, algas y hongos, la cual permite
observar en los microorganismos la
movilidad, el color, el tamaño, la forma y
la agrupación en su forma natural viva y
sin alteraciones. Sin embargo, la
observación se dificulta debido al escaso
contraste, por la poca diferencia entre el
índice de refracción del medio y de los
microorganismos. Objetivo. De modo
que el objetivo de la presente práctica
consistió en observar bacterias, hongos y
levaduras con distintas técnicas,
identificando diferentes características de
los mismos. Materiales y métodos. Una
forma de preparación en fresco consistió
en utilizar porta y cubreobjetos. Otra
forma de aumentar el contraste y
observar estructuras importantes fue la
utilización de coloraciones, como la
tinción de Gram. En cuanto a la
morfología de los microorganismos, ésta
se pudo examinar siguiendo dos rutas:
observando las preparaciones en fresco
(sin colorear, por ejemplo para observar
protozoos algas e incluso bacterias) y
preparando extensiones delgadas
llamadas frotis que se fijan y colorean.
Resultados. Se pudo apreciar que la
___________________
1
Universidad de La Salle. Facultad de Ingeniería Ambiental y Sanitaria.
mayoría de las bacterias presentan a
nivel microscópico morfologías de bacilos
o cocos, e incluso macroscópicamente
también se observó dicha característica.
En el caso de los hongos se observaron
pequeñas estructuras semicirculares
tratando de conformar micelios. En
cuanto a la levadura a nivel microscópico
se visualizaron ovoides con formación de
pseudomicelio. Conclusión. Fue de vital
importancia tener en cuenta cada tipo de
microorganismo para su posterior
identificación según el tipo de método
requerido.
PALABRAS CLAVE: Amiboide,
coloraciones, frotis, índice de refracción,
preparación en fresco.
INTRODUCCIÓN
El trabajo en el laboratorio de
microbiología implica situaciones que
representan riesgos eventuales según
el agente infeccioso y los procedimientos
realizados, la bioseguridad hace
referencia a los principios, técnicas y
prácticas aplicadas con el fin de evitar la
exposición no intencional a patógenos y
agentes infecciosos, o su liberación
accidental en el laboratorio que provocan
flujos contaminantes, estimando así las
medidas de protección que se deben
seguir para mitigar los riesgos de
accidentalidad y garantizar la integridad
del personal en el laboratorio además
este lugar debe permanecer con una
buena técnica aséptica, y trabajar
siempre en condiciones de esterilidad, al
igual que todos los microorganismos
deben ser manipulados con precaución.
(Ramos, M. D. L. A. A., & Chabela, M. D.
L. P. (2004).
El microscopio es indispensable en el
laboratorio de microbiología para el
estudio de la morfología y estructura de
los microorganismos, así como su
reacción a diferentes colorantes, lo cual
junto con otros criterios, permitirá su
identificación, por lo tanto, es importante
conocer su adecuado manejo (Valencia,
H. (2004). Al realizar la observación en el
microscopio la preparación en fresco
permite visualizar en los
microorganismos algunas características
tales como la movilidad, el color, él
tamaño, la forma y la agrupación en su
estructura natural, la manera más común
de preparación en fresco es en la que se
utiliza un portaobjetos y un cubreobjetos.
La morfología de las bacterias al
microscopio está determinada por la
rigidez de su pared celular. Básicamente,
se diferencian según su forma en cocos
(esféricas u ovaladas), bacilos (cilíndrica
o de bastones; rectos o curvos) y
espirilos (espiral) (Prescott, Harley et.al
(1999).
Las células generalmente son tratadas
para coagular el protoplasma antes de
teñirlas, proceso llamado fijación. Para
bacterias, la fijación más común es la
que se realiza por medio de calor,
aunque también puede fijarse con
sustancias químicas como formaldehído,
ácidos y alcoholes.
La tinción Gram tiene importancia en la
microbiología porque permite diferenciar
dos grandes grupos de bacterias (Gram
positivos y Gram negativos) según se
comporten ante esta tinción, el
fundamento radica en la diferencia
estructural de la pared celular de ambos
grupos(Balsdon, M. J(1999): Las
bacterias Gram positivas tienen una
gruesa capa de peptidoglucano en su
pared que retiene el colorante tiñéndose
de color azul o violeta, mientras que las
Gram negativos tienen una capa de
peptidoglucano más fina y una capa
lipopolisacarídica externa que no retiene
el colorante violeta, pero al adicionar la
fucsina éstas tienden a tomar coloración
rosada o fucsia.
Una colonia es una agrupación de
bacterias formada a partir de la
reproducción de una Unidad Formadora
de Colonia (UFC) sobre un medio sólido;
aunque varía de tamaño, generalmente
es visible a simple vista siendo notorias
las siguientes características
macroscópicas: tamaño en mm, color,
forma (puntiforme, circular, filamentosa,
ameboide, alargada o fusiforme),
elevación (plana, elevada, convexa,
pulvinada y umbonada), borde o margen
(entero, ondulado, lobulado, filamentosa,
enrollado, festoneado), superficie (lisa o
rugosa), aspecto (húmeda o seca),
transmisión de la luz (traslucida, opaca,
transparente), consistencia (butirosa
blanda, dura o friable).
METODOLOGÍA (Materiales y
Métodos)
Antes de iniciar cualquier práctica de
laboratorio se requiere llevar siempre
puesto los siguientes implementos,
debido a que se está expuesto a
cualquier agente infeccioso:
 Bata blanca, de manga larga,
gruesa y de abotonar.
 Gorro y guantes de nitrilo.
 Gafas y tapabocas para
protección de ojos nariz y boca.
 Marcador Sharpie y cinta de
enmascarar para marcar con
cuidado, láminas, cajas de Petri o
 cualquier elemento necesario de
observar.
 Colores y cuaderno requeridos
para dibujar la observación
macroscópica y microscópica de
mohos y levaduras.
 Toallas de papel requeridas para
limpiar antes y después de la
práctica.
PROCEDIMIENTO
PARA BACTERIAS:
Principalmente se realizó una
observación macroscópica de cada una
de las cepas bacterianas, según su
forma (puntiforme, circular, filamentosa,
irregular, rizoide, huso o eje); además de
su tipo de elevación (plana, elevada,
convexa, pulvinada, acuminada/
umbonada) y su borde (entero, ondulado,
lobulado, crenada, filamentoso y un objetivo de 40X y luego en el objetivo
enrollada);así mismo se determinó
características óptimas, su consistencia,
textura y pigmentación o color.
Posteriormente se procedió hacer una
observación microscópica de las
bacterias por preparación de láminas por
frotis fijo: Para el procedimiento
mencionado, se requirió principalmente
de una lámina portaobjetos limpia, la cual
se marcó con el nombre de la bacteria
dada a observar y se depositó una gota
de agua destilada pequeña. Así mismo,
se destapó una caja de Petri cerca al
mechero y con un asa bacteriológica
esterilizada al fuego y enfriada con
anterioridad se procedió a tomar un
inóculo del cultivo el cual fue suspendido
en la gota de agua destilada. Para llevar
a cabo lo anteriormente mencionado, se
debió extender la gota de suspensión en
un área no superior a dos centímetros
cuadrados usando el asa. Finalmente se
debió fijar la preparación con calor al
pasarla tres veces seguidas a través de
la llama del mechero y se colorió según
protocolo para tinción Gram.
Tinción Gram
De acuerdo con todo el procedimiento
realizado con anterioridad y cuando ya la
muestra se encuentre perfectamente
seca se hizo los siguientes pasos:
En un comienzo se cubrió totalmente la
muestra de frotis con unas pocas gotas
de colorante cristal violeta que se dejó
por aproximadamente un minuto y
pasado ese minuto se descartó en la
rejilla el exceso de colorante y fue
enjuagado con agua. Del mismo modo se
agregó algunas gotas de reactivo lugol y
se dejó de igual modo por un minuto;
posteriormente se descartó el exceso y
se enjuagó con agua. Igualmente se hizo
una decoloración con la mezcla alcohol-
acetona al 3% por 30 segundos y se lavó
inmediatamente con agua suavemente;
por último se agregó el colorante fucsia y
se dejó por un minuto y se lavó con
agua, luego se dejó secar la muestra.
Ahora bien, se observó principalmente en
de 100X en donde se requirió agregar
una gota de aceite de inmersión sobre la
laminilla (lo que se pudo observar fue
dibujado en el cuaderno de laboratorio
con sus respectivo nombre y
constituyentes celulares importantes).
PARA HONGOS MICELIALES Y
LEVADURAS
Se tomó una caja de Petri de hongos ya
cultivados en la cual se hizo una
observación macroscópica según su
color, tamaño de colonia, apariencia;
además de identificar la colonia; de
observar el reservo y su pigmento al
medio.
Ahora bien cuando ya se ha anotado y
dibujado las características, se realizó
una observación microscópica; para esto
se tomó un asa de punta especial para
hongos y se esterilizo en calor pasándola
por el fuego del mechero hasta que la
punta tomó un color anaranjado y se dejó
enfriar. En ese momento se tomó una
caja de Petri y se destapó cerca de un
mechero, en el cual se desprendió con
ayuda del asa una parte del cultivo del
hongo a observar y se colocó sobre un
portaobjetos que contenía ya una
pequeña gota de azul de lactofenol
colocada con anterioridad; se requirió
despegar el micelio del asa con ayuda de
otra asa esterilizada y por ultimó se
cubrió el preparado con un cubreobjetos
presionando suavemente sin dañar la
muestra. Finalmente con ayuda de un
microscopio, se observó el preparado
primero enfocándolo en un objetivo de
10X y por último en un objetivo de 40X. a
Para observar las levaduras con azul de )
lactofenol, se agregó una pequeña gota
de lactofenol en el centro de una lámina
que ya estaba debidamente marcada con
el nombre del cultivo en uno de sus
bordes. Posteriormente se destapó una
caja de Petri de la levadura cultivada
cerca al mechero y con ayuda de un asa
redonda se tomó una muestra del cultivo
de levadura y se colocó sobre la gota del
colorante; de igual forma se colocó una
laminilla para cubrir el preparado y se
procedió a observar en un objetivo de b)
10X y finalmente en un objetivo de 40X.

Todas las observaciones anteriores, Figura 1. Aspergillus flavus cultivado en

cabe aclarar que se realizaron con
cuidado y teniendo en cuenta las normas
de bioseguridad en un laboratorio de
microbiología y los resultados fueron
registrados realizando una ilustración en
el cuaderno de laboratorio.
RESULTADOS
Aspergillus flavus
En la observación macroscópica del A.
Flavus se evidencia una colonia de color
verde oscuro con segmentos cafés
amarillentos, esta colonia cuenta con un
borde ondulado de coloración blanca y
apariencia algodonosa (Ver figura 1a y
1b).
caja de Petri en medio de cultivo PDA. a)
Dibujo de observación macroscópica de A.
flavus y b) Colonia de A. flavus cultivada en
caja de Petri.
Durante la observación microscópica del
Aspergillus flavus con el objetivo 40x se
observaron numerosas y pequeñas
estructuras semicirculares que
posiblemente pueden conformar micelios
“esclerocios” (Ver figura 2a). Se hace
evidente microscópicamente que A.
Flavus estructuralmente está formado
generalmente por hifas hialinas o
septadas, conidióforo hialino, vesícula
ovoide-globosa, fialides uniseriadas o
biseriadas, y conidias lisas, globosas y
subglobosas en cadena (Ver figura 2b).
 a) a)

b) b)

Figura 3. Rhodotorula Sp cultivada

en caja de Petri.a) ilustración
Figura 2.Vista microscópica de Aspergillus macroscópica de Rhodotorula sp.b)
flavus .a) Dibujo de observación
Colonia de Rhodotorula Sp
microscópica con el objetivo 40x y b)
Observación microscópica de A. Flavus cultivada.
(Samson (2000))
La Rhodotorula Sp observada en el
microscopio a un aumento de 40x permite
Rhodotorula Sp. La Rhodotorula Sp, es
visualizar levaduras redondas, ovoides
una levadura cuya colonia tiene por
con formación de pseudomicelio ilustrado
características macroscópicas coloración
en la (figura 4a y 4b).
rojo coral-naranja con aspecto liso,
mucosas y brillantes, como se observa en
la (figura 3a, 3b).
 a)
a)

b) b)

Figura 4. Vista microscopica de

Rhodotorula Sp, aumento 40x. a) Figura 5 (a,b). Colonia de Staphylococcus
Ilustración de la observación y b) observación aureus sobre medio sólido.
40 x de Rhodotorula Sp.
En la observación microscópica de
Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus después de
realizada la tinción se pudo identificar
La colonia de Staphylococcus aureus
que su morfología corresponde a la de
tiene forma puntiuniforme irregular, de
un coco formando agrupaciones
elevación plana con bordes netos,
semejantes e irregulares similares a
superficie lisa y brillante, con coloración
racimos de uvas, este microorganismo es
amarillenta debido a la producción de
Gram positivo debido a su tinción violeta,
pigmento carotenoide (s. aureus) (figura
como se muestra a continuación. (Ver
5a, 5b).
figura 6).
Las principales características de su
cultivo es que es poco exigente en sus
necesidades, crece bien en cualquier
medio ordinario, aunque lo hace mejor en
medios enriquecidos, estos
microorganismos son aerobios y
anaerobios facultativos, halófilos, la
temperatura optima de crecimiento es de
30-37°C .
a)
 Morfológicamente Corynebacterium sp
tiene forma de bacilo (Ver figura 8), no
espurulado e inmóvil, además de ser
Gram positivo por su coloración violeta.

b)

Figura 6 (a,b). Observación microscópica a

un aumento 100x de Staphylococcus aureus
luego de la preparación de la lámina por frotis
fijo y la respectiva tinción Gram.

Corynebacterium sp.

Macroscópicamente la bacteria
Corynebacterium sp tiene coloración
grisácea, marrón clara. Ésta colonia no
era de gran extensión. (Ver figura 7).

Figura 8. Observación microscópica

(aumento 100x) de Corynebacterium sp
luego de la preparación de la lámina por frotis
fijo y la respectiva tinción de Gram.

Generalidades

Aspergillus flavus:
Éste género de hongos está conformado
alrededor de 180 especies,
categorizados como filamentosos,
hialinos y ubicuos. Su reproducción es
asexual por conidias que se originan de
Figura 7. Vista macroscópica y dibujo de la
colonia de Corynebacterium sp. grupos de fiálides ubicadas en un
ensanchamiento terminal del conidióforo
de la estructura del hongo. Tienen gran
potencial biótico y son degradadores
activos del material orgánico, por lo tanto
son muy útiles en la ecología del planeta.
Dentro de sus características cabe
resaltar que:
 Morfológicamente se clasifican en
dos formas básicas: levaduras e
hifas.
 Dentro de su hábitat natural se
encuentran el heno y el
compostaje.
 También reciben el nombre de
hialohifomicetos, por el hecho de
encontrarse dentro de las hifas no
pigmentadas.
Este género rara vez causa
enfermedades, sin embargo cuando lo
hace, se pueden presentar ciertos
factores de riesgo que crean oportunidad
de infección, como por ejemplo:
penetración predilecta por sitios
húmedos, limpieza excesiva del cerumen
de las orejas, introducción de materiales
en el oído. Producen patologías como:
Aspergilosis pulmonar invasiva,
onicomicosis (enfermedad de las uñas),
otomicosis (enfermedad principalmente
del oído externo), sinusitis alérgica.
El asperigillus se caracteriza por
presentar un alto riesgo de mortalidad en
personas inmunocomprometidas, es
decir cuando su sistema inmune es débil.
Por lo mismo, es uno de los más temidos
en lugares como hospitales, debido a
que no hay un tratamiento eficaz para
quien lo contrae, llevando generalmente,
a la muerte.
Principalmente ataca las vías
respiratorias, llegando a los alveolos,
luego a la sangre y finalmente mediante
ésta a todos los órganos.
Rhodotorula sp. :
Ésta especie son levaduras
(Basidiomycotas pigmentadas)
provenientes de la familia
Sporidiobolaceae. Contiene 37 especies,
de las cuales sólo tres, han sido
reportados como causas de la infección
en los seres humanos. Producen
colonias que son de color rosa a coral
pero también pueden ser de color
naranja a rojo, debido a la presencia de
pigmentos carotenoides.
En cuanto a su morfología, se describe
como suave, lisa y húmeda, y, a veces
mucoide. Algunos crecen fácilmente en
la mayoría de los medios de
comunicación, y se caracterizan por una
tasa de crecimiento rápido.
Fisiológicamente, aparecen como células
redondas u ovaladas en ciernes en el
microscopio con ausencia de seudohifas.
Las especies de Rhodotorula son muy
diversas y extendidas en la naturaleza,
como el aire, el suelo, el agua de mar,
plantas, productos lácteos, y el medio
ambiente del hogar. En los seres
humanos, se han hallado a partir de
cultivos de la piel, uñas, sistema
respiratorio, gastrointestinal y urinario.
Casi el 90% de los pacientes con
infección por este tipo de especies tiene
cáncer subyacente o inmunosupresión
debido al uso de corticosteroides,
neutropenia, SIDA, o desnutrición.
El factor de riesgo más común es la
presencia de un catéter y la infección
más común a la cual se encuentra
asociada la especie, es fungemia.
En el caso de Rhodotorula spp. Ésta es
una levadura que coloniza humanos,
haciendo parte de microbiota normal de
piel y mucosas y producir infecciones a
partir de catéteres centrales. Rara vez
produce cuadros pulmonares, infección
de vías urinarias, meningintis y
fungemias en inmunocomprometidos. Es
común encontrarla a partir de
aislamientos de lesiones de piel, sin
embargo en la mayoría de los casos es
considerada como contaminante. La
infección causada por especies de
Rhodotorula es mucho menos común
que la infección causada por otras
especies de levaduras (Candida y
Cryptococcus).
Staphylococcus aureus:
Éste género de bacterias se encuentra
formado por cocos Gram positivos, con
un diámetro de 0.5 a 1.5 μm, agrupados
como células únicas, en pares, tétradas,
cadenas cortas o más comúnmente
formando racimos de uvas. Actualmente
se tiene conocimiento acerca de 32
especies, de las cuales 16 de ellas se
localizan en los humanos, en donde
algunas forman parte de la microbiota de
piel y mucosas en humanos, y otras se
encuentran sólo entre la flora de otros
mamíferos y aves.
Fisiológicamente, son bacterias no
móviles, no esporuladas, no poseen
cápsula (aunque existen excepciones de
cepas que desarrollan una cápsula de
limo), son anaerobias facultativas.
En su gran mayoría los estafilococos
producen catalasa (enzima capaz de
desdoblar el peróxido de hidrógeno en
agua y oxígeno libre); ésta característica
permite diferenciar éste género de otros
como el Streptococcus y Enterococcus.
De las especies mencionadas
anteriormente presentes en seres
humanos, algunas son patógenas
cuando existe predisposición e
inmunosupresión en el huésped o en
presencia de cuerpos extraños.
Generalmente, cada especie tiende a
ocupar una localización anatómica
específica en el huésped que coloniza.
Aquella especie como la S. aureus, tiene
gran importancia clínica dentro de las
que suelen colonizar al ser humano,
debido a que es la que más causa
infecciones, como por ejemplo:
infecciones en la piel, neumonía,
intoxicación por alimentos, síndrome del
shock tóxico e intoxicación sanguínea.
Las infecciones más comunes
provocadas por esta bacteria son las
relacionadas con la piel, como: foliculitis,
forúnculos, impétigo y celulitis, que se
limitan a una pequeña área de la piel de
una persona. No obstante, también
puede provocar infecciones mucho más
graves, lo cual sucede cuando las
bacterias ingresan en el torrente
sanguíneo debido a un corte en la piel.
Esto puede producir infecciones en otras
partes del cuerpo, como en los
pulmones, los huesos, las articulaciones,
el corazón, la sangre y el sistema
nervioso central. Debido a que algunos
tipos de staphylococcus son resistentes a
antibióticos se puede dificultar el
tratamiento para quien contrae este tipo
de bacteria.
Corynebacterium sp. :
Son bacterias Gram positivas, catalasa
positiva, no esporuladas, que carecen de
movilidad, morfológicamente pueden ser
apreciados como bacilos rectos o
ligeramente curvados cuyo tamaño oscila
entre 2-6 micrómetros de longitud y 0,5
micrómetros de diámetro, con una típica
forma de V (generalmente), aunque
también es posible encontrarlas de
formas elipsoidales. Fisiológicamente,
son aerobias o anaerobias facultativas,
quimioorganotrofos, el pleomorfismo en
su ciclo de vida se observa en formas
bacilares de distintas longitudes y
frecuentes engrosamientos en los
extremos.
Es catalogado como uno de los géneros
más numerosos de actinobacterias con
más de 50 especies, generalmente no
causan enfermedades, pero hacen parte
de la flora saprófita de la piel humana.
Habitan ampliamente en la naturaleza
encontrándose en el suelo, el agua,
productos alimenticios y también en la
mucosa y piel del hombre y animales.
Dentro de las que tienen características
patógenas se encuentra la C. diphtheriae
que produce la patogenia conocida como
difteria, que es una enfermedad aguda,
contagiosa productora de una
pseudomembrana compuesta por células
epiteliales muertas, leucocitos, glóbulos
rojos y fibrina que se forma alrededor de
las amígdalas y la faringe. Aunque es
una enfermedad poco común, tiende a
ocurrir en personas no vacunadas, en
especial niños en edad escolar.
Otras especies que no causan difteria,
producen enfermedades en especies
animales específicas, y algunas de ellas
son también patógenos humanos, de la
cuales algunas atacan hospedadores
saludables, mientras que otras atacan
hospedadores inmunocomprometidos.
Algunos de sus efectos incluyen
linfadenitis granulomatosa, neumonitis,
faringitis, infecciones de la piel y
endocarditis. La endocarditis causada
por las especies de Corynebacterium es
frecuente en pacientes con dispositivos
intravasculares.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
OBSERVACIÓN MACROSCÓPICA
La observación macroscópica de hongos,
levaduras y bacterias nos permitió
darnos una idea de la morfología de
cada uno de ellos; a simple vista se
pudo determinar por ejemplo si el hongo
a observar era de apariencia
atenciopelada, algodonosa, polvorienta y
cuál era el color que se podía identificar,
su tamaño entre otras cosas. En este
caso Aspergillus flavus en la cual su
descripción se encuentra representada
en la figura 1a, 1b se puede respaldar
con otra investigación realizada que
aclara que al ser los miembros de este
género aerobios y de crecimiento rápido,
su colonia tiende a ser inicialmente
plana, blanca y que crece haciéndose
algodonosa; así mismo a medida que
envejece va apareciendo la esporulación
y el centro de la colonia se va tornando
de color distinto según la especie, así
Aspergillus flavus toma un color verdoso
y su reverso es verde y de crema oscura
(Guzmán,1977). En cuestión de la
levadura esta tiene una apariencia
cremosa y se debe siempre mirar el tipo
de colonia, el reverso de la caja Petri y
su pigmentación al medio; en el caso de
Rhodotorula Sp observada en la figura
figura 3a, 3b siempre se caracterizará
por ser colonias de color rojo-anaranjado
o naranja, de aspecto cremoso o rugoso
(Sicilia, M. J. L., & Cuesta, F. S.) Por otra
parte en el estudio de bacterias para su
caracterización macroscópica, en este
caso Staphylococcus aureus cuenta con
características nombradas en la figura
figura 5a, 5b demás estudios demuestran
que estas son en medios no selectivos,
S. aureus presenta colonias de 1 a 3 mm
de diámetro, lisas, levemente elevadas,
de bordes enteros, levemente convexas
y generalmente pigmentadas con un
color que puede ir desde la crema al
amarillo. La producción de pigmento se
ve favorecida si se incuban los cultivos
por 24 a 48 horas adicionales a
temperatura ambiente. Cuando crecen
en agar sangre ovina se puede observar
una zona de β-hemólisis alrededor de las
colonias. S. epidermidis presenta
colonias generalmente de menor tamaño
y estas no presentan pigmentación
(Seija, V. (2008)).
OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA
En el caso de observaciones
microscópicas para caso de hongos
miceliales y levaduras, se debe observar
si el micelio es hialino (azul) o
diamatiácelo (café); si es aceptado,
septado, ancho o delgado y si en las
levaduras hay formación de
peseudomicelio. Para tener una buena
observación con el microscopio fue
indispensable contar con el poder que
tenga el objetivo, calidad, claridad,
nitidez y fineza detallada de la imagen,
tener un buen uso del microscopio y
hacer con cuidado y mucha esterilidad el
procedimiento. Además de que como se
realizó en este procedimiento, se debe
hacer una observación de hongos
miceliales y levaduras con azul de
lactofenol debido a que aunque la tinción
de azul de lactofenol no es considerada
una tinción diferencial, posee
características tintoriales que permiten
observar cada uno de los componentes
fúngicos y apreciar fácilmente las
estructuras para una adecuada
identificación. El fenol inactiva las
enzimas líticas de la célula e impide que
ésta se rompa; de igual forma, destruye
la flora acompañante e inactiva a la
célula, quitándole el grado de
patogenicidad; además de ser un
colorante ácido, que tiñe el citoplasma y
la quitina presente en las células
fúngicas (López-Jácome, L.E,
Hernández-Durán, M., Colín-Castro, C.
A., Ortega-Peña, S., Cerón-González, G.,
& Franco-Cendejas, R. (2014)) Gracias a
esto permite una alta calidad de
observación, al haber una tinción entre
la pared y el citoplasma de las células lo
que se pudo ver en las (figuras 2 a y 2b)
y (figura 4a, 4b).
En el caso de las bacterias al hacer una
tinción Gram se busca encontrar
características y propiedades
determinantes de estos
microorganismos; se puede observar así
su movilidad, color, tamaño y agrupación
como se identificó en las figuras 6 y 8 de
Staphylococcus aureus y
Corynebacterium sp. La utilización del
Gram está basado en las características
de la pared celular, así como en el caso
de esta bacteria al arrojar gram positivas,
solo indica que poseen una pared celular
gruesa constituida por peptidoglicano,
pero no cuentan con membrana celular
externa. La tinción Gram se hace con los
respectivos colorantes con un
determinado fin: Principalmente se
coloca como colorante primario cristal
violeta, el cual tiene afinidad con el
peptidoglicano de la pared bacteriana.
Posteriormente, se coloca lugol, el cual
sirve como mordiente e impide la salida
del cristal violeta por la formación de un
complejo cristal violeta yodo que satura
los espacios del peptidoglicano de la
pared bacteriana. En seguida, se coloca
una mezcla de alcohol-acetona, la cual
deshidrata la pared bacteriana y cierra
los poros de la misma, también destruye
la membrana externa de las bacterias
Las bacterias Gram positivas, al contener
una gran cantidad de peptidoglicano,
retienen con mayor fuerza este complejo,
mientras que las Gram negativas no lo
pueden retener por tener menos cantidad
de peptidoglicano. Por último, se coloca
safranina, la cual funciona como un
colorante secundario o de contra tinción
y sirve para teñir las bacterias que no
pudieron retener el complejo cristal
violeta-yodo (López-Jácome, L.E,
Hernández-Durán, M., Colín-Castro, C.
A., Ortega-Peña, S., Cerón-González, G.,
& Franco-Cendejas, R. (2014)) Así se
pudo hacer una observación exacta en el
objetivo de 100X y fue lo que se
evidenció.
CONCLUSIONES
teniendo en cuanta lo anterior y tomando
en cuenta los pasos adecuados para la
extracción de la muestra y su uso en la
toma de identificación.
•Un adecuado uso de las herramientas y
limpieza de las mismas es importante
dentro del laboratorio, pues de esto
depende la seguridad tanto personal
como del equipo de trabajo.
•Tener en cuenta el tipo de
microorganismo (bacteria, hongo,
levadura) es importante para poder
aplicar el método más eficiente para su
posterior observación, además del
reconocimiento morfológico.
Cuestionario

A. Defina cada uno de los 3 grupos en

•Es importante hacer un uso adecuado
los que se dividen los colorantes.
de los materiales para la práctica de
1) Colorantes Sustantivos: Son
análisis de un microorganismo, pues de colorantes que pueden teñir
esto depende el éxito de la observación y directamente las fibras de
reconocimiento del microorganismo. algodón.
2) Colorantes Mordientes: El
•Tener un conocimiento previo de la mordiente es un producto que se
metodología y su uso, también aporta las adiciona a la fibra y es absorbido
condiciones necesarias para hacer una por ella, pudiendo
coloración apropiada dependiendo del consecutivamente atraer el
tipo de hongo o bacteria que se vaya a colorante. Este término se usa
trabajar. principalmente para los
colorantes que se adicionan
•El uso apropiado del microscopio usando óxidos metálicos como
proporciona la base para la correcta mordiente. Especialmente se
emplean como mordientes los
identificación de colonias, formas y
óxidos de aluminio y cromo por
tamaños de los organismos que se
formar precipitados insolubles.
están analizando. 3) Colorantes Directos: Se
absorbe directamente por las
•Hacer uso de los conocimientos dados fibras en soluciones acuosas. Hay
en las partes teóricas es necesario para colorantes ácidos y básicos de
una clasificación y distinción de los este tipo. Estos dos tipos de
microorganismos correctamente, colorantes se emplean
 especialmente en el teñido de
lanas y en poliamidas sintéticas.
B. Para qué se usa una tinción simple
y una diferencial?, cuál de éstas es
más apropiada para la observación
de bacterias?
Tinción: Es el proceso por el cual las
moléculas de un colorante se adsorben a
una superficie. El uso de colorantes
permite cambiar el color de las células de
los microorganismos y poder realizar la
observación en microscopio óptico. Dado
que las bacterias son casi incoloras, no
presentan contraste con el medio en el
cual se encuentran suspendidas y no
pueden observarse claramente sin algún
tratamiento previo. De acuerdo a la
reacción que ocurre, existen diferentes
tipos de tinción:
Tinción simple: El colorante utilizado
sirve solo para denotar la morfología
celular.
Tinción diferencial: El colorante
utilizado pone de manifiesto diferencias
entre células bacterianas o entre partes
de una misma célula. Estas técnicas
utilizan más de un colorante o bien
ciertos reactivos complementarios para la
tinción.
C. Qué otro tipo de tinciones existen?
Tinción Simple: utiliza un solo colorante.
Tinción de Gram: Utiliza varios
colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m,
lavado con alcohol, Safranina 30 s)
Tinción Ácido Resistente: Una vez
teñidos, conservan su color resistiendo al
lavado con ácido mineral reducido. En
esta tinción las bacterias ácido
resistentes conservan el colorante
primario color rosa o rojo, los demás
microorganismos son decolorados por el
ácido y toman el color azul.
Tinción de Giensa: El colorante se
aplica a un frotis de sangre y se utiliza
cuando se sospeche de la presencia de
protozoos en la sangre para observar
materias núcleos de la células.
Tinción de Esporas: Se usa verde de
malaquita en contraste con safranina.
Tinción de Cápsula: Colorante
nigrosuna, aquí se observan
microorganismos encapsulados
creando resistencias.
Tinción de Flagelos: Se usa mordiente,
el cual aumenta el tamaño
del microorganismo.
D. La coloración de Gram es una
tinción de qué tipo y por qué?
La tinción de Gram o coloración de
Gram es un tipo de tinción
diferencial empleado en la
bacteriología para la visualización de
bacterias, sobre todo en muestras
clínicas. Se utiliza tanto para poder
referirse a la morfología celular
bacteriana, como para poder realizar una
primera aproximación a la diferenciación
bacteriana, considerándose bacterias
Gram positivas a las que se visualizan de
color morado, y bacterias Gram
negativas a las que se visualizan de color
rosa, rojo o grosella.
E. La fucsina es el último colorante
que se adiciona en la coloración de
Gram, por qué?
Para poner de manifiesto las células
Gram negativas se utiliza una coloración
de contraste. Habitualmente es un
colorante de color rojo, como
la safranina o la fucsina. Después de la
coloración de contraste las células Gram
negativas son rojas, mientras que las
Gram positivas permanecen violetas.
F. Cuál es el fundamento en la
que se basa la coloración de
Gram?
Los fundamentos de la técnica se basan
en las diferencias entre las paredes
celulares de las bacterias Gram
positivas y Gram negativas. La pared
celular de las bacterias Gram positivas
posee una gruesa capa de
peptidoglucano, además de dos clases
de ácidos teicóicos: Anclado en la cara
interna de la pared celular y unido a
la membrana plasmática, se encuentra el
ácido lipoteicoico, y más hacia
la superficie, el ácido teicoico que está
anclado solamente en el peptidoglucano
(también conocido como mureína). Por el
contrario, la capa de peptidoglucano de
las Gram negativas es delgada, y se
encuentra unida a una segunda
membrana plasmática exterior (de
composición distinta a la interna)
por medio de lipoproteínas. Tiene una
capa delgada de peptidoglicano unida a
una membrana exterior por lipoproteínas.
La membrana exterior está hecha de
proteína, fosfolípido y lipopolisacárido.
Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se
tiñen diferencialmente debido a éstas
diferencias constitutivas de su pared.
La clave es el peptidoglicano, ya que es
el material que confiere su rigidez a la
pared celular bacteriana, y las Gram
positivas lo poseen en mayor proporción
que las Gram negativas. La diferencia
que se observa en la resistencia a la
decoloración, se debe a que la
membrana externa de las Gram
negativas es soluble en solventes
orgánicos, como por ejemplo la mezcla
de alcohol/acetona. La capa
de peptidoglicano que posee es
demasiado delgada como para poder
retener el complejo de cristal violeta/yodo
que se formó previamente, y por lo tanto
este complejo se escapa, perdiéndose la
coloración azul-violácea. Pero por
el contrario, las Gram positivas, al poseer
una pared celular más resistente y con
mayor proporción de peptidoglicanos, no
son susceptibles a la acción del solvente
orgánico, al contrario, éste actúa
deshidratando los poros cerrándolos,
lo que impide que pueda escaparse el
complejo cristal violeta/yodo, y
manteniendo la coloración azul-violácea.
G. Indique la importancia ecológica o
una característica específica de
cada una de las cepas con las que
se trabajó: tanto de bacterias como
de hongos y levaduras.
•Hongo Aspergillus flavus: Hongo que obtenida por dos procedimientos. Rev.
suele asociarse chil. infectol, 16(2), 100-4.
con aspergilosis pulmonar y se cree que
•López-Jácome, L. E., Hernández-Durán,
causa con frecuencia infecciones de
M., Colín-Castro, C. A., Ortega-Peña, S.,
córnea y nasoorbiatles, además de ser Cerón-González, G., & Franco-Cendejas,
alergénico. Aparece con frecuencia en R. (2014). Las tinciones básicas en el
maíz y cacahuetes y también en laboratorio de microbiología.
alfombras frecuentemente mojadas, Prescott, Harley, Klein. Microbiología. Mc
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•Levadura Rhodotorula: Es una
levadura que coloniza humanos, puede •Ramos, M. D. L. A. A., & Chabela, M. D.
hacer parte de microbiota normal de piel L. P. (2004). Manual de prácticas del
y mucosas, produciendo infecciones a laboratorio de microbiología general.
partir de catéteres centrales. Rara vez Universidad Autónoma Metropolitana,
Unidad Iztapalapa, Departamento de
produce cuadros pulmonares, infección Biotecnología
de vías urinarias, meningintis y
fungemias en inmunocomprometidos. Es •Seija, V. (2008). Género
común encontrarla a partir de Staphylococcus. Etiopatogenia
aislamientos de lesiones de piel, sin microbiológica, 255-72. Obtenido el 24
embargo en la mayoría de los casos es de marzo de 2016 en
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/Stap
considerada como contaminante. Sus
hylococcus.pdf
características microscópicas son
similares a las de Candida spp. •Sicilia, M. J. L., & Cuesta, F. S.
•Corynebacterium: Es Identificación de levaduras 11 Obtenido
el 24 de marzo de 2016 en
un género de bacterias, bacilos y Gram
http://www.guia.reviberoammicol.com/Ca
positivos, inmóviles, anaerobio pitulo11.pdf.
facultativos, pertenecientes
al filoactinobacteria. Es uno de los •Valencia, H. (2004). Manuel de
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DEPARTAMENTO DE INGENIERIA http://kidshealth.org/es/teens/staph-
QUIMICA/ - UNIVERSIDAD esp.html#
TECNOLOGICA NACIONAL/- CATEDRA
DE BIOTECNOLOGIA/- Trabajo práctico